Hluti 2: Milliverkanir askorbínsýra, 5-kaffeóýlkínsýru og quercetíns-3-rútínósíðs í nærveru og fjarveru járns við varmavinnslu og áhrif á andoxunarvirkni

Fyrir frekari upplýsingar. hafðu samband við:tina.xiang@wecistanche.com

Smelltu á hlekkinn til að fá upplýsingar um hluta 1:
https://www.xjcistanche.com/news/part1-interactions-of-ascorbic-acid-5-kaffi-54916714.html

3. Umræður

3.1. Samband uppbyggingar og virkni askorbínsýru,5-kaffeóýlkínsýru og quercetíns-3-rútínósíðs

Fyrsti vísbending um AOA, mældur fyrir mismunandi efni eftir samhengi uppbyggingu og virkni, kom út frá fjölda starfrænna hópa. Ef borin voru saman öll þrjú efnin sem greind voru, hafði askorbínsýra lægsta AOA, fylgt eftir með 5-kaffóýlkínsýru, enquercetin-3-rutínósíðnáði hæsta AOA. Csepregi o.fl. [14] fann sömu röð þegar borið var saman AOA þessara þriggja efnasambanda. Þessa röðun má útskýra með heildarmagni hýdroxýhópa: quercetin-3-rutínósíð hefur tíu, 5-kaffóýlkínsýra hefur fimm ogaskorbínsýraer með fjóra. Fyrirflavonoids, heildarmagn hýdroxýhópa og áhrif þeirra á verkun AOA var áður sýnt af Burda og Oleszek [15]. Hýdroxýhópar eru sérstaklega verðmætir í endiólbyggingum þar sem þeir geta auðveldlega oxast í díketóna [8]. Í greindu efnum er endíólbyggingin einnig mikilvæg fyrir getu til að mynda fléttur með málmjónum [16-18]. Endíólbyggingin á sér stað í quercetin-3-rutínósíði og 5-kaffóýlkínsýru sameindum í fenýlhringnum, sem getur einnig haft áhrif á sterkara AOA þessara efnasambanda. Frekari rannsóknir komust að því að AOA gæti einnig verið undir áhrifum frá öðrum sameindabyggingum. Fenólsýrur verða hugsanlega fyrir áhrifum af karboxýlsýruhópunum, td hýdroxýfenýlediksýra (R-CH=CH-COOH) er veikari rafeindatökuhópur, samanborið við hýdroxýkanilsýru (R-CH,-COOH) ss. sem koffínsýra í 5-kaffóýlkínsýru [19]. Í flavonoidum höfðu aglýkónar hærra AOA en samsvarandi glýkósíð [20,21], þegar um er að ræða quercetin-3-rutínósíð, glýkósíð, AOA aglýkónsinsquercetiner þar af leiðandi hærra [14]. Það eru margir mismunandi starfrænir hópar sem geta haft áhrif á AOA og þar af leiðandi er mikilvægt að nota mismunandi prófunargreiningar með mismunandi aðferðum, svo sem eins rafeindaflutningi (SET), vetnisatómaflutningi (HAT) og raðbundinni róteindatap rafeind flytja (SPLET) til uppgötvunar. Hver vélbúnaður og jafnvel notaða prófunarhvarfefnið getur greint mismunandi uppbyggingu lífvirkra efnasambanda [22].

3.2.Áhrif varmavinnslu og víxlverkunar ólíkra andoxunarefna í uppbyggingu á andoxunarvirkni í fjarveru steinefnajárnsins

