Fenýletanóíð glýkósíð frá Paraboea Martinii vernda rottufrumur (PC12) frumur gegn vetnisperoxíði af völdum frumuáverka

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Xue Gong†a, Yan Xu†b, Kai Renc, Xiaorong Baid

Vitað er að oxunarálag gegnir mikilvægu hlutverki í meingerð nokkurra sjúkdóma. Það er tengt orsökum Alzheimerssjúkdóms (AD), Parkinsonsveiki (PD), flogaveiki og annarra sjúkdóma [1-3]. Sem stendur hafa áframhaldandi framfarir orðið í rannsóknum á meingerð AD, PD og annarra sjúkdóma. Hins vegar, vegna takmarkaðrar þekkingar á sameindaháttum sem liggja að baki AD, PD og öðrum sjúkdómum, hafa árangursríkar fyrirbyggjandi eða læknandi aðferðir fyrir þessa sjúkdóma ekki verið að veruleika [4]. H2O2 er mikilvægur hluti hvarfgjarnra súrefnistegunda (ROS). Samkvæmt því er H2O2-framkallað PC12 frumuáverkar algengasta líkanið af oxunarálagi og er mikið notað í tilraunarannsóknum á taugaverndandi áhrifum [5]. Heme oxygenasi 1 (HO-1) og glútamat-cystein lígasa-hvata undireining (GCLC) eru mikilvæg frumu andoxunarensím og báðum genunum er stjórnað aftan við kjarnaþætti erythroid 2 (Nrf2), sem er að koma fram sem efnilegt lækningalyf. markmið fyrir taugavernd [6,7]. Fenýletanóíð glýkósíð, unnin úr C-6-C-3 einingunni, innihalda marga fenólhýdroxýlhópa og hafa umtalsverða andoxunar- og öldrunarvirkni. Undanfarin ár hafa rannsóknir bent til þess að margar lækningajurtir innihaldi fenýletanóíð glýkósíð sem sýna verulega andoxunarvirkni. Til dæmis, fenýletanóíð glýkósíð unnin úrHerba cistancheVitað er að hafa verndandi áhrif á vitræna galla í AD. Sú rannsókn rannsakaði tengda verndarbúnaðinn með því að nota AD öldrunarhraða mús 8 (SAMP8) líkan. Niðurstöðurnar bentu til þess að geta fenýletanóíð glýkósíða til að bæta vitsmunalegan vankanta hjá SAMP8 músum gæti tengst því að efla synaptic mýkt sem felur í sér andoxunarferli [8]. Í þessari rannsókn voru tvö fenýletanóíð glýkósíð aðskilin og hreinsuð úr Tectona grandis (tekk) viðarhnútum; þessi efnasambönd sýndu athyglisverð andoxunaráhrif sem voru ákvörðuð með straummælingaraðferð [9]. Ennfremur hafa koffeóýl fenýletanóíð glýkósíð efnasambönd frá Lindernia ruellioides skammtaháð andoxunarefni og súperoxíð anjón sem hreinsar sindurefna in vitro [10]. Verkunarháttur fenýletanóíð glýkósíða er tengdur stjórnun á Nrf2/ARE boðleiðinni, sem hefur áhrif á myndun SOD, CAT, GSH-PX og annarra andoxunarensíma [11]. Fjölskyldan Gesneriaceae, sem inniheldur 150 ættkvíslir og um það bil 3700 tegundir, er aðallega dreift í hitabeltis- og tempruðum svæðum í austur- og suðurhluta Asíu, Eyjaálfu, Suður-Ameríku, Afríku, Suður-Evrópu og Mexíkó [12].

