FYRIR HLUTI Fenýletanól glýkósíð vernda ofstækkun hjartavöðva af völdum samdráttar í kviðarholi með ECE-1 afmetýleringarhömlun og PI3K/PKB/eNOS leiðaaukningu
Mar 06, 2022
Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com
Qiong-Ling Fan,1 Jia-Wei Wang,1 Shi-Lei Zhang, og o.fl.
Phenylethanoild glýkósíð (CPhGs)eru kjarnaefnisgrundvöllur lyfjafræðilegrar virkni íCistanche tubulosaog hafa margvísleg lyfjafræðileg áhrif. Hins vegar er óljóst hvort CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) hafa bætandi áhrif á ofþyngd hjartavöðva af völdum þrýstingsofhleðslu. Í þessari rannsókn, voru karlkyns SD rottur sem vógu (200 ± 20) g staðfestar hjartastækkunarlíkön með ósæð í kviðarholi (AAC). Eftir aðgerðina var rottunum gefið með samsvarandi lyfi í 6 vikur (CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) 125, 250 og 500 mg/kg/d og valsartan 8,3 mg/kg/d). Hjartaómun, hjartaþyngdarstuðull (HWI), þversniðsflatarmál hjartavöðvafrumna (CSCA), bandvefssvæði, plasma endóþelín 1(ET-1) og magn bólgueyðandi þátta greindust. Niðurstöður okkar sýndu að mismunandi CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð) skammtur minnkaði bakveggþykkt vinstri slegils (LVPWT), end-diastolic þvermál vinstri slegils (LVED), HWI, CSCA, bandvefssvæði, ET-1, bólgueyðandi þættir, arterial natriuretic peptíð (ANP), natriuretic peptíð í heila (BNP) ), endothelin-umbreytandi ensím 1(ECE-1) mRNA-gildi, sýklóoxýgenasa 2 (COX-2), próteinmagn með mikla hreyfanleika hóps 1 (HMGB-1) og ECE{{8} } afmetýleringarstigi á meðan aukið er útfallshlutfall vinstri slegils (LVEF), brot úr vinstri slegli (LVFS), fosfórýleruðum fosfatidýlínósítóli 3-kínasa (p-PI3K), fosfórýleruðum próteinkínasa B (p-PKB) og fosfórýleruðu æðaþelsnítrónuoxíði syntetasi (p-eNOS). -e vísitölur CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) 250 og 500 mg/kg hópur var marktækt frábrugðinn AAC hópnum; samanborið við valsartan hópinn (AV), voru vísitölur CPhGs 500 mg/kg hópsins ekki marktækt mismunandi. Að lokum, CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) batnað rottum hjartavöðvastækkunar vegna AAC, sem gæti tengst ECE- 1 afmetýleringarhömlun og PI3K/PKB/eNOS aukningu.
2. Efni og aðferðir
2.1.Dýr.
70 karlkyns SPF SD rottur sem vógu 200 ± 20 g (10 í hverjum hóp) voru veittar af tilraunadýramiðstöð Xinjiang læknaháskólans (Urumqi, Kína). Dýraframleiðsluleyfisnúmerið var SYXK(XIN)2016-0003 og vottorðsnúmerið var SCXK(XIN)2016-002. -e rannsókn var samþykkt af dýrasiðanefnd fyrsta tengda sjúkrahússins Xinjiang Medical University (samþykkisnúmer 20180223-183). -ey var haldið með frjálsan aðgang að vatni og mat í plastbúrum og haldið í 12 klst ljós/myrkri hringrás við 22 ± 2 gráðu hita og 45–55 prósent raka í tilraunadýramiðstöðinni okkar.
2.2. Efni.
CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) , þar sem innihald echinacea var meira en 40 prósent og akteósíð var meira en 16 prósent, var keypt frá Hetian Di Chen Medical Biotechnology Co., Ltd. Valsartan var keypt frá Beijing Novartis Pharma Co., Ltd. Karboxýmetýlsellulósanatríum (CMC-Na) var veitt af Xian Zhengtian Pharmaceutical Accessories Co., Ltd. Og CPhGs voru leyst upp í 0,5 prósent CMC-Na.
Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche
2.3. Abdominal Aorta Coarctation (AAC).
Eftir að hafa verið svæfð með 2,5 prósenta pentobarbital natríum (2,5 ml/kg) (Merck, Darmstadt City, Hessen, Þýskalandi), voru rotturnar rakaðar og haldið hita á hitapúðum. -en kviðarhol rottunnar var opnað í 2 cm á miðju kviðar í dauðhreinsuðu umhverfi, innyflum kviðarhols var ýtt til hægri hliðar og ósæð í kviðarholi var að fullu afhjúpuð við 0,5 cm fyrir ofan hægri nýrnaslagæð. Númer 8 nál var bundin með vír númer 2 samhliða kviðarholinu sem var saumað [18]. Ósæðar í kviðarholi rotta í sýndarhópnum voru aðskildar án bindingar og enginn samanburðarhópur var fyrir aðgerðina. -e degi eftir aðgerð var AC 125 mg/kg, AC 250 mg/kg og AC 500 mg/kg gefið með CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche)með magagjöf; AV hópurinn var fóðraður með valsartani með magaslöngu; og samanburðarhópur, AAC hópur og sýndarhópur fengu ekki CPhGs eða valsartani einu sinni á dag í 42 daga í röð. Lyfjaskammtur var stilltur á grundvelli fyrri tilvísana og fortilrauna [8].
2.4. Hjartaómun.
Sex vikum eftir AAC voru rotturnar svæfðar með 2,5 prósent pentobarbital natríum og framkvæmdar hjartaómskoðun (Philips HD11 XE, Amsterdam, Hollandi). LVPWT, LVED, LVEF og LVFS voru mæld fjórum sinnum til að reikna út meðaltöl sem lokavísa.
2.5. Hjartaþyngdarstuðull (HWI).
Eftir hjartaómun voru rotturnar teknar af lífi með því að safna blóði úr ósæð í kviðarholi. -e hjörtu rotta voru fjarlægð úr brjósti og vigtuð eftir að hafa verið þvegin með venjulegu saltvatni (4 gráður) 3 sinnum og tæmd með hreinum síupappír. -e HWI var reiknað út með eftirfarandi formúlu: HWI � hjartaþyngd líkamsþyngdar. (1)
2.6. Hematoxylin-Eosin og Masson litun.
-e hjartavöðva frá vinstri slegli var festur með 4 prósentum paraformaldehýði innbyggt í parafin, krossskorið með þykkt 4 μm, þurrkað í ofni við 60 gráður í 2 klukkustundir og síðan litað með hematoxýlín-eósíni eða Masson (Solaibio, Peking, Kína). -e uppbygging hjartavöðvans sást með öfugum fasa-andstæða smásjá (Leica, Frankfurt, Þýskalandi). Mynd J hugbúnaður var notaður til að reikna út CSAC og bandvefssvæði.
2.7. Ensímtengd ónæmissogefnagreining (ELISA).
Ósæðarblóð í kviðarholi var dregið úr rottum og sett í segavarnarrör í 2 klst við stofuhita og síðan skilið í skilvindu við 3000 r/mín hraða. -e flotið var frásogast með pípettum (Eppendorf, Hamborg, Þýskalandi) og geymt við 80 gráður til prófunar. Plasma ET-1, interleukin 1 (IL-1), interleukin 6 (IL-6), æxlisdrepsþáttur, gagnreynd viðbótar- og óhefðbundin lyf
(TNF- ) (Bioss, Peking, Kína) og sýklóoxýgenasa 1 (COX-1) (Cusabio, Wuhan, Kína) magn rotta greindist samkvæmt leiðbeiningum ELISA setts.
