Hluti 1: Að tengja taugalíffræði þroskaheilaskaða: taugaræktun sem stjórnandi truflunar á starfsemi og hugsanlegu meðferðarmarkmiði

ali.ma@wecistanche.com

Smelltu til aðCistancheherba gegn Alzheimerssjúkdómi

Vinsamlega smelltu hér til að hluta 2

Ane Goikolea-Vives og Helen B. Stolp *

Department of Comparative Biomedical Sciences, Royal Veterinary College, London NW1 0TU, Bretlandi; agoikoleavive18@rvc.ac.uk

* Bréfaskipti: hstolp@rvc.ac.uk

Ágrip: Taugaþroskaraskanir geta stafað af flókinni samsetningu erfðabreytileika og umhverfisþrýstings á lykilþroskaferli. Þrátt fyrir þessa flóknu orsök og jafn flókna fjölda heilkenna og sjúkdóma sem greind eru undir yfirskriftinni taugaþroskaröskun, þá eru hliðstæður í taugameinafræði þessara sjúkdóma sem benda til skarast á frumuskaða og truflun á starfsemi.Taugakerfiarborization er ferli til að lengja dendrite og axon sem er nauðsynlegt fyrir tengingu milli taugafrumna sem liggur að baki eðlilegri heilastarfsemi. Algengt er að greint sé frá truflun á arborization og taugamótamyndun í taugaþroskasjúkdómum. Hér tökum við saman sönnunargögnin fyrir truflun á taugafrumum arborist-athugun fyrir Tilvitnun: Goikolea-Vives, A.; Stolp, HB Að tengja taugalíffræði þroskaheilaskaða:TaugakerfiArborization sem eftirlitsaðili með vanstarfsemi og hugsanlegu meðferðarmarkmiði. Alþj. J. Mol. Sci. 2021, 22, 8220. https://doi.org/ 10.3390/ijms22158220

Akademískur ritstjóri:

Giuseppe Lazzarino

Móttekið: 2. júlí 2021

Samþykkt: 28. júlí 2021

Birt: 30. júlí 2021

Athugasemd útgefanda: MDPI er hlutlaus með tilliti til lögsagnarkröfur í útgefnum kortum og stofnanatengslum.

Höfundarréttur: © 2021 eftir höfunda. Leyfishafi MDPI, Basel, Sviss. Þessi grein er grein með opnum aðgangi sem dreift er samkvæmt skilmálum og

skilyrði Creative Commons

Attribution (CC BY) leyfi (https:// creativecommons.org/licenses/by/ 4.0/).

við þessar aðstæður, með áherslu fyrst og fremst á heilaberki og hippocampus. Að auki könnum við þróunarsértæka aðferðir sem notataugafrumumarborization er stjórnað. Að lokum ræðum við helstu eftirlitsaðila umtaugafrumumarborization sem gæti tengst taugaþroskasjúkdómum og möguleika á lyfjafræðilegum breytingum á arborization og myndun taugamótunartenginga sem gætu veitt lækningalegan ávinning í framtíðinni.

Lykilorð: dendritic arborization; dendritic hrygg; myndun taugamóta; taugaþroskaröskun; burðarmáls heilaskaða

1. Inngangur

Dendritic arbors, ásamt dendritic hryggjar í taugafrumum, eru grundvallaratriði í því að stjórna bæði upplýsingum sem taugafrumur berast og hvernig þessar upplýsingar eru unnar og brugðist við. Þar af leiðandi hafa breytingar á tönnum arborization, eða myndun tannhryggja, stórkostleg áhrif á heilastarfsemi. Þetta sést af umtalsverðum rannsóknum sem tengja breytingar á dendritum og dendritic hrygg við alvarleika vitsmunalegra og hegðunarlegra einkenna taugaþroska, taugageðrænna og taugahrörnunarsjúkdóma.

