Fenólefnasambönd úr laufum og blómum Hibiscus Roseus: Hugsanleg húðsnyrtiefni fyrir vanrannsökuð tegund

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

Ágrip:Notkun plöntuþykkna í snyrtivörum fyrir húðvörur er nútímaleg stefna vegna ríkrar pólýfenóla sem virka sem sameindir gegn öldrun. hibiscus rós er ævarandi tegund sem er náttúruleg á Ítalíu, með fallegum mjúkum bleikum blómum; Fenólsamsetning þess og líffræðileg virkni hefur ekki verið rannsökuð ennþá. Markmið þessarar rannsóknar var að einkenna og magngreina fenólin og meta andoxunarefni, sólarvarnarþátt (SIPF) og and-kollagenasavirkni etanólískra útdrátta H. roseus laufa (HL) og blóma (HE).p- Kúmar-, klórógen- og trans-ferúlínsýruafleiður, auk quercetin og kaempferol flavonoids, voru helstu fenólefnasamböndin sem fundust. Katechín, epicatechin, kaempferol-3-O-rutínósíð, kaempferol-3-O-glúkósíð, kaempferól-7-O-glúkósíð, salidrósíð, óenín og peónidín-3-O-glúkósíð greindust aðeins í HF, en phloridzin var eingöngu frá HL, sem sýndi einnig meira magn af hýdroxýkanilsýruafleiðum. HF var ríkara af flavonoidum og heildarfenólefnum, og sýndi einnig meiri andoxunargetu.lífflavonoidsSPF og and-kollagenasavirkni beggja útdrátta var svipuð og sambærileg við gervistaðla. Heildarniðurstöðurnar sýna að H. roseus útdrættir eru efnilegar uppsprettur lífvirkra fenólefnasambanda sem hugsanlega væri hægt að nota sem öldrunarefni í snyrtivörum fyrir húðvörur.

Leitarorð:and-kollagenasa; andoxunarefni; flavonoids; blóm; náttúrulyf snyrtivörur; hýdroxýkanilsýrur; LC-MS/MS-MRM; laufblöð; húðvörur; sólarvörn

1. Inngangur

Notkun snyrtivara er ævaforn og saga hennar mótast samhliða sögu mannkyns [1,2]. Snyrtivörur fyrir húð eru nokkrar af mikilvægustu vörum, er aðal flokkurinn í þessum iðnaði [1,3]. Þess vegna hefur áhuginn á húðumhirðu orðið útbreiddur, sem hefur kallað á eftirspurn eftir áhrifaríkum vörum úr náttúrulegum uppruna [2].

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

Nýleg vitund um umhverfið, heilsugæsluna og lítilsháttar notkun gerviefna leiddi til aukins áhuga á snyrtivörum úr plöntum, sem nú eru þriðjungur alls snyrtivörugeirans [1A]. Þannig er notkun á plöntuútdrætti og plöntuþáttum þeirra sem virk innihaldsefni nútímaleg "for-vistfræðileg" nálgun [5,6]. Aukin eftirspurn eftir þessum vörum getur stafað af minni aukaverkunum þeirra, breitt verkunarsvið þeirra ásamt mikilli virkni og almennt lágu verði þeirra [7,8].

Plöntur eru ríkar af nokkrum flokkum lífvirkra efnasambanda, sem eru ein af ríkustu uppsprettunum nýrra innihaldsefna sem bera ábyrgð á að meðhöndla marga sjúkdóma [9,10]. Að auki eru plöntur einnig uppsprettur náttúrulegra raka, bragðefna og litarefna, sem gera þær mjög áhugaverðar fyrir snyrtivörur fyrir húð [5]. Að lokum eru plöntuþykkni almennt talin örugg og uppfylla kröfur eftirlitsyfirvalda [10,11].

Meðal efnasambanda sem eru til staðar í plöntuþykkni hafa fenólar fengið sérstaka athygli sem virk innihaldsefni [12,13], aðallega vegna þess að þau skera sig úr sem bólgueyðandi, örverueyðandi og andoxunarefni[14,15]. Þessir eiginleikar gera þær tilvalin fyrirbyggjandi og græðandi sameindir fyrir húðsjúkdóma, notaðar í snyrtifræði og húðsjúkdómafræði [16]. Áberandi andoxunarvirkni fenóla er einnig að hluta til ábyrg fyrir áhrifum þeirra gegn öldrun, sem hugsanlega stafar af getu þeirra til að draga úr kollagenniðurbroti og veita UV-vörn [16]. Þess vegna hefur notkun náttúrulegra fenólríkra útdrátta með mikla andoxunargetu verið rannsökuð og hvatt til að skipta um tilbúið andoxunarefni í húðvörum [12].