2.8. Metýleringarsértæk PCR.
DNA var dregið úr hjartavöðvavef í vinstri slegli rotta með DNA útdráttarbúnaði (Tiangen Biotech, Peking, Kína). -e frásogsgildi (A gildi) var jafnt og OD260/OD280 (1,8~1,9). 20 ul erfðafræðilegt DNA (500 pg-1 ug) var breytt með brennisteinssýru með Methylation-Gold Kit (ZYMO, Orange County, CA, Bandaríkjunum). -e MSP hvarfkerfi var 25 μL, þar á meðal 3,0 μL af súlfít breyttu DNA sniðmáti, 2,5 μL af 10 × stuðpúða, 2,5 μL af 2,5 mm dNTPs, 1,0 μL af 10 μm grunni, 0,1 TaqARA DNA fjölliða (Hotstar μL) , og 14,9 μL af ddH2O. -þær voru 45 lotur í heildina: eðlisbreyting við 95 gráður, glæðing við 55 gráður og framlenging við 72 gráður í 30 s. Eftir PCR var 5 μL afurð aðskilin með 2 prósenta agarósa gel rafdrætti. -e DNA var meðhöndlað með M. Sssl metýltransferasa (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA) var notað sem jákvæð stjórn á metýleringu og DNA eðlilega viðmiðunarhópsins var notað sem jákvæð viðmiðun við afmetýleringu. Að lokum var agarósa hlaupið ljósmyndað og greint með Bio-Rad hlaupmyndakerfi. -e afmetýlunarstig var reiknað með eftirfarandi formúlu:
Allir grunnar sem hannaðir eru í Methprimer (Applied Biosystems, MA, Bandaríkjunum) og framleiddir af Sangon Biotech (Shanghai, Kína) eru skráðir í töflu 1.
2.10. Western Blot.
Prótein voru dregin úr hjartavöðva vinstri slegils með Ripa Buffffer (Scientific) og próteasahemli bætt við. Próteinstyrkur var ákvarðaður með BCA aðferð (Solarbio, Peking, Kína). Prótein voru tekin við 50 ug og eðlishreinsuð við 100 gráður C í 5 mínútur. Prótein voru aðskilin með natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð gel rafdrætti (SDS-PAGE, Beyotime, Shanghai, Kína) og síðan flutt yfir á pólývínýlídenflúoríð (PVDF) himnu með rafhleðslubúnaði (Bio-Rad, CA, USA). Eftir að hafa verið stíflað með 3 prósent BSA í 2 klukkustundir við stofuhita, voru himnurnar ræktaðar með and-PI3K mótefni, andfosfó-PI3K mótefni, and-eNOS mótefni, and-fosfó-eNOS (1:1000, Bioss, Peking, Kína), and-COX-2 mótefni, and-HMGB-1 mótefni (1: 1000, Proteintech, Chicago, IL, USA) og and-ECE-1 mótefni (1: 2000, Signalway Antibody) , College Park, MD, Bandaríkjunum), aðal mótefni yfir nótt við 4 gráður. Daginn eftir, eftir að hafa verið þveginn með TBST 3 sinnum, voru himnurnar ræktaðar með HRP-merktu geita-anti-kanínu IgG (1: 25000, 1 klst., Zhongshanjinqiao, Shanghai, Kína) við stofuhita. Eftir að hafa verið þvegið með TBST þrisvar sinnum voru himnurnar sýndar með Pierce™ ECL Western Blotting Substrate og myndaðar með því að nota FluorChem E Imaging System (Protein Simple, USA), sem voru staðlað til -aktíns sem innra eftirlit.