Stöðugt AOA yfir langan tíma sem er 40 mínútur af varmavinnslu gefur til kynna að varma niðurbrot skipti minna máli en upphaflega var gert ráð fyrir. Ennfremur sýndu HPLC gögn að hrein 5-kaffóýlkínsýra og quercetin-3-rutínósíð voru stöðug, með hámarksniðurbrot upp á 20 prósent, við varmavinnslu. Fyrri rannsóknir sönnuðu stöðugleika 5-kaffóýlkínsýru upp að venjulegu suðumarki vatns [23], en Dawidowicz og Typek[24] fundu níu afleiðusambönd, eftir að hafa hitað 5-kaffóýlkínsýru í 5 klst. bakflæði. Fyrir styrk askorbínsýru fannst niðurbrot eftir 40 mín af eldun. Áhrifaþættir, sem leiða til niðurbrots askorbínsýru án járns í vatnslausn, gætu verið pH gildi, ljósáhrif, oxun, hitastig og mismunandi styrkur [25,26]. Í þessari rannsókn spiluðu þættirnir hiti og styrkur líklegast aðalhlutverkið þar sem oxunarferlar voru lækkaðir í lágmarki vegna lágmarks gasrýmis í örrörunum. Hugsanlegt er að gasfasinn sem eftir er nægi enn til niðurbrots við loftháðar aðstæður. Mismunandi aðstæður leiða til mismunandi afurða [27,28], þannig að í þessari rannsókn, eftir 40 mín af eldun, var hægt að finna afurðir við báðar aðstæður. Yuan og Chen [28] greindu frá því að furfural, 2-fúrósýra, 3-hýdroxý-2-pýrrón og óþekkt efni séu helstu niðurbrotsafurðir askorbínsýru í vatnslausn sem fer eftir pH gildi . Shinoda o.fl. [29,30] fannst í appelsínusafa niðurbrotsefnin furfural, 2-fúrósýra, 5-hýdroxýmaltól, 3-hýdroxý-2-pýrrón og 5-(hýdroxýmetýl )furfural. Hsu o.fl. [31] greindi askorbínsýru í etanóllausnum og fann 2-fúrósýru og 3-hýdroxý-2-pýrrón. Það fer eftir loftháðum eða loftfirrtum aðstæðum, askorbínsýruafleiðurnar sem greindust (toppar 3 og 4) gætu verið furfural, 2-fúrósýra eða 3-hýdroxý-2-pýrrón eða milliefni. Askorbínsýran minnkaði í skammta-svörunarsambandi og hærri styrkur askorbínsýra sýndi lægra niðurbrotshlutfall við matreiðslu. Askorbínsýra virðist koma á stöðugleika í hærri styrk, væntanlega vegna vetnistengja og van de Waals orku [32].

Í tvíundar- og þrískiptum blöndum fundust aðallega viðbótaráhrif á AOA. Ef styrkur efnisins með hærra AOA jókst í tvíundarblöndum jókst AOA samsetningar þeirra einnig. Aðrar rannsóknir fundu einnig samlegðaráhrif á milli (plús)-katechíns (200 um) með askorbínsýru (50-200 mg/L)[33], og milli tvíflokka af mismunandi mónóterpenum[34]. Einungis í DPPH prófinu fundust andstæð áhrif í 5-kaffóýlkínsýru ásamt quercetin-3-rutínósíði og í þrískiptum blöndum með tvöföldum styrk quercetins-3-rutínósíðs. Þetta gæti stafað af stefnu sameindanna í geimnum, sérstaklega quercetin-3-rutínósíð, sem nokkuð stór sameind, og sterískt aðgengi DPPH róttæku sameindarinnar [35]. Í TPC prófuninni leiddi samsetning askorbínsýra og 5-kaffóýlkínsýru í sterk andstæð áhrif í 1:2 hlutfallinu, en öfugar blöndur með 2:1 hlutfalli leiddu til mikils samlegðaráhrifa sem fóru yfir summan af viðkomandi AOA. Tvöföld styrkleiki askorbínsýra getur gefið, við þessar aðstæður, aukna aukningu á AOA, vegna sjálfsstöðugleika fylgt eftir af stöðugleika annarra sameinda, sem 5-kaffóýlkínsýru sýndi í þessari tilraun. Í granatepli-nektarínsafa, á milli náttúrulegra fenóla og askorbínsýru, kom fram sama víxlverkun, en í þrúgusafa sáust aukin andstæð áhrif með aukinni styrk askorbínsýru [36]. Þessar niðurstöður benda til þess að blöndur af askorbínsýru, 5-kaffóýlkíníni og quercetin-3-rutínósíði nái hæstu AOA-möguleikum þegar þau eru öflugustandoxunarefnieru nóg til.

Smelltu til að læra meira um vörurnar

3.3. Áhrif steinefnajárnsins

The addition of iron to the samples had the most influence on changes in their AOA. Contrary to the hypothesis, based on the pro-oxidative activity of iron, the AOA increased, compared to the same substance or substance mixture without iron. Iron may act like a catalyst itself or forms metal chelates, which are effective catalysts. The changed stoichiometry of the chelates can form additional radical-scavenging metal centers [18], which explains the increased AOA. Further tests showed that reduced ferrous iron (50-100%,v/o)itself interacts with the TEAC(0.266-0.538 mol TE/mol iron), DPPH(0.210-0.495 mol TE/mol iron), and TPC(16.65-31.82g GAE/mol iron) assay reagents, while oxidized ferric iron does not (data not shown). In the presence of iron, 5-caffeoylquinic acid had the highest AOA, followed by quercetin-3-rutinoside and ascorbic acid in TEAC and DPPH assays. This may be due to the changed stoichiometry by metal chelation. The AOA ranking detected by the TPCassay stayed the same, as in the absence of iron: quercetin-3-rutinoside >5-caffeoylquinic acid>askorbínsýra. Hins vegar hafði viðbót járns í blöndurnar áhrif á niðurstöður TEAC og DPPH mælinga, en TPC mælingar voru víða óbreyttar. Af þessum sökum er mikilvægt að nota mismunandi prófunargreiningar með mismunandi vinnuaðferðum þegar unnið er með járnrík sýni.

