Askorbínsýra stjórnar ónæmi, andoxun og apoptosis í Abalone Haliotis Discus Hannai Ino Part 2

3.5. Tjáning á ónæmistengdum genum og próteinum í meltingarkirtlum og tálknum gáska

Glýkósíð af cistanche getur einnig aukið virkni SOD í hjarta- og lifrarvef og dregið verulega úr innihaldi lipofuscins og MDA í hverjum vef, hreinsar í raun ýmsar hvarfgjarnar súrefnisradicals (OH-, H₂O₂, osfrv.) og verndar gegn DNA skemmdum af völdum af OH-róttækum. Cistanche phenylethanoid glýkósíð hafa sterka hreinsunargetu sindurefna, meiri afoxunargetu en C-vítamín, bæta virkni SOD í sæðisviflausn, draga úr innihaldi MDA og hafa ákveðin verndandi áhrif á virkni sæðishimnu. Cistanche fjölsykrur geta aukið virkni SOD og GSH-Px í rauðkornum og lungnavef í tilraunamúsum af völdum D-galaktósa, auk þess að draga úr innihaldi MDA og kollagens í lungum og plasma og auka innihald elastíns, hafa góð hreinsunaráhrif á DPPH, lengja tíma súrefnisskorts í öldruðum músum, bæta virkni SOD í sermi og seinka lífeðlisfræðilegri hrörnun lungna í öldruðum tilraunamúsum. Með frumuformfræðilegri hrörnun hafa tilraunir sýnt að Cistanche hefur góða andoxunargetu og hefur tilhneigingu til að vera lyf til að koma í veg fyrir og meðhöndla öldrunarsjúkdóma í húð. Á sama tíma hefur echinacoside í Cistanche umtalsverða getu til að hreinsa DPPH sindurefni og hefur getu til að hreinsa hvarfgjarnar súrefnistegundir og koma í veg fyrir niðurbrot kollagen af ​​völdum sindurefna og hefur einnig góð viðgerðaráhrif á anjónskemmdir af týmín sindurefnum.

Smelltu á Cistanche Reddit fyrir öldrun

【Frekari upplýsingar:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

MRNA gildi lykilgenanna í toll-like receptor (TLR) boðleiðinni í meltingarkirtli abalone eru sýnd í töflum 6 og 7. Tjáningarmagn tlr2 og tlr4 í meltingarkirtlinum minnkaði marktækt (p < { {5}}.05) og voru með lægstu stigin á AA1000 og AA500{{43 }} hópa, í sömu röð (tafla 6). MRNA-gildi-a var marktækt uppstýrt (p < 0.05), og-b hafði ekki áhrif á stig af mataræði AA (p > 0.05 ). Tjáning myd88, ferðatengdrar aðlögunarsameindar (sporvagn), interleukin 1 viðtakatengd kínasa 4 (irak4) og æxlisdrepsþáttar viðtakatengds þáttar 6 (traf6) minnkaði marktækt eftir AA viðbót í fæðu (p < 0,05). Traf4 var ekki undir áhrifum af magni AA viðbót (p > 0,05). MRNA-gildi iκb kínasa (ikk ) og nf-κb hemla (iκb ) í meltingarkirtli abalone voru ekki fyrir áhrifum af mataræði AA (p > 0,05) (tafla 7). Hins vegar var tjáning á p38 mítógenvirkjuðum próteinkínasa (p38 mark) og rusli marktækt minnkað með aukinni AA mataræði (p < 0,05). Mataræði AA gæti dregið marktækt úr tjáningarmagni nf-kb, virkjaprótein 1 (ap-1) og æxlisdrep (tnf- ) (p < 0,05), og interleukin 16 (il 16) gildið var ekki háð mataræði AA (p > 0,05). Próteintjáning MyD88, JNK, þroskaðs IL-1 og kjarna NF-kB p65 er sýnt á mynd 2. Próteinmagn MyD88, þroskaðs IL-1 og kjarna NF-kB p65 í meltingarvegi kirtill af abalone var marktækt minnkað með mataræði AA (p < 0,05). Aftur á móti var próteinmagn JNK ekki undir áhrifum af AA (p > 0,05).