Ávinningurinn af Phenylethanoild glýkósíðum frá cistanche
cistanche ávinning
3. Úrslit
3.1. CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) Bætt hjartastarfsemi hjá rottum eftir AAC.
-e rottur fengu slímgjöf frá deginum eftir AAC. -e jákvæður samanburðarhópur (AV) var gefinn í slímgjöf með valsartani 8,3 mg/kg/d og CPhGs hópnum (AC) var gefið með CPhGs 125, 250 og 500 mg/kg/d, í sömu röð. Eftir sex vikna samfellda skömmtun hafa rotturnar framkvæmt hjartaómun undir 2,5 prósent natríumpentóbarbital svæfingu. Tvær rottur dóu eftir AAC: ein í líkanahópnum dó á þriðja degi eftir AAC úr lungnabjúg; annar í AC 500 mg/kg lést daginn eftir aðgerð sem grunur leikur á að stafi af skurðaðgerð. Eins og sést á mynd 2, samanborið við sýndarhópinn, lækkuðu LVED, LVEF og LVFS í AAC hópnum marktækt en LVPWT í AAC hópnum jókst verulega. Í samanburði við AAC hópinn voru LVED, LVEF og LVFS aukin og LVPWT lækkaði í mismiklum mæli í hverjum AC skammtahópi; fyrir LVPWT fannst ekki marktæk breyting í AC 125 mg/kg hópnum en fannst í AC 250 og 500 mg/kg hópum. Í samanburði við AV hópinn sást marktækur munur á LVPWT og LVED í AC 125 mg/kg hópnum, en LVPWT, LVED, LVFS og LVFS í AC 250 og 500 mg/kg hópum ekki.
3.2. CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) Minnkað HWI, CSAC og Fibrosis svæði hjá rottum eftir AAC.
-en við vógum hjarta hverrar rottu til að reikna út HWI og tókum hjartavef fyrir HE og Masson litun til að fylgjast með breytingum á þversniðsflatarmáli (CSAC) og bandvefssvæði í hjartavöðvafrumum. Eins og sýnt er á myndum 3(a), 3(d), og 3(e), samanborið við sýndarhópinn, minnkaði hjartaþyngd (HW) og HWI í AAC hópnum verulega; samanborið við AAC hópinn, HW og HWI í AC250 og 500 mg/kg hópum minnkuðu verulega; borið saman við AV hópinn, HW og HWI hækkuðu marktækt í AC 125 mg/kg hópnum en voru ekki í AC 250 og 500 mg/kg hópunum. Á myndum 3(b) og 3(f), samanborið við sýndarhópinn, sýndu niðurstöður Masson litunar að bandvefssvæðið í AAC hópnum var aukið marktækt. Fyrir bandvefssvæðið fannst marktæk fækkun í AC 125, 250 og 500 mg/kg hópum samanborið við AAC hópinn, en marktæk aukning í AC 125 og 250 mg/kg hópum og marktæk lækkun á AC 500 mg/ kg hópur fannst þegar borinn var saman við AV hóp. Á myndum 3(c) og 3(g) sýndu niðurstöður HE-litunar að CSAC í AAC hópnum var aukið marktækt í samanburði við það í sýndarhópnum; samanborið við AAC hópinn minnkaði CSAC í AC 250 og 500 mg/kg hópum verulega; samanborið við það í AV hópnum, hins vegar jókst CSAC marktækt í AC 125 og 250 mg/kg hópum og enginn marktækur munur fannst í AC 500 mg/kg hópnum
3.3. CPhGs(Phenylethanoild glýkósíð frá cistanche) Lækkað mRNA-stig hjartavöðvastækkunargena í hjartavef rotta eftir AAC.
ANP, BNP og myosin þungkeðja (-MHC) eru mikilvægir ofstækkunarþættir hjarta [19, 20]. Við fundum hlutfallslegt tjáningarstig þessara þriggja hjartastækkunargena í hjartavefnum. Eins og sýnt er á mynd 4, samanborið við sýndarhópinn, var hlutfallslegt tjáningarmagn ANP, BNP og -MHC mRNA í AAC hópnum aukið marktækt; hins vegar, samanborið við AAC hópinn, hlutfallslegt tjáningarstig þriggja hjartastækkunargena í AC 250 gagnreyndum viðbótar- og óhefðbundnum lækningum 5.
