Nýruverndandi áhrif Beluga linsubaunaformeðferðar fyrir blóðþurrðar-endurflæðisskaða

Syng-okk Lee,¹ Svo ungur Chun,²EunHye Lee,²Bomi Kim,²BoHyun Yoon,² o.fl

Bakgrunnur og markmið. Blóðþurrð/endurflæði (I/R) áverka, af völdum bráðsnýruskemmdir, veldur vefjameinafræðilegum breytingum, frumudauða píplafrumna, bólgu, oxun og skerðingu á nýrnastarfsemi. Við metum verndandi áhrif gegn I/R meiðslum af formeðferð hvítlabauna. Efni og aðferðir. Músum var skipt í fjóra hópa: eðlilega, ómeðhöndlaða, lága (2mg) og háskammta (8mg) belúga linsubaunir meðferðarhópa. Beluga linsubaunir voru gefin til inntöku í 2 vikur, fylgt eftir með tvíhliða nýrnablóðþurrð í 20 mínútur og endurflæði í 30 mínútur. Blóðsýni ognýruvefjum var safnað og greind til að rannsaka nýrnastarfsemi, vefjameinafræði, þekju- og æðaþelsfrumurskemmdir, apoptosis, oxunarálag og bólguviðbrögð. Niðurstöður. Formeðhöndluðu hóparnir héldu nýrnastarfsemi, með marktækt lægra magni þvagefnis í blóði (BUN) og kreatíníns samanborið við hina hópana. Vefjameinafræðilega greiningin sýndi minni skaða á nærpíplum og minnkuð áverkatengd sameind (nýruseytingu áverkasameindar 1 (KIM-1) og daufkyrninga gelatínasa-tengt lípokalín (NGAL)) í formeðhöndluðu hópunum samanborið við hina hópana. Endanleg deoxýnukleótídýl transferasa dUTP nick-end merkingar- (TUNEL-) jákvæðar frumur og seyting frumudauðatengdra sameinda (Fas og caspase 3) minnkaði verulega í formeðhöndluðu hópunum samanborið við hina hópana. Formeðhöndluðu hóparnir sýndu jákvæða tjáningu gena (cluster of differentiation (CD31)) og neikvæða viðloðunsameind (innanfrumu viðloðunsameind 1 (ICAM{11}})) tjáningu. Andoxunaráhrif sáust í formeðferðarhópunum, með minni tjáningu malónaldehýðs (MDA) og aukinni andoxunarensímseytingu (superoxíð dismutasi (SOD), katalasa (CAT), glútaþíon (GSH) og glútaþíonperoxídasa (GPx)). Hjá formeðhöndluðu hópunum var F4/80 plús átfrumum og CD4 plús T-frumum hindrað og bólgueyðandi cýtókín (interleukin-(IL-) 1, IL-6 og æxlisdrepsþáttur-(TNF-)) lækkuðu; hins vegar jókst styrkur bólgueyðandi cýtókína (transforming growth factor- (TGF-), IL-10 og IL-22). Ályktanir. Formeðferð með Beluga linsubaunir sýndi verndandi áhrif gegn I/R-völdum nýrnaskemmdum, með apoptótískum, bólgueyðandi og andoxunarvirkni.

Tengiliður:joanna.jia@wecistanche.com

cistanche propiedadesdeserticola kemur í veg fyrirnýrusjúkdóm, smelltu hér til að fá sýnishornið

1. Inngangur

Blóðþurrð/endurflæðisáverka (I/R) áverka, við nýrnabrot að hluta eða nýrnaígræðslu, veldur bráðrinýruáverka [1, 2] og getur leitt til óafturkræfra skerðingar á nýrnastarfsemi [3]. Blóðþurrð kallar á frumudauða í nýrnapíplum þekjufrumum, sem eykur bólgusvörun millivefsfrumna. Endurflæði veldur smáæðaskemmdum, sem stuðlar að flutningi bólgufrumna, með tjáningu viðloðun þátta á yfirborði æðaþelsfrumna [4-8]. I/R meiðsli veldur einnig oxunarálagi, eykur hvarfgjörn súrefnistegundir (ROS) og minnkar andoxunarensímvirkni [9], sem leiðir til aukinnar framleiðslu á bólgueyðandi þáttum [10], virkjun caspasa ferli og auknum apoptótískum frumudauða, sem valda að lokum skertri nýrnastarfsemi [11]. Til að koma í veg fyrir nýrnaskaða af völdum I/R hefur verið lagt til að nota andoxunarefni, með bólgueyðandi og apoptotic virkni, [10-14].

Linsuafbrigði (græn, rauð, frönsk eða hvítvín) innihalda ýmis lífvirk efnasambönd, sérstaklega andoxunarefni [15]. Heildarmagn pólýfenóls og flavonoids þeirra er á bilinu 27,30–30,30 mg (tannínsýrujafngildi)/g til 13,14–16,29 mg (quercetin jafngilda)/g, í sömu röð [16]. Sýnt hefur verið fram á að Beluga linsubaunir hafi umtalsvert hátt pólýfenólinnihald og ROS-hreinsandi áhrif [16]. Lið okkar greindi frá andoxunaráhrifum linsubauna með því að nota in vitro lifrarfrumulínutilraun [16]. Beluga linsubaunir sýndu marktæk verndandi áhrif gegn frumudrepandi áhrifum af völdum alkóhóls í AML-12 frumum samanborið við aðrar linsubaunir. Bólgueyðandi áhrif beluga linsubauna komu einnig fram í lípópólýsykru meðhöndluðum RAW264.7 frumum [17]. Beluga linsubaunir meðhöndluð verulega minnkaði framleiðslu nituroxíðs (NO) og framkallanlegrar NO syntasa (iNOS) tjáningu, með uppstýringu á kjarnastuðli E2-tengdum þáttum 2- (Nrf2-) miðluðum heme súrefnisasa-1 (HO-1) feril. Þessar in vitro tilraunir bentu til andoxunar- og bólgueyðandi áhrifa hvítlaukslinsubauna.