Aðeins í DPPH prófinu hafði AOA hreins quercetin-3-rutínósíðs, og í samsettri meðferð með askorbínsýru, equimolar eða non-equimolar með tvöföldum styrk quercetin-3-rutínósíðs, lægri gildi í nærveru járns. Boligon o.fl. [351 útskýrði að DPPH prófið greindi smærri andoxunarefni betur, vegna sterísks aðgengis þessara rótefna. Væntanlega getur quercetin-3-rutínósíð með báðar bindihliðarnar byggt upp nokkuð stórar fléttur með járni og því verið óaðgengilegar fyrir prófunina. Eins og nefnt er af Kejic o.fl. [8], gæti þetta verið útskýrt með myndun supramolecular complexes með samhæfingu málmjóna. Í samsettri meðferð með askorbínsýru, sem getur byggt upp blandað gildisfléttur í 1:2 hlutfalli [12], væntanlega geta þessar stærri blönduðu fléttur ekki haft samskipti við DPPH stakeindina. Öfugt við niðurstöðurnar í þessari rannsókn, fundu aðrar rannsóknir [18,37,38], með því að nota DPPH prófið, að quercetin-3-rutínósíðfléttur eru áhrifaríkari andoxunarefni en hreint quercetin-3-rutínósíð. Það er vitað að chelate fléttur flavonoids og málmjóna geta stöðvað róttæka virkni flókinna málmjóna [39]. Eini munurinn var sá að í þessari rannsókn var ammóníumjárn(II)súlfat notað, í stað járn(ⅡI)klóríðs eða súlfats, notað í verkum Symonowics og Kolandek [39].

Samverkandi áhrif á milli askorbínsýru og 5-kaffóýlkínsýru í návist járns í hlutfallinu 2:1 og andstæðra áhrifa í hlutfallinu 1:2. Ekki var mælt með samsetningu 5-kaffóýlkínsýru og járns in vivo [6]. Hins vegar sýndi þessi rannsókn að tvöfalt magn af askorbínsýru í samanburði við 5-kaffóýlkínsýru getur jafnvel haft samverkandi áhrif á AOA. Frekari rannsóknir á hlutföllum gætu sýnt hvort hægt sé að ná jákvæðum áhrifum líka in vivo.

Samkvæmt HPLC gögnum mun það að bæta járni í sýnið hafa lágmarks áhrif á hvatavirkni þess, þar sem aðeins askorbínsýrustyrkur í 0 mín soðnum sýnum minnkaði. Í soðnu askorbínsýrusýnunum, öfugt við sýni án járns, leiddi hærri askorbínsýrustyrkur til hærra niðurbrotshlutfalls.5-Kaffeóklínsýra og quercetin-3-rutínósíð þurfa viðbótarþættina hitastig og tíma, auk víxlverkanir í blöndur, til að hvartavirkni járns virki. Quercetin-3-rutínósíð, í nærveru járns, minnkaði aðeins í tvíundarblöndu með askorbínsýru eftir varmavinnslu. Þetta gæti stafað af því að flavonoid virkar sem aðal andoxunarefni og síðan hvarfast efnasambandið sem myndast við askorbínsýru og endurnýjar upprunalega efnasambandið [18]. 5-Kaffeóýlkínsýra virðist vera sérstök, vegna þess að hún verndar quercetin-3-rutínósíð, en askorbínsýra getur ekki verndað quercetin-3-rutínósíð. Þess vegna getur 5-kaffóýlkínsýra verið lykilsameindin til að koma á stöðugleika í kerfinu ásamt járni og varmavinnslu. Þessi tilgáta um 5-kaffóýlkínsýru sem stöðugleikasameind var staðfest enn frekar í þríæðu blöndunum. Hér var quercetin-3-rutínósíð alltaf stöðugt með 5-kaffóýlkínsýru, þannig að jafnvel í nærveru askorbínsýru sást engin lækkun á styrk quercetins-3-rutínósíðs. Í annarri rannsókn sýndi 5-kaffóýlkínsýra verndandi eiginleika gegn niðurbroti anthocyanins með samlitunarkerfi [40]. Ný niðurbrotsefni, með hugsanlega hærra AOA, komu fram úr öllum þremur efnunum í nærveru járns. Koffínsýra (hámark 6) var auðkennd sem 5-kaffóýlkínsýru niðurbrotsafurð (gögn ekki sýnd). Þetta leiddi til þeirrar forsendu að hitt efnið gæti verið kínsýra eða ein af níu mögulegum afleiðum sem Dawidowicz og Typek [24] lýstu: kínsýra;(1S,3R,4R,5R)-5-[{{24 }}(3,4-díhýdroxýfenýl)-2-hýdroxýprópanóýl]-1,4,5-tríhýdroxýsýklóhexan karboxýlsýra;(1S3R,4R,5R)-5- [3-(3,4-díhýdroxýfenýl)-3-hýdroxýprópanóýl]-1,4,5 tríhýdroxýsýklóhexankarboxýlsýra; trans 3-O-kaffóýlkínsýra; trans 5-O-kaffóýlkínsýra; trans 4-O-kaffóýlkínsýra; koffínsýra; cis-5-O-kaffeóýlkínsýra;4,5-díkaffeóýlkínsýra. Fyrir quercetin-3-rutínósíð birtist niðurbrotsefni í litskiljuninni sem ekki var hægt að bera kennsl á.