Herba cistanche

Gesneriaceae í Kína. Greint var frá því að um það bil 100 tegundir hafa læknisfræðilega virkni og flestar þeirra eru aðallega dreifðar í Guangxi og Guizhou héruðum [13]. Á undanförnum árum hefur rannsóknum á Gesneriaceae plöntum smám saman aukist á mismunandi svæðum í heiminum og nokkur ný efnisþáttur með lífeðlisfræðilega virkni hafa fundist [14]. Paraboea martinii (Levl.) Burtt tilheyrir Parabola (Gesneriaceae) og er jurtarík planta. Byggt á "The Chinese Traditional Medicine Resource Records" var skráð að öll plantan er notuð sem lyf. Þar að auki getur það beitt mörgum lyfjafræðilegum virkni á ástandi eins og blóðmyndun, bjúg, mæði, áverka og beinbrot [15]. Bai sannaði að fenýletanóíð glýkósíð eru eitt helsta efnafræðilega innihaldsefni Gesneriaceae plantna [16]. Sumir vísindamenn hafa einnig komist að því að fenýletanóíð glýkósíð hafa verulega andoxunarvirkni [17]. Li sýndi fram á að fenýletanóíð glýkósíð afCistanche deserticola have significant antioxidant activity [18]. In addition, Ju systematically studied the neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides using PC12 cell models. The results indicated that phenylethanoid glycosides significantly attenuate the damage induced by Aβ1-42 [19]. In our studies, we isolated eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) from P. martini [20]. All compounds were isolated from the genus Parabola for the first time, and the compounds paraboside A, paraboside B, p paraboside I, paraboside II, and paraboside III were new compounds [20]. In a continuing search for molecules with antioxidant properties, phenylpropanoid glycosides were examined. However, whether these phenylpropanoid glycosides from P. martini could protect against H2O2-induced PC12 cell injury was previously unclear. In this study, we examined the protective effects of phenylpropanoid glycosides on H2O2-induced damage to PC12 cells. We also examined the effects and preliminary mechanism underlying the activity of phenylpropanoid glycosides with respect to the activation of HO-1 and GCLC in vitro. Materials and methods Materials Paraboea martini (Level.) Burtt was collected from Daxin County, Guangxi Autonomous Region in August 2014 and verified by Dr. Minhui Li (Baotou Medical College). Voucher specimens were deposited at the Laboratory of Pharmacognosy and Phytochemistry. Eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) were extracted and separated from P. martinii (Levl.) Burtt by prof. Xiaoqin Wang [20]. The purity (>98 prósent) af átta fenýlprópanóíð glýkósíðum voru mæld með HPLC aðferð til að staðla hámarksflatarmál. Sem dæmi eru litskiljunartöflur parabósíðs B og parabósíðs II sýndar á mynd 1 og hlutfallslegt innihald þeirra reyndist vera 98,23 prósent og 99,20 prósent, í sömu röð. Illa aðgreinda nýrnahettufrumufrumufrumulína (PC12) var keypt frá frumubankanum við Kína vísindaakademíuna (Shanghai, Kína). Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) og hestasermi voru keypt frá Gibco (Gaithersburg, MD, Bandaríkjunum). Fósturnautasermi (FBS) var keypt frá Thermo Fisher Scientific (Hyclone, Waltham, MA, Bandaríkjunum). H2O2 var fengið frá Tianjin Fu Yu Reagent Co., Ltd. (Tianjin, Kína). Trizol var keypt frá Invitrogen (Carlsbad, CA, Bandaríkjunum). PrimeScriptTM RT hvarfefnissett (Perfect Real Time) var fengið frá TaKaRa Biotechnology Co. (Dalian, Kína). Grunnur fyrir HO-1, GCLC og GAPDH voru smíðaðir af Sangon Biotech (Shanghai, Kína). CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit (MTS) var fengið frá Promega Corp. (Madison, Bandaríkjunum). Hemlar á HO-1 sinkprótóporfýríni (ZnPP) voru keyptir frá Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, Bandaríkjunum). Einnig voru notuð Thermo311 CO2 útungunarvél (Thermo, Bandaríkin), StepOnePlusTM rauntíma PCR Instrument Thermal Cycling Block (Thermo), Thermo Scientific Multiskan FC (Thermo), og xCELLigence RTCA DPlus Analyzer og E-Plate 16 (ACEA Biosciences, Bandaríkjunum). .

Cistanche deserticola

Frumuræktun og meðferð

PC12 frumur voru ræktaðar í DMEM sem innihélt 5 prósent FBS og 5 prósent hrossasermi við 37 gráður í rakaðri 5 prósent CO2 andrúmslofti. PC12 frumum var skipt í þrjá hópa sem hér segir: samanburðarhóp, fyrirmyndarhóp og meðferðarhóp. Átta fenýlprópanóíð glýkósíð voru leyst upp í DMSO (< 0.01%)="" and="" then="" diluted="" with="" a="" complete="" culture="" medium.="" to="" study="" the="" effects="" of="" the="" eight="" phenylpropanoid="" glycosides="" on="" h2="" o2-induced="" cell="" injury,="" pc12="" cells="" were="" cultured="" with="" the="" eight="" compounds="" at="" concentrations="" of="" 3.125,="" 6.25,="" 12.5,="" 25,="" and="" 50="" μm="" for="" 12="">

Ákvörðun á H2O2

Við ákváðum viðeigandi styrk H2O2 með því að nota rauntíma frumugreiningu (RTCA). PC12 frumum var sáð í CIM-plötu-16 örplötu í rúmmáli 100 µL og síðan ræktaðar í 12 klst við 37 gráður í andrúmslofti 5% CO2. PC12 frumunum var skipt í samanburðar- og módelhópa. Næst var 10 μL H2O2 (50, 100, 200 og 400 μM) bætt við líkanhópana og viðmiðunarhóparnir voru meðhöndlaðir með 10 μL fullkomnu DMEM, sett upp í þremur flóknum holum. E-platan 16 var sett í xCELLigence RTCA, fylgst með á 15 mínútna fresti og niðurstöðurnar voru skráðar í 32 klst. Áhrif H2O2 á PC12 frumur voru greind með því að nota xCELLigence RTCA gagnagreiningarhugbúnaðinn. Gildi frumuvísitölu (CI) var notað til að ákvarða ákjósanlegan H2O2 styrk og verkunartíma.