Dendritamyndun er tiltölulega seint og langvarandi þroskaatburður, eftir langvarandi útbreiðslu, sem fylgir í stórum dráttum staðalímyndamynstri fyrir allar taugafrumur. Það er knúið áfram af blöndu af innri erfðastýrðum ferlum, sérstaklega mikilvægum á fyrstu stigum taugafrumaframlengingar, sem síðan verða fyrir áhrifum af margvíslegum ytri vísbendingum, þar á meðal virkniháðri stjórnun [1-3]. Til að bera kennsl á hugsanlegar meðferðir til að leiðrétta truflaða arborization og tengingu í taugaþroskaröskunum, er nauðsynlegt að skilja afleiðingar erfða- og umhverfisatburða á dendritic arborization, tímaháð þessara truflana og getu til uppbyggingar eða virkni bóta. sem hluti af eðlilegum þroska. Þó framfarir séu að verða í skilningi okkar á mörgum þessara sviða skortir enn yfirsýn og samþættingu upplýsinga sem nauðsynlegar eru til að gera nauðsynlegar framfarir í uppgötvun lækninga. Til að auðvelda þessar framfarir munum við fara yfir tengsl taugaþroskaraskana og truflaðrar tannþroskun, með tilliti til hugsanlegra afleiðinga truflunar á starfsemi tauganeta. Aðgerðirnar sem liggja að baki breytingum á þéttleika taugamóta og taugamóta í taugaþroskaröskunum verða kannaðar, sérstaklega með áherslu á þá aðferðir sem sýna fyrirheit um meðferðaríhlutun.

2. Trufluð taugaþroska í taugaþroskasjúkdómum

Taugakerfiformgerð er stór ákvörðunaraðilitaugafrumumtengsl og eðlileg heilastarfsemi [4,5]. Dendritic greiningarmynstur, sem og dendritic og hryggþéttleiki, stærð og formgerð, ákvarðar virkni taugamótunarinntaksflutnings, samþættingar og vinnslu [5,6]. Margir taugaþroskasjúkdómar sýna frávik í tannskemmdum og hrygg, samantekt á mynd 1 [7-10]. Til dæmis greindu niðurstöður úr rannsóknum á heila á einhverfum sjúklingum frá minnkaðri greiningarflækju á flækingum á CA1 og CA4 svæði í hippocampal [11], fækkun á fjölda dendrita í dorsolateral prefrontal heilaberki [12], og aukinni þéttleika hryggs í barkarpýramída. taugafrumur [13]. Dendritic frávik eru kjarnaeinkenni heilkenni eins og Downs heilkenni, Rett heilkenni, brothætt X heilkenni og fenýlketónmigu; sjúklingar sýndu minnkaðan fjölda og lengd dendritic arbors sem og óeðlilega formgerð og fjölda dendritic hryggjar í heilaberki (skoðað í [14]). Kvillar eins og flogaveiki og áverka heilaskaða (TBI), þar sem örvandi eiturverkanir eru þátttakendur, hafa einnig verið tengdir afbrigðilegri uppbyggingu og dreifingu tannhryggs. Skýrslur eftir slátrun frá sjúklingum með flogaveiki sýndu minnkuð flækjustig í tannviði, færri greinar, auk minnkaðs hryggjarþéttleika og þrotabólgu í lag III pýramída taugafrumum [16]. Tengd æðahnúta og tap á tannhryggjum hefur sést í hippocampus þessara sjúklinga [17]. Heilaskaði með súrefnisskorti/blóðþurrð í burðarmáli getur leitt til langvarandi taugagalla eða dauða nýbura (skoðað í [18]). Dýrarannsóknir hafa sýnt að súrefnisþurrð-blóðþurrðartilvik leiða til taps á tannhryggjum, útlits tannæðabólga, minnkaðrar lengdar tannbeina og greiningar í taugafrumum í pýramída taugafrumum í rottum [19,20] og taugafrumum í heilaberki og undirbarkar [21-24] .