Cistanche getur gegn öldrun

Náttúruafurðir unnar úr plöntum af Malvaceae fjölskyldunni eru notaðar um allan heim og ættkvísl Hibiscus hefur vakið mikla athygli fyrir margvíslega lyfjafræðilega virkni útdrátta þeirra og fyrir mikla fenólríku [17-19]. Hibiscus spp. inniheldur um 240 tegundir af árlegum eða fjölærum blómstrandi jurtum, runnum eða trjám, sem eru dreifðar á mismunandi svæðum í heiminum [20]. Hibiscus útdrættir hafa verið notaðir í hefðbundinni læknisfræði sem mýkjandi efni til að meðhöndla marga húðsjúkdóma og bruna[19,21].kaupa cistancheByggt á þessum bókmenntagögnum eru útdrættir úr Hibiscus sp. Plöntur gætu verið áhugaverð virk innihaldsefni fyrir snyrtivörur fyrir húð, verndað frumurnar gegn oxunarálagi, niðurbroti kollageni og skaðlegum áhrifum UV geislunar.

Þrátt fyrir að ættkvíslin Hibiscus samanstandi af mörgum tegundum, hafa minna en 10 prósent þeirra verið rannsökuð hingað til [17]. Hibiscus roseus Thore(syn. H.palustris L., H.moscheutos subsp. palustris (L.) RT Clausen.) er anherbaceous-ævarandi tegund sem hefur verið náttúruleg á Ítalíu [22,23]Auðkenning og lýsing á H. roseus eru enn í umræðu[ 20,23]. Samkvæmt bókmenntum er tegundin H. moscheutos subsp. palustris hefur verið kynnt mjög snemma í Evrópu en í Frakklandi hafði Thore verið lýst sem nýrri tegund, H. roseus, af Thore árið 1807 [23]. Þessi tegund hefur ekki verið einkennist af fenólsamsetningu sinni og rannsökuð fyrir líffræðilega virkni hennar, sem gerir hana að hugsanlegri ósýnilegri uppsprettu lífvirkra efnasambanda fyrir húðvörur.

Notkun þjóðarinnar í húðmeðferðum og breitt litróf lífvirkni Hibiscus tegunda réttlætir mikilvægi nýrra rannsókna sem beinast að þessari plöntuættkvísl [17]. Þess vegna var markmið þessarar rannsóknar að einkenna fenólsamsetninguna og meta andoxunargetu, sólarvörn og kollagenasahömlunarvirkni etanólískra útdrátta úr laufum og blómum H. roseus. Niðurstöður okkar sýna í fyrsta skipti fenólsamsetningu og öldrunartengda lífvirkni H. roseus, sem gefur til kynna möguleika þessarar vankönnuðu tegundar í lyfja- og snyrtivörunotkun sem andoxunarefni og aukefni gegn öldrun.

2. Niðurstöður og umræður

2.1.Fenóleinkenni og magngreining

Markgreining, byggð á LC-MS/MS-MRM (vökvaskiljun ásamt tandem massagreiningu sem vinnur í fjölhvarfseftirlitsham), var gerð til að bera kennsl á fenólsamböndin sem eru til staðar í etanólútdrætti H. roseus þar sem fenólsamsetningin á enn hefur ekki verið greint frá þessari tegund í bókmenntum. Nítján fenólsambönd sem áður hefur verið lýst í Hibiscus ættkvíslinni voru notuð sem staðlar (viðbótartafla S1) til að þróa MRM aðferðina, þar sem val á bestu umbreytingunum var hannað með hagræðingu á tækjabreytum og með gögnum úr bókmenntum [24].

The main classes of compounds detected in H.roseus leaf and flower extracts were chlorogenic, p-coumaric, and trans-ferulic acids derivatives and flavonoid derivatives (Figure 1,Table 1), similarly to the previous phytochemical characterization of other Hibiscus species[25-29]. Although the phenolic profile was quite similar, some qualitative differences were observed between flowers (HF) and leaves (HL)(Figure 1 and Table 1). While leaves showed richness in p-coumaric acid derivatives (Figure 1, blue line, peaks with Rt from 2 to 9 min), flowers were especially rich in flavonoid derivatives such as catechins, dihydrochalcones, and anthocyanins (Figure 1, red line, Rt>9,3 mín, tafla 1).

