Hluti 1: Áhrif Cistanche Tubulosa vatnsútdráttar á þörmum örveru músa með þarmasjúkdóma

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

Truflanir í örveru í þörmum tengjast mörgum sjúkdómum. *e vatnskenndur útdráttur úrCistanche tubulosa (CT), hefðbundin kínversk jurtaformúla, hefur verið tilkynnt að gegni hlutverki ívernda þörmum manna. Hins vegar er lítið vitað um áhrif þess á örveru í þörmum. *Núverandi rannsókn var gerð til að ákvarða hvort CT-vatnsútdrátturinn geti stillt örveru í þörmum í músum með þarmasjúkdóma. Við komumst að því að skemmdformgerð þarmasem stafar af meðferð með cefixími gæti verið bjargað með því að nota CT vatnsútdráttinn. *Samanburður á fjölbreytileika örvera á milli músa sem fengu CT-útdráttinn og samanburðarmúsa benti einnig til þess að hægt væri að endurheimta röskunina í örverusamfélagi líkanahópa með meðferð með háum og meðalstórum styrk af vatnskennda útdrættinum. Meðferð með cefixími leiddi til marktækrar fækkunar á mjólkursýrugerlum; þó, viðbótin á CT vatnskennda útdrættinum endurheimti vöxt þessara mjólkursýrugerla. Ennfremur gat CT-vatnsútdrátturinn stillt stórkostlegar breytingar á efnaskiptaferlum örveru í þörmum sem framkallað er af cefixími. *Þessar niðurstöður veittu innsýn í jákvæð áhrif CT-vatnsútdráttarins á örveru í þörmum og þær gáfu einnig mikilvæga viðmiðun fyrir þróun skyldra lyfja í framtíðinni.

Cistanche til að slaka á þörmum, vinsamlegast smelltuhérað vita meira

Kynning

hafa sýnt fram á að C.deserticola fjölsykrurframkalla sortumyndun ísortufrumur, draga úr oxunarálagi[15], draga úr vitrænni truflun með því að stjórna andoxunar- og bólgueyðandi ferlum í rottum [16], vernda PC12 frumur gegn OGD/RP-völdum meiðslum [17], auka frásog echinacosides in vivo og hafa áhrif á örveru í þörmum [17] 18]. Probiotics eru lifandi ósjúkdómsvaldandi örverur sem hafa heilsufarslegan ávinning og veita örverujafnvægi í meltingarvegi þegar þær eru gefnar í nægilegu magni [19]. *ey geta aukið ósértæk frumuónæmissvörun sem einkennist af virkjun átfrumna, náttúrulegra drápsfrumna (NK) og mótefnavaka-sértækra frumudrepandi T eitilfrumna og losun ýmissa frumuefna á stofnsértækan og skammtaháðan hátt [20]. Probiotic stofnar bæta eiginleika þarmaþekju með TJ mótun og sýnt hefur verið fram á að sérstakir probiotic stofnar stjórna slímtjáningu og hafa þar með áhrif á eiginleika slímlagsins og óbeint stjórna ónæmiskerfi þarma [21]. Stofnar af mjólkursýrubakteríum (LAB) og Bifidobacterium eru helstu probiotics sem hafa verið notuð á mörgum sviðum [22-26]. *Heilsuávinningur þeirra er fjölmörg, þar sem andoxunargeta þeirra er mikilvægur þáttur í heilsutengdri starfsemi þeirra[27]. Probiotics geta klóað málmjónir til að koma í veg fyrir að þær hvati oxun [28, 29]; þau geta einnig aukið tjáningu andoxunarensíma [30, 31], framleitt ýmis umbrotsefni með andoxunarvirkni [32, 33], miðlað andoxunarboðaleiðum [34-36] og stjórnað ensímum sem framleiða hvarfgjörn súrefnistegundir (ROS) og svörun þarma örverur til oxunarálags[37]. Nýleg rannsókn sýndi fram á að fjölsykrur CD gætu örvað vöxt sumra mjólkursýrubaktería, sem gæti gagnast heilsu manna [38]. Hins vegar er innihald fjölsykra í CD öðruvísi en í CT [7, 39], og þessi munur getur leitt til mismunandi áhrifa í örverum í þörmum. Ennfremur, þó að CD fjölsykrur geti dregið úr oxunarálagi með því að virkja NRF2/HO-1 ferlið [15], geta áhrif einstakra fjölsykra verið frábrugðin heildaráhrifum margra samsetninga í CT. *us, það er nauðsynlegt að skilgreina nákvæmlega áhrif CT vatnskenndra útdrátta á örverur í þörmum. Að auki geta aðdáendur einnig staðist oxunarálag [40] og bælt bólguviðbrögð sem miðlað er að lipolysaccha með því að virkja Keap1/Nrf2/HO-1 ferlið [41]. *áður er mikilvægt að ákvarða áhrif CT-vatnsútdráttarins. Þar að auki benda áhrif ákveðinna innihaldsefna í vatnskennda CD útdrættinum á oxunarálag og þarmaflóru til þess að þol gegn oxunarálagi gæti verið í samhengi við breytingar á þarmaflóru. Til að fylla upp í eyðurnar í þekkingunni um efnin sem nefnd eru hér að ofan, könnuðum við áhrif CTaqueous extracts á þarmaörveru músa með þarmaflórusjúkdóma. *Þessar niðurstöður munu veita verðmætar upplýsingar um mögulega aðferðir sem breyta þarmaflórunni og veita þörmum viðnám gegn oxunarálagi.

