Rannsóknir á margvísitölu alhliða gæðamati á cistanches Herba byggt á CRITIC þyngdaraðferðinni

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Jiuquan gæðaeftirlits- og prófunarstöð í Gansu héraði, Jiuquan, Gansu 735000, Kína)

Ágrip:Markmiðið var að koma á alhliða matsaðferð með mörgum vísitölum til að meta gæði Cistanche deserticola og meta vísindalega gæðamun á Cistanches Herba frá mismunandi uppruna (Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa) og mismunandi framleiðslusvæðum. Innihald fimm fenýletanóíð glýkósíða (echinacoside, verbascoside, tubuloside A, isoacteoside og 2′-acetylacteoside) var ákvarðað með hágæða vökvaskiljun (HPLC). CRITIC vigtunaraðferðin var notuð til að reikna út þyngd hvers þáttar og heildarskor úrtakanna voru reiknuð út. Klasagreiningu var beitt til að greina mynstur gæðamuna meðal sýnanna. Niðurstöðurnar sýndu að gæðamunur kom fram á milli Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa. Matsskor fyrir Cistanche tubulosa var almennt hærri en fyrir Cistanche deserticola. Klasagreining flokkaði Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa í sérstaka flokka. Gæði Cistanche deserticola sýndu lágmarks breytileika, en gæði Cistanche tubulosa voru mismunandi eftir mismunandi framleiðslusvæðum. Líkanið sem komið var á fót í þessari rannsókn getur á hlutlægan hátt mælt gæðamuninn á milli Cistanches Herba frá mismunandi uppruna og framleiðslusvæðum, sem gefur vísindalegan grunn fyrir gæðamat á Cistanche.

Lykilorð: Cistanches Herba;CRITIC þyngdaraðferð; klasagreining;gæðamat

Cistanche herba þykkni til sölu

 

 

 

 

 

Cistanches Herba samanstendur af þurrkuðum, hreistruðnum safaríkum stilkum af Cistanche deserticola YC Ma eða Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, fyrrum almennt þekktur sem eyðimerkur cistanche. Cistanches Herba er heitt í eðli sínu og sætt og salt á bragðið. Það styrkir nýra yang, gagnast kjarna og blóði, og rakar þörmum til að létta hægðatregðu. Það er notað við skort á yang í nýrum, skorti á kjarna og blóði, getuleysi og ófrjósemi, eymsli og máttleysi í mitti og hné, máttleysi í vöðvum og beinum og þarmaþurrki með hægðatregðu. Lyfjafræðilega virkir þættir þess - eins og fenýletanóíð glýkósíð, fjölsykrur og iridoids - hafa verið staðfest með andoxunarefni, öldrun, ónæmisbælandi og taugaverndandi virkni. Sem þekkt hefðbundið kínverskt lækningaefni er það skráð sem hágæða jurt í Shennong's Classic of Materia Medica og er þekkt sem "ginseng eyðimerkurinnar." Það er aðallega dreift í norðvesturhluta Innri Mongólíu, Gansu, Xinjiang og Ningxia.

Með aukinni eftirspurn á markaði eru villtar auðlindir að ganga í garð og gerviræktun er orðin almenn. 2005 útgáfan af Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína stækkaði Cistanche tubulosa sem lögleg grasafræðileg uppspretta Cistanches Herba. Heimildirnar tvær hafa aðskilin prófunarmörk, en aðeins fyrir útdráttarefni og innihald echinacoside og verbascoside, sem geta ekki endurspeglað fjölþætta, fjölmarkandi eiginleika hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði. Efnasamsetning Cistanches Herba er mismunandi eftir framleiðslusvæði, uppskerutíma og vinnsluaðferðum. Þess vegna hefur það mikla þýðingu að koma á vísindalegu og kerfisbundnu gæðamatskerfi til að tryggja öryggi og virkni lyfjaefna og stuðla að sjálfbærri iðnaðarþróun. Í þessari rannsókn voru 20 lotur af Cistanches Herba frá mismunandi framleiðslusvæðum í Jiuquan greindar. HPLC var notað til að ákvarða samtímis fimm fenýletanóíð glýkósíð-echinacoside, tubuloside A, verbascoside, isoacteoside og 2'-acetylacteoside. CRITIC vogunaraðferðin var notuð til að úthluta vægi á hvern vísi fyrir alhliða gæðamat á grasafræðilegu uppsprettunum tveimur og klasagreining (CA) var notuð til að túlka mun eftir grasafræðilegum uppruna og framleiðslusvæði, með það að markmiði að veita vísindalegan grunn fyrir gæðamat á Cistanches Herba.

