HLUTI 2 Einangrun og auðkenning á fenýletanóíð glýkósíðum frá Aloysia Polystachya og virkni þess sem hemlar mónóamínoxíðasa-A

Hver er ástæðan fyrir því að Cistanche Actosides geta hamlað ensímvirkni?

Meginreglan um andoxunaráhrif Cistanche

Fyrir frekari upplýsingar vinsamlega hafið samband við:joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola hefur mörg áhrif, smelltu hér til að vita meira

Aðskilnaður og auðkenning á innihaldsefnum með ofurafkastamikilli vökvaskiljun og massagreiningu

Litskiljunargreiningar voru gerðar með því að nota Waters Acquity UPLC H-Class kerfi útbúið með díóða fylkisskynjara (DAD) og Waters Xevo TQ-S tandem fjórpóla massarófsmæli með Z-úðagjafa sem starfar í neikvæðri jónastillingu. Stofnlausnir sem innihalda 1.0mg/mL af útdrætti eða stöðlunumakteósíð, ísóakteósíð, 6'-asetýlakteósíðog 4',4''',5,5''-tetrahýdroxý-6,6'',3'''-trímetoxý-[C7–O-C7'']-bíflavón í LC-gráðu metanóli voru útbúnar sérstaklega, með hljóðgjöf í 30mínútur hver þegar þörf krefur, og síuð í gegnum 0.45μm Millipore síur (Merck Millipore). Lausnir voru þynntar í 10µg/mL með metanóli og deilum (5μL) var sprautað á Sigma-Aldrich Ascentis Express C18 súlu (1{{30}}0×4,6 mm id; 2,7 µm kornastærð). Hreyfanlegur fasi samanstóð af vatni sem innihélt 0,1 prósent maurasýru (leysi A) og metanóli sem innihélt 0,1 prósent maurasýru (leysi B) með flæðihraða 0,5 ml/mín í samræmi við skolunarsniðið: ísókratískt með 3 prósent B á milli 0 og 4 mín, fylgt eftir með línulegum halla frá 3 til 60 prósent B á milli 4 og 19 mín og frá 60 til 90 prósent B á milli 19 og 23 mín, og loks aftur í 3 prósent B á milli 23 og 28 mín. Frárennslisvatnið var fylgst með af DAD á bilinu 210 til 720nm og af MS með bjartsýni uppsprettu og rekstrarbreytum sem hér segir: háræðaspenna 2,50 kV, Z-úða uppspretta hitastig 150 gráður, leysingarhitastig (N2) 350 gráður, leysingargasflæði 600 l/klst., og massasvið m/z 150 til 600 í fullri skönnun.

Hreinsun auðkenndra innihaldsefna

Hráa hýdróetanólútdrátturinn (10 g) var leystur upp í vatni: etanóli (50:50; rúmmálshlutfall) og skipt í röð á móti hexani, etýlasetati og n-bútanóli. Bútanólhlutinn var þéttur á snúningsuppgufunarbúnaði og 3g sýni af sundruðum útdrættinum var sett á glersúlu (10 × 3 cm odd) fyllt með C-18 RP kísilgeli (230-400 möskva; Sigma -Aldrich) og skolað með vatni, fylgt eftir með blöndu af vatni: metanóli (90:10, 50:50 og 10:90; rúmmáli). Undirhlutinn sem fékkst með skolun með vatni: metanóli (90:10; rúmmál / rúmmál) var hreinsað frekar með RP-HPLC með því að nota Shimadzu LC-20AP System tengt SPD-20A UV/Vis skynjara og búin Phenomenex Luna® C-18 dálki (250 × 10 mm id; 5 μm kornastærð). Hreyfanlegur fasi var vatn: metanól byrjaði við 90:10 (v/v) og breyttist í 30:70 (v/v) á 100 mínútum til að fá hinar fjórar þekktu efnasambönd.akteósíð(750 mg), einangruð hlið (430 mg), 6'-asetýlakteósíð(42 mg), og 4',4''',5,5''-tetrahýdroxý-6,6'',3'''-trímetoxý-[C7–O–C7'']-bíflavón ( 13 mg). Flæðishraði hreyfanlegu fasans var 1 ml/mín., inndælingarrúmmálið var 500 μL, litskiljunin var skráð við 340 nm og UV litróf fengust á bilinu 240 til 400 nm. Auðkenni hreinsuðu innihaldsefnanna voru staðfest út frá 1H- (500 MHz) og 13C-NMR (125 MHz) litrófum þeirra sem skráð voru á Bruker DPX 500 litrófsmæli, og samanburður á gögnunum við þau sem til eru í bókmenntum [18, 19, 41]. Hreinleiki einangruðu efnasambandanna var staðfestur með UPLC-DAD-MS (▶Mynd. 1b–d) og NMR (▶Mynd. S1–S12, Stuðningsupplýsingar).