3.4. Geta til að mynda kelöt með járni (Fe3 plús) og járnjárni (Fe2 plús)

Í öllum sýnum sem innihéldu askorbínsýru var járnjárn minnkað í járn. Í þessu ferli,askorbínsýratekur rafeind úr járnjárninu og minnkar hana í járn og verður sjálf róttæk. Óstöðuga rótin breytist hratt í dehýdróaskorbínsýru og frekari niðurbrotsefni [12]. Vegna þess að hýdroxýperoxíð vantar er ekki hægt að bregðast við járnjárni í gegnum Fenton hringrásina. Í 0 mín. soðnum tvíblöndum var meira en 20 prósent af járni bundið í nærveru askorbínsýra. Vitað er að askorbínsýra myndar fléttur með járntegundum og öðrum málmjónum með klómyndun um 3-O og 2-O kjarnana eftir tilfærslu vetnis frá 3-OH og 2- OH hópar [16,17,41. Það getur einnig myndað járn-askorbatfléttur með blönduðu gildi [42]. Hins vegar er askorbínsýra veikt klóbindandi efni og eftir matreiðslu greindust aðeins leifar af bundnu járni í hreinum og blönduðum sýnum þegar askorbínsýra var til staðar. Ennfremur, vegna eldunarferlisins, brotnar askorbínsýra niður í niðurbrotsefni, sem virðast ekki geta klóbundið með járni.

5-Kaffeóýlkínsýra er tiltölulega lélegt afoxunarefni. Járnjárn minnkaði með 5-kaffóýlkínsýru og við langvarandi eldun jókst minnkun.5-Kaffeóýlkínsýra klóbindur með járnjárni í bindil til málmhleðsluflutnings [17].5-Kaffeóýlkínsýra ber eina mögulega bindihlið við 3,4 endíólbyggingu koffínsýrunnar. Þetta gæti verið vísbending um hvers vegna koffínsýra er lífvirki hluti 5-kaffóýlkínsýru, en kínsýra hefur nánast ekkert AOA [43]. Endíólar hamluðu OH-myndun vegna myndunar járnfléttu [41] í hlutfalli eins og einnar [44,45]. Lamy o.fl.[46] álykta að 5-kaffóýlkínsýra myndar einliða fléttur, en Kiss o.fl. [47] fundust fáliðategundir. Öfugt við fyrri rannsóknir [17,48] fundust aðeins leifar af bundnu járni í nærveru 5-kaffóýlkínsýru fyrir og eftir hitavinnslu. Þetta má skýra með hlutlausum pH-skilyrðum í þessari rannsókn, á meðan aðrar rannsóknir virkuðu í súrum miðli, byggt á pH gildi frá 1-2.5 í maga manna [48]. Svart botnfall fannst í geymdum sýnum eftir nokkrar klukkustundir, sem er vísbending um 5-kaffóýllíkínsýru-járnjárnfléttur. Nýlega voru notuð blönduð sýni við greininguna, þannig að myndun þessara fléttna við hlutlaust pH krefst lengri tíma. Járnfléttur með koffínsýru sýndu litla hreinsunarvirkni [49]. Ennfremur eru engar vísbendingar um litrófsmælingar fyrir hvarf milli kínsýru og járnjárns [48]. Andstætt 5-kaffóýlkínsýru, í quercetin-3-rutínósíðsýninu, fannst bundið járn, jafnvel eftir varmavinnslu.