Efnaútdráttur og einangrun

Brot voru aðskilin út frá pólun þeirra með því að nota áður lýstar aðferðir. Loftþurrkað, duftformað P. martini (4 kg) var dregið út þrisvar sinnum í röð með 75 prósenta vatnskenndri etanóllausn [20]. Útdrættirnir sem fengust voru síðan þéttir með því að nota snúningsuppgufunartæki til að fjarlægja etanól, og hráþykkni fengust. Sýnin voru leyst upp í afjónuðu vatni og síðan dregin út í röð með jarðolíueter, etýlasetati, n-bútanóli og vatni. N-bútanól útdrátturinn (400 g) var brotinn með því að nota AB-8 stórgjúpa plastefnissúlu og etanól-H2O2 lausn (0, 1{{47} }, 30, 50, 70 og 95 prósent). Sex brot (brot 1–6) fengust að lokum. Hlutir 3 og 4 voru aðskildir með MCI súlu með þrepastigi MeOH-H2O2 (10-100 prósent). Næst voru afurðirnar einangraðar með því að nota Sephadex LH-20 með 50 prósent MeOH sem skolefni. Efnasambönd 1 (41,0 mg) og 6 (15,6 mg) voru einangruð úr broti 3. Efnasambönd 2 (62,0 mg), 3 (34,7 mg), 7 (11,0 mg) og 8 (26,0 mg) voru fengin úr broti 4 með því að nota Sephadex LH-20 litskiljun með 50 prósent MeOH sem skolefni. Lokaeinangrun voru framkvæmd með hálfundirbúnum, öfugfasa HPLC (Merck LiChrosorb, RP-18, RP-18, 250 × 10 mm) með 50 prósent MeOH og UV greiningu við 280 nm til að gefa efnasambönd 4 (39,0 mg) og 5 (9,0 mg) [20].

Frumulífvænleikapróf

PC12 frumum var sáð í 96-brunnsplötur með þéttleikanum 2 × 1{{10}}4 frumur/brunn með lokarúmmáli 100 µL . PC12 frumur voru ræktaðar við 37 gráður með 5 prósent CO2 í 12 klst. Því næst voru frumurnar meðhöndlaðar með ýmsum styrkjum af hráefni (0.025, 0.05, 0.1, 0.2 og 0.4 mg/mL) og efnasamböndum 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 og 8 við fimm styrkleika (3,125, 6,25, 12,5, 25 og 50 μM). Eftir formeðferð í 24 klst. var lífvænleiki frumna ákvarðaður með MTS greiningum. PC12 frumur voru forræktaðar með eða án HO-1 hemils án ZnPP (15 μM) í 30 mínútur, síðan ræktaðar með eða án caleolarioside B, paraboside B og paraboside II (3,125 μM) í 12 klst. og loks ræktaðar með 400 μM H2O2 í 6 klst. Eftir meðferð var fjöldi frumna sem lifðu ákvarðaður með MTS prófi [6].

Verndaráhrif óhreinsaðs útdráttar og einliða efnasambanda á H2O2-meðhöndlaðar PC12 frumur

Frumurnar voru ræktaðar í {{0}}brunnsplötu með lokarúmmáli 100 µL. Raðþynningar af óhreinsuðu útdrætti (0.025, 0,05, 0,1, 0,2 og 0,4 mg/ml) var bætt við meðhöndlaða hópinn. Eftir formeðferð í 12 klst. var 400 μM af H2O2 lausn (ákjósanlegur styrkur) bætt við meðhöndlaða hópinn og H2O2 hópinn í hverjum brunni í 6 klst. MTS lausn var síðan bætt við hvern brunn og plöturnar voru ræktaðar í 3 klst við 37 gráður C. Plöturnar voru sveifluðar á lágum hraða í 5 mínútur við stofuhita þar til allir kristallar voru að fullu uppleystir. Frumuvörn var ákvörðuð út frá MTS prófunarniðurstöðum samkvæmt 2204 X. GONG ET AL framleiðanda. Hlaðið niður af https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145 af gestum 27. ágúst 2021leiðbeiningar. Ljósþéttleiki var ákvarðaður við gleypnibylgjulengd 490 nm. Við fylgjumst frekar með virkni efnasambanda 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 og 8 einangruð úr brotum 3 og 4. Raðþynningar efnasambanda 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 og 8 (3.125, 6.25, 12.5, 25 og 50 μM) var bætt við meðhöndlaða hópinn til að ákvarða verndandi áhrif þeirra á H2O2-framkallaðar PC12 frumur.

fenýletanóíð glýkósíð frá Cistanche deserticola: Verndar taugafrumur og gegn öldrun

Magntíma PCR (qRT-PCR)