MRNA gildi tlr2, tlr4 og the-b í tálknum á grásleppu voru ekki marktækt mismunandi (p > 0.05), og tar-a magnið var marktækt lækkað eftir stigin stig af AA mataræði (p < 0.05) (tafla 8). Ennfremur var tjáningargildum myd88, irak4 og traf6 í tálknum gálka minnkað verulega með auknu magni AA í fæðunni (p < 0.{{20}}5). Þess í stað sást enginn marktækur munur á tjáningu tram og traf4 (p > {{30}}.05). AA mataræði lækkaði marktækt mRNA stigi ikk (p < 0,05), og tjáning iκb , p38 marks og rusl í tálknum hafði ekki áhrif á AA (p > 0,05) (tafla 9). Einhliða ANOVA leiddi í ljós að tjáningarmagn nf-κb, ap-1 og tnf- minnkaði marktækt með mataræði AA (p < 0,05), og enginn marktækur munur á il 16 stigum sást (p > 0,05). Próteinmagn MyD88 og kjarna NF-κB p65 var marktækt lækkað með stigum AA í mataræði (p < 0,05) (Mynd 3). Hins vegar var próteintjáning JNK og þroskaðs IL-1 í tálknum grásleppu ekki fyrir áhrifum af mataræði AA (p > 0,05).

Tjáning á -defensíni, goðsagnagerð 6 og arginasa-I í meltingarkirtli og tálknum á abalone eru gefnar upp í töflu 10. Magn -defensíns og arginasa-I í meltingarkirtlinum jókst marktækt eftir mataræði AA (p < 0.05), en tjáning goðsagnagerðar 6 var ekki fyrir áhrifum af mataræði AA (p > 0,05). Aftur á móti var mRNA-gildi -defensíns og arginasa-I í tálkninu ekki marktækt ólíkt og tjáning goðsagnagerðar 6 var marktækt uppstýrt af mataræði AA (p < 0,05).

3.6. Tjáning ónæmistengdra gena í meltingarveginum sem svar við Vibrio Parahaemolyticus

Tjáningarstig nokkurra mikilvægra gena í TLR merkjaleiðinni, sem innihalda tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 og tnf- í meltingarkirtli grásleppu eftir V. parahaemolyticus sýkingu eru sýnd á mynd 4 MRNA tjáningu tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 og tnf- var marktækt uppstýrt eftir gjöf V. parahaemolyticus (p < 0.05). Faldabreytingin á tlr4 var mest í AA0 hópnum (10.24-föld) 24 klst. eftir sýkingu og í kjölfarið lækkaði hæsta stigið í 3.{{ 20}}falt í AA5000 hópnum eftir 6 klst. MRNA-gildi myd88 var marktækt uppstýrt eftir 12–72 klst. í AA0-hópnum (6.86-falt) og eftir 6–12 klst. í AA5000-hópnum (3.88-falt) eftir V. parahaemolyticus sýkingu. Tjáning sporvagns í meltingarkirtli abalone eftir V. parahaemolyticus sýkingu jókst marktækt úr 12 klst í 72 klst í AA0 hópnum og úr 12 klst í 24 klst í AA5000 hópnum. Faldabreytingin á nf-κb náði hæsta stigi eftir 48 klst í AA0 hópnum (10.55-falt), fylgt eftir af lækkun á hæsta stigi eftir 12 klst. í AA5000 hópnum (3.{{48 }}falda breytingu). Tjáningarstig ap-1 var marktækt hækkað úr 6 klst í 72 klst í AA0 og AA50 hópnum áður en það náði sér í eðlilegt stig 72 klst eftir samfellda AA viðbót. Brotbreytingin á TNF- náði hámarki 24 klst. eftir V parahaemolyticus sýkingu í AA0, AA50, AA100, AA200 og AA500 hópunum og náði hæsta gildi eftir 12 klst. í AA1000 og AA5000 hópunum.