Þrettán af nítján markfenólefnasamböndum voru auðkennd í útdrættinum sem greind voru með LC-MS/MS í MRM ham (tafla 1).cistanchMRM er öflug leið til að ákvarða samtímis nokkra íhluti, byggt á massa-til-hleðsluhlutfalli (m/z) sameindajónarinnar (((MH] ) og samsvarandi dótturjónar hennar. Það gerir kleift að auka sértækni og næmi LC-MS/MS greininga [30]Þessi aðferðafræði er mjög áreiðanleg og hentar vel fyrir greiningar á plöntuútdrætti og öðrum flóknum blöndum sem leiða til mestrar sértækni, framúrskarandi næmis og mikillar margföldunargetu þökk sé möguleikanum á að greina efnasambönd sem hafa sömu móðurjónir en mismunandi brot [31,32]. Með þessari aðferð höfum við náð marktækri minnkun á litskiljunarkeyrslum, meiri sértækni og nákvæmni sem fæst með góðri aðskilnað efnasambanda sem greind eru með sömu umbreytingum, en forðast tap á næmni ef um er að ræða mismunandi samskolunarsambönd eða fyrir efnasambönd sem eru til staðar í mjög lágum styrk [24,334].

Meðal 13 fenólefnasambanda sem voru auðkennd með því að nota ekta staðla (viðbótartafla S1), voru tíu eingöngu til staðar í blómseyði (mynd 1 rauð lína, tafla 1 HF): katekin og epicatechin (toppar 16b og 23), klórógensýra (hámark 18), peonidin-3-O-glúkósíð og óenín (toppar 21 og 22), trans-ferúlínsýra (hámark 27), þrjár kaempferol glýkósíðafleiður (kaempferol-3-O-rutínósíð, kaempferól-7-O- glúkósíð og kaempferól-3-O-glúkósíð; toppar 30,31b og 32), og salídrosíð (hámark 34). Að auki greindist phloridzin (toppur 33b) aðeins i í laufútdrætti (mynd 1 blá lína, tafla 1 HL), en rútín og quercetin-3-O-glúkósíð (toppar 26b og 28a) greindust í báðum tegundum útdrátta (mynd 1, Tafla1HF/HL). Svipaðar quercetin afleiður, eins og quercetin-3-O-sambubioside og isoquercitrin, sáust áður í H.sabdariffa [26,29,35,36] og í H. rosa-sinensis útdrætti [18]. Sum þessara glýkósíða gætu samsvarað quercetin afleiðunum sem við fundum í H. roseus. Að auki hefur tiliroside einnig áður greinst í fenólútdrætti af H. sabdariffa blóm [37,38]. Oenin (malvidin-3-O-glúkósíð) og peonidin-3-O-glúkósíð, anthocyanin tvö sem hér eru auðkennd í H. roseus blómum í fyrsta skipti, voru ólík þeim sem áður hefur verið lýst í H. sabdariffa blómum, delphinidin 3-sambubioside, delphinidin-3-glúkósíð og cyanidin-3-O-sambubioside [27,35,39,40]. Hins vegar er mikilvægt að nefna að mest rannsakaði hluti blóm af H. sabdariffa er bikarinn (bikarblöðin), ekki blómblöðin eins og þau eru rannsökuð hér fyrir H.roseus.

Til viðbótar við efnasamböndin sem auðkennd voru og staðfest með ósviknu markstaðlunum, voru önnur 27 efnasambönd auðkennd í H.roseus blaða- og blómaútdrætti á grundvelli MRM (m/z) þeirra og dótturjóna þeirra, þannig að miðað er við sundurliðunarafurðirnar sem fengust frá forvera (viðbótartafla S1). Einkum fundust p-kúmarín, trans-ferulic og klórógensýruafleiður og quercetin afleiður, sem og flóretín og flóridzín afleiður í báðum útdrættinum (tafla 1).

Magngreining fenólanna sem auðkennd eru í þessum útdrætti var framkvæmd með HPLC-DAD greiningu (hágæða vökvaskiljun tengd við díóða fylkisgreiningu; Tafla 2). Innihald hýdroxýkanilsýruafleiðna (THC) var hærra í laufum en blómum, en meira magn af flavonoids (TFC) fannst í blómum en í laufum (p.<0.001,table 2).catechin="" derivatives(tcd),dihydrochalcones(tdc),and="" anthocyanins="" (tac)="" were="" quantified="" only="" in="" flower="" extracts(table=""><0.001).therefore, flowers="" represent="" a="" greater="" source="" of="" phenolics="" compared="" to="" leaves="" (tpc,p="0.02," table="" 2).="">cistanche ÁstralíuLíkt og H. sabdariffa útdrættir, voru helstu flokkar efnasambanda sem finnast í H. roseus laufum klórógen- og p-kúmarsýruafleiður sem og kaffóýlkín- og p-kúmaróýlkínsýrur [26,40,41]. Að auki var eingöngu greint frá anthocyanínum í Hibiscus spp. blóm og bikar, ásamt katekínum [19,28,35].