Mynd 1. Skýringarmynd sem dregur saman breytingar sem tengjast sjúkdómum á tróðri og hryggmyndun. Taugadæmin taugafruma þróar flókna greiningu og langa og fjölmarga dendrita. Það þróar einnig tiltölulega stöðuga og þroskaða hrygg. Einstaklingar með ASD sýna oft minnkað dendritic greiningarflækjustig og aukna nærveru óþroskaðra/þyrnandi hryggja og aukinn þéttleika hrygg. Í ljós hefur komið að taugafrumur frá brothættu X- og Rett-heilkennissjúklingum sýna styttri og fátækari dendrita og óeðlilega langa og þunna hrygg með auknum þéttleika. Hjá flogaveikisjúklingum hefur sést að taugafrumur mynda styttri og greinóttari holur sem oft sýna æðahnúta og brenglaða hrygg, auk þess sem þéttleiki hryggsins minnkar. Taugafrumur frá geðklofa einstaklingum sýna minnkaða hryggstærð og óeðlilega hryggháls, minni sóma og minnkaðan fjölda dendrita. Hjá einstaklingum með súrefnisskort/blóðþurrð eða TBI, mynduðu taugafrumur minna og styttri dendrita, með æðahnútum og þrengingum, og sýndu minni þéttleika hryggsins og tilvist óeðlilegra hryggja. Minnkuð dendritic lengd og greiningar sem og hrygglos hefur sést í taugafrumum frá sjúklingum með AD og PD. AD—Alzheimer-sjúkdómur, ASD—einhverfurófsröskun, PD—Parkinson-sjúkdómur, TBI—áverka heilaskaðar.

3. Taugaræktun og taugamótamyndun sem hluti af myndun cortical hringrásar

Elstu heilaberki hringrásar í mönnum myndast í prelátum eftir meðgönguviku 5 [25–28]. Taugafrumur innan prelátsins búa til frumstæðar og tímabundnar taugamótunartengingar við aðliggjandi frumur sem virka eins og bráðabirgða skotmörk þar til taugafrumur flytjast til að mynda stöðugri tengingar. Þessar preplate taugafrumur eru einnig fyrstu taugafrumurnar sem standa út fyrir heilaberki. Þegar barkarhúðin þróast mynda taugafrumur stutt- og langlínutengingar til að búa til staðbundin og alþjóðleg samtengd tauganet. Þróunarferlar í kjölfar fólksflutninga og aðgreiningar leiða í upphafi til of mikilstaugafrumumarborization og synaptic tengingu. Þetta krefst betrumbóta, fyrst með sjálfsprottinni virkni og síðar með ytri áreiti háð virkni, til að mynda og koma á þroskaðri taugahringrás [29]. Hvatvístaugafrumumvirkni er nauðsynleg fyrir fyrstu þróun tengsla og hún nær til heilaberkins í gegnum thalamocortical brautina, jafnvel áður en geislaflutningur taugafrumna í heila er lokið [30]. Sáðrannsóknir, sem gerðar voru á sjónkerfi katta með fæðingu, sýndu fram á að stífla sjálfkrafa kveikju á verkunarmöguleikum fyrir opnun auga skerti eðlilega axon endanlega greiningu á ganglion frumum í sjónhimnu [31] og taugafrumum í thalamocortical feril, sem leiddi til afbrigðilegrar myndunar augnráðs. súlur í aðal sjónberki [32]. Í þroskaskynjunarberki músa, áður en skynjunaráreiti er hægt að taka á móti, leiðir fjarvera sjálfkrafa virkni sem kemur frá thalamus til ofurspennandi hringrása í heilaberki og afbrigðilegri þróun starfrænna súlulaga [33].

Þegar heilinn þroskast og byrjar að taka á móti skynfærum er fjöldi, gerð og styrkur taugamóta breytilegur vegnataugafrumumstarfsemi. Þessi taugafrumavirkni gerir ekki aðeins kleift að bæta einstökum upplýsingum inn í taugafrumumynstur heldur stuðlar einnig að fágun hringrásar og er nauðsynleg í þróun þroskaðra rafrása. Eftir fæðingu er dendritic morphogenesis sérstaklega næm fyrir virkniháðum aðföngum og það er mikilvægt að ákvarðataugafrumumdendritic uppbyggingu og tegund tenginga til að koma á [34]. Að auki geta dendritic greinar endurbyggt til að bregðast við skemmdum af völdum meiðsla eða sjúkdóma. Getan til að endurmóta og laga sig að breytingum er kölluð mýkt og sýnt hefur verið fram á að hún sé til staðar allt fullorðið líf [35,36].

Á fyrstu 18 mánuðum lífsins eykst tíðni tannfrumumyndunar og taugamyndunar og þroskaferli eins og upplifunarháð endurgerð taugamóta og klippingu nálgast mikilvægt tímabil þar sem röng tímasetning og hraði hefur verið lagt til að leiða til þróunar nokkurra taugaþroska. truflanir [26,37,38]. Dendritic og synaptic pruning er knúin áfram af samspili taugafrumna, microglia og stjarnfruma [39]. Pruning á sér stað í tveimur áföngum: beint eftir fæðingu—snemma barnæsku—til að tryggja rétta myndun skynrása; og við umskipti frá barnæsku, unglingsárum og fullorðinsárum yfir í endurgerð hringrás sem taka þátt í æðri vitrænni virkni, þar með talið sjálfstjórn [39,40]. Óeðlileg klipping leiðir til afbrigðilegrar tannskemmda og taugamótunarstarfsemi.