Niðurstöður magns -defensíns og goðsagnagerðar 6 í meltingarkirtlinum eftir V. parahaemolyticus sýkingu eru sýndar á mynd 5. Tjáningarmagn -defensíns og goðsagnagerðar 6 í meltingarkirtli abalones jókst marktækt eftir V. parahaemolyticus sýkingu ( p < 0.05). MRNA-gildi -defensíns jókst marktækt í AA0, AA50, AA100 og AA200 hópum eftir 12 klst. og 24 klst. og náði hápunkti sínum eftir 12 klst. í AA200, AA500, AA1000 og AA5000 hópum með 4 .51-falt, 4.74-falt, 5.20-falt og 5.47-falt, í sömu röð. Fallbreytingin á goðsagnagerð 6 í meltingarkirtli grásleppu var marktækt uppstýrð úr 12 klst í 24 klst í AA0, AA50, AA100, AA200 og AA500 hópunum og úr 6 klst í 72 klst í AA1000 og AA5000 hópunum. Hæsta tjáningarstig goðsagnagerðar 6 sást eftir 12 klst. í AA5000 hópnum með 5.82-falt.

3.7. Tjáning á andoxunartengdum og apoptosis-tengdum genum og próteinum í meltingarkirtlum og tálknum

MRNA-gildi nf-e2-tengds þáttar-2 (nrf2), gpx, köttur og cuznsod í meltingarkirtli grásleppu var marktækt hækkuð með stigum AA í fæðunni (p < {{4) }}.05) (Tafla 11). Aftur á móti lækkuðu mRNA og próteinmagn Keap1 marktækt eftir mataræði AA (p < 0.05), og glútaþíon-s-transferasa (GST) hafði ekki áhrif á AA (mynd 6, Tafla 11) (p > 0.05). Í tálknum jukust mRNA gildi nrf2 og gpx marktækt með AA mataræði (p < 0,05) (tafla 11). Hins vegar voru tjáningar kaup1, köttur, GST og cuznsod í tálkninu ekki háð stigum AA í mataræði (p > 0,05). Engin marktæk áhrif AA-fæðis í mataræði á próteintjáningu Keap1 í tálknum grásleppu sáust (p > 0,05) (Mynd 6).

Það sem stendur upp úr í töflu 12 er að tjáningarmagn Bax og caspase3 í meltingarkirtli grásleppu minnkaði marktækt eftir stigin stig af AA í mataræði (p < 0.05). Á sama tíma var mRNA-gildi bcl-2 verulega hækkað (p < 0.05). Hins vegar var tjáning caspase7 ekki fyrir áhrifum af mataræði AA (p > 0.{{20}}5). Klofnað caspase3 próteinið í meltingarkirtlinum minnkaði marktækt eftir viðbót við AA (p < 0,05) (mynd 6). Í tálknum lækkuðu mRNA-gildi caspase7 og bcl-2 marktækt og hækkuðu, í sömu röð, eftir AA-fæði (p < 0,05) (tafla 12). Engu að síður var tjáning Bax og caspase3 ekki marktækt frábrugðin öllum meðferðum (p > 0,05). Þar að auki var próteintjáning klofnaðs-kaspasa3 í tálknum á abalone ekki fyrir áhrifum af stigum AA í mataræði (p > 0,05) (Mynd 6).

4. Umræður

4.1. Askorbínsýruinnihald í mismunandi vefjum

Í þessari rannsókn jókst AA innihald í vöðvum, tálknum og meltingarkirtlum með auknum AA-gildum í fæðu. Svipuð niðurstaða fannst einnig í Vundu (Heterobranchus logfiles), japönskum áli og Chu's croaker (Nibea litur) [27,56,57]. AA-innihaldið var hæst í tálkninu og þar á eftir kom meltingarkirtill grásleppunnar. Hins vegar náði AA-innihald í tálknum, meltingarkirtlum og vöðvum abalone ekki mettun eftir 4821,17 mg/kg af AA í fæðunni. Í kínverska soginu (Myxocyprinus asiaticus) jókst AA innihald í lifur verulega með AA mataræði [58]. Aukið AA innihald í lifur kínverska sogskálarinnar eftir AA mataræði var í tengslum við lifrarheilbrigði. Í graskarpi hækkaði AA innihald í nýrum, milta og húð marktækt með aukinni AA viðbót [35]. Höfuðnýra, milta og húð eru mikilvæg ónæmislíffæri í vatnadýrum [59-61]. Þessar niðurstöður sýna fram á að aukið AA-innihald í meltingarkirtlum og tálknum af grásleppu var nátengt heilsu grásleppu eftir AA-fæði og að AA uppsöfnun endurspeglar magn AA-útsetningar í fæðunni.