Quercetin-3-rutínósíð minnkaði járnjárn í járn með lágmarkshækkun um lengri eldunartíma. Þessari hóflega minnkandi virkni quercetin-3-rutínósíðs var áður lýst af Mira o.fl. [50]. Járnafoxandi virkni quercetin-3-rutínósíðs greindist í 3-rutínósíði, 5,7,3',4'-OH [50]. Í meðallagi víxlverkun við járnjárn má skýra með lægri fjölda -OH hópa, sem leiddi til lægri neikvæðrar hleðsluþéttleika á klóbundinni hlið [50]. Flavonoids geta klóbundið með málmjónum á þremur mögulegum samhæfingarhliðum: (i) á milli 5-hýdroxý- og 4-karbónýlhópa, (ii) milli 3-hýdroxý- og 4-karbónýlhópa, og (ii) á milli 3', A'-hýdroxýhópa í Bring [39]. Quercetin-3-rutínósíð notar bindihliðarnar (i) og (i)[9], og við 3-hýdroxýhópinn er rútínósíðið tengt. Litrófsgögn sýndu jafnvel að málmjónir eru aðeins bundnar 3', A'-hýdroxý hópnum [18]. Klóöt eru áhrifaríkari með járni í tvígildu formi þess [50]. Í tvíblöndum getur quercetin-3-rutínósíð ekki myndað fléttur þegar askorbínsýra er til staðar, þvert á móti í þrennum blöndum. Ef 5-kaffóýlkínsýra er til staðar finnst lítið magn af bundnu járni. Þetta gefur til kynna að 5-kaffóýlkínic verndar quercetin-3-rutínósíð sameindir í nærveru askorbínsýru, þannig að quercetin-3-rutínósíð getur myndað fléttur með járni.

4. Efni og aðferðir

4.1.Efnaefni

ABTS(2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt)(≥98%)was obtained from Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany), DPPH*(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) radical (95%) and Trolox(97%)were obtained from Thermo Fisher (Kandel, Germany). Folin-Ciocalteu phenol reagent was purchased from Merck(Darmstadt, Germany). HPLC grade methanol, acetonitrile(HPLC grade), glacial acetic acid (100%, p.a.), sodium acetate trihydrate (≥99.5% p.a.), potassium thiocyanate (≥98.5%, p.a., ACS),2,2'-dipyridyl (≥95%), hydrochloric acid (≥25%, p.a., ISO), gallic acid monohydrate (≥99%), potassium persulfate (≥99%), rutin trihydrate (working standard), chlorogenic acid (working standard), L-(+)-ascorbic acid (working standard), sodium carbonate(>99 prósent), járnammoníumsúlfatdódekahýdrat og járnammoníumsúlfathexahýdrat voru keypt frá Carl Roth (Karlsruhe, Þýskalandi).

4.2.Sýni

Vatnslausnir og blöndur af ekta stöðlum askorbínsýra, {{0}}kaffóýlkínsýru og quercetin-3-rutínósíðs voru útbúnar sem hreinar lausnir og blöndur í mismunandi hlutföllum. Allar mögulegar tvöfaldar blöndur voru gerðar í jafnmólhlutföllum og ójafnmólhlutföll með einu efnasambandi tvöfölduðust. Þrír blöndur voru einnig framleiddar í jafnmólhlutföllum, sem og í ójafnmólhlutföllum með einu eða tveimur efnasamböndum tvöfölduð, í sömu röð. Lokastyrkur andoxunarefnanna var 0,3 mM fyrir hverja próflausn. Að auki voru allar tilraunir endurteknar eftir að 0,3 mM járni ({{10}},15 mM járnjárni og 0,15 mM járnjárni) var bætt í alls í hverja blöndu. Valið magn andoxunarefna og járns er ekki byggt á lífeðlisfræðilegu magni eða fæðugildum, það er byggt á mólmassa til að rannsaka áhrif sameindasamskipta. Þar af leiðandi var komið á jafnvægishlutfalli milli heildar andoxunarefna og járns. Allar blöndur voru soðnar í 0, 10, 20 og 40 mínútur í sjóðandi vatni og síðan kældar á ís til að stöðva hitunarferlið. Þetta var gert fyrir þrjár óháðar endurtekningar.