Aftur á móti var minna tilkynnt um ferúlsýra og afleiður hennar sem innihaldsefni Hibis-cus spp. útdrætti, en þeir geta skipt miklu máli fyrir líffræðilega virkni þeirra [6,42-44]. Reyndar sýndu ferúlsýruafleiður úr mismunandi Hibiscus tegundum mikilvæga lyfjafræðilega eiginleika eins og veirueyðandi og angíótensín-umbreytandi ensím hindrandi starfsemi [43,44]. Að auki var ferúlínsýru lýst sem virkri sameind í H.mutabilis, H.taivanensis útdrætti[45,46] og í H.sabdariffa bikarútdrætti [28,38].

Varðandi hugsanlega snyrtivörunotkun hefur verið sannað að ferulínsýra hamlar melanínmyndun [6,42], á meðan p-kúmarsýruafleiður hafa aflitun [47,48], bólgueyðandi og týrósínasahemjandi virkni [49]. Að auki benda margar rannsóknir á viðbótarhlutverk flavonóls og anthocyanins, sem geta virkað sem húðverndandi efnasambönd, einkum hamlað sortumyndun [50,51] og með virkni þeirra sem öldrunarefnasambönd og komið í veg fyrir sortuæxli [52,53]. Að auki gæti hugsanlega notkun H. roseusleaf útdrætti fyrir húðsjúkdóma einnig verið aukið með nærveru phloridzins, sem hefur sýnt að það dregur úr tjáningu UVB-framkallaðra bólgueyðandi frumudrepna í UV-útsettri húð [54].

2.2. Andoxunarvirkniprófanir

Nú á dögum er víða sýnt fram á að uppsöfnun hvarfgjarnra súrefnistegunda (ROS) er ábyrg fyrir öldrun húðar, sem leiðir til þurrkunar, taps á undirhúð og hrukkummyndun [55,56]. Þess vegna er mjög mikilvægt fyrir snyrtivöruiðnað að finna náttúruleg möguleg andoxunarefnasambönd sem hægt er að nota í húðvörur.

Niðurstöður okkar sýndu að H. roseus laufþykkni hafði lægri andoxunarvirkni (gefin upp sem ECso gildi) en blóm (tafla 3). Reyndar var andoxunarvirkni neðri útdrátta að minnsta kosti tvöfalt meiri en virkni laufseyða í báðum prófunum (tafla 3). Þessar niðurstöður eru í samræmi við fenólsamsetningu og innihald þessara útdrátta (mynd 1, töflur 1 og 2), þar sem HF útdrættir voru ríkari af fenólsamböndum (tafla 2). Reyndar sýndi fylgnigreining milli ECso-gilda og innihalds mismunandi flokka fenóla vera marktæk og neikvæð fyrir öll efnasamböndin nema fyrir THC. Sem slíkt stuðlar meira magn af flavonoids, katekínum, anthocyanínum, díhýdrókalkónum og heildarfenólinnihaldi til meiri andoxunargetu (lægri gildi EC50—tafla 4).

Meðal flavonoids eru quercetin og afleiður þess þekktustu andoxunarefnin og sindurefnahreinsiefnin, sem einnig virka sem áhrifaríkar hemlar oxidasa og lípoxýgenasa [57]. Þar að auki hefur díhýdrókalkónum, eins og flóretíni, einnig verið lýst sem öflugum andoxunarefnum í 2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl (DPPH)-hreinsandi og OH-hreinsandi prófum[58]. Að auki sýndu anthocyanín einangruð úr Hibiscus útdrætti vera helstu andoxunarefnasambönd í frumum manna [59].

Útdrættir mismunandi hluta af Hibiscus tegundum hafa sýnt mikla andoxunargetu [18,21,27,35,40]. Hlutar af etanólútdrætti af H. sabdariffa sýndu mjög lágt EC50 gildi í andoxunarmælingum, sem voru í tengslum við hátt innihald í protocatechuic sýru [21,59], klórógensýru, flavonoids og anthocyanins [24,60]. Að auki sýndi rannsókn á H. esculentus in vitro andoxunarmöguleika quercetin afleiða og katekína sem eru til staðar í útdrætti þess[61]. Að lokum, í H.acetosella, var andoxunarvirkni sterka fylgni við anthocyanins innihald [62].