PC12 frumur voru safnað 12 klst. eftir meðferð með 3.125 μM caleolarioside B, paraboside B og paraboside II. Heildar-RNA var dregið út með því að nota TRIzol-hvarfefni og skammtar af heildar-RNA voru umritaðir í öfugt með því að nota Primescript RT Master Kit samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Eftirfarandi grunnur voru notaðir fyrir tilraunirnar í samræmi við fyrri skýrslu [21]. HO-1: Áfram 5′ -GC CTGCTAGCCTGGTTCAAG-3′, afturábak 5′ -AGC GGTGTCTGGGATGAACTA-3′; GCLC: Áfram 5′ - GTCCTCAGGTGACATTCCAAGC-3′, afturábak 5′ -TG TTCTTCAGGGGCTCCAGTC-3′; GAPDH: Áfram 5′-AAGCTGGTCATCAACGGGAAAC-3′, afturábak 5′- GAAGACGCCAGTAGACTCCACG-3′. Skammtar af cDNA sem fengust voru síðan magnaðir með PCR. Hvarfaðstæður voru sem hér segir: upphafsdenaturnun við 95 gráður (30 s), fylgt eftir með 40 lotum við 95 gráður (5 s), 60 gráður (34 s) og 72 gráður (35 s). Allir primerarnir voru prófaðir og FL flúrljómunarmerkið greindist; síðan var △Ct gildið reiknað og hlutfallsleg gildi borin saman við gildi samanburðarhópsins með því að nota eftirfarandi jöfnu: △Ct=Ct (sýnishorn) − Ct (innræn viðmiðun), △△Ct {{36} } △Ct (sýnishorn) −△Ct (ómeðhöndlað), og skipta um=2-△△Ct. Glýseraldehýð-3-fosfat dehýdrógenasi (GAPDH) var notað sem innra eftirlit.

Próteinútdráttur

PC12 frumum var sáð á 100-mm diska með 1 × 107 frumum/skál. Eftir viðhengi voru frumurnar meðhöndlaðar með caleolarioside B, paraboside B og paraboside II (3,125 µM) í 12 klst. Glýkósíðin voru síðan fjarlægð og frumurnar ræktaðar með H2O2 í aðrar 6 klst. Eftir ræktun voru frumurnar þvegnar tvisvar með köldu PBS og skafnar úr diskunum með 1 ml af PBS. Frumujafnefni voru skilin í skilvindu við 1500 rpm í 10 mín. Eftir meðhöndlun voru frumuprótein dregin út með því að nota Beyotime RIPA frumulýsubuff með 1 mM PMSF samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Að auki voru umfrymis- og kjarnaprótein einangruð eins og lýst er í Beyotime kjarna- og umfrymisútdráttarsettinu. Próteinstyrkur sýnanna var greindur með því að nota Beyotime BCA próteingreiningarsett og öll sýni voru geymd við -80 gráður fyrir Western blotting greiningu [6].

Western blot greining

SDS-PAGE rafskaut var gerð eftir útdrátt og síðari eðlisbreytingu á heildarpróteini úr mismunandi hópum. Eftir rafdrætti var próteinið flutt yfir á PVDF himnur, sem síðan var lokað með 5 prósenta undanrennudufti í 4 klst. Eftir þvott, frummótefni (fjölstofna kanínumótefni GAPDH (1:10,000 þynning), kanínufjölstofna mótefni HO-1 (1:1000 þynning), eða kanínufjölstofna mótefni GCLC (1:1000 þynning) var bætt við himnurnar sem voru ræktaðar yfir nótt við 4 gráður. Daginn eftir voru PVDF himnurnar þvegnar þrisvar sinnum í TTBS. Næst var annað mótefni (conjugated affinity pure goat anti-kanin IgG (1:1000 þynning) merkt með Piparrótarperoxíðasa var bætt við himnurnar, sem síðan voru ræktaðar við stofuhita í 2 klst. PVDF himnurnar voru þvegnar og settar í ECL efnaljómunarskynjunarefni til að gefa til kynna útsetningu á röntgenfilmu, sem síðan var fest og skanuð [22].

tölfræðigreining

Gögnin voru greind með SPSS 19.0 og niðurstöðurnar eru settar fram sem meðaltal með staðalfráviki (SD) þriggja óháðra tilrauna. Gildin p < 0.05="" voru="" talin="" gefa="" til="" kynna="" tölfræðilega="" marktækan="">

Niðurstöður Stofnun H2O2 líkans

Eins og sýnt er á mynd 2 olli H2O2 við 50, 100 og 200 μM ekki viðeigandi frumudauða. Hins vegar virkaði 400 μM H2O2 á PC12 frumur innan 2–6 klst. og oxunarskemmdir á frumum höfðu tilhneigingu til að vera stöðugar. Þess vegna töldum við að framköllun með H2O2 í styrk 400 μM í 6 klst væri viðeigandi til að líkja eftir skaða af völdum oxunarálags á PC12 frumum.

