Hagræðing á aflitunarferli og andoxunarvirkni Cistanche Deserticola Polysaccharide Extract með svörun yfirborðsaðferð

Ágrip:

 

Markmið:Til að hámarka aflitunarferli Cistanche Deserticola fjölsykrur og kanna andoxunarvirkni þeirra.

Aðferðir með því að nota virkt kolefni sem aflitandi lyf, voru áhrif 4 þátta, þar með talin virk kolefnisskammtur, aflitunarhitastig, aflitunartíma og sýrustig á aflitunartíðni og endurheimt fjölsykrunar. Byggt á tilraunir með stakum þáttum var aflitunarferli Cistanche Deserticola fjölsykrumútdráttar fínstillt með því að nota svörunar yfirborðsaðferð. Með því að nota in vitro andoxunarefnismatsaðferð, þá er hin sindurefna hreinsunargetu 1, 1- dífenýl -2- picrylhydrazine (DPPH), heildar minnkunargeta, hýdroxýl róttækar hreinsunarhæfileik bis (3- etýlbenzothiazol - 6- sulfonic sýru) diamonium salt (ABTS) katjón var ákvörðuð. Niðurstöður Besta aflitunarferli aðstæður fyrir útdrátt fjölsykrur úr Cistanche Deserticola voru eftirfarandi: virkur kolefnisskammtur 20%, aflitun hitastig 37 gráðu, aflitun tími 49 mín., PH 5,03. Við þessar ákjósanlegu aðstæður var afkólóizrering og endurheimtunarhlutfall fjölsykra 62,66% og 96,16%, í sömu röð. Eftir afneitun var getu til að hreinsa DPPH róttæk og hýdroxýl sindurefni verulega aukin, meðan getu til að hreinsa ABT -anjón róttækling minnkaði verulega. Ályktun er auðvelt að reka aflitunarferlið, með góðum aflitunaráhrifum og endurheimtunarhlutfalli fjölsykru. Það hefur mikilvægt umsóknargildi og veitir grundvöll fyrir síðari rannsóknir og þróun Cistanche Deserticola fjölsykru.

Lykilorð: Cistanche DeserticolaFjölsykrur; aflitun; aðferðafræði svörunar; Andoxunarvirkni

CistancheDeserticola áhrif

 

1.2.3 Mæling á endurheimt fjölsykru

Undirbúningur staðalferilsins:
Fenól-brennisteinssýruaðferðin var notuð. Um það bil 0. 0 5 0 0 g af glúkósa staðli (þurrkað í stöðugri þyngd við 105 gráðu) var vegið nákvæmlega og þynnt í 50 ml rúmmál til að undirbúa stofnlausnina. Síðan var 1,0 ml af stofnlausninni mæld nákvæmlega og þynnt í 10 ml í rúmmálskolbu til að fá 0,1 mg/ml staðallausn. Hefðbundnar lausnir af 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 og 100 μl glúkósa voru mældar nákvæmlega í 1,5 ml skilvindu rör. Eimuðu vatni var bætt við hvert rör til að mynda heildarrúmmál 100 μl. Önnur 1,5 ml skilvindu rör sem innihélt 100 μl eimað vatn var notað sem auða stjórnlausn. Við hvert rör var 100 μl af 5% fenóllausn bætt við, blandað vandlega og síðan var 500 μl af þéttri brennisteinssýru fljótt bætt við. Rörin voru hvirfiluð í 3 mínútur og látin standa í 35 mínútur. Síðan var 200 μl af hvarflausninni flutt í 96- brunnplötu og frásog var mæld við 490 nm með sjálfvirkum örplötulesara. Hefðbundin ferill var samsærður með frásog (Y) sem lóðrétta ás og glúkósaþéttni (x, ug/ml) sem lárétta ásinn. Staðlaða feriljöfnan sem fengin var var:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Mæling á fjölsykruinnihaldi:
Skammtur af 100 μl af þynntCistanche DeserticolaPolysaccharide þykkni var nákvæmlega mælt í 1,5 ml skilvindu rör. Uppsogsgildið var ákvarðað með aðferðinni sem lýst er hér að ofan og styrkur fjölsykru var reiknaður með því að nota staðalferilinn.