1 Hljóðfæri og efni úr cistanche

1.1 Tæki og búnaður

Agilent 1260 Infinity HPLC kerfi [þar á meðal fjórðungsdæla, sjálfssýnistæki, súluofn og DAD skynjari; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; XP205DR rafræn greiningarvog (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE ultrasonic hreinsiefni (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Hvarfefni

Viðmiðunarstaðlar: verbascoside (lotunúmer. 111530-201914, hreinleiki 95,2%) og echinacoside (lotunúmer. 111670-201706, hreinleiki 89,7%) voru keyptir frá National Institute for Food and Drug Control; túbúlósíð A (lotunúmer B20471, hreinleiki meira en eða jafnt og 98%), ísóakteósíð (lotunr. B21535, hreinleiki meiri en eða jafnt og 98%) og 2′-asetýlakteósíð (lotunr. B21779, hreinleiki meiri en eða jafnt og 98% af eða jafnt og 98% frá BioTech Co., Shanghai, Yun. Metanól var HPLC einkunn (Merck). Ofurhreint vatn var útbúið innanhúss. Önnur hvarfefni voru af greiningargráðu.

 

1.3 Sýnishorn

Tíu lotum af Cistanche deserticola og tíu lotum af Cistanche tubulosa var safnað frá Cistanches Herba ræktunarstöðvum og apótekum á Jiuquan svæðinu, merkt R1–R20 (sjá töflu 1). Þeir voru auðkenndir af aðstoðarforstjóra og TCM lyfjafræðingi Hou Jianzhong frá Jiuquan gæðaeftirlits- og prófunarmiðstöðinni sem þurrkaðir, hreisturlaga safaríka stilkar af Cistanche deserticola YC Ma eða Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Skírteinissýni eru afhent á lyfja- og snyrtivöruprófunarstofnun Jiuquan gæðaeftirlits- og prófunarmiðstöðvar.

Tafla 1 Heimildarupplýsingar um Cistanches Herba sýni

R1|Cistanche deserticola|Dazhuangzi Town, Jinta County, Jiuquan City

R2|Cistanche deserticola|Jiashan New Town, Suzhou District, Jiuquan City

R3|Cistanche deserticola|Xiqu Town, Jinta County, Jiuquan City

R4|Cistanche deserticola|Zhonghe Town, Jinta County, Jiuquan City

R5|Cistanche deserticola|Shuanglong Town, Suzhou District, Jiuquan City

R6|Cistanche deserticola|Hongliu Town, Guazhou County, Jiuquan City

R7|Cistanche deserticola|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Yumen City, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Tashi Town, Guazhou County, Jiuquan City

R10|Cistanche deserticola|Zongtai Township, Yumen City, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Dazhuangzi Town, Jinta County, Jiuquan City

R12|Cistanche tubulosa|Suzhou District, Jiuquan City

R13|Cistanche tubulosa|Suzhou District, Jiuquan City

R14|Cistanche tubulosa|Suzhou District, Jiuquan City

R15|Cistanche tubulosa|Suzhou District, Jiuquan City

R16|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Liangzhong Township, Yumen City, Jiuquan

R20|Cistanche tubulosa|Liugou Township, Anxi County, Jiuquan

 

2 Aðferðir og niðurstöður

2.1 Tilreiðsla blönduðrar viðmiðunarlausnar

Vegið nákvæmlega verbascoside 10,45 mg, echinacoside 11,56 mg, tubuloside A 10,59 mg, ísóakteósíð 19,63 mg og 2′-asetýlakteósíð 9,03 mg í aðskildar 50 ml mæliflöskur, leyst upp með 5% af metanóli. Blandið vel saman til að fá stofnviðmiðunarlausnirnar. Pípettu síðan nákvæmlega 1,00 ml af hverri stofnlausn í 10 ml mæliflösku, þynntu að rúmmáli með 50% metanóli og blandaðu saman til að fá blönduðu viðmiðunarlausnina.