4.3.Ljósmælingar

Andoxunarefni(hreint eða blandað) í fjarveru og nærveru járns voru mæld með tilliti til heildar afoxandi virkni þeirra og andoxunarvirkni í þremur sjálfstæðum tæknilegum eftirlíkingum með því að nota háafkastaaðferð í 96-brunnsplötum (SynergyTM HTX Multi-Mode Microplate Reader, BioTek Instruments, Winooski, VT, Bandaríkjunum). Mismunandi prófunargreiningar voru notaðar, vegna mismunandi hvarfaðferða: stakra rafeindaflutninga (SET) og vetnisatómaflutnings (HAT). Þó að TEAC og TPC prófið sé byggt á SET [17,18], fyrir DPPH prófið, er ekki alveg ljóst hvort það byggist á SET, HAT eða jafnvel samsetningu þessara tveggja aðferða [{{6} }]. Nýleg rannsókn af Foti[51] komst að því að fenól geta brugðist við DPPH með röð róteindataps rafeindaflutnings (SPLET), sambland af þessum tveimur aðferðum. Þættir, eins og miðlungs pólun og jónunargeta, hafa áhrif á ríkjandi vélbúnað.

4.3.1. Heildarfenólinnihald (TPC)

Heildarfenólinnihald (TPC) var ákvarðað með Folin-Ciocalteu aðferðinni í 96-brunnsplötu, sem áður var lýst af Bobo-Garcia o.fl.[52] með nokkrum breytingum.

Briefly, 10 μL Folin-Ciocalteu reagents were mixed with a 50 μL sample, and afterward 100 μL Na, CO3 was added. The 96-well plate was incubated at 37 °C（±0.2°C） and with constant orbital shaking at a moderate speed (237 CPM, 4 mm) for 14 min. After a 1 min resting period, the absorbance was measured at 736 nm. Results were expressed as gallic acid equivalents (mg GAE/ mol Antioxidant), using a standard curve ranging from 5.97 to 59.7 ug gallic acid/mL(R~>0.99). Algengt nafn þessarar prófunar er villandi vegna þess að Folin-Ciocalteu hvarfefnið bregst einnig við ekki fenólum, svo sem vítamínum og steinefnum [22]. Það lýsir betur "heildarafoxandi virkni" lífvirkra efnasambanda.

4.3.2. Trolox jafngild andoxunargeta (TEAC)

Andoxunarvirknin var ákvörðuð með því að nota TEAC prófið í 96-brunnsplötu með nokkrum breytingum. Stofnlausn með 9,6 mg ABTS og 1,66 mg kalíumpersúlfati fyllt upp með H2O í 25 ml var útbúin og ræktuð í myrkri við stofuhita í 12-16 klst. Úr þessari stofnlausn var TEAC vinnulausn, sem innihélt 5mL stofnlausn fyllt upp í 25 mL með 100 prósent MeOH, útbúin.

Briefly, 10 μL of the sample was mixed with 150 μL of the TEAC working solution. After a 5 min incubation, the plate was shaken orbitally at a moderate speed for 1 min, followed by a 1 min resting period. The absorbance was measured at a wavelength of 734 nm. The TEAC was expressed as Trolox equivalents (mol TE/mol Antioxidant), using a standard curve ranging from 0.025-0.8 mM Trolox(R->0.98).

4.3.3. DPPH*Róttækar hreinsun

Theandoxunarefniactivity was determined using the modified DPPHmethod for 96-well plates. A DPPHworking solution with 7.88 mg DPPH filled up to 100 mL was prepared. Briefly, 20 μL of the sample was mixed with 180 ul of the DPPH working solution and incubated in the dark for 28 min at room temperature. After 1 min orbital shaking at a moderate speed and a 1 min resting time, the absorbance was measured at a wavelength of 515 nm. Results were expressed as Trolox equivalents (mol TE/mol Antioxidant), using a standard curve ranging from 0.025-0.8 mM Trolox(R2>0.98).

4.4. Samvirkni og mótþrói

Til að greina samverkandi og andstæð áhrif andoxunarvirkninnar var samanburður á niðurstöðum sem fengust í tilraunaskyni við fræðileg gildi reiknuð með summan af áhrifum einstakra íhluta við samsvarandi styrk [53]. Samvirkni lýsir víxlverkun tveggja eða fleiri efna þannig að samanlögð virkni er meiri en summan af hverri virkni fyrir sig. Andstætt þessu er andstæðingur fyrirbæri þar sem víxlverkun tveggja eða fleiri efna í samsetningu hefur heildaráhrif sem eru minni en summan af einstökum áhrifum þeirra.