Athyglisvert er að það virðist sem þroskun dendrits og tjáning hegðunareinkenna sumra taugaþroskaraskana séu í tímabundinni fylgni [41]. Til dæmis, upphaf einhverfurófsröskunar (ASD) passar við tannvöxt og ræktun sem á sér stað í æsku [42], og tjáningu á einkennum athyglisbrests með ofvirkni (ADHD) um miðja og seint barnæsku og geðklofa á seint unglingsárum með dendritic og synaptic pruning [40,41]. ASD meinafræði hefur verið tengd truflun á örvandi/hamlandi jafnvægi og óeðlilegri tengingu á hærri röð tengslasvæðum [43]. Þar sem ASD fylgir oft aukinni heilastærð á fyrstu 3 árum ævinnar, hefur verið haldið fram að það gæti verið vegna ofvaxtar tannslaga eða skorts á klippingu og viðhaldi á eðlilegum frumufjölda [42]. ADHD og Tourette heilkenni koma fram seint á barnsaldri og einkennast af ónógri tengingu í taugarásum sem tengjast sjálfstjórn og hamlandi getu. Einnig hefur verið sýnt fram á að sjúklingar með ADHD ná hámarksþykkt í heilaberki seinna en taugadæmdir hliðstæða þeirra [44]. Dæmigert upphaf geðklofa kemur fram á unglingsárum eða ungum fullorðinsárum. Hjá geðklofasjúklingum, á kynþroskaskeiði, verður barkarþynning hraðari og nær til nálægra svæða samanborið við aldurssamsvörun viðmiðunarhópa [45]. Ástæðan fyrir óhóflegri þynningu hefur verið talin vera annaðhvort vegna minnkaðrar tannviðargreins og minnkaðs frumufjölda, eða oftar vegna of mikillar taugamótaklippingar eða óreglulegrar taugamótunarbreytingar [46,47]. Af þessum upplýsingum getum við ályktað að bilun í að viðhalda réttri tannþroska leiði til óeðlilegrartaugafrumumvirkni og hringrásarstofnun, sem að lokum leiðir til þróunar óhefðbundinna hegðunareinkenna sem tengjast taugaþroskaröskunum. Í þessu samhengi er mikilvægt að huga að sérstakri tímasetningu tannþroskaatburða og merkjaaðferðirnar sem liggja til grundvallar þeim.

4. Þroskatímalína og reglugerð um taugaþroska og taugamótamyndun

Formgerð þroskaðra taugafrumna einkennist af fjölmörgum mjög greinóttum ferlum sem ná frá frumulíkamanum. Þessir taugafrumur teygja sig upphaflega á svipaðan hátt, fyrir sérhæfingu, inn í öx og dendrita, þar sem hryggmyndun er hluti af seint dendritic sérhæfingu í taugafrumum [2,3,8]. Hægt er að draga saman stiga dendritic arborization sem (i) vöxt (einkennist af hægum upphafsfasa og síðari hröðu lengingu), fylgt eftir af (ii) kraftmikilli framlengingu og afturköllun, sem leiðir til lokatímabils (iii) stöðugleika dendrits (Mynd 2) ) [2]. Auk þessarataugafrumum-háð ferli, það er langvarandi tímabil klippingar sem er sérstaklega háð umhverfisvísum (skoðað í [1]). Þess vegna er staðalímynd þáttur í dendritic arborization, þó að það sé breytileiki í tímasetningu atburða milli einstakra frumutegunda, heilasvæða og tegunda.

