Nýjar bensókínónafleiður gegn öldrun frá Onosma Bracteatum Wall Part 2

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

2.3. Virkni gegn öldrun í K6001 gerstofni

Virkni gegn öldrun einangraðra bensókínóna (1-5) var metin með því að nota K6001 ger eftirlíkingar líftíma lífgreiningarkerfis. Resveratrol (Res), vel þekkt efni gegn öldrun, var notað sem jákvæð viðmiðun til að athuga áreiðanleika lífgreiningarkerfisins. Áhrifaríkasti styrkurinn af Res var 10 μM í gerafritunarlífgreiningarkerfinu eins og greint var frá í fyrri útgáfum okkar 【4-6】.cistanche herbaEins og sýnt er á mynd 4, allomicrophyllone (1) við 3 μM, ehretiquinone (2) og ehretiquinone C (4) við 1 og 3 μM, og ehretiquinone D (5) við 1 μM umtalsverða aukningu á endurtekinni líftíma. K6001 gerstofn, en ehretiquinone B (3) var óvirkt. Þessi niðurstaða gaf til kynna öldrunarmöguleika bensókínóna (1, 2, 4 og 5) einangraðir úr O. bracteatum.

3. Umræður

Í samhengi við alþjóðlega öldrun eru rannsóknir og þróun lyfja gegn öldrun til að bæta lífsgæði aldraðs fólks og draga úr algengi aldurstengdra sjúkdóma mjög mikilvægt.cistanche typpið vöxturÞessi rannsókn greinir frá einangrun, skýringu á uppbyggingu, líffræðilegri virkni og stuttri SAR rannsókn á bensókínónafleiðum gegn öldrun frá O.bracteatum1.

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

Í þessari rannsókn voru tvær þekktar(1 og 2) og þrjár nýjar (3-5) bensókínónafleiður einangraðar úr etýlasetatlagssýnum af O.bracteatum undir leiðsögn K6001 gerafritunar líftíma lífgreiningar. Uppbygging nýrra bensókínóna (3-5) var skýrð með víðtækri litrófsgreiningu. Þekkt benzókínón, allómíkrófyllón(1) og ehretíkínón(2) voru hreinsuð og auðkennd með því að bera saman litrófsgögn við þau sem greint er frá í fræðiritum [17-19]. Áður var greint frá því að bæði efnasamböndin hefðu ofnæmis- og bólgueyðandi virkni [17,19]. Eftir því sem við best vitum var engin rannsókn tengd öldrun tilkynnt um þessi efnasambönd. Þessi einangruðu efnasambönd deildu sömu bensókínónbeinagrindinni og munurinn á þeim var í breytingum á C-11 og C-11 stöðunum.

Cistanche getur gegn öldrun

Mat á líffræðilegum virkni var framkvæmt til að rannsaka sambandið milli uppbyggingu og virkni.cistanche salsa fríðindiNiðurstöður á mynd 4 bentu til þess að einangrað allómíkrófyllón (1), ehretíkínón (2) og ehretíkínón CD (4-5) lengdu marktækt endurmyndunarlíf gers. Hins vegar, ehretiquinone B (3) sem hafði sömu bensókínón beinagrind en mismunandi breytingar voru óvirkar. Samkvæmt SAR rannsókninni innan þessara einangruðu efnasambanda, komumst við að þeirri niðurstöðu að nærvera metýl- og exómetýlenhópa við C-9' sé mikilvæg fyrir öldrunarvirkni eins og í ehretiquinone (2) og ehretiquinone C (4). Breytingin eins og hýdroxýlering C-11/metýlhópsins eins og í ehretiquinone B (3) leiddi til taps á virkni. Ennfremur sýndi samanburður á ehretiquinone (2) og ehretiquinone C(4) með betri virkni en virkni allomicrophyllone (1) og ehretiquinone D (5) að tilvist exómetýlenhópsins við C-9' gegndi mikilvægu hlutverki. hlutverki gegn öldrun þessara sameinda. Ehretiquinone C(4) sýndi betri öldrunarvirkni en resveratrol vegna þess að meðallíftímagildi 4 við 1 uMis var sambærilegt við resveratrol við 10 uM sem sýndi sama gildi.cistanche tubulosa skammtur redditÞess vegna getur ehretiquinone C(4) talist efnilegt blýefnasamband og ætti að rannsaka verkunarhátt þess gegn öldrun frekar ítarlega. Að auki veita þessar niðurstöður einnig mikilvægar upplýsingar um uppbyggingu til að hanna og búa til ný lyf gegn öldrun. Þessi rannsókn mun leggja sitt af mörkum til að koma í veg fyrir og meðhöndla aldurstengda sjúkdóma. Niðurstöðurnar bentu einnig til þess að hægt væri að nota O.bracteatum auðgað með öldrunarefni sem lyf eða sem fæðubótarefni.