Verndaráhrif óhreinsaðs útdráttar á PC12 frumur meðhöndlaðar með H2O2

Samanborið við það í H2O2 líkanahópnum (mynd 3), n-bútanól útdráttur í styrkleika 0.05, 0.1, {{10} }.2 og 0.4 mg/ml bættu marktækt oxunarskemmdir á PC12 frumum af völdum H2O2 (p < 0.05)="" á="" styrkleikaháðan="" hátt.="" þessar="" upplýsingar="" bentu="" til="" þess="" að="" n-bútanólhlutinn="" innihélt="" öflugri="" verndarvirkni.="" hins="" vegar="" sýndu="" jarðolíueter="" og="" etýlasetat="" útdrættir="" aðeins="" verndandi="" virkni="" við="" háan="" styrk="" (jarðolíueter:="" 0.1="" og="" 0.2="" mg/="" ml,="" p="">< 0.{{31}="" }5;="" etýlasetat:="" 0,2="" og="" 0,4="" mg/ml,="" p="">< 0,05).="" þar="" að="" auki="" sýndi="" mismunandi="" styrkur="" vatnsfasaútdrátta="" engin="" verndandi="" áhrif="" (p=""> 0,05). Ennfremur höfum við bætt við gögnum úr staðfestingarrannsókn með SH-SY5Y taugafrumufrumufrumulínum úr mönnum (SH-SY5Y) í viðbótarskránni. Meðferð með 250 μM H2O2 leiddi til minnkaðrar lífvænleika frumna; þó, meðferð með caleolarioside B, paraboside B og paraboside II (3.125, 6.25, 12.5, 25 og 50 μM) dró verulega úr SH-SY5Y frumudauða. Niðurstöður tilraunarinnar sönnuðu að kaleólariosíð B, parabósíð B og parabósíð II vernduðu SHSY5Y frumur gegn H2O2-frumum af völdum skaða.

Uppbygging efnasambanda einangruð úr n-bútanólhlutanum

Til að staðfesta að n-bútanól útdrátturinn innihélt virka efnisþætti, skiptum við enn frekar átta efnasambönd úr útdrættinum. Uppbygging efnasambanda 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 og 8 var auðkennd með mismunandi litrófsgögnum (1H-NMR, 13C-NMR og ESI-MS) byggt á samanburði við birt gögn fyrir parabósíð A , parabósíð B, parabósíð I, parabósíð II, parabósíð III, nuomioside A, caleolarioside B og isonuomioside A, í sömu röð [20]. Til dæmis voru gögnin fyrir parabósíð B sem hér segir: brúnt tyggjó; ½ 20 D -55,7 (c 0,05, CH3OH) [20]; UVMeOH max nm (log): 220 (3,61), 291 (3,54), 330 (3,66) [20]; IRKBr max cm−1: 3392, 2943, 2885, 1699, 1683, 1606, 1521, 1361, 1282, 1163, 1114, 1039, 995, 817 cm−1 [200]; fyrir 1H og 13C NMR ítarleg gögn sýnd í tilvísun 20; HR-ESI-MS (neikvætt) m/z 741,2231 [MH]- (reiknað fyrir C33H41O19, 741,2242) [20]. Gögnin fyrir parabósíð II voru sem hér segir: hvít amor pous duft; ½ 20 D -80,5 (c 0,05, CH3OH) [20]; UVMeOH max nm (logε): 229 (3,74), 322 (3,73) [20]; IRKBr max cm−1: 3419, 1699, 1625, 1596, 1515, 1456, 1419, 1263, 1159, 1139, 1068, 1022, 808 cm−1 [20]; fyrir 1H og 13C NMR ítarleg gögn sýnd í tilvísun 20; ESI-MS (neikvæð) m/z 637

Verndaráhrif einangraðra efnasambanda gegn H2O2-eitrun í PC12 frumum

MTS mælingar voru notaðar til að kanna áhrif einangraðra efnasambanda á lífvænleika PC12 frumna sem verða fyrir eiturverkunum af H2O2-. Eins og sést á mynd 5, samanborið við það í samanburðarhópnum, voru PC12 frumur formeðhöndlaðar með fimm mismunandi styrkjum af caleolarioside B, paraboside B, paraboside II eða paraboside A (3.125, 6.25, 12.5, 25 og 50 μM) í 24 klst. sýndi engan marktækan mun á lífvænleika frumna (p > 0,05). Þannig leiddi formeðferð á PC12 frumum með caleolarioside B, paraboside B og paraboside II ekki til frumueiturhrifa. Eins og sést á mynd 6 minnkaði 400 µM H2O2 marktækt lífvænleika frumna samanborið við samanburðarhópinn. Þar að auki jókst frumulífvænleiki H2O2- meðhöndlaðra PC12 frumna verulega eftir formeðferð á PC12 frumum með mismunandi styrk af caleolarioside B, paraboside B og paraboside II; ennfremur var lífvænleiki frumna hæstur eftir meðferð með 50 µM caleolarioside B, 50 µM paraboside B og 12,5 µM paraboside II. Hin fimm efnasamböndin sýndu engin marktæk verndandi áhrif á H2O2-meðhöndlaðar PC12 frumur. Til að skýra þessa niðurstöðu ræðum við eina af þessum sem dæmi, en hinum er ekki lýst í handritinu.