Til að auka notkun belúga linsubauna, notuðum við þær á nýrna I/R skaða mús líkan og metum verndandi áhrif nýrna. Fyrir þessa tilraun voru beluga linsubaunir gefnar í 2 vikur, sem formeðferð, síðan blóðþurrð í 20 mínútur og endurflæði í 30 mínútur. Hlífðaráhrif á nýru af formeðferð með beluga linsubaunir voru sannreynd með því að greina nýrnastarfsemi, vefjameinafræði, skemmdir á þekju- og æðaþelsfrumum, frumudauða, oxunarálag og bólguviðbrögð. Við gerðum þá tilgátu að formeðferð með beluga linsubaunir myndi koma í veg fyrir I/R-framkallaða nýrnaskaða, með andoxunarefni, bólgueyðandi og apoptotic virkni.

2. Efni og aðferðir

2.1. Dýrahópar og meðferðaraðstæður.

Allar aðgerðir voru gerðar með því að nota dýrareglur sem hafa verið samþykktar af Yeungnam University Institutional Animal Care and Use Committee (AEC2019-003). Músum (ICR, 8 vikna, karlkyns, 23–25g, Orient, Seongnam, Kóreu) var skipt af handahófi í eftirfarandi 4 hópa (n =7 í hverjum hópi): (1) Venjulegur, eðlilegur samanburðarhópur; (2) Ómeðhöndlaður, saltvatnsmeðhöndlaður hópur; (3) Lágir, lágir skammtar (2mg/100μL saltvatn/-BioMed Research International mús), 14-daginn til inntöku formeðferðarhópur fyrir beluga linsubaunir; og (4) Stórir, stórir skammtar (8mg/100μL saltvatn/mús), 14-dagar inntöku beluga linsubaunir, formeðferðarhópur. Beluga linsubaunir voru veittar af prófessor Syng-Ook Lee (Keimyung háskólinn, Daegu, Kóreu) og greint var frá útdrætti og lífvirkum efnasamböndum í fyrri rannsókn [16]. Eftir meðferð voru dýrin sett í liggjandi stöðu, undir svæfingu og skurður á bakið [1]. Nýrnaslagæð og bláæðar í báðum nýrum voru lokaðar með æðaklemma í 20 mínútur, fylgt eftir með endurflæði í 30 mínútur, samkvæmt áður lýstri samskiptareglu [18, 19]. Blóði var safnað með hjartastungum og nýrun dregin út. Nýrun voru þvegin með fosfatbúðuðu saltvatni; annað nýrað var notað til RNA og próteinútdráttar, en hitt nýrað var notað til vefjagreiningar.

2.2. Vefjameinafræðilegar og ónæmisvefjaefnafræðilegar (IHC) greiningar.

Vefjameinafræðilegar rannsóknir voru gerðar með því að nota hematoxylin og eosin (H&E) litun og meiðsli voru metin út frá eftirfarandi þáttum: tilvist píplafrumna sem falla inn í holrýmið, kjarnatap í flögguðum frumum, luminal rusl, hrunið luminal space og ónæmisfrumuinnflæði. . Stigagjöf var náð af sérfræðingi í meinafræði: skor 0, engin pípulaga meiðsli; stig 1,<10% of="" tubules="" injured;="" score="" 2,="" 10–25%="" of="" tubules="" injured;="" score="" 3,="" 25–50%="" of="" tubules="" injured;="" score="" 4,="" 50–74%="" of="" tubules="" injured;="" and="" score="" 5,="">75 prósent af píplum slasast. Fyrir IHC greiningu var nýrað fest með 4 prósent paraformaldehýði og parafin innfelld sýni voru skorin í 5μm hluta. H&E og IHC litun var gerð eftir venjubundnum ferlum. Aðalmótefni gegn ónæmisfrumum (F4/80 og aðgreiningarþyrping 8 (CD8), Abcam, Cambridge, Bretlandi) og æðaþelsfrumum (CD31 og innanfrumu viðloðunsameind 1 (ICAM-1), Abcam) merki voru sett á hluta , í 24 klst. við 4 gráður (þynning 1:200), fylgt eftir með aukamótefninu (Alexa Fluor 594, Life Technology, Waltham, MA, Bandaríkjunum), í 1 klst. við stofuhita og 4′,6-diamidino{ {19}}fenýlindól (DAPI) var notað til að lita kjarna.