4. Efni og aðferðir

4.1.Almennt

JASCO P{{0}} stafrænn skautamælir var notaður fyrir sjónræna snúningsmælingar. Notuð var undirbúnings vökvaskiljun (HPLC) með kerfi með ELITE P-230 dælum og UV skynjara. Háupplausnarmassaróf (HR-ESI-TOF-MS) voru fengin með Agilent Technologies 6224A nákvæmu massa TOF LC/MS kerfi. NMR litróf sáust með Bruker AVII-500 litrófsmæli og NMR efnabreytingar íδ（ppm） var vísað til leysistoppa bc 77.0 og 6H7.26 fyrir CDCl. Súluskiljun var framkvæmd með því að nota kísilgel (200-300 möskva, Yantai Chemical Industry Research Institute, Yantai, Kína) eða öfugfasa C18 (Octadecylsilyl, ODS) kísilgel (Cosmosil 75C18-OPN, Nacalai Tesque, Kyoto, Japan).

4.2. Plöntuefni

Plöntuefnið var keypt frá Mansehra, Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan, og auðkennt sem Onosma bracteatum Wall af Dr. Zafar Ulah Zafar, dósent, Institute of Pure and Applied Biology, Bahauddin Zakariya University, Multan, Pakistan. Skírteinissýnishornið (20170220) af plöntunni var afhent hjá Institute of Materia Medica, Zhejiang háskólanum.

4.3. Útdráttur1 og einangrun1

Þurrkað plöntuefni (1,5 kg) var malað í duft og dregið út með metanóli (CH3OH) í 3 daga ásamt stöðugum hristingi við stofuhita. Hráa útdrættinum sem fékkst (120 g) var skipt á milli etýlasetats (EtOAc) og vatns (H,O). Sýnið af virka etýlasetatlaginu (30 g) var litskiljað á opinni kísilgelsúlu og skolað með n-hexani/CH,Cl(100:0,80:20, 50:50,0:100) og CH,Cl/CH3OH (98:2,95: 5,90:10 og 0:100). Sex brot fengust. Hluti 4 (8g) sem var skolað með CH,Cl,/CH3OH (95:5, 90:10) var unnið frekar með ODSopen súlu. CH3OH/H,O(40:60,50:50,55:45,60:40,70:30,90:10 og 100:0) var notað sem leysir. Af sjö þáttunum (Fr.{{46} }Fr.7) sem fengust, Fr.2-Fr.4, voru frekar aðskilin sem hér segir:

Fr.4 (500 mg) var aðskilið með opinni kísilgelsúlu og skolað með CH2Cl2/CH3OH (100:0, 99:1,98:2,97:3,95:5 ,90:10 og0:100). Níu sýni (Fr.4-1-Fr.4-9) fengust. Sýnishorn Fr.4-3 var hreinsað frekar með HPLC【C30- UG-5（φ10× 250 mm, Nomura Chemical）, hreyfanlegur fasi∶ asetónítríl (CH3CN)/H2O(40:60), flæðihraði:3 ml/mín og skynjari:210nm] og gaf efnasamband (1) (65 mg, tR =21,2 mín.).

Fr.3(113 mg) var aðskilið með því að nota ODS opna súlu og skolað með CH;OH/H2O(40:60, 45:55,50:50,55:45,60:40,80: 20 og 100:0). Tíu brot (Fr.3-1-Fr.3-10) fengust og Fr.3-7 var hreinsað frekar með HPLC【C30-UG{ {21}}（φ10×250 mm, Nomura Chemical）, hreyfanlegur fasi∶metanól (CH3OH)/HO(68:32), flæðihraði: 3 ml/mín og skynjari:210nm] og gaf efnasamband (2) (20) mg, IR =20,3 mín).