Mæling á endurheimt fjölsykru:
Massi fjölsykra íCistanche DeserticolaÚtdráttur fyrir og eftir aflitun var mældur með aðferðinni hér að ofan. Endurheimtuhlutfall fjölsykru var reiknað með jöfnu (2):

Endurheimta fjölsykla (%)
Sig
Hvar:

MBEFOREM _ \ texti {áður} Mbefore og Mafterm _ \ texti {After} Mafter eru fjöldinn íCistanche DeserticolaFjölsykrur fyrir og eftir aflitun, hver um sig (g).

 

 

1.2.4 Tilraunahönnun eins þátta

Áhrif fjögurra þátta virkjaðs kolefnisskammts, aflitun hitastigs, aflitunartíma og PH-ON aflitunarhraða og endurheimt fjölsykraCistanche DeserticolaPolysaccharide þykkni var rannsakað.

Áhrif virks kolefnisskammts:
Fastur aflitunartími eftir 30 mínútur, aflitun hitastigs við 50 gráðu og pH við 5,03 (mælt sýnishorn). Áhrif virks kolefnisskammts á aflitunartíðni og endurheimtunarhraða fjölsykru voru rannsökuð.

Áhrif aflitunarhitastigs:
Fastur virkjaður kolefnisskammtur við 20% (m: m), aflitunartíma eftir 30 mínútur og pH við 5,03. Áhrif aflitunarhitastigs á aflitunarhraða og endurheimtarhraða fjölsykru voru rannsökuð.

Áhrif aflitunartíma:
Fastur virkt kolefnisskammtur við 20%, aflitunarhitastig við 50 gráðu og pH við 5,03. Áhrif aflitunartíma á aflitunarhlutfall og endurheimtarhlutfall fjölsykru voru rannsökuð.

Áhrif pH:
Fastur virkjaður kolefnisskammtur við 20% (m: m), aflitun hitastigs við 50 gráðu og aflitunartíma eftir 30 mínútur. Áhrif sýrustigs á aflitunartíðni og endurheimtarhlutfall fjölsykru voru rannsökuð.

 

1.2.5 Svörun yfirborðs hagræðingar tilraunahönnun

Byggt á ákjósanlegu ástandi sviðunum sem greind voru í tilraunum með einum þáttum var notuð kassa-Behnken tilraunaaðferð til að framkvæma fjögurra þátta, þriggja stigs hönnun fyrir aflitun skilyrði fyrir aðstæðurCistanche DeserticolaPolysaccharide þykkni. Afkitunarhlutfall og endurheimtunarhlutfall fjölsykra voru notuð sem matsvísitölur. Hönnunarbreyturnar eru sýndar í töflu 1.

1.2.6 Ákvörðun andoxunarvirkniCistanche DeserticolaFjölsykrur

(1) ÁkvörðunCistanche DeserticolaDPPH róttækar hreinsunargetu fjölsykra

Byggt á aðferð Kan Jintao o.fl. [21] Með smávægilegum breytingum var 0. (1, {{1 0}} dífenýl -2- picrylhydrazine) og 1,1 ml af eimuðu vatni. Blandan var látin bregðast við í myrkrinu við 37 gráðu í 30 mínútur. Uppsog hvarflausnarinnar var mæld við 517 nm og DPPH róttækar hreinsunarhraði 1,0 mg/ml fjölsykrum fyrir og eftir afköstun var reiknuð með jöfnu (3):

DPPH Radical hreinsunarhraði (%)

{{0}} [1− (a1 - a2) a 0] × 100%= \ vinstri [1 - \ frac {(a _1 -} _2)} {A _0} \ rétt] 100 \%= [1 - A0 (A1 −A2)] × 100%

Hvar:

A1A _1 A1 er frásog sýnishornsins,

A2A _2 A2 er frásogið þegar vatnsfrítt etanól kemur í stað DPPH lausnarinnar,

A {{0}} a _0 a0 er frásogið þegar eimað vatn kemur í stað sýnisins.