2.3. Próteingreining.

Fyrir greiningu á nýrnastarfsemi var sermi aðskilið, án segavarnarlyfs, og styrkur kreatíníns og þvagefnis köfnunarefnis í blóði (BUN) greindist með því að nota Creatinine Colorimetric Assay Kit og Quanti- Chrom Urea Assay Kit (BioAssay Systems LLC, Hayward, CA, Bandaríkjunum ), í sömu röð. Til að meta áverka á nýrnapíplum/æða, oxunarálagi, andoxunarensímum og frumudauða, var nýrnavefur gerður einsleitur með hvern stuðara. Til að greina nýrnapípluþekjufrumuáverka, nýrnaskaðasameind-1 (KIM-1) og þéttni daufkyrninga gelatínasa tengds lípokalíns (NGAL) var metin með ensímtengdri ónæmissogandi prófun (ELISA) (USCN Life Science Inc. ., Wuhan, Kína). Til að greina apoptosis var styrkur Fas og kaspasa 3 mældur með því að nota viðkomandi ELISA sett (Abcam). Til að meta oxunarálag var magn malónaldehýðs (MDA) mælt með því að nota MDA prófunarbúnað (Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute, Nanjing, Kína). Andoxunarensím, þar á meðal ofuroxíð dismutasa (SOD), katalasa (CAT), glútaþíon (GSH) og glútaþíon peroxidasi (GPx), voru mæld með því að nota heildar SOD prófunarbúnað (Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute), CAT prófunarsett ( Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute), GSH flúrómetrískt prófunarsett og GPx prófunarsett (BioVision Inc.), í sömu röð. Öll sett voru notuð samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.

2.4. Greining á genatjáningu.

Heildar-RNA var dregið út með TRIzol hvarfefninu og cDNA var búið til úr 20 ug heildar-RNA, með því að nota cDNA nýmyndunarbúnað (Invitrogen, Waltham, MA, USA). Rauntíma PCR aðstæður voru sem hér segir: 95 gráður í 10 mínútur, fylgt eftir af 40 lotum með 95 gráður í 10 sekúndur, 60 gráður í 50 sekúndur og 72 gráður í 20 sekúndur. Genmögnun var greind með því að nota SYBR grænt og 2−ΔΔCt aðferðin var notuð til að greina tjáningu. Tilraunir voru gerðar í þríriti, með því að nota eftirfarandi grunnröð: interleukin- (IL-) 1 , 5'-gcccatcctctgagactcat-3' og 5'-aggccacagg- tattttgtcg-3′; IL-6, 5'-agttgccttcttgggactga-3' og 5' -tccacgatttcccagagaac-3′; æxlisdrep þáttur- (TNF-), 5'-agcccccagtctgtatcctt-3' og 5'-ctccctttgcagaactcagg-3′; umbreytandi vaxtarþáttur- (TGF-), 5′-tggttgtagaggg- caaggac-3′ og 5'-ttgcttcagctccacagaga-3′; IL-10, 5′ -acctggtagaagtgatgccc-3′ og 5'-agggtcttcagcttctcacc-3′; IL- 22, 5′-tccaacttccagcagccata-3′ og 5′-tagcactgactcctcggaac- 3′; og glýseraldehýð 3'-fosfat dehýdrógenasa (GAPDH), 5'-tgtgtccgtcgtggatctga-3' og 5'-cctgcttcac- caccttcttga-3′.

2.5. TUNEL prófun.

Til að meta frumudauða var TdT-miðluð dUTP nick-end merking (TUNEL) próf gerð með því að nota frumufrumugreiningarbúnað (Chemicon, Bedford, MA, USA) eftir leiðbeiningum framleiðanda. Stuttlega, afparaffínuðum og endurvötnuðum skyggnum voru melt með 20ug/mL próteinasa K, við 37 gráður í 15 klst., til að fjarlægja prótein, og meðhöndluð með 3,0 prósent vetnisperoxíði, til að slökkva á innrænum peroxíðasa. Glerunum var sökkt í 1x TdT jafnvægisbuff og vinnustyrk TdT ensímsins var bætt við í 1 klst við 37 gráður. And-digoxigenin samtenging var sett á 3'-OH DNA endastöðina í 30 mínútur og liturinn var þróaður með því að nota peroxidasa hvarfefni í 3 mínútur. Eftir DAPI meðferð voru rennibrautirnar settar upp. TUNEL-jákvæðir kjarnar voru taldir í öllum sjónsviðum í hverju vefjasýni, undir 200x stækkun.

2.6. Tölfræðigreining.

Öll gildi eru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik. Marktækur munur fyrir I/R nýrnaskaðahópinn og Beluga lentil-I/R formeðferðarhópana var metinn með því að nota dreifigreiningu, fylgt eftir með Tukey's post hoc prófi, í SPSS (Statistical Package for the Social Sciences v. 9.{{ 2}}; Chicago, IL, Bandaríkjunum). p gildi < 0.05="" voru="" talin="">

cistanche salsa fríðindi

3. Úrslit

3.1. Áhrif Beluga linsubaunaformeðferðar á nýrnastarfsemi.