Mynd 2. Skýringarmynd sem dregur saman samanburðartímann þar sem lykilatburðir í dendritic arborization eiga sér stað. Dendritic greiningu hefst með frumgrein myndun, strax á eftirtaugafrumumflutningur í lokastöðu sína. Kvíslunarferli eiga sér síðan stað til að mynda auka- og háskólagreinar, sem og lenging greinarinnar. Á þessu tímabili er upphafleg myndun dendritic hryggjar og síðan taugamóta. Endurskipulagning og stöðugleiki á dendritic greinum, hryggjum og taugamótum á sér stað tiltölulega seint í þroskaferlinu. Samanburðartími þessara atburða er sýndur fyrir mús, kind, prímata og mannsheila. E—fósturvísisdagur, GW—meðgönguvika, P—dagur eftir fæðingu.

4.1. Framvinda og tímasetning þróunar dendrita

Gögn sem safnað var frá fjölmörgum tegundum sýna almennt mynstur þensluþenslu á fyrstu árum lífsins, þar sem lenging tannviðagreina og vaxandi greinarflækjustig tengist myndun taugamóta. Þetta ferli kemst á stöðugleika áður en tímabil endurskipulagningar og taugamótunar klippt á snemma á unglingsárum þar sem fullorðinsmynstur trjáræktunar og taugamótunartengingar er komið á (sjá mynd2). Dæmigert snemmgreinamynstur, sýnd með Golgi-litun, sýna einn apical aðaldendrite ásamt 3-9 basal dendrites [48]. Þetta nær eftir að flutningi er lokið, þar sem leiðandi flutningsbrúnin er talin fara frá aðal apical neurite á þessum tímapunkti. Skiptingin frá flutningi yfir í dendritic framlengingu virðist auðveldast, að minnsta kosti í músinni, með því að fjarlægja Sox11 hömlun í frumberki eftir fæðingu [49]. Axónið sérhæfir sig almennt frá grunntaugafrumu, en restin stuðlar að dendritic trénu. Í mannsheilanum hefur verið greint frá fyrstu dendritic greiningu á milli 16-26 vikna meðgöngu, sem eykst í allt að 36 vikur.50,51], og rótgróin, þó frumleg, dendritic uppbygging er til staðar á tíma, með taugafrumum í heilaberki 30–55 prósent af hámarkslengd þeirra [52]. Álíka staðfestri arborization hefur verið lýst á tíma fyrir prímata sem ekki eru menn [53]. Í taugafrumum í heilaberki virðast basal dendrites vera flækjustig fyrr en apical dendrites, án þess að nýjar greinar séu auðkenndar í basal dendrites eftir tímabil [52]. Í músarheilanum eiga sér stað þessi skref að mestu í fyrstu viku eftir fæðingu, með greiningu sem jafngildir í stórum dráttum mannlegu hugtaki, í kringum dag eftir fæðingu (P)7-10 (sjá samanburðargögn í [49,54–56] sem dæmi). Hjá sauðkindinni, öðru algengu dýri til að líkja eftir þroskaheilaskaða, byrjar dendritic arborization í heilaberki um það bil {{0}}.7–0.85 á meðgöngu (sjá gögn í [21,23,24]).

Greining á lag V-taugafrumum í framendaberki mannsins bendir til þess að það sé hraður áfangi tannþensluþenslu og greiningar sem heldur áfram til 5 ára aldurs [57]. Þessu fylgir síðan langt tímabil af staðbundinni kraftmikilli endurskipulagningu á dendritic greinum. Meirihluti gagna varðandi þetta tímabil kraftmikillar endurskipulagningar kemur frá rannsóknum á nagdýrum eða frumurækt þar sem sameindakerfin sem stjórna þessum stigum tanndýramyndunar (rædd hér að neðan) kanna. Umtalsvert starf í sebrafiskum er einnig til, sem nýtir getu til erfðafræðilega aukins tímaskemmdarmyndatöku til að taka upp ákveðna þroskaatburði. Þó að þessi umfjöllun beinist fyrst og fremst að niðurstöðum úr spendýraheilanum, eru sebrafiskagögnin mikilvæg viðbót við sviðið og þau eru skoðuð í [58]. Gögn frá músarheila sýna greinilega myndun frumgreina með P10, með áframhaldandi útfærslu á framhaldsgreinum og háskólagreinum þar til um það bil P40 [50]. Breytileiki í tannskemmdum á milli heilaberkissvæða er greinanleg í heila nýbura, þar sem frumhreyfiberki virðist þróast fyrst (byggt á auðkenningu lengri dendrita og meiri fjölda tannhryggja) [59]. Synaptic þéttleiki í sjón- og heyrnarsvæðum virðist einnig þróast tiltölulega snemma [60]. Í báðum mælingum virðist framhliðarberki vera eftir í þroska, með minna flóknum dendritic greinum [52] og minni taugamótafjölda snemma á lífsleiðinni [60]. Gögn frá simpansheila sýna svipað þroskamynstur: taugafrumur í framheilaberki halda áfram að vera minna vandaðar fyrr en eftir klippingu unglinga, þó að þær sýni að lokum flóknara greinamynstur en taugafrumur á öðrum svæðum í heilaberki [53].