Fr.2(450 mg) var sett í opna kísilhlaupssúlu og skolað með CH2Cl2:CH3OH (100:0, 99:1,98: 2,97:3,95:5,90:1{{105}},0:100). Níu brot (Fr.2-1-Fr.{{20}}) fengust, og Fr.2-4(20 mg) var látin fara í ODS opna súluskiljun með CH3OH/H2O(30:70, 32:68,35:65,40:60 og 100∶O）, og fimmta brotið（ 6,5 mg） var hreinsað með HPLC 【C30-UG-5（φ10×250 mm, Nomura Chemical), hreyfanlegur fasi: asetónítríl(CH3CN)/H,O(35:65), flæðihraði: 3 ml/mín og skynjari:210 nm] til að gefa efnasamband (3) (3,5 mg, t=31.0). Fr.2-5(70 mg) var aðskilið með ODS opinni súlu með því að nota CH3OH/H2O(25:75,27:73,30:70, 32:68,34:66,36:64,40:60 og 100:0) og sjöunda hluti (11 mg) var hreinsaður með HPLC 【C30-UG-5（φ10×250 mm, Nomura Chemical）, hreyfanlegur fasa∶asetónítríl (CH,CN)/HO (32:68), flæðihraði:3 ml/mín og skynjari: 210 nm] til að gefa efnasamband (4)(2,1 mg, tg=43.3).Fr.2-8(75 mg ) var aðskilið með ODS opinni súlu með því að nota CH3OH/H2O(20:80, 22:78.24:76.25:75.26:74,30:Z0.35:65.40:60 og 100:0) og sjöundi hluti (10 mg) var hreinsaður með HPLC 【C30-UG-5 （φ10×250 mm, Nomura Chemical）, farsímafasa∶ asetónítríl（CH3CN）/H2O (30:70), flæðihraði:3 ml/mín. og skynjari : 210 nml til að virkja efnasamband (5)(4,3 mg, tn=22.3). Allomicrophyllone (1). Gult duft; []6 plús 0,02 (c 0,57, CHCl3); Háupplausn ESI-TOF-MS m/z 389,1359, reiknað fyrir C2H22O5Na (M plús Na) plús 389,1359; }}.83 （1H,dI=10.5 Hz,H-5^),6.61(1H,d,J=8.6 Hz,H-6), 6,56(1H,d, J=2.8Hz,H-3),6.51(1H, dd, J=2.8, 8.6 Hz,H-5),6.51 (1H,d, J=10,5 Hz, H-6'),5,76(1H, d,J=15,9 Hz,H-8'),5,67 (1H, d, J=15.9 Hz, H-7),5.65(1H,d,J=7.1Hz,H-8),3.77(1H, d,J=7.1Hz,H-7),2.73(1H,d, J=19.2Hz,Hb-10),2.50 (1H,d,J{ {206}},2 Hz,Ha-10),1,69 (3H,s, H-11),1,22(6H,s, H-10'& H-11 ');13CNMR(125 MHz,CDCl3):6c=195.8(C-1'),193.1(C-4'),150.0(C-4), 145,0(C-1),143,3(C-8'),139,4(C-5'),138,6(C-6'),131,8(C{{245} }), 127,7(C-2), 122,5(C-8),122,0(C-7'),117,6(C-6),114,9(C{{260 }}),114,4(C-3),80,7(C-3'),71,0(C-9),54,9 (C-2'),39,1(C{ {275}}), 36.2(C-10),29.8(C-10'),29.8(C-11'),22.6(C-11). Uppbyggingin aftur var auðkennt með samanburði á MS, 'H NMR og 13C NMR litrófum sem og sértækum snúningi við fræðirit [17,18]. Ehretíkínón (2). Rautt duft; []16 plús 1,01 (c 0,12, CH3OH); háupplausn ESI-TOF-MS m/z 371.1254, reiknað fyrir C2.H20OANa （M plús Na） plús 371.1252; lH NMR (500MHz, CDCl3) 312}}.5Hz,H-5'),6.62(1H,d, J=8.6Hz,H-6),6.58(1H,d,J=2 ,2 Hz,H-3),6,53(1H,m,H-5), 6,52(1H,d, J=10,5 Hz,H-6') ,6,25(1H,d,J=16.0Hz,H-8),5.65(1H,d,J=6.2Hz,H-8),5.50(1H ,d, J=16.0Hz,H-7),5.04(1H,s,Hb-10),4.97(1H,s,Ha-10'),3.83 (1H,d, J=6.2Hz,H-7),2.78(1H,d, I=19.1Hz,Hb-10),2.52(1H,d ,J=19.1 Hz,Ha-10),1.73(3H,s,H-11'),1.70(3H,s,H-11);13CNMR ( 125MHz,CDCl):6c=195.4(C-1),193.2(C-4),150.0(C-4),145.1(C-1 ),140,8(C-9),139,2(C-5),138,8 (C-6'),137,5(C-8'),131,9(C{{418 }}),127.7(C-2),124.1(C-7'),122.7(C-8),119.3(C-10'),117.6(C{ {433}}),114,9 (C-5),114,4(C-3),80,7(C-3'),55,3(C-2'),39,4( C-7),36.3(C-10),22.7(C-11),18.3(C-11). Uppbyggingin var auðkennd með samanburði af MS,'H NMR og 13C NMR litrófum sem og sértækum snúningi með bókmenntum [19].