Formeðhöndluðu hóparnir sýndu báðir marktæk verndandi áhrif gegn I/R meiðslum (Mynd 1). Meðalþéttni BUN og kreatíníns í sermi í ómeðhöndluðum hópi var 89:92 ± 7:29mg/dL og 0:48 ± 0:16mg/dL, í sömu röð. Formeðhöndluðu hóparnir sýndu marktækt minnkað BUN (lágt: 22 :6±3:67mg/dL; hátt: 21:6± 3:17mg/dL) og kreatínín í sermi (lágt: 0:25 ± {{19} }:04mg/dL; há: 0:23 ± 0:04mg/dL) styrkur samanborið við þá í ómeðhöndlaða hópnum (p<0:01), and="" no="" significant="" differences="" were="" observed="" between="" the="" two="" pretreatment="" groups.="" these="" results="" indicated="" that="" pretreatment="" with="" beluga="" lentils="" can="" protect="" against="" acute="" renal="" functional="">

3.2. Áhrif Beluga linsubaunaformeðferðar á pípluþekjufrumuáverka og apoptosis.

Pípuskemmdir, sérstaklega rýrnun þekjufrumna, kom oft fram í ytri nýrnamergnum, og af og til greindust kjarnatap af skrúfuðum frumum, rusl úr augum á nýrnapíplum, samanbrotið ljósrými og millivefs daufkyrninga í nýru. ómeðhöndlaðan hóp (mynd 2(a)). Aftur á móti sýndu nýrun úr formeðhöndluðu hópunum næstum eðlilega frumuform og pípluskaðar sást sjaldnar í hópnum sem fékk stóra skammta en í hópnum sem fékk lágskammta. Þegar meiðslin voru gefin upp sem hundraðshluti á hverja flatarmálseiningu, var meiðslastigið lækkað í hópunum sem fengu formeðferð (lágt: 2:0±0:93; hátt: 1:5± {{ 11}}:53) samanborið við það í ómeðhöndlaða hópnum (2:87 ± 1:25) (Mynd 2(b)). Þegar KIM-1 og NGAL seyting var skoðuð (mynd 2(c)), sýndu ELISA niðurstöður að KIM-1 innihald minnkaði í formeðhöndluðu hópunum (lágt: 1, 922:83 ± 199:42 pg/ mg; hátt: 1.827:83 ± 278:26pg/mg) samanborið við ómeðhöndlaða hópinn (1.977:83 ± 184:49pg/mg). Tjáning NGAL minnkaði verulega í hópnum sem fékk stóra skammta (489:34 ± 19:95 pg/mg) samanborið við þá sem voru í litlum skömmtum (527:36 ± 15: 19 pg/ml) og ómeðhöndluð (537:05 ± 15: 70pg/mg) hópar (bls<>

Síðan var greint hvort pípulaga þekjufrumuáverka olli frumudauða. Frumufrumumyndun var metin með því að greina sundurleitt litninga-DNA með því að nota TUNEL prófið (mynd 2(d)). TUNEL-jákvæðar frumur sáust sjaldan í formeðhöndluðu hópunum (lágt: 5:00 ± 1:22; hátt: 2:25 ± 1:09). Aftur á móti sýndi ómeðhöndlaði hópurinn tiltölulega aukinn fjölda TUNEL-jákvæðra frumna á ytra medulla svæðinu (47:50 ± 16:77) (p.<0:01), showing="" apoptotic="" bodies="" that="" extruded="" into="" the="" tubular="" lumen="" (figure="" 2(e)).="" when="" the="" secretion="" of="" apoptosis-related="" molecules="" (fas="" and="" caspase="" 3)="" was="" analyzed="" by="" elisa="" (figure="" 2(f)),="" fas="" expression="" was="" high:="" 3:96="" ±="" 0:55ng/mg)="" compared="" with="" that="" in="" the="" untreated="" group="" (7:10="" ±="" 0:87ng/mg),="" and="" caspase="" 3="" expression="" showed="" similar="" results="" (low:="" 8:44="" ±="" 2:05ng/mg;="" high:="" 8:25="" ±="" 1:28ng/="" mg;="" and="" untreated:="" 11:99="" ±="" 0:63ng/mg)="" (p=""><0:05). these="" results="" indicated="" that="" beluga="" lentil="" pretreatment="">

pípulaga þekjufrumna apoptosis framkallað af I/R.

3.3. Áhrif Beluga linsubaunaformeðferðar á æðaþelsfrumuáverka.

Áhrif formeðferðar fyrir hvítlaxlinsubaunir á æðaþelsfrumur voru staðfest með IHC, með því að nota CD31 mótefni (mynd 3(a)). Í venjulegum hópi voru CD31-jákvæðar æðar auðkenndar, en CD31-jákvæðar frumur fundust ekki í ómeðhöndlaða hópnum, sem gefur til kynna I/R-völdum æðaröskun. Háskammta formeðferðarhópurinn sýndi CD31-jákvæðar frumur í peritubular háræðunum, sem gefur til kynna æðaverndandi áhrif háskammta formeðferðar með hvítblómabaug. Innþelsfrumur voru skoðaðar með því að greina ICAM- 1, viðloðunsameind, og jákvæðar frumur voru oftar auðkenndar á pípulaga svæði ómeðhöndlaða hópsins (46:4±41:7 frumur/glas) samanborið við formeðhöndluðu hópana ( lágt: 5:77 ± 1:01 frumur/skyggna; hátt: 3:72 ± 1:05 frumur/- renna) (Mynd 3(b)). Þessar niðurstöður gáfu til kynna að formeðferð með beluga linsubaunir varðveitti háræðar og hindraði virkjun viðloðunsameinda á yfirborði æðaþelsfrumunnar.