Niðurstöður rannsóknar okkar á H. roseus etanólútdrætti sýndu andoxunarvirkni sem var hundrað sinnum meiri en þær sem greint var frá fyrir vatnskennda útdrætti af H. sabdariffl bikar, þar sem EC var nálægt 45 mg ml- í svipaðri DPPH in vitro líkan [56] Hins vegar, til aðgreiningar frá niðurstöðum okkar, var heildarflavonoid innihald og andoxunargeta H. sabdariffa laufþykkni hærri en í blómum [63,64]. 2.3.In vitro sólarverndarþáttur (SPF)

Útfjólublá geislun er einn skaðlegasti umhverfisþátturinn sem hefur áhrif á heilsu og lífeðlisfræði húðarinnar, þar sem hún er mikilvæg ytri öldrun húðar [65,6]Stöðug útsetning fyrir útfjólublári geislun eykur hættuna á litarefnissjúkdómum og húðljósmyndun [67]. Þetta er að mestu leyti vegna hækkunar á ROS-gildum, sem leiðir til örvunar kollagenasaframleiðslu og veldur töluverðum skemmdum á frumustarfsemi húðarinnar [56]. Þess vegna eru UV-verndandi innihaldsefni, þar á meðal þau sem eru til staðar í plöntuþykkni, víða notuð í snyrtivörum til að forðast að útfjólublá geislun komist inn í húðina en einnig koma í veg fyrir ROS framleiðslu með því að virka sem andoxunarefni [56,

Einföld aðferð til að sannreyna virkni mismunandi náttúrulegra þátta sem UV sía er sólvarnarþáttur (SPF) prófun, sem er hröð og áreiðanleg in vitro aðferð sem byggir á skimun á gleypni innan UV-B litrófssvæðis (á milli 290 og 320 nm), sem er gagnlegt í upphafi vals á ljósvörn virkra innihaldsefna [69].

Hátt fenólinnihald og andoxunarvirkni H.cistanche bæturroseus extracts suggest that they may have also an UV absorbing activity. Both leaf and flower extracts of H. roseus at 0.1 mgmL-1 showed comparable SPF results (p>{{0}}.05):2,6±0,15 fyrir HL og 2,4±0,19 fyrir HF. Þessar niðurstöður lofa góðu þar sem stöðluð sólarvarnarblanda sem innihélt 8 prósent hómósalat (mikið notuð kemísk sólarvörn) sýndi SPF gildi 4[69,70]. Niðurstöðurnar sem fundust hér fyrir H.roseus voru svipaðar þeim sem fundust fyrir aðrar plöntutegundir[68,69,71,72] og eru mikilvægar með hliðsjón af lágum styrk útdrættanna sem notaðir eru til að prófa þessi áhrif.

Útdrættir af H. rosa-Sinensis hafa þegar sýnt jákvæð áhrif gegn útfjólubláum geislaskemmdum í húð músa með andoxunarvörn [73]. Náttúruvörur sem sýna SPF ásamt mikilli andoxunargetu og hömlun á kollagenasa og elastasa eru mikilvægir möguleikar til að nota til að vernda húðina fyrir ljósskemmdum og til að koma í veg fyrir að hrukkum komi fram[66,71]. síur og þessar afleiður náttúrulegra uppsprettna tákna þróun í snyrtivöruiðnaðinum, þar sem neytendur líta á þessar vörur sem öruggari, vegna aukaverkana gervi UV-sía[72].

Hærra innihald heildarfenólefnasambanda í HF útdrætti (TPC; Tafla 2) gæti bent til meiri UV-gleypnivirkni þeirra. Hins vegar sýndu bæði lauf- og blómseyði mjög svipaðar niðurstöður, sem gefa til kynna að meira en heildarinnihald fenóla, fenólsnið útdrættanna myndi tengjast vörninni gegn UV. Einkum hærra innihald hýdroxýkanilsýruafleiðna í HL( Tafla 2) gæti stuðlað að því að auka SPF gildi þeirra, þar sem þessi efnasambönd hafa UV frásog í kringum 300-320 nm [74] sem er því miðja á UV-B svæði. Aftur á móti hafa flavonoids og anthocyanín, sem eru aðallega til staðar í blómseyði, breiðari gleypnisvið þar sem að minnsta kosti tvö bönd eru til staðar, með aðalbandið í eða nálægt sýnilegu sviðinu, um 350 nm fyrir flavonól og 505-550 nm fyrir antósýanín [53,69]. Reyndar eru hýdroxýkanilsýruafleiður framleiddar af plöntum, sérstaklega til að vernda þær gegn UV geislun [75]. Þess vegna gætu þessar hýdroxýkanilsýruafleiður stuðlað mjög að upptöku UV-B í húð manna [6]. Hins vegar, með tilliti til tilvistar anthocyanins og flavonoids sem ná yfir svið bylgjulengda frásogs, þar á meðal UV-A og sýnileg svæði, gætu H. roseus blómaútdrættir verið vænlegir til frekari greiningar og þróunar á sólarvörn snyrtivara. Að auki gæti meiri andoxunarvirkni sem sést fyrir HF (tafla 3) aukið sólverndaráhrifin í hugsanlegum frekari samsetningum [69].