2. Efni og aðferðir

gefið daglega kl. 12:00 klst. og önnur efni voru gefin daglega kl. 15:00 klst. Meðan á tilraununum stóð var C, D, E og F hópunum haldið í fyrirmyndarástandi þarmasjúkdóma. *E saur var safnað á sjö daga fresti á dauðhreinsað skurðborð og geymt við -20 gráður .2.4. Vefjameinafræðileg athugun á ristli músa. Í lok tilraunarinnar voru mýsnar drepnar með leghálsi og innihaldi ristilsins var safnað á dauðhreinsað skurðborð og geymt við -80 gráður; á sama tíma voru ristilvefssýni fest í 10 prósent hlutlausu formalíni.*en, sýnin voru þurrkuð með því að nota hallastyrk af etanóli, hýalínuð með xýleni, felld inn í paraffín, sneidd og lituð með hematoxýlín-eósíni. Formfræðilegar breytingar á ristilslímhúð komu fram og þær voru bornar saman með ljóssmásjá. Villuslengd og duldudýpt í ristli var mæld og reiknað hlutfall villuslengdar og duldudýptar (V/C gildi) (51).2.5. DNA útdráttur og bókasafnsbygging. DNA var dregið úr saur með því að nota EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, Bandaríkjunum) samkvæmt samskiptareglum framleiðanda. DNA gæði voru ákvörðuð með flúormæli (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, Bandaríkjunum). Pöraðir frumrar á V3-V4 svæðinu í 16s rDNA voru hannaðir til að magna svæðið og framleiða 466 bp DNA brot. *e áfram ræsi var 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-), og afturábak var 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Hvert PCR rúmmál var 25 μL, sem innihélt 2,5 μL af 10 × PCR buffffer, 2 μL af dNTP, 1 μL af hverjum grunni og 20–30 ng af sniðmát DNA. *is, verðtryggðu millistykkin voru fest við enda magnmagnanna til að búa til raðgreiningarsöfn. *söfn voru staðfest með QuantiFluor™ flúormæli og magngreind í 10 nmól.2.6. 16s rRNA genaröðun og örverusamfélagsgreining. *e Illumina pallur (Illumina MiSeq) var notaður til að fá 2 × 250 bp pöruð gögn. Rekstrarflokkunareiningar (OTUs) voru fengnar með Uparse hugbúnaði í gegnum staðlaða þyrping með 97 prósent líkt. *Einkennilegt Bayesian úthlutunaralgrím RDP flokkunarkerfisins var notað til að samræma OTUs við Greengene gagnagrunn útgáfu 13.5 og framkvæma tegundaskýringar. *e alfa fjölbreytileiki í örveru í þörmum var reiknaður út með Shannon og Simpson vísitölum og munurinn á milli hópa var greindur með línulegri greiningu á áhrifastærð (LEfSe). *e beta fjölbreytileiki var greindur með aðalhnitagreiningu (PCoA) á Brady–Curtis ólíkindum. PICRUST2 var notað til að áætla efnaskiptagetu örvera í þörmum [42].2.7. Tölfræðileg gagnagreining. SPSS 20 var notað fyrir einstefnu ANOVA og tilraunagögnin voru gefin upp sem X ± S; X gefur til kynna meðalgildi og S gefur til kynna staðalfrávik.