4.5.Ákvörðun jónajárns

The colorimetric determination of ferrous and ferric iron was modified according to Niedzielski et al. 【54】 for 96-well plates. Briefly, for ferrous iron detection, 20 μL acetate buffer(90 g sodium acetate trihydrate and 48 g acetic acid glacial filled up to 200 mL)and 20 μL 2,2'dipyridyl （0.5%, m/m） and, for ferric iron detection, 20 μL hydrochloric acid （2 M） and 20 μL potassium thiocyanate （5%, m/m）were pipetted into a 200 μL sample in the 96-well plate, incubated there for 10 min at room temperature, and the absorbance was measured for ferrous iron at520nm and for ferric iron at 470nm. Results were expressed in mM ionic iron/mM total iron, using a standard curve ranging for ferrous iron from 0.024-0.214mM(R'>0.99) and for ferric iron from0.005-0.178 mM(R->0.99). Munurinn á heildarjárni og jónuðu járni, summan af járni og járnjárni, er bundið járn.

4.6.HPLC-DAD

Til að mæla andoxunarefnin askorbínsýra, 5-kaffóýlkínsýru og quercetin-3-rutínósíð og niðurbrotsefni þeirra í sömu útdrætti og notaðir eru fyrir ljósmælingar

measurements, a Shimadzu Prominence 20 high-performance liquid chromatography (HPLC) system equipped with a refrigerated SIL-20AC HT autosampler, CTO-10AS VP column oven, DGU-20A5 degasser, LC-20 AT liquid chromatograph quaternary pump, and an SPD-M20A diode array detector (DAD) was used. As a column for separation, a Supelco Ascentis⑧Express an F5 column (150× 3.0 mm, 5 um)equipped with a Supelco Guard column （5×3.0 mm, 5 μm） and a 0.2 micron SST Frit for UltraLite was used. The column temperature was set to 30°C. UV detection was at 245 nm for ascorbic acid, 320 nm for 5-caffeoylquinic, and 360 nm for quercetin-3-rutinoside. The mobile phase consisted of Eluent A (1% acetic acid (v/o), pH 2.5) and Eluent B(100% ACN). The separation was achieved using the following gradient program: 0-2.5 min.5% B:2.5-15 min.5-20%B:15-20 min,20%B;20-22.5 min, 20-5%B;22.5-30 min,5%B.The flow rate was 0.3 mL/min, and the sample injection volume was 30 μL. Standard calibration curves for the three substances 5-caffeoylquinic （0.5-0.15 μM; R2>0.99）, ascorbic acid （0.35-0.025 uM; R2>0.99）, and quercetin-3-rutinoside（0.35-0.025 μM; R2>0.99） voru undirbúin. Afleidd efnasambönd voru auðkennd með semingi með því að greina hreina staðla í nærveru og fjarveru járns fyrir og eftir hitavinnslu. Þess vegna verður nýi toppurinn að koma frá innskotsstaðlinum. Ennfremur voru valdar blöndur mældar með HPLC-MS til að sannreyna fyrirhugaða uppbyggingu.

4.7. Tölfræðigreining

Microsoft Excel 2016 (Microsoft, Redmond, Bandaríkin) og R Statistics (útgáfa 3.6.3, Hold-ing the Windsock, 2020) voru notuð til að prófa líftölfræði og kynna og teikna gagnaniðurstöður. Ályktunartölfræði til að meta og tengja meðferðir voru framkvæmdar með því að nota þríhliða dreifnigreiningu (ANOVA), post hoc Tukey's HSD próf og Pearson fylgni. R pakkarnir sem notaðir voru voru ggplot2 [55], þýðir [56] og multcomp [57].

5. Ályktanir

Byggt á ofangreindum niðurstöðum var AOA askorbínsýru, 5-kaffóýlkínsýru og quercetin-3-rutínósíðs undir áhrifum af sameindabyggingu þeirra, styrk, hlutfalli og milliverkunum við önnur andoxunarefni og járn. Milliverkanir virðast einkum gegna hlutverki í AOA þegar askorbínsýru og 5-kaffóýlkínsýru eru sameinuð. Hér greindust samverkandi og andstæð áhrif. Hitastigið hafði lágmarks áhrif á AOA en á sama tíma hafði hitastig áhrif á stöðugleika allra andoxunarefna í ákveðnum blöndum, sérstaklega í nærveru járns. Aðeins styrkur askorbínsýra minnkaði án járns með lengri eldunartíma og styrkur 5-kaffóýlkínsýru lækkaði aðeins í nærveru járns, en styrkur quercetin-3-rutínósíðs lækkaði aðeins í samsettri meðferð með askorbínsýru í tilvist járns. Ásamt járni gat 5-kaffóýlkínsýra verndað aðrar sameindir frá því að minnka styrk þeirra með varmavinnslu.