Ehretíkínón B (3).Rautt duft; [ |6 plús 0.99(c 0.31, CH3OH); háupplausn ESI-TOF-MS m/z 387.1208, reiknað fyrir C22H20OsNa (M plús Na) plús 387.1203; Gögn fyrir 1H NMR og 13C NMR eru lýst í töflum 1 og 2 í sömu röð.

Ehretíkínón C(4). Rautt duft; [ ] 16 plús 0.37 (c 0.12, CH,OH); háupplausn ESI-TOF-MS m/z 387.1174, reiknað fyrir C2H20O;Na (M plús Na) plús 387.1174; Gögn fyrir 1H NMR og 13C NMR eru lýst í töflum 1 og 2 í sömu röð.

Ehretíkínón D (5). Gult duft; [ l5 plús 0.51(c 0.41, CHCl3); háupplausn ESI-TOF-MS m/z 405.1300, reiknað fyrir C2,H,O,Na (M plús Na) plús 405.1300;Gögnum fyrir HNMR og 13CNMR er lýst í töflum 1 og 2 í sömu röð.

4.4. Lífsþolsgreining/

Lífgreiningaraðferðinni sem notuð var í rannsókninni gegn öldrun var áður lýst [4]. K6001 gerstofninn var ræktaður á YPGalactose eða YPGlucose miðli. YPGalaktósa miðill var útbúinn með 3 prósent galaktósa, 2 prósent hípólýpeptóni og 1 prósent gerþykkni á meðan YPGlucose miðill innihélt 2 prósent glúkósa í stað galaktósa.cistanche แอ ม เว ย์Til að útbúa agarplötur var 2% agar bætt við miðilinn. Til að meta sýni með lífgreiningu var K6001 gerstofninum sáð og ræktaður í 24 klst í gerpeptón galaktósa miðlinum ásamt hristingi. Eftir 24 klst var miðillinn sem innihélt gerstofninn skilinn í skilvindu. Gerkögglurnar sem fengust voru þvegnar með fosfatjafnalausn (PBS) þrisvar sinnum og þynntar. Eftir þynningu voru frumurnar reiknaðar með blóðfrumnamæli og um 4000 frumur voru sáð á agarplötur sem innihéldu sýni með mismunandi styrk. Síðan voru plöturnar settar í hitakassa við 28 gráður í 2 daga. Gerfrumurnar í agarplötunni sáust í smásjá eftir 48 klst. Alls voru 40 örnýlendur úr hverjum plötu valinn af handahófi og fjöldi dótturfrumna talinn og greindur.

4.5. Tölfræðigreining

Marktækur munur á milli hópa var ákvarðaður með einstefnu ANOVA með Dunnetts margfeldissamanburðarprófi. GraphPad Prism 5.0 hugbúnaður var notaður. Ap gildi af<0.05 was="" considered="" statistically="">

5. Ályktanir

Þrjú ný og tvö þekkt bensókínón voru einangruð og einkennd úr O. bracteatum undir leiðsögn K6001 gerafritunar líftímaprófsins. Uppbygging nýju bensókínónanna (3-5) var útskýrð með litrófsgreiningu og þau þekktu (1-2) voru auðkennd með því að bera saman litrófsgögnin við þau í bókmenntum. Öll einangruðu benzókínónin voru metin með tilliti til öldrunarvirkni með gerafritunarlíftímaprófi og 1,2,4 og 5 sýndu marktæka öldrunarvirkni.hversu mikið cistanche á að takaEhretiquinone C(4) sýndi vænlegasta öldrunarvirknina og getur því talist hugsanlegt blýefnasamband. Það ætti að rannsaka frekar öldrunarkerfi þess.

Viðbótarefni:1D og 2D NMR litróf eru fáanleg á netinu á http://www.mdpi.com/1420-3049/24/7/1428/s1.

Framlög höfunda:UF framkvæmdi efnarannsóknina og samdi handritið. YP framkvæmdi endurteknar lífstímaprófanir. DD tók þátt í auðkenningu efnasambanda. JQ hannaði og hafði umsjón með þessari rannsókn og endurskoðaði handritið.

Fjármögnun:Þessi vinna var styrkt fjárhagslega af National Key R&D Program of China [No.2017YFE0117200]og NSFC [Grant Nos.21661140001,21877098, and 21572204].

Viðurkenningar:Við erum þakklát Michael Breitenbach frá háskólanum í Salzburg í Austurríki fyrir gjöfina á S. cerevisiae gerstofninum K6001. UF viðurkennir einnig stuðning við doktorsnám frá háskólanefndinni í Pakistan.

Hagsmunaárekstrar:Höfundar lýsa ekki yfir hagsmunaárekstrum.

Þessi grein er dregin út úr Molecules 2019, 24, 1428; doi:10.3390/molecules24071428 www.mdpi.com/journal/molecules