3.4. Áhrif Beluga linsubaunaformeðferðar á oxunarálag.

To evaluate the antioxidant effects of beluga lentil pretreat- ment, MDA, SOD, CAT, GSH, and GPx levels were detected by ELISA (Figure 4). MDA levels decreased in the pretreated groups (low: 0:85 ± 0:23nmol/mg; high: 0:81 ± 0:22nmol/ mg) compared with that in the untreated group (0:96 ± 0:11nmol/mg) (p >0:05) (Figure 4(a)). However, the antioxidant enzyme activities increased in the pretreated groups (Figure 4(b)) compared with those in the untreated group (p >{{{{20}}}}:05), fyrir SOD (lágt: 360:21 ± 56:42U/mL; hátt: 362:7{{ 36}} ± 70:32U/mL og ómeðhöndlað: 333:52 ± 41:58U/mL), CAT (lágt: 3:64 ± 1:09 nmól/g; hátt: 3:21 ± 0:76nmól/g; og ómeðhöndlað: 3:18 ± 0:40 nmól/g), GSH (lágt: 4:13 ± 0:53 nmól/mg; hátt: 4:56 ± 0:69 nmól/mg; og ómeðhöndlað: 3:59 ± 0 :53nmól/mg), og GPx (lágt: 198:89 ± 48:43U/ug; hátt: 219:61 ± 138:08U/ug; og ómeðhöndlað: 165:14 ± 34:73U/ug). Þrátt fyrir að þessi munur hafi ekki verið tölfræðilega marktækur bentu þessar niðurstöður til þess að formeðferð með beluga linsubaunir kom í veg fyrir I/R-framkallaða oxunarálag á nýrum með því að auka andoxunarvirkni í nýrum.

3.5. Áhrif Beluga linsubaunaformeðferðar á ónæmisfrumuinnflæði, frumufrumur og bólgu. Íferð átfrumna (F4/80 plús) og T-frumna (CD4 plús) og bólgueyðandi cýtókín (IL-1, IL-6 og TNF-) losun voru greind til að meta bólgu af völdum frumnauða. Færri F4/80 plús og CD4 plús innsnípandi ónæmisfrumur sáust í formeðhöndluðu hópunum en í ómeðhöndlaða hópnum, eins og metið var með IHC greiningu (mynd 5(a)). Rauntíma PCR greiningin sýndi að þéttni mRNA í nýrum bólgueyðandi cýtókíns (IL-1, TNF- og IL 6) lækkuðu í hópnum sem var meðhöndluð áður en þau voru í ómeðhöndlaða hópnum (Mynd 5(b) )). Hins vegar jókst mRNA-gildi bólgueyðandi frumudrepna (TGF- og IL-22) í formeðhöndluðu hópunum samanborið við ómeðhöndlaða hópinn, nema fyrir IL-10 (Mynd 5(c)). Þessar niðurstöður bentu til þess að hægt væri að koma í veg fyrir I/R-framkallaða bólguáverka í nýrum með formeðferð með hvítblómalindum vegna bólgueyðandi áhrifa, þó að IL-10 hafi ekki verið fyrir áhrifum.

anthocyanin viðbót

4. Umræður

Nýrnaskaðar af völdum I/R einkennast venjulega af hratt minnkandi nýrnastarfsemi [20]. Hægt er að áætla nýrnastarfsemi með því að nota BUN og kreatíníngildi í sermi, sem eru niturefnabundnar efnaskiptaafurðir sem gefa til kynna gauklasíuvirkni [21]. Ómeðhöndlaði hópurinn sýndi marktækt aukin BUN (89:92 ± 7:29mg/dL) og kreatínín (0:48 ± {{20}}:16mg/dL) gildi, sem gefur til kynna starfhæfa nýrnabilun framkallað af I/R. Hins vegar sýndu formeðhöndluðu hvítlaufa-linsubaunahóparnir marktækt minnkað BUN (lágt: 22 :6±3:67mg/dL; hátt: 21:6± 3:17mg/dL) og kreatínín í sermi (lágt: 0: 25 ± 0:04mg/dL; há: 0:23 ± 0:04mg/dL) gildi (p<0:01) compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" group.="" these="" values="" are="" similar="" to="" those="" observed="" in="" normal="" mice="" (male,="" 6wks;="" bun:="" 22:68="" ±="" 3:05mg/dl;="" creatinine:="" 0:25="" ±="" 0:06mg/dl)="" [22].="" the="" significantly="" decreased="" bun="" and="" serum="" creatinine="" values="" observed="" in="" the="" pretreated="" groups="" relative="" to="" the="" untreated="" group="" indicated="" that="" beluga="" lentil="" pretreatment="" exerted="" protective="" effects="" on="" renal="" function="" against="" i/r-induced="" renal="">