Í plöntum eru samsetningar af askorbínsýru, 5-kaffóýlkínsýru og quercetin-3-rutínósíði ekki aðeins mögulegar heldur algengar. Þess vegna gefa þessar niðurstöður grunnþekkingu á ferlum sem eiga sér stað við matreiðslu grænmetis. Fæðufylki eru flóknari og innihalda óteljandi lífvirk efnasambönd, þar á meðal ensím, önnur steinefni eða sýrur, sem breyta hvarfskilyrðum eða eru sjálfir hvarfefni. Þessar flóknu víxlverkanir eru langt út fyrir svið þessarar rannsóknar og gagnlegar styrkir og víxlverkanirandoxunarefnií soðnu grænmeti verður að taka á í framtíðinni.

Heimildir

1. Mellor, DD; Naumovski, N. Áhrif kakós í sykursýki: Möguleiki bris og lifur sem lykilmarklíffæri, meira en andoxunaráhrif? Alþj. J. Food Sci. Tækni. 2016, 51, 829–841. [Krossvísun]

2. Crozier, A.; Jaganath, IB; Clifford, MN Fenól, pólýfenól og tannín: Yfirlit. Afleidd umbrotsefni í plöntum: Tilvik, uppbygging og hlutverk í mataræði mannsins; Crozier, A., Clifford, MN, Ashihara, H., Ritstj.; Blackwell Publishing: Hoboken, NJ, Bandaríkin, 2006; bls. 1–24. ISBN 1-4051-2509-8.

3. Miller, D. Umbreytingarmálmar sem hvatar fyrir "sjálfoxunar" viðbrögð. Free Radic. Biol. Med. 1990, 8, 95–108. [Krossvísun]

4. Buchner, N.; Krumbein, A.; Rohn, S.; Kroh, LW Áhrif varmavinnslu á Flavonólin Rutin og Quercetin. Hröð samfélag. Massa litróf. 2006, 20, 3229–3235. [Krossvísun]

5. Layrisse, M.; García-Casal, MN; Solano, L.; Barón, MA; Arguello, F.; Llovera, D.; Ramírez, J.; Leets, I.; Tropper, E. Járn aðgengi í mönnum frá morgunverði auðgað með Iron Bis-Glycine Chelate, Phytaates and Polyphenols. J. Nutr. 2000, 130, 2195–2199. [CrossRef] [PubMed]

6. Hurrell, RF; Reddy, M.; Cook, JD Hindrun á frásog járns sem ekki er haem hjá mönnum með drykkjum sem innihalda pólýfenól. Br. J. Nutr. 1999, 81, 289–295. [CrossRef] [PubMed]

7. Kostyuk, VA; Potapovich, AI Antiradical og klóbindandi áhrif í flavonoid vernd gegn kísilvöldum frumuskaða. Arch. Biochem. Lífeðlisfræði. 1998, 355, 43–48. [CrossRef] [PubMed]

8. Kejík, Z.; Kaplánek, R.; Masaˇrík, M.; Babula, P.; Matkowski, A.; Filipenský, P.; Veselá, K.; Gburek, J.; Sykora, D.; Martásek, P.; o.fl. Járnsamstæður af flavonoids-andoxunarefni getu og víðar. Alþj. J. Mol. Sci. 2021, 22, 646. [Krossvísun]

9. Latos-Brozio, M.; Masek, A. Sambönd uppbyggingar og virkni Greining á einliða og fjölliðuðum fjölfenólum (Quercetin, Rutin og Catechin) fengin með ýmsum fjölliðunaraðferðum. Chem. Líffræðilegir kafarar. 2019, 16, e1900426. [CrossRef] [PubMed]

10. Gullón, B.; Lú-Chau, TA; Moreira, MT; Lema, JM; Eibes, G. Rutin: Yfirlit um útdrátt, auðkenningu og hreinsunaraðferðir, líffræðilega starfsemi og aðferðir til að auka aðgengi þess. Trends Food Sci. Tækni. 2017, 67, 220–235. [Krossvísun]