 

(2) Ákvörðun á heildarafköstumCistanche DeserticolaFjölsykrur

Með vísan til aðferðarinnar eftir Lu Xue o.fl. [22], 1. 0 mg/ml fjölsykrur fyrir og eftir aflitun voru framleidd. 5 μl sýni og 180 μl af FRAP (járn jón sem minnkaði andoxunarefni) Vinnulausn var bætt við 96- vel plötu, blandað vandlega og leyft að bregðast við með 37 gráðu í 5 mínútur. Uppsogið var mælt við 593 nm og heildar minnkandi kraftur fjölsykranna var gefinn upp með tilliti til styrks FESO4 staðallausnar.

(3) Ákvörðun á hýdroxýl róttækum hreinsunargetuCistanche DeserticolaFjölsykrur

Eftir aðferðinni sem lýst er í fræðiritunum [23] og leiðbeiningum um hýdroxýl róttæka hreinsunarpróf, 1. 0 mg/ml fjölsykrur fyrir og eftir aflitun. Eimað vatn var notað til að skipta um vetnisperoxíð fyrir frásog samanburðarhópsins (acontrola _ \ text {control} acontrol), og eimað vatn var notað til að skipta um sýnishorn fyrir auða hópinn absorbance (ablanka _ \ texta {{ablank). Gleymisgildi voru mæld við 550 nm og hýdroxýl róttæku hreinsunarhraðinn var reiknaður með jöfnu (4):

Hýdroxýl róttæk hrærsluhraði (%)

= [(acontrol - Apample) (acontrol - Ablank)] × 100%= \ vinstri [\ frac {(a _ \ texti {control} - a {{{_ \ texti {control {control}} {(a _} {control {}}} {(a {_} {control {}}}} {(A {{_. A _ \ texti {auður})} \ hægri] \ sinnum 100 \%= [(acontrol −ablebe) (acontrol −Asple)] × 100%

Hvar:

Asamplea _ \ texti {sýnishorn} asample er frásog sýnishópsins,

Acontrola _ \ texti {control} acontrol er frásog stjórnunarhópsins,

Ablanka _ \ texti {auður} ablank er frásog auða hópsins.

 

(4) Ákvörðun á ABTS katjón róttækri hreinsunargetuCistanche DeserticolaFjölsykrur

Samkvæmt aðferðinni sem lýst er í fræðiritunum [24] og leiðbeiningum um róttækan hreinsunarbúnað fyrir ABTS, 1. {2}} mg/ml fjölsykrur fyrir og eftir aflitun. 10 μl sýni var blandað saman við 20 μl af hvarfefni sem vinnur lausn fjögur og 170 μl af ABT -vinnulausn, blandað vandlega og leyft að bregðast við í myrkrinu við stofuhita í 6 mínútur. Afjónað vatn var notað sem autt stjórn. Uppsogið var mælt við 405 nm og ABTS katjón róttæka hreinsunarhraði var reiknaður með jöfnu (5):

Abts katjón róttæka hreinsunarhraði (%)

= [(bblank - basple) bBlank] × 100%= \ vinstri [\ frac {(b _ \ text {auður} - b _ \ \ text {autt}} \ \ rétt] 100 \%= [bblank (bBlank −bSample)] × 100%

Hvar:

Bblankb _ \ texti {auður} bblank er frásog viðbragðsins milli eimaðs vatns og ABTS lausnar,

Bsampleb _ \ texti {sýnishorn} bsample er frásog viðbragðs milli sýnisins og ABTS lausnarinnar.

 

1.3 Gagnavinnsla

SigmaPlot 12.5 hugbúnaður var notaður til að samsæri og hönnunarsérfræðingur 8. 0. 6 Hugbúnaður var notaður til gagnagreiningar.