Skert nýrnastarfsemi bendir til vandamála við gauklasíun sem stafar af bakleka gauklasíunnar yfir pípulaga þekjuvef, sem táknar það svæði sem er alvarlegast slasaður af I/R [23]. I/R leiddi til kjarnataps í flögnun frumna, rusl úr augum á nýrnapíplum og hrundi holrými í pípulaga þekjufrumum. Formeðhöndluðu hóparnir sýndu minni vefjameinafræðilega pípuskaða á skammtaháðan hátt. Vefjameinafræðilegur pípluskaði sem sást var staðfestur með því að meta sameindamerki, KIM-1 og NGAL [24]. KIM-1 er fosfatidýlserín viðtaki sem virkar sem frumuþekkingarsameind, sem flytur slasaða frumu yfir í lýsósómið fyrir apoptotic/necrotic frumuátfrumu, úthreinsun apoptotic rusl og takmörkun á bólgueyðandi svörun [25]. NGAL er lítið siderophores prótein sem binst gelatínösum úr daufkyrningum manna. NGAL er sjaldan tjáð í venjulegum nýrum, en bráðar, blóðþurrðarskemmdir eða eitraðar nýrnaskemmdir leiða til seytingar NGAL af þekjufrumum í nær/fjarpíplum, sem eykur styrk NGAL í þvagi og blóði; þannig er hægt að nota NGAL sem nýsnemma lífmerki fyrir bráða nýrnabilun af völdum I/R [26]. Formeðhöndluðu hóparnir sýndu minni KIM-1 og NGAL seytingu og hópurinn sem fékk háskammta formeðferð sýndi marktæka minnkun á NGAL seytingu samanborið við ómeðhöndlaða hópinn. Lækkunin á pípluskaða og KIM-1 og NGAL próteinaseytingu benti til þess að formeðferð fyrir beluga linsubaunir hefði verndandi áhrif gegn skemmdum á þekjufrumum í píplum af völdum I/R.

Þegar I/R meiðsli er alvarlegt, eru skemmdar frumur hreinsaðar í gegnum apoptotic leiðina, sem er meinalífeðlisfræðilegt frumudauðakerfi [27]. Hægt er að greina DNA-skemmdir sem eru sérstakar fyrir frumufrumu í gegnum TUNEL prófið.

TUNEL-jákvæðar frumur sáust oft í ómeðhöndlaða hópnum, á meðan formeðhöndluðu hvítlaufa-linsubaunir hóparnir sýndu marktækt minnkað TUNEL-jákvæðar frumur, á skammtaháðan hátt. Þessi vefjafræðilega vísbending um apoptosis var staðfest með því að skoða Fas og caspase 3 tjáningu. Fas er bindill sem binst frumudauðaviðtakanum og sést upphaflega við forritaðan frumudauða [28]. Caspase 3 er innanfrumu execution ensím á apoptotic frumudauða ferli, sem leiðir til apoptotic líkama myndun [29]. Fas og caspase 3 próteinmyndun minnkaði verulega í formeðhöndlaða hópnum samanborið við þá í ómeðhöndluðum hópnum, sem staðfestir að formeðferð með beluga linsubaunir getur hamlað apoptotic merkjaflutningi eftir I/R meiðsli.

I/R meiðsli veldur einnig tapi á öræðum nýrna [30], sem leiðir til meinafræðilegra breytinga á æðaþelsfrumum [20]. Nýrnaskemmdir greindust með því að nota mótefni gegn CD31, æðaþelsfrumumerki [30]. CD31 tjáning greindist ekki í ómeðhöndluðum hópi, sem bendir til taps á nýrnasmáæðum. Hins vegar sýndi hópurinn sem fékk háskammta formeðhöndlaða jákvæða CD31 tjáningu, með svipaðan æðaþéttleika og sást í venjulegum hópi, sem benti til þess að formeðferð með beluga linsubaunir, í stórum skömmtum, hefði verndandi áhrif á varðveislu æðaþelsfrumna. Skemmdar æðaþelsfrumur tjá æðaþels-hvítfrumna viðloðunsameindir, eins og ICAM-1 [31]. Auknar viðloðunsameindir geta leitt til virkjunar hvítfrumna, háræðastíflu, frumumyndunar og bólgueyðandi viðbragða [32]. Ómeðhöndlaði hópurinn sýndi jákvæða ICAM-1 tjáningu, sem gefur til kynna aukna tjáningu viðloðunsameinda sem orsakast af skemmdum á æðaþelsfrumum. Hins vegar sýndi hópurinn sem fékk háskammta formeðhöndlaða neikvæða ICAM-1 tjáningu, sem gefur til kynna verndandi áhrif formeðferðar með hvítblómalindum til að viðhalda æðaþelsfrumum, bæði virkni og lífeðlisfræðilega. Viðhaldnar æðabyggingar geta veitt stöðugt blóðflæði, skilað súrefni og næringarefnum til vefja og frumna sem hafa skemmst af I/R, og aðstoðað við virkni og vefjafræðilega endurheimt nýrna.

Endurflæði endurheimtir súrefnisframboð til skemmdra frumna, sem getur kallað fram tjáningu oxunarálagstengdra ensíma, sem umbreyta súrefni í ROS [33]. ROS eru óstöðugar og mjög hvarfgjarnar vörur sem mynda sindurefna, sem valda DNA skemmdum, frumudauða og drepi, með breytingum á frumupróteinum, lípíðum og kjarnsýrum. Sindurefni skaða ómettaðar fitusýrur í frumuhimnunni, sem leiðir til lípíðperoxunar [34]. Lípíðperoxíð er síðan brotið niður í MDA, sem dregur úr andoxunarensímvirkni, svo sem SOD, GPx, GSH og CAT [35]. SOD hvatar umbreytingu súperoxíðs í súrefni og vetnisperoxíð, sem er frekar niðurbrotið af CAT. GPx er lykilandoxunarensím sem eyðir peroxíði með því að nota GSH. GSH getur afeitrað ýmsar oxunarvörur, ásamt GPx. Magn MDA og andoxunarensíma sýndu öfugt samband í ELISA greiningu. Í formeðhöndluðu hópunum var MDA tjáning tiltölulega lítil, en andoxunarensímin voru mjög tjáð samanborið við viðkomandi magn þeirra í ómeðhöndluðu hópnum.