Cistanche til að bæta friðhelgi

3. Úrslit

3.1. 8 Áhrif CT-vatnsútdráttarins á formgerð ristils.*e dæmigerð efnasambönd (echinacoside og acetonide) og styrkur þeirra í CT-útdrættinum voru staðfest með HPLC (Mynd S1). Til að ákvarða áhrif vatnskennda útdráttarins á þörmum, könnuðum við lengd ristils og dýpt rjúpna í kjölfar meðferðar með vatnsútdrættinum. *e ristli villi í venjulegum og háskammta hópnum (A, B og D) voru lengri og fingurlíkir, en ristill villi í líkaninu og lágskammta hópnum (C og F) voru stuttir og oddarnir á ristill villi voru brotnir (Mynd 1). Í samræmi við það, jók háskammta CT vatnsþykkni marktækt lengd ristilvilli og minnkaði dýpt í músum með þarmasjúkdóma samanborið við mýsnar í líkanahópnum (P < 0.01).="" aftur="" á="" móti="" var="" dýptin="" ekki="" marktækt="" frábrugðin="" háskammtahópnum="" og="" venjulega="" hópnum="" (p=""> 0,05) (tafla S1). *þessar niðurstöður gáfu til kynna að stór skammtur af CT vatnskennda útdrættinum geti bætt formgerð inni í ristli músa með þarmasjúkdóma.3.2. 8e Áhrif CT-vatnsútdráttar á fjölbreytileika þarma örveru. Við gerðum 16s rRNA gena raðgreiningu til að kanna hugsanlega orsök formfræðilegra breytinga inni í ristli og rannsaka breytingar á örveru í þörmum eftir meðferð með CT vatnsþykkni. Að meðaltali 100.553 áhrifarík merki, á bilinu 77.734 til 125.144, voru fengin úr hrágögnum (tafla S2). *Stags voru flokkaðir í 4932 OTUs (tafla S3). Við greindum síðan fjölbreytileika örveru í þörmum byggt á Theseus. *e Shannon og Simpson vísitölur sýndu engan mun á A hópnum (eðlilegt með CT vatnskennda útdrættinum) og B hópnum (eðlilegt án CT vatnsútdráttsins) (Mynd 2(a)). *Er gefið til kynna að í músunum án cefixímmeðferðar gæti CT vatnsútdrátturinn ekki haft nein frekari jákvæð eða skaðleg áhrif á fjölbreytileika örveru í þörmum. Hins vegar sýndi -fjölbreytileikinn í líkanahópnum (C) minnkandi tilhneigingu miðað við venjulegu hópana. *e mýs sem voru meðhöndlaðar með stórum og meðalskammta CT vatnsútdrætti sýndu merki um endurheimt margbreytileika, en slíkt fyrirbæri sást ekki hjá músum sem fengu lágskammta CT vatnsútdrátt (Mynd 2(a)). Á sama tíma leiddi PCoA í ljós að eðlilegir hópar (A og B) og þarmasjúkdómahópar sem fengu háskammta (D) og miðskammta (E) CTvatnsútdrætti höfðu tilhneigingu til að hafa styttri fjarlægð milli sýna en þeir í líkanahópnum og í lágskammta -skammtur CTaqueous extract supplement group (F) (Mynd 2(b)). *niðurstöður bentu til þess að CT-vatnsútdrátturinn gæti hjálpað til við að bæta fjölbreytileika örveru í þörmum í músum með þarmasjúkdóma.