Umritunarstig HO-1 og GCLC

Næst prófuðum við umritunarmagn HO{{0}} og GCLC í PC12 frumum sem voru meðhöndlaðar með caleolarioside B, paraboside B og paraboside II. Heildar mRNA var safnað úr meðhöndluðum og ómeðhöndluðum PC12 frumum í 12 klst og síðan sett í tjáningargreiningu með qRT-PCR. Eins og sýnt er á mynd 7(a,c,e), jókst umritunarmagn HO-1 marktækt eftir að PC12 frumur voru formeðhöndlaðar með tilgreindum styrk kaleólariosíðs B, parabósíðs B og parabósíðs II í 12 klst (p < 0.05).="" eins="" og="" sýnt="" er="" á="" mynd="" 7(b),="" jókst="" umritunarmagn="" gclc="" einnig="" marktækt="" í="" pc12="" frumum="" sem="" voru="" formeðhöndlaðar="" með="" tilgreindum="" styrk="" kaleólariosíðs="" b="" í="" 12="" klst.="" hins="" vegar="" minnkaði="" styrkur="" gclc="" í="" pc12="" frumum="" sem="" voru="" formeðhöndlaðar="" með="" parabósíð="" b="" í="" 12="" klst="" marktækt="" samanborið="" við="" þær="" í="" líkanahópnum="" (p="">< 0,05;="" mynd="" 7(d)).="" ennfremur,="" með="" paraboside="" ii="" meðferð,="" var="" magn="" gclc="" í="" pc12="" frumum="" ekki="" marktækt="" frábrugðið="" því="" sem="" var="" í="" líkanahópnum="" (p=""> 0,05; mynd 7(f)).

Tjáning HO-1 og GCLC

HO{{0}} og GCLC eru mikilvæg frumu andoxunarensím, og bæði eru Nrf2-stýrð gen í straumnum. Próteintjáning HO-1 og GCLC sást einnig eftir meðferð [6]. Mynd 8 sýnir próteinmagn HO-1 og GCLC í PC12 frumum eftir meðferð með 400 μM H2O2; niðurstöðurnar gáfu til kynna að FL-flúrljómunarstyrkur HO-1 í caleolarioside B og paraboside B hópunum væri meiri en í H2O2-meðhöndluðum hópum (Mynd 8(a,c)). Hins vegar var tjáning GCLC ekki marktækt breytt af efnasamböndunum, nema fyrir caleolarioside B (Mynd 8(b)). Næst voru efnahemlar HO-1 notaðir til að meta frekar hlutverk andoxunarensíma við að stjórna verndandi áhrifum sem kaleólariosíð B, parabósíð B eða parabósíð II hefur gegn H2O2-framkölluðum frumueiturhrifum. Caleolarioside B, paraboside B og paraboside II (3,125 µM) komu í veg fyrir H2O2-framkallað frumueiturhrif, en slíkum verndandi áhrifum var snúið við með HO-1 hemlinum ZnPP (p < 0,01)="" við="" 15="" µm="" (mynd="" 8)="">