Vísbendingar um kynjamun í ræktun dendrita eru farin að vaxa, úr blöndu af in vivo og in vitro rannsóknum. Þessar rannsóknir sýna greinilega aukið flækjustig innan taugafrumna hippocampus taugafrumna hjá karlkyns músum við P28, samanborið við kvenkyns hliðstæða þeirra [61]. Þessi niðurstaða var endurtekin í prófkjöritauga-glialræktun úr P0 hippocampal vefjum í sama músastofni og virtist vera að minnsta kosti að hluta til estrógenháð [61]. Þessi munur á myndun dendritic arbors milli karla og kvenna getur hjálpað til við að útskýra vel þekktan kynjamun á kynningu og greiningu taugaþroskaraskana. Þó að rannsókn Keils o.fl. (2017) tengir þennan kynjamun við virkjun estrógenviðtaka [61], rannsókn eftir Beyer og Karolczah (2000) á dópamínvirkum miðheila í músum.taugafrumummenning bendir til þess að estrógen geti einnig örvað vöxt taugafrumna óháð

estrógenviðtaka, í stað þess að vera háður cAMP- og PKA-afleiddri fosfórun á CREB [62]. Þar að auki eru nokkrar vísbendingar úr músarannsóknum sem benda til þess að kynjamunur á þróun smávökva (meðfæddur og eftir bólgu) geti stuðlað að þeim mun sem sést átaugafrumumarborization og taugamótanúmer [63].

4.2. Dendritic hryggjar og Synaptic þróun

Dendritic hryggir eru smásjá útskot himnu sem samanstanda af móttækilegu postsynaptic hólf taugamóta í heila [15]. Hryggir innihalda taugaboðefni, taugapeptíð, viðtaka, boðsameindir, jónagöng og önnur prótein sem taka þátt í taugamótasendingu. Nýmyndaðir dendritar skortir taugamót og hrygg. Við spinogenesis koma þunn fingralík og kraftmikil útskot sem kallast filopodia úr dendritic arborinu. Þessar fílopódíur geta myndað óþroskaða taugamót við snertingu við axon; taugamót geta átt sér stað eftir allri endilöngu fílopódíum og við grunn þess og geta tekið við mörgum taugamótum [64]. Eftir því sem spinogenesis heldur áfram minnkar lengd og tíðni flóðþurrðar og dendritar byrja að framleiða þunnar, stubba og þroskaða sveppalaga hrygg frá inndrættum hryggjarliðum [65].

Myndun tannhryggjar á taugafrumum fylgir greiningu á taugafrumum eftir náttúrulega seinkun, þar sem óþroskaðir hryggjar eru greinanlegir á taugafrumum í hippocampus mannsins eftir 36 vikna meðgöngu, tími þegar margar dendritic greinar eru til staðar [50]. Líklegt er að hryggmyndun eigi sér stað enn fyrr í heilaberki þar sem hægt er að greina taugamót frá eins fljótt og 27 vikna aldri eftir getnað, allt frá 3-10 taugamótum/100 um eftir barkarsvæði [60]. Synaptic þéttleiki eykst í hámarki (~60 taugamót/100 um) við um 4 ára aldur og minnkar síðan á unglingsárum í fullorðinsþéttleika sem er um það bil 35 taugamót/100 um [60]. Í músaberki eru hryggjar greinilega til staðar í óþroskuðum ástandi fyrir P10 og sýnilega þroskaðir af P20 [54]. Synapses eru greinanleg frá P5, hækka hratt í stóran stöðugan fjölda á milli P10–17 [66]. Mynstur taugamótamyndunar eru breytileg um heilann, byrja fyrr í innri heilaberkilögum (V, VI) samanborið við ytri (II, III), í kjölfar þróunar heilaberkis að innan.60].