2.4.Kollagenasahömlunarvirkni

Both H.roseus extracts showed high collagenase inhibitory activity (>80%)at0.25mg mL-1, which is comparable to that of the synthetic inhibitor 1,10-phenanthroline 1M (Figure 2). The IC50 value of both extracts were very similar( >{{0}}.05),IC50blómseyði =0.14 ± 0,02 mg ml-1 og IC50blaða útdrættir =0.13±0.01 mg ml-1, þrátt fyrir mismunandi fenólsamsetningu og innihald (Tafla 1 og 2). Þetta gæti stafað af samverkandi víxlverkunum á milli fenóla og kollagenasa, sem gæti gegnt mikilvægu hlutverki í hömlunarferlinu. Að auki gætu önnur efnasambönd sem hugsanlega eru til staðar í H. roseus útdrættinum og ekki greind hér tekið þátt í and-kollagenasavirkninni, þar á meðal E-vítamín og askorbínsýra [71,7]. Ennfremur sýndu tvö prófuð staðlaða efnasamböndin, klórógensýra og quercetin, sem afleiður þeirra eru til staðar í H. roseus blaða- og blómseyði (tafla 1), mjög mikla kollagenasa hömlun, með ICso gildi upp á 5,8±0,5 og 5,6±0,7g ml. -l í sömu röð. Þess vegna gætu þessi efnasambönd verið ábyrg fyrir and-kollagenasavirkni sem sést. Það er viðeigandi að taka eftir því að mismunandi flokkar fenóla, sem einnig eru til staðar í plöntuútdrættinum okkar, hafa þegar sýnt virkni gegn öldrun með því að hindra niðurbrot kollagen og stuðla að rakavirkni húðarinnar [78]. Til dæmis hefur verið sannað að ferúlínsýra og afleiður hennar gefa húðinni raka og örva myndun kollagentrefja, sem notuð eru í snyrtivörur eins og krem ​​gegn hrukkum [6]. Ennfremur eru flavonól, sérstaklega quercetin afleiður, sterkir hemlar á kollagenasa ensíminu [79].

Niðurstöður okkar sýna lofandi áhrif H. roseus útdráttar gegn niðurbroti kollagens, sem er eitt mesta próteinið sem ber ábyrgð á tapi á mýkt og heilleika húðarinnar og í myndun hrukka [80,81]. Kollagenasa ensímið hindrar varðveislu á mýkt og togstyrk húðarinnar [82]. Reyndar hafa mismunandi rannsóknir sýnt mikilvægi náttúrulegra andoxunarefna vegna virkni þeirra við að seinka ótímabæra öldrun með því að hindra kollagenasavirkni [78,83].

Fyrri rannsóknir sem meta áhrif Hibiscus tegunda á örvun kollagenframleiðslu og hamla kollagenasavirkni hafa verið gerðar [56,84,85]. Hömlun á kollagenasavirkni H. sabdariffa vatnsútdráttar hefur nýlega verið lýst í bókmenntum [56]. Svipað og niðurstöður okkar sáu höfundarnir ekki áhrif kollagenasahömlunar við lágan styrk útdrættanna heldur aðeins við verulega háan styrk [56]. Í annarri rannsókn var ICso gildið í kollagenasa hömlun á H. sabdariffin etanólútdrætti 0.75±0.04 mg mL-1[65], sem er virkni sem er næstum sex sinnum lægri en hér er lýst fyrir H. roseus.

3. Efni og aðferðir

3.1. Plöntuefni

Tíu Hibiscus roseus Thore plöntur, keyptar frá verslunarræktarstöð í Flórens (Ítalíu), voru gróðursettar í 10-lítra potta fyllta með sandmold (sandi/mó, 60:40, v/v) og viðhaldið í gróðurhúsi á landbúnaðar-, matvæla-, umhverfis- og skógræktardeild (DAGRI)—háskólinn í Flórens (UNIFD, Sesto Fiorentino (Ítalía,43949/N,1137/E). Plönturnar voru ræktaðar í gróðurhúsinu frá janúar til júlí 2019, samkvæmt handbók áveitu við pottvatnsgetu. Frá þessum tíu mismunandi plöntum var laufum og blómum í tveimur sameindum safnað í lok júlí á blómstrandi tímabilinu og geymt strax við -80 gráðu þar til útdrátturinn var tekinn. 3.2.Umhljóðstýrð útdráttur