Ávinningur af Cistanche: Auka æxlun karla

Umræða

Öldrun fólks er alvarlegt vandamál á heimsvísu. Margir sjúkdómar tengjast elli, eins og AD og PD, sem eru alvarleg ógn við lýðheilsu. AD og PD hafa komið fram sem þriðju banvænustu sjúkdómarnir á heimsvísu, á eftir hjarta- og æðasjúkdómum og krabbameini. Þess vegna hefur taugahrörnun orðið brýnt rannsóknarefni um allan heim. Hins vegar hefur meingerð AD og PD, taugahrörnunarsjúkdóma í miðtaugakerfinu, verið óljós til þessa. Ennfremur eru aðeins fá lyf sem geta á áhrifaríkan hátt meðhöndlað AD eða PD vegna flókins sjúkdómsvaldandi verkunar þeirra [23]. Fyrri rannsóknir sýndu að ROS, eins og súperoxíð anjón (O2−) og H2O2, eru helstu þættirnir sem stuðla að taugahrörnunarsjúkdómum. Sjúklegar breytingar meðan á PD stendur fela í sér hrörnun taugafrumna og dauða substantia nigra og striatal dópamíns [24,25]. Í samræmi við það er mikilvægt að þróa áhrifarík andoxunarlyf til að meðhöndla PD og slík lyfjauppgötvun hefur orðið mikilvæg rannsóknarstefna [26]. Eins og er virðist Nrf2/ARE merkjaleiðin vera mikilvægasta innræna streituleiðin fyrir andoxunarefni [27]. Ares er staðsett á 5′-uppfyllingarsvæðum gena, eins og HO-1 og GCLC [28,29]. HO-1 og GCLC eru Nrf2-tengd gen sem eru stjórnað aftan við þetta prótein [6]. ARE geta í kjölfarið haft áhrif á magn andoxunarefna og virkjað tjáningu HO-1 og annarra verndargena, sem gæti aukið frumuverndarvirkni [30,31]. Ennfremur bentu niðurstöður til þess að verndandi áhrif resveratrols gegn A {{2{{50}}}} af völdum eiturverkunum í PC12 frumum eigi sér stað með uppstýringu á HO-1 tjáningu með virkjun Nrf2 innanfrumu. boðleið [32]. PC12 frumur eru viðurkennd líkan af taugafrumum og eru mikið notaðar í rannsóknum á taugaverndandi áhrifum [33]. H2O2 getur auðveldlega farið í gegnum frumuhimnuna og sameinast járni til að mynda mjög virka sindurefna, sem valda oxunarálagi og frumuskaða [34]. H2O2 er mikilvægt ROS, og sindurefni myndast auðveldlega og tiltölulega stöðugt, þannig að þeir eru venjulega notaðir til að koma á oxunarálagslíkani með PC12 frumum [5]. Í þessari rannsókn olli formeðferð á PC12 frumum með óeitruðum styrk af plöntuútdrættinum sem verndaði frumur fyrir H2O2- frumueiturhrifum með því að draga úr myndun ROS. Fenýletanóíð glýkósíð innihalda marga fenólhýdroxýlhópa sem hafa andoxunar- og öldrunarvirkni. Í þessari rannsókn komumst við að því að n-bútanól útdráttur gaf betri vörn en önnur skautunarbrot (mynd 3). Þannig skimuðum við frekar verndarvirkni átta efnasambanda sem voru einangruð úr n-bútanólhlutanum. Niðurstöðurnar sýndu í fyrsta skipti að mynd 8. Greining á HO-1 og GCLC próteinmagni á PC12 frumum. (a) Western blotting greining á tjáningu HO-1 og GCLC og GAPDH var notuð sem hleðslustýring. (b) Western blot greining GCLC prótein tjáning. (c) Western blot greining HO-1 prótein tjáning. (d) HO-1 hemill ZnPP minnkaði taugaverndandi áhrif. Gögn eru sýnd sem meðaltal ± SD, n=3. ***p < 0.001="" á="" móti="" viðmiðunarhópi;="" #p="">< 0,05="" á="" móti="" h2o2="" hópnum="" (án="" znpp="" meðhöndlaðs),="" ##p="">< 0,01="" á="" móti="" h2o2="" hópnum="" (án="" znpp="" meðhöndlaðs),="" ###p="">< 0,001="" á="" móti="" h2o2="" hópnum="" (án="" znpp="" meðhöndlaðs);="" og="" p="">< 0,01,="" á="" móti="" h2o2="" hópnum="" (með="" znpp="" meðhöndlaðan),="" og="" &p="">< 0,001,="" á="" móti="" h2o2="" hópnum="" (með="" znpp="" meðhöndlaðan).="" (stjórnhópur;="" líkanflokkur:="" h2o2;="" znpp="" neikvæður="" hópur:="" kaleólariosíð="" b="" plús="" h2o2,="" parabósíð="" b="" plús="" h2o2,="" parabósíð="" ii="" plús="" h2o2;="" znpp="" jákvæður="" hópur:="" znpp="" plús="" kaleólaríósíð="" b="" plús="" h2o2,="" znpp="" plús="" parabósíð="" b="" plús="" h2o2,="" znpp="" plús="" parabósíð="" ii="" auk="" h2o2).="" 2210="" x.="" gong="" o.fl.="" hlaðið="" niður="" af="" https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145="" af="" gesti="" 27.="" ágúst="" 2021caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" og="" paraboside="" ii="" hafa="" umtalsverð="" verndandi="" áhrif="" gegn="" oxunarefni="" af="" völdum="" h2o2-="" skemmdir="" í="" pc12="" frumum.="" niðurstöðurnar="" bentu="" einnig="" til="" þess="" að="" meðferð="" með="" h2o2="" olli="" marktækum="" pc12="" frumuskaða="" og="" minnkaði="" lífvænleika="" frumna,="" en="" meðferð="" með="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" og="" paraboside="" ii="" dró="" verulega="" úr="" þessum="" áhrifum="" (mynd="" 6).="" fyrri="" rannsókn="" greindi="" frá="" því="" að="" nrf2/are="" ferillinn="" er="" ein="" mikilvægasta="" innræna="" andoxunarferlið="" og="" getur="" aukið="" tjáningu="" niðurstreymismerkja,="" eins="" og="" ho="" -1,="" til="" að="" vernda="" frumur="" [7].="" niðurstöður="" qrt-pcr="" og="" western="" blotting="" greininga="" sýndu="" að="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" og="" paraboside="" ii="" hækkuðu="" marktækt="" magn="" ho-1.="" hins="" vegar="" jókst="" umritunarmagn="" gclc="" marktækt="" í="" pc12="" frumum="" sem="" voru="" formeðhöndlaðar="" með="" caleolarioside="" b="" en="" minnkaði="" hjá="" þeim="" sem="" voru="" formeðhöndlaðar="" með="" paraboside="" b="" samanborið="" við="" þær="" í="" líkanahópnum.="" ennfremur="" breytti="" parabósíð="" ii="" ekki="" tjáningu="" þessa="" merkis,="" samanborið="" við="" það="" í="" líkanahópnum="" (myndir="" 7="" og="" 8="" (a-c)).="" að="" auki="" var="" verndandi="" áhrifum="" kaleólariosíðs="" b,="" parabósíðs="" b="" og="" parabósíðs="" ii="" gegn="" h2o2-framkölluðum="" pc12="" frumuáverkum="" snúið="" við="" með="" ho-1="" hemlinum="" znpp="" (mynd="" 8(d)).="" niðurstaðan="" er="" sú="" að="" fenýletanóíð="" glýkósíð="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" og="" paraboside="" ii="" vernduðu="" pc12="" frumur="" á="" áhrifaríkan="" hátt="" gegn="" h2o2-völdum="" oxunarskemmdum.="" í="" samræmi="" við="" það="" gætu="" þessi="" efnasambönd,="" einangruð="" úr="" p.="" martini,="" táknað="" hugsanlega="" lyfjaframbjóðendur="" til="" meðferðar="" á="">