Þessar niðurstöður gáfu til kynna að formeðferð fyrir beluga linsubaunir geti dregið úr I/R-völdum nýrnaskemmdum með því að hindra oxunarálagsferlið, með því að hindra himnulípíðperoxun og virkjun andoxunarensíma.

Endurflæði vekur einnig virkjun æðaþelsfrumna, sem leiðir til ICAM-1 tjáningar á yfirborði frumunnar. Hið tjáða ICAM-1 tengist daufkyrningum í gegnum eitilfrumuvirknitengda mótefnavaka-1 (LFA-1), sem leiðir til viðtengingar daufkyrninga við æðaþelsfrumur, daufkyrningaíferð og seytingu bólgueyðandi cýtókín af daufkyrningum [36]. Eftir að daufkyrningar birtast á skemmdu svæði á sér stað inníferð F4/80 plús átfrumna. Átfrumur greina í bólgueyðandi M1 og bólgueyðandi M2 svipgerð, allt eftir tíma og umhverfi. M1 átfrumur seyta bólgueyðandi frumudrepum (IL-1, TNF- og IL- 6) sem tengjast I/R-völdum nýrnaskemmdum, en M2 átfrumum seyta bólgueyðandi frumudrepum (TGF-, IL{ {19}} og IL-22) [37, 38]. Átfrumur örva einnig CD4 plús T frumuvirkjun. Virkjaðar T frumur búa til interferón- (IFN-), sem eykur ónæmissvörun með virkjun M1 átfrumna [39]. Í þessari rannsókn sýndu formeðhöndluðu beluga linsubaunir hóparnir hamlandi áhrif gegn F4/80 plús átfrumum og CD4 plús T frumum inn í nýrnaberki, sem leiddi til minnkaðrar tjáningar IL-1, IL-6, og TNF-mRNA og aukin tjáning TGF-, IL-10 og IL-22 mRNA. Þessar niðurstöður gáfu til kynna að formeðferð með beluga linsubaunir getur dregið úr bólgusvörun með því að hamla ónæmisfrumum og draga úr tjáningu bólgufrumuefna.

5. Ályktanir

Í stuttu máli sýndu formeðferðarhóparnir fyrir beluga linsubaunir minnkað skaða á nærpíplum, minnkað áverka-tengda sameindaseytingu, minnkað TUNEL-jákvæðar frumur, minnkað frumudauðatengda sameindaseytingu, jákvæða tjáningu öræða, neikvæða tjáningu viðloðunarmerkja, andoxunaráhrif og bólgueyðandi áhrif. viðbrögð. Þess vegna hafði formeðferð fyrir beluga linsubaunir verndandi áhrif gegn nýrnaskemmdum af völdum I/R, með apoptótískum, bólgueyðandi og andoxunarvirkni. Byggt á niðurstöðum þessarar rannsóknar er hægt að varðveita nýrnastarfsemi með því að nota beluga linsubaunameðferðir í klínískum aðstæðum sem tengjast innri/r meiðsli, svo sem nýrnabrot að hluta.

flavonoids viðbót í nýrum

Aðgengi gagna

Gögn eru fáanleg sé þess óskað.

Uppljóstrun

Greint var frá handritságripinu á 72. ársfundi kóreska þvagfærasjúkdómafélagsins.

Hagsmunaárekstrar

Það eru engir hagsmunaárekstrar.

Framlög höfunda

Syng-ook Lee og So Young Chun lögðu jafnt sitt af mörkum til þessa verks.

Viðurkenningar

Þessi vinna var styrkt af Lífeðlisfræðilegum Rannsóknastofnun styrk frá Kyungpook National University Hospital (2019).

1Department of Food Science and Technology, Keimyung University, Daegu 42601, Lýðveldið Kóreu

2BioMedical Research Institute, Kyungpook National University Hospital, Daegu 41940, Lýðveldið Kóreu

3 Stuðningsteymi rannsóknardýrarannsókna, Yeungnam háskólasjúkrahúsinu, Daegu 42415, Lýðveldinu Kóreu

4Department of Internal Medicine, Yeungnam University College of Medicine, Daegu 42415, Lýðveldið Kóreu

5Department of Urology, School of Medicine, Kyungpook National University, Daegu 41566, Lýðveldið Kóreu

6Department of Pathology, School of Medicine, Kyungpook National University, Daegu 41566, Lýðveldið Kóreu

7Department of Urology, Yeungnam University College of Medicine, Daegu 42415, Lýðveldið Kóreu

Heimildir

[1] SY Chun, DH Kim, JS Kim, o.fl., "Ný dorsal rauf nálgaðist non-blóðþurrðarhækkun að hluta nýranámsaðferð fyrir endurnýjun vefja í músarlíkani," Tissue engineering and regenerative medicine, vol. 15, nr. 4, bls 453–466,2018.