Frostþurrkuð sýni (900 mg) af H.roseus blómum (HF) og laufum (HL) voru möluð í fljótandi köfnunarefni og dregin út með 3 × 15,0 mL etanóli 75 prósent (pH2,5 stillt með HCOOH) með útdráttur með ómskoðun (UAE). UAE var framkvæmt í úthljóðsbaði (BioClass@ CP104) með stöðugri tíðni 39kHz og inntaksafl 100 W, í 30 mínútur, við 5 gráður. Eftir skilvindu (5 mín, 9000 rpm, 5 gráður; ALC@4239R, Mílanó, Ítalíu), var flotinu skipt með 3×15 ml af n-hexani til að fjarlægja fitusækin efnasambönd sem gætu truflað greininguna. Etanólfasinn var minnkaður niður í þurran, veginn á stafrænu greiningarvogi (Precisa[125A), og leifin var endurleyst með metanóli/vatnssýrðri lausn (1:1 v/v, pH 2,5 stillt með HCOOH). Útdráttarferlið var framkvæmt í þríriti.

3.3.LC-MS Greining: Phenolic Profile of the Extracts

LC-MS greiningin var gerð með því að nota ABSciex API3000 þrefaldan fjórpóla massagreiningarmæli (AB Sciex LC, Framingham, MA, USA) ásamt Agilent 1100 HPLC kerfi með tvíundirdælu og sjálfssýnistæki (Agilent Technologies, Inc, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum) ). Öflun og gagnaminnkun var framkvæmd með því að nota Analyst 1.6.2 hugbúnað (AB Sciex LLC, Framingham, MA, Bandaríkjunum).

HPLC aðskilnaðurinn var framkvæmdur á Agilent Phenyl Column (3 × 10 mm;2,7 um), og skolefnin voru (A) sýrt vatn (við pH 2,5 stillt með HCOOH) og (B)acetonitrile/ vatn (90/10, við pH 2,5 stillt með HCOOH). Halli leysikerfi var notað sem hér segir: 0-3 mín,5 prósent B;3-18 mín,5-40 prósent B; 18-28 mín.,40 prósent B;28-38mín., 40-80 prósent B; 38-43mín, 80 prósent B,43-45mín, 80-5 prósent B, við flæðihraða 0,4mLmin -l. MS-greiningin var framkvæmd við eftirfarandi tilraunaaðstæður: Loftþrýstingur Efnajónun (APCI) með því að nota upphitaða eimgjafaviðmótið; Nálarstraumur （NC）, -5 μA; Nebulizer Gas (loft), 10 (handahófskenndar einingar); Hjálpargas (loft), 3L mín-l; Hjálpargashitastig (TEM), 550 gráður; Fortjaldgas (CUR, köfnunarefni), 6 (handahófskenndar einingar); Árekstursgas(CAD, köfnunarefni),9(handahófskenndar einingar, sem samsvarar 2,6×10~ Torr árekstrarfrumuþrýstingi).

Greining á mismunandi fenólþáttum var framkvæmd með markvissri nálgun, með því að nota margfeldisviðbragðseftirlit (MRM) aðferð, fínstillt með stöðlum fyrir 19 markefnasambönd (valin á grundvelli fyrri rannsókna á fjölfenólsamsetningu Hibiscus spp.[25,35] ): tvö flavan-3-ól (katekin og epicatechin), sjö flavonól (quercetagetin-7-O-glúkósíð, rútín, quercetín-3-O-glúkósíð, kaempferól-3-O. rútínósíð , kaempferól-7-O-glúkósíð, kaempferól-3-O-glúkósíð og quercetin), einn cinnamatester (klórógensýra), tvær hýdroxýkanilsýrur (p-kúmar- og trans-ferúlsýrur), tveir tvíhýdrókalkónar ( phloridzin og phloretin), eitt oxýflavon (salidroside) og fjögur anthocyanín (myrtillin, kuromanin, peonidin-3-O-glúkósíð og óenín). Greint var frá varðveislutímanum og hlutfallslegum MRM umbreytingum (magni og tímamæli) í viðbótartöflu S1. Ennfremur hafa frekari bráðabirgðaauðkenni verið prófuð með því að nota ómarkvissa nálgun, skanna fjórpólinn frá m/z 100 til 100 Da.

3.4.HPLC-DAD Greining: Magngreining á fenólum

HPLC-DAD greining var gerð til að magngreina mismunandi flokka fenóla (hýdroxýkanilsýruafleiður, katekín, díhýdróchalcones, flavonoids og anthocyanins) í útdrættinum. Skammtar af sýnunum (15 μL) var sprautað í fljótandi Perkin Elmer Flexar quaternary 200Q/410 dæla og LC 200 diode array detector (DAD) (allt frá Perkin Elmer", Bradford, CT, Bandaríkjunum). Skiljunaraðstæður voru þær sömu og notaðar voru fyrir HPLC-MS/MS greiningar (kafli 3.3). .