Magngreining áakteósíðmeð HPLC-díóða fylkisskynjara

Sýni (1 mg) af þurrkaðri hýdraetanólútdrættinum var endurleyst í 1 ml af blöndu (80:20; rúmmáli) af metanóli (JT Baker HPLC bekk) og Milli-Q Ofurhreint vatn (Merck Millipore), hljóðblandað í 30 mín., og síað í gegnum 0.45-μm Millipore fisíu. Skammtar (20 µL) af þessari lausn voru greindir á Shimadzu LC-10APvp kerfi sem var tengt við SPD-M10Avp DAD og búið Phenomenex Luna C18 súlu (250 × 4,6 mm id, 5 µm) varið með Phenomenex C18 forsúla (4,0 × 3,0 mm auðkenni, 5 µm). Aðskilnaður var framkvæmdur við stofuhita (22 ± 1 gráðu) með því að nota hreyfanlegur fasa sem samanstendur af ediksýru 0,1 prósent í vatni (leysi A) og metanóli (leysi B;

JT Baker HPLC einkunn) afhent með stöðugum flæðihraða 1,0 mL/mín samkvæmt áætluninni: línulegur halli frá 10 til 70 prósent B á milli 0 og 32 mín., frá 70 til 10 prósent B á milli 32 og 35 mín, og endanleg ísókratísk skolun með 10 prósent B á milli 35 og 40 mín. Uppgötvunarbylgjulengdin var stillt á 330 nm.

Efni íakteósíðí útdrættinum var áætlað með því að notaakteósíð(Sigma-Aldrich; CAS nr. 61276-17-3) sem ytri staðall. Lausnir sem innihéldu 500, 250, 125, 62,5, 31,2 og 15,6 ug/ml af viðmiðunarstaðlinum voru útbúnar og kvörðunarferlar voru smíðaðir með því að láta hverja lausn undirrita HPLC greiningu í þríriti [42]. Hlutfall hámarksflatarmáls staðalsakteósíðsamsvarandi styrk greiniefnis var komið á með línulegri afturhvarf á stöðluðu ferlunum (▶Mynd. S13, Stuðningsupplýsingar). Greiningargögn voru fullgilt með tilliti til línuleika, nákvæmni og nákvæmni samkvæmt leiðbeiningum sem gefin voru út af Agência Nacional de Vigilância Sanitária [42]. Greiningarmörk (LoD) og magngreining (LoQ) áakteósíðvoru {{0}},30 og 0,92 µg/mL, í sömu röð.

Mónóamín oxidasa-A hömlunarpróf

Raðbrigða MAO-A úr mönnum, týramín, klorgýlín, vanillínsýra, 4-amínó andpýrín og piparrótarperoxidasi voru keypt frá Sigma-Aldrich. MAO-A hömlunargreiningar voru gerðar með því að nota 96-brunnsplötur eftir breyttri útgáfu af aðferðinni sem lýst er af López o.fl. [43]. Hver brunnur var hlaðinn með 50 μL af litningalausn (0,8 mM vanillínsýru, 2,5 mM 4-amínó andpýrín og 4 U/mL piparrótarperoxíðasa í fosfatbuffi við pH 7,6), 100 μL af 3 mM týramín og 50-μL skammtur af óhreinsuðu hýdróetanólútdrættinum eða einu af hreinsuðu fenýletanóíðunum sem eru leystir upp í metanóli. Að lokum var 50 μL skammtar af 8 U/mL MAO-A bætt við hverja holuna og platan var ræktuð við 37 gráður í 30 mínútur, á þeim tíma var gleypni skráð á 5 mínútna fresti með því að nota örplötulesara. Clorgyline (Stærra en eða jafnt og 97 prósent GC; Sigma-Aldrich) og metanól voru innifalin sem jákvæð og neikvæð viðmið, í sömu röð, á hverri greiningarplötu.