Ávinningurinn af Cistanche:meðhöndlun taugahrörnunarsjúkdóma

Heimildir

[1] Butterfield DA. Sjónarmið um oxunarálag í Alzheimerssjúkdómi og spár um áherslur í framtíðarrannsóknum. J Alzheimer Dis. 2018;64:1–11.

[2] Chignon C, Tomas M, Bonnefontrousselot D, o.fl. Oxunarálag og amyloid-beta peptíð í Alzheimerssjúkdómi. Redox Biol. 2018;14:450–464.

[3] Guo JD, Zhao X, Li Y, o.fl. Skemmdir á dópamínvirkum taugafrumum vegna oxunarálags í Parkinsonsveiki (endurskoðun). Int J Mol Med. 2018;41:1817–1825.

[4] Bai Y, Dong LH, Huang XH, o.fl. Samtök rs823128, rs1572931 og rs823156 fjölbreytileika með minni hættu á Parkinsonsveiki. Taugaskýrsla. 2017;27:936–941.

[5] Han XH, Zhu SL, Wang BX, o.fl. Andoxunarvirkni 7,8-díhýdroxýflflavons verndar PC12 frumur gegn frumueiturhrifum af völdum 6-hýdroxýdópamíns. Neurochem Int. 2014;64:18–23.

[6] Li MQ, Xu T, Zhou F, o.fl. Taugaverndandi áhrif fjögurra fenýletanóíð glýkósíða á H2O2-örvuðu frumudauði á PC12 frumum í gegnum Nrf2/ARE leiðina. Int J Mol Sci. 2018;19:1135.

[7] Buendia I, Michalska P, Navarro E, o.fl. Nrf2-ARE leið: vaxandi markmið gegn oxunarálagi og taugabólgu í taugahrörnunarsjúkdómum. Pharmacol Therapeut. 2016;157:84–104.

[8] Jia XJ, Yan XS, Cai ZP, o.fl. Áhrif fenýletanóíð glýkósíða, unnin úrHerba cistanche, um vitræna skort og andoxunarvirkni hjá karlkyns SAMP8 músum. J Toxicol Env Heal A. 2017;80:1180–1186.

[9] Tsvetkov DE, Dmitrenok AS, Tsvetkov YE, o.fl. Fenýletanóíð glýkósíð úr tekkviðarhnútum og andoxunarvirkni þeirra. J Biol Active Prod Nat. 2016;6:272–281.

[10] Zhang YQ, Gao EY, Liang CQ, o.fl. Andoxunarvirkni kaffeóýlfenýletanóíð glýkósíðefna frá Lindernia ruellioides in vitro. Cent South Pharm. 2017;15:1687–1690.

[11] Wu ZH, Ma YF, Zhao L, o.fl. Hlutverk Nrf2-ARE leiðar í oxunarálagsmeiðslum og tengsl þess við aðrar boðleiðir. Animal Husbandry Feed Sci. 2016;37:42–48.

[12] Zheng XK, Li J, Feng WS, o.fl. Framfarir í rannsóknum á Gesneriaceae. Chin J Nýtt lyf. 2003;12:261–263.

[13] Wen F, Li ZD. Rannsóknarframfarir á plöntunni Gesneriaceae. Chin Wild Plant Resour. 2006;25:1–6.

[14] Yan WY, Chen L, Wang JM, o.fl. Rannsóknir á framvindu triterpenoids af Gesneriaceae plöntum. Nat Prod Res Dev. 2012;24:698–701.

[15] Kínverskt jurtalyfjafyrirtæki. Kínverska hefðbundna læknisfræði auðlindaskrár. Kína: Science Press; 1994.

[16] Bai ZF, Wang XQ, Xiao PG, o.fl. Dreifing fenýletanóíð glýkósíða í lækningajurtum Gesneriaceae. Chin J Chin Mater Med. 2013;38:4267–4270.

[17] He ZD, Lau KM, Xu HX, o.fl. Andoxunarvirkni fenýletanóíð glýkósíða frá Brandisia hancei. J Etnopharmacol. 2000;71:483–486.

[18] Li L, Shi DF, Gui YG, o.fl. Rannsókn á andoxunarvirknifenýletanóíð glýkósíð frá Cistanche deserticola. J Anhui Agri Sci. 2009;32:15835–15836.

[19] Ju BW, Yang JH, Yan Y, o.fl. Verndaráhrif afglýkósíð af cistancheum skemmdir á PC12 frumum PARABOLA MARTINI VERND PC12 FRUM FYRIR H2O2-VÖLDUM MEIÐSlum 2211