[2] M. Agrawal og R. Swartz, „Bráð nýrnabilun,“ American Family Physician, vol. 61, nr. 7, bls. 2077–2088, 2000.

[3] KR Tuttle, "Ischemic nephropathy," Current Opinion in Nephrology and Hypertension, bindi. 10, nr. 2, bls. 167–173,2001.

[4] K. Singbartl og K. Ley, "Vörn gegn alvarlegri bráðri nýrnabilun af völdum blóðþurrðaraffalls með því að hindra E-selektín," Critical Care Medicine, bindi. 28, nr. 7, bls. 2507–2514, 2000.

[5] M. Takada, KC Nadeau, GD Shaw, KA Marquette og NL Tilney, "Cýtókínviðloðun sameindarinnar í blóðþurrðar-/endurflæðisskaða á rottum nýra. Hindrun með leysanlegum P-selektín bindli," The Journal of klínísk rannsókn, árg. 99, nr. 11, bls. 2682–2890, 1997.

[6] J. Niu, J. Wu, X. Li og F. Zhang, „Samband á milli endóþelíns-1/endóþelínviðtaka A og bólgu í nýrum músa í kjölfar bráðrar blóðþurrðar/endurflæðis,“ Molecular Medicine Reports, bindi . 11, nr. 5, bls. 3981–3987, 2015.

[7] L. Wang, X. Liu, H. Chen o.fl., "Áhrif peroxíðs II á frumudauða af völdum nýrnablóðþurrðar/endurflæðisskaða hjá rottum," Experimental and Therapeutic Medicine, vol. 9, nr. 3, bls. 817–822, 2015.

[8] B. Dong, H. Zhou, C. Han, o.fl., "Blóðþurrð/endurflæði-framkölluð chop tjáning stuðlar að apoptosis og skerðir endurheimt nýrnastarfsemi: hlutverk sýrublóðsýringar og Gpr4," PLoS One, bindi. 9, nr. 10, grein e110944, 2014.

[9] DL Cruthirds, L. Novak, KM Akhi, PW Sanders, JA Thompson og LA MacMillan-Crow, "Mitochondrial targets of oxidative stress during renal ischemia/reperfusion," Archives of biochemistry and biophysics, vol. 412, nr. 1, bls. 27–33, 2003.

[10] B. Yang, S. Jain, IZ Pawluczyk, o.fl., "Bólga og kaspasavirkjun við langvarandi nýrnablóðþurrð / endurflæðisskaða og ónæmisbælingu í rottum," Kidney International, bindi. 68, nr. 5, bls. 2050–2067, 2005.

[11] HH Wu, TY Hsiao, CT Chien og MK Lai, "Blóðþurrð með stuttum tímabilum endurflæðis dregur úr nýrnablóðþurrð / endurflæðisframkallaðri frumuhimnu og sjálfsát í rottum," Journal of biomedical science, vol. 16, nr. 1, 2009.

[12] EM El Morsy, MA Ahmed, og AA Ahmed, "Attenuation of renal ischemia/endurflæðisskaða með açai extract preconditioning in a rat model," Life sciences, vol. 123, bls. 35–42, 2015.

[13] H. Ilhan, M. Eroglu, V. Inal, o.fl., "Hyperbaric súrefnismeðferð léttir oxunarálag og vefjaskaða í nýrnablóðþurrð / endurflæðisskaða hjá rottum," Renal Failure, vol. 34, nr. 10, bls. 1305–1308, 2012.

[14] H. Chen, B. Xing, X. Liu, o.fl., „Ósonoxunarformeðferð hindrar bólgu og frumudauða í rottulíkani af nýrnablóðþurrð/endurflæðisskaða,“ European Journal of pharmacology, vol. 581, nr. 3, bls. 306–314, 2008.

[15] BJ Xu, SH Yuan og SK Chang, "Samanburðargreiningar á fenólsamsetningu, andoxunargetu og lit á belgjurtum á köldum árstíð og öðrum völdum belgjurtum," Journal of Food Science, bindi. 72, nr. 2, bls. S167–S177, 2007.

[16] SO Lee og SH Lee, "Pólýfenólinnihald og andoxunarvirkni linsubaunaþykkna úr mismunandi ræktunarafbrigðum," Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, vol. 45, nr. 7, bls. 973–979, 2016.

[17] SO Lee og SH Lee, „Nrf2-miðluð bólgueyðandi áhrif metanólútdráttar úr beluga linsubaunir í LPS-meðhöndluðum RAW264.7 frumum,“ árið 2018 KFN International Symposium and Annual Meeting, bls. {{ 7}}, Busan, Kóreu, 2018.

[18] EE Hesketh, A. Czopek, M. Clay, o.fl., "Renal ischemia-reperfusion injury: a múslíkan af meiðslum og endurnýjun," JoVE (Journal of Visualized Experiments), nr. 88, bls. 8, 2014.

[19] Q. Wei og Z. Dong, "Músarlíkan af bráðum nýrnaskaða vegna blóðþurrðar: tæknilegar athugasemdir og brellur," American Journal of Physiology-Renal Physiology, vol. 303, nr. 11, bls. F1487– F1494, 2012.

[20] JV Bonventre og L. Yang, "Cellular pathophysiology of ischemic acute kidney injury," The Journal of Clinical Investigation, bindi. 121, nr. 11, bls. 4210–4221, 2011.