3.3. Breytingar á samsetningu örveru í þörmum sem eru meðhöndlaðir með CT vatnsþykkni. *Efni örverusamsetningar voru borin saman milli mismunandi hópa. Á fylkisstigi var hlutfallslegt magn Proteobacteria í líkanahópnum hærra en í hinum hópunum.

Mynd 1: *e áhrif vatnskenndra Cistanche tubulosa (CT) útdráttar á formgerð ristils: A, eðlilegur hópur með miðskammta vatnskenndu Cistanche tubulosa (CT) útdrætti bætt við; B, venjulegur hópur; C, módelhópur; D, fyrirmyndarhópurinn með háskammta CT vatnskenndu útdrætti bætt við;E, fyrirmyndarhópur með miðskammta CT vatnsútdrætti bætt við; F, fyrirmyndarhópur með lágskammta CT vatnsþykkni bætt við. (a) Hópur A. (b) Hópur B. (c) Hópur C. (d) Hópur D. (e) Hópur E. (f) Hópur F.

(Mynd 3(a)). *Eaukning á Proteobacteria benti til þess að örveru líkanmúsa væri breytt með cefixime og að CT vatnsseyði gæti gagnast þarmaörverunni þar sem aukin algengi Proteobacteria er miðstöð merki um truflaða þarmaflóru [43-45]. Að auki, á ættkvíslastigi, minnkaði hlutfallslegt magn Lactobacillus í líkanahópnum samanborið við eðlilega og háskammta hópa; það jókst hins vegar samanborið við hópinn sem fékk meðalskammta og lágskammta (Mynd 3(b)). *Þessar niðurstöður gáfu til kynna að háskammta CTaqueous útdrátturinn gæti stuðlað að vexti sumra baktería úr ættkvíslinni Lactobacillus. Mismunandi örvera á milli hópanna sem rannsakaðir voru var ákvarðað frekar samkvæmt LEfSe greiningu. *greining sýndi að eftir meðferð með cefixime jókst hlutfallslegt magn Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales og Chloroflflexi marktækt, en hlutfallslegt magn lactobacillus, Eubacterium_nodatum_hópur, cardiales og Christensenellaceae_R-7_hópnum fækkaði verulega samanborið við hópinn í venjulegum hópi (mynd 4(a)). Það er sláandi að þegar líkanhópurinn var bætt við háskammta CT vatnsútdrættinum jókst hlutfallslegt magn Muribaculaceae, Lactobacillus, Kin eosporiaceae, Eubacterium no datum group og Pedobacter marktækt samanborið við þá í líkanahópnum. Á sama tíma minnkaði hlutfallsleg magn Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostri dium_9 og Candidatus Stoquefifichus marktækt samanborið við þær í líkanahópnum (Mynd 4(b))

Mynd 2: Greining á fjölbreytileika örvera í þörmum á saur músa. (a) -Fjölbreytileiki bakteríusamfélaga mældur með Shannon vísitölunni (A) og Simpson vísitölunni (B); (b) aðalhnitagreining (PCoA) plott sem sýnir gögnin byggð á Bray-Curtis ólíkindum.A, venjulegur hópur með miðskammta vatnskenndu Cistanche tubulosa (CT) þykkni bætt við; B, venjulegur hópur; C, módelhópur; D, fyrirmyndarhópur með háskammta CT vatnsútdrætti bætt við; E, fyrirmyndarhópur með miðskammta CT vatnsútdrætti bætt við; F, fyrirmyndarhópur með lágskammta CT vatnsútdrætti bætt við.