tölfræðigreining

Þrjár óháðar mat á MAO-A hamlandi virkni voru framkvæmdar og aflað gögn voru greind með Graph-Pad Prism hugbúnaði. IC₅₀gildi hýdróetanólsútdráttarins, hreinsaðra fenýletanóíða og jákvæða samanburðarins voru reiknuð út með ólínulegri aðhvarf, þar sem líkt var eftir log (þéttni hemils) á móti eðlilegri prósentuhömlun.

Stuðningsupplýsingar

H- og 13C-NMR litróf afakteósíð, ísóakteósíð, 6'-asetýlakteósíð og 4,4,5,5-tetrahýdroxý-6,6,3 trimetoxý-[C7–O–C7'']-bíflavon og HSQC/HMBC fylgnigreiningar fyrir fenýletanóíðin þrjú eru fáanleg sem stuðningsupplýsingar.

Heimildir

[1] Alþjóðaheilbrigðismálastofnunin. Þunglyndi og önnur algeng geðræn

Kvillar: Global Health Estimates. Genf: WHO; 2017

[2] Ferguson JM. SSRI þunglyndislyf: Aukaverkanir og þol. Prim Care Companion J Clin Psychiatry 2001; 3:22–27

[3] van der Watt G, Laugharne J, Janca A. Viðbótar- og óhefðbundin lyf við meðhöndlun á kvíða og þunglyndi. Curr Opin Psychiatry 2008; 21:37–42

[4] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Plöntubundin lyf við kvíðaröskun, hluti 1: Yfirlit yfir forklínískar rannsóknir. Miðtaugakerfislyf 2013; 27: 207–219

[5] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Plöntubundin lyf við kvíðaröskun, hluti 2: Yfirlit yfir klínískar rannsóknir með forklínískum sönnunargögnum. Miðtaugakerfislyf 2013; 27: 301–319

[6] Del Vitto LA, Petenatti EM, Petenatti ME. Recursos herbolarios de San Luis (República Argentina). Aðalhluti: Plantas Nativas. Multequina 1997; 6:49–66

[7] González Y, Arrúa RD, Rojas GD, García MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito",Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verben- aceae), cultivado en Paragvæ. Rojasiana 2014; 13:31–41

[8] Mora S, Díaz-Véliz G, Millán R, Lungenstrass H, Quirós S, Coto-Morales T, Hellion-Ibarrola MC. Kvíðastillandi og þunglyndislyf-eins áhrif vatnsáfengs þykkni fráAloysia polystachyaí rottum. Pharmacol Biochem Behav 2005; 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S. Kvíðastillandi áhrif afAloysiapolystachya(Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) í músum. J Ethnopharmacol- col 2006; 105: 400–408

[10] Hellion-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J,

De Lima TCM, Mora S. Áhrif þunglyndislyfjaAloysiapolystachya(Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) í músum. Phytomedicine 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H.

-Karbólínalkalóíðar í Peganum harmala og hömlun á mannamónóamínoxídasa (MAO). Food Chem Toxicol 2010; 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Auðkenning, tilvik og virkni kínasólínalkalóíða í Peganum harmala. Food Chem Toxicol 2017; 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Mónóamín oxidasa-A hömlun og tengd andoxunarvirkni í plöntuþykkni með hugsanlegum þunglyndislyfjum. Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. Sértækir MAO-B hemlar: Lærdómur frá náttúrulegum vörum. Mol Divers 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, Silva DM, Oliveira DR, Costa EA. Meðferð við kvíða og þunglyndi: Lyfjaplöntur eftir á. Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Fišar Z. Lyf tengjast mónóamínoxíðasavirkni. Prog Neuropsy- chopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. Mónóamínoxidasi af tegund A og serótónín taka samræmdan þátt í þunglyndi: Frá ójafnvægi taugaboðefna til skertrar taugamyndunar. J Neural Transm 2017; 125: 53–66