4.2. Hlutverk askorbínsýra í eftirliti með ónæmi Abalone

Blóðfrumur, sem fjölhæfir frumuhlutar hemolymph í lindýrum, eru ábyrgir fyrir mörgum þáttum lindýralífsins, svo sem ónæmissvörun, lífefnavæðingu, frumu-frumusamskipti og endurnýjun [62,63]. Þess vegna geta THC, RB og PA af hemolymph beint endurspeglað ónæmi lífverunnar. AA var nátengd THC, RB og PA blóðfrumna, sem leiddi til virkjunar á aðlagandi ónæmiskerfi [64,65].

Í þessari rannsókn jukust THC, RB og PA í hemolymph af abalone marktækt með mataræði AA. Það er gefið til kynna að stig af mataræði AA hafi tekist að efla ónæmisvirkni í grásleppu. Svipaðar niðurstöður komu fram í Nílarhlíf og grasrækju (Penaeus monodon) [64,66]. RB í sermi rauðra mýrarkrífa (Procambarus clarkii) og PA í sermi blendings sorubim steinbíts (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) lækkaði marktækt eftir mikið magn af AA fæðubótarefni (321,38 mg/kg og 850 mg/ kg, í sömu röð) [67,68]. Hins vegar sást engin marktæk lækkun á THC, RB og PA í hemolymph of abalone í meðferð með miklu magni af AA-fæðubótarefni (4821,17 mg/kg).

Lysozyme, C3 og C4 gegna lykilhlutverki í meðfæddu ónæmi og vernda dýr gegn sjúklegri sýkingu [69-71]. Í þessari rannsókn jókst LZM í CFH af abalone marktækt eftir stigið stig af AA í mataræði. Þetta var svipað og niðurstöður fyrri rannsókna á cobia (Rachycentron canadum), kóreskum steinbít (Sebastes schlegelii) og grouper (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. Skortur á AA dró úr innihaldi C3 og C4 í graskarpi og AA fæðu gæti aukið ónæmisstærðir eins og C3 og C4 í stórmómbassa verulega [35,74]. Í þessari rannsókn var C4 innihaldið í CFH í abalone hins vegar ekki undir áhrifum af AA-gildum í mataræði. Það var vaxandi tilhneiging til C3 innihalds í CFH í abalone, þó að C3 innihaldið hafi ekki verið marktækt bætt með mataræði AA. Þessar niðurstöður leiddu í ljós að fæðubótarefni með AA gæti aukið getu til að útrýma sýkingu sýkla af völdum LZM og C3, ekki C4, til að bæta ónæmishindranir grásleppu.

Meðfædd ónæmi er mikilvægt fyrir grásleppu vegna skorts á aðlögunarónæmi hjá hryggleysingja [43,49]. TLRs gegna mikilvægu hlutverki í meðfædda ónæmiskerfinu gegn ýmsum örverum [75]. PAMP-virkjaðar TLRs ráða sértækar aðlögunarsameindir til að virkja umritunarþætti, eins og NF-KB og AP-1, sem ákvarða niðurstöðu meðfædds ónæmissvörunar [76]. TLR merkjasendingar eru flokkaðar í tvær aðskildar leiðir: MyD88- háð og MyD88-óháð, sem framkalla ýmis frumudrep eins og TNF- og IL-1 í spendýrum og öðrum vatnadýrum [77,78 ]. Í MyD88-háða ferlinum hefur MyD88 samskipti við IRAK4 og hefur síðan samskipti við TRAF6 [79]. TRAF6 getur virkjað TGF- -virkjað kínasa 1 (TAK1) og TAK1-bindingsprótein (TAB) [80]. TAK1 virkjar IKK flókið, sem getur fosfórýlerað IκB sem binst NF-κB undireiningum (sem samanstendur af p50 og p65) og fosfórýlerar MAPKs og JNK, sem stuðlar að flutningi AP -1 inn í kjarna [81]. Eyðing IκB auðveldar kjarnaflutning NF-κB [82]. Kjarna NF-κB og AP-1 miða að umritun cýtókína, svo sem TNF- og IL-1, sem eru vel þekkt sem bólgueyðandi miðlar sem stuðla að bólgu [76,77,83] . Í MyD88-óháðu ferli er TRAM krafist og gegnir lykilhlutverki í þessari leið [84]. Innanfrumuhlutirnir aftan við TLR merkjaleiðina eru almennt og mjög varðveittir milli hryggdýra og hryggleysingja [60,85]. Tjáningu TLR4 í lifur var minnkað í AA-gjöfum músum (Mus musculus) [86]. AA beitti jákvæðri lifrarvernd gegn concanavalin A-völdum ónæmisfræðilegum lifrarskaða í músum með því að hindra NF-KB merkjaferilinn [87,88]. Þannig má álykta af þessum niðurstöðum að AA geti haft áhrif á TLR merkjaleiðina. Hins vegar er enn óþekkt hvernig AA stjórnar TLR merkjaleiðinni í vatnadýrum, sérstaklega í lindýrum.