Litskiljurnar voru teknar við 280,330.350 og við 520 nm (til magngreiningar á anthocyanínum). Greining og magngreining fenólefnasambandanna var framkvæmd út frá varðveislutíma, UV litrófseiginleikum og samanburði við staðla, sem og byggt á gögnum úr bókmenntum [25] og í fyrri LC-MS greiningu. Fimm punkta kvörðunarferlar með mismunandi stöðlum (klórógensýra, p-kúmarín, rútín, epicatechin, naringin og peonidin-3-O-glúkósíð, allt frá Sigma-Aldrich"-Merck KGaA, Darmstadt, Þýskalandi) voru notaðir til að mæla mismunandi fjölfenól sem greindust og auðkennd eru í útdrættinum. Ef viðskiptastaðall var ekki tiltækur var magngreiningin framkvæmd með því að nota kvörðunarferil staðla úr sama fenólflokki, sem gefur áætlað innihald. Línulegleiki ferlanna var ákvörðuð með stuðlinum ákvörðun (R4), sem er hærri en 0,99 fyrir alla staðla.

Allir útdrættirnir voru greindir í þríriti og megindlegar niðurstöður fenólanna voru gefnar upp í mg gl af þurrþyngd (mg gl DW), gefið upp sem heildarmagn hýdroxýkanilsýruafleiða (THC), heildarflavonoids innihald (TFC), heildarkatekinafleiður innihald (TCD), heildarinnihald díhýdrókalkóna (IDC), heildarmagn anthocyanins (TAC) og heildarfenólinnihald (TPC), sem voru metin sem summa einstakra auðkenndra efnasambanda sem tilheyra hverjum flokki.

3.5. Andoxunarvirkniprófanir

Andoxunarvirknigreiningin var gerð með tveimur mismunandi aðferðum: DPPH (2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl) og Hydroxyl Radical (OH)-scavenging (HRS) prófunum.

Aðferð Khandi og Charles [{{0}}] var beitt fyrir DPPH greiningu. Í stuttu máli var þynntum sýnum af útdrættinum (0,5 mL) bætt við 0,5 mL af DPPH lausn (0,1 mM í metanóli; Sigma-Aldrich@, St. Louis, MI, Bandaríkjunum), og blandan var látin hvarfast við stofuhita í 40 mínútur í myrkri. Þessi tími (40 mín.) var skilgreindur út frá niðurstöðum hreyfigreininga hvers útdráttar og stöðlunum klórógensýru og rútíni. Eftir hvarftímann var gleypni mæld við 518 nm með PerkinElmer§ Lambda 25UV/VIS litrófsmæli. Gleypiefni núlls (0,5 ml metanóls og 0,5 ml sýna) og neikvæða samanburðarins (0,5 ml metanóls og 0,5 ml DPPH lausn) var einnig metið. Allar greiningar voru gerðar í þríriti. Hlutfall andoxunarvirkni var reiknað út sem hér segir (1).

4. Niðurstöður

Önnur umbrotsefni eru hugsanleg virk innihaldsefni fyrir nýjar snyrtivörur. Þar á meðal geta fenólsambönd unnin úr plöntum haft mikla andoxunar- og öldrunareiginleika, þau eru áhrifarík við að hindra húðensím (td kollagenasa) og við frásog UV. Þess vegna geta vankönnuð plöntuþykkni, eins og þau úr H. roseus, táknað óbirta uppsprettur lífvirkra sameinda.

Við sýndum fram á að blöð og blóm H.roseus eru rík af hýdroxýkanilsýruafleiðum og flavonoidum, þar sem blóm hafa meira magn af kaempferol glýkósíðum, katekínum, díhýdrókalkónum og antósýanínum, öllum þessum efnasamböndum er ekki lýst enn í bókmenntum fyrir þessa tegund. . Hin mikla andoxunargeta, sérstaklega blómaseyði, ásamt sólarvörn og and-kollagenasavirkni bæði lauf- og blómseyði, benda á efnilega nýtingu þessarar illa rannsökuðu tegundar í húðumhirðu. Að lokum sýndu niðurstöður okkar möguleika H. roseus blóma og laufa sem uppsprettu fenóla sem og virkni útdrætti þeirra sem öldrunarvarnarefni sem gætu verið notuð sem innihaldsefni í hagnýtar snyrtivörur.

Þessi grein er dregin út úr Plants 2021, 10, 522. https://doi.org/10.3390/plants10030522 https://www.mdpi.com/journal/plants