Í þessari rannsókn var mRNA gildum tlr2 og tlr4 í meltingarkirtlinum marktækt niðurstýrt af stigum AA í mataræði. Lagt er til að TLR merkjaleiðin hafi verið kveikt af AA í meltingarkirtli grásleppu (Mynd 7). Hugtakið-a og tlr-b höfðu víðtækari mynsturþekkingargetu og tóku þátt í bakteríudrepandi og veirueyðandi ónæmi grásleppu [89]; hins vegar er undirliggjandi vélbúnaður the-a/b enn óþekktur. Hins vegar var magn tlr-b ekki fyrir áhrifum af mataræði AA og tlr-a var marktækt uppstýrt af AA í þessari rannsókn. Frekari rannsókna er þörf. Tjáning myd88, irak4 og traf6, og próteintjáning MyD88, í meltingarkirtli abalone var stjórnað niður með AA viðbót og magn traf4 var ekki undir áhrifum af mataræði AA. TRAF4 virkar sem hljóðdeyfi í TLR-miðluðum merkjum með því að bæla TRAF6 [90]. Það er gefið til kynna að hömlun á TLR leiðinni með mataræði AA hafi ekki verið miðluð í gegnum traf4 í meltingarkirtli abalone. MRNA magn iκb í meltingarkirtlinum var ekki undir áhrifum af AA. Hins vegar er aðeins hægt að flytja NF-KB í kjarnann eftir niðurbrot IκB fosfats [91]. MRNA tjáningu nf-κb og próteintjáningu kjarna NF-κB p65 í meltingarkirtlinum var marktækt minnkað með mataræði AA. Þessar niðurstöður bentu til þess að AA gæti bælt fosfórun á IκB próteini til að draga úr kjarna NF-KB. IKK getur virkjað NF-KB p65 til að kveikja á NF-KB kanónísku leiðinni og IKK getur virkjað NF-KB p52 til að kveikja á NF-KB non-canonical leiðinni [92]. Það er gefið til kynna að mataræði AA gæti virkjað NF-KB kanóníska ferilinn í meltingarkirtli abalone. Ennfremur minnkaði mRNA tjáning sporvagnsins, p38 marksins, ruslsins, ap-1 og tnf- og próteinmagn þroskaðs IL-1 marktækt með mataræði AA. Þessar niðurstöður benda til þess að mataræði AA gæti hamlað TLR merkjaleiðinni í gegnum Myd88-háða ferlið um NF-κB, p38 mark/ap-1 og JNK/ap-1 og Myd{{ 43}}óháðar leiðir til að draga úr bólgu í meltingarkirtli grásleppu. Í tálkninu hafði AA einnig áhrif á TLR merkjaleiðina (Mynd 7). Hins vegar voru mRNA-gildi sporvagnsins, p38-merkið og rusl og próteintjáning þroskaðs IL-1 ekki marktækt mismunandi. Þessar niðurstöður gáfu til kynna að mataræði AA gæti bælt TLR merkjaferilinn í gegnum Myd88-háða ferilinn, ekki MyD88-óháða. Hindraði TLR ferillinn létti bólgu í tálknum grásleppu í gegnum NF-κB og p38 mark/ap-1 ferlið, ekki JNK/ap-1 ferlið. Mataræði AA hafði sterkari áhrif á TLR ferilinn í meltingarkirtlinum en á tálkni grásleppu.

【Frekari upplýsingar:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】