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Fyrir frekari upplýsingar um samvinnu
Netfang:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Sími:+86 15292862950

 

2.2 Undirbúningur próflausna

Látið sýnisduft í gegnum No. 3 sigti; vegið um 1 g nákvæmlega í 100 ml brúna mæliflösku. Bætið við 80 ml af 50% metanóli, tappa, hristið, vegið, látið liggja í bleyti í 30 mínútur og hljóðlátið í 40 mínútur (250 W, 35 kHz). Kælið niður í stofuhita, vegið aftur, bætið við 50% metanóli til að vega upp á móti þyngdartapi, hristið vel, látið standa, hellið yfir flotið og síið. Safnaðu síðari síuvökvanum sem próflausninni.

 

2.3 Litskiljunarskilyrði

Notaðu InertSustain C18 súlu (4,6 mm × 250,0 mm, 5 μm). Hreyfanlegur fasi: metanól (A) og 0,1% fosfórsýrulausn (B). Stigull fyrir fasa A: 0–6 mín, 20%; 6–18 mín., 20%→30%; 18–35 mín., 30%→45%. Rennslishraði: 1,0 ml/mín; súluhitastig: 35 gráður; uppgötvun bylgjulengd: 330 nm; inndælingarrúmmál: 10 μL. Fræðilegar plötur fyrir hvern íhlut voru ekki færri en 5.000. Litskiljun blönduðu viðmiðunarlausnarinnar og próflausnanna eru sýnd á mynd 1.

 

2.4 Aðferðafræðilöggilding við ákvörðun innihalds

2.4.1 Nákvæmnipróf

Sprautaðu blönduðu viðmiðunarlausninni úr kafla 2.1 sex sinnum í röð við skilyrðin í kafla 2.3. RSD-gildi toppsvæða fyrir öll greiniefni voru minna en eða jafnt og 0,86%, sem gefur til kynna góða nákvæmni tækisins.

 

2.4.2 Endurtekningarpróf

Vigtið sex skammta af sýni R2 nákvæmlega (um 1,0 g hver) og undirbúið sex prófunarlausnir í kafla 2.2. Greindu við skilyrðin í kafla 2.3. RSD á toppsvæðunum var minna en eða jafnt og 1,12%, sem gefur til kynna góða endurtekningarhæfni aðferðarinnar.

 

2.4.3 Stöðugleikapróf

Undirbúið prófunarlausn úr sýni R1 eins og í kafla 2.2. Sprautaðu við 0, 2, 4, 8, 12 og 24 klst. við skilyrðin í kafla 2.3. RSD á toppsvæðunum var minna en eða jafnt og 1,20%, sem gefur til kynna góðan stöðugleika lausnarinnar innan 24 klst.

 

2.4.4 Línuleiki

Útbúið röð af blönduðum viðmiðunarlausnum með því að pípa nákvæmlega 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 og 2,0 ml af hverri stofnlausn í 10 ml mæliflöskur og þynna að rúmmáli með 50% metanóli. Sprautaðu samkvæmt skilyrðum í kafla 2.3. Teiknaðu styrk á móti toppflatarmáli til að fá kvörðunarjöfnur og línuleg svið (tafla 2). Niðurstöður sýndu góða línuleika fyrir echinacoside, tubuloside A, verbascoside, isoacteoside og 2′-acetylacteoside innan þeirra marka.

Tafla 2 Niðurstöður línuleikarannsóknarinnar

Echinacoside|y=2397.4x − 15.363|r=0.9987|línulegt bil: 0,0046–0,0462 mg·L−1

Tubuloside A|y=9428.7x − 7.104|r=0.9984|línulegt bil: 0,0024–0,0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8,507|r=0.9986|línulegt bil: 0,0024–0,0418 mg·L−1

Ísóaktósíð|y=11600.3x − 11.359|r=0.9985|línulegt bil: 0,0079–0,0786 mg·L−1

2'-asetýlakteósíð|y=10901.8x − 5,216|r=0.9985|línulegt bil: 0,0036–0,0362 mg·L−1

2.4.5 Endurheimt
Undirbúið níu skammta af sýni með þekktu innihaldi (R1), um 0,5 g hver. Hækkið við 50%, 100% og 150% af nafninnihaldi með viðeigandi magni af verbascoside, echinacoside, tubuloside A, isoacteoside og 2'-acetylacteoside. Undirbúið prófunarlausnir samkvæmt kafla 2.2 og greinið samkvæmt kafla 2.3. Meðalendurheimtur voru 99,58%, 99,24%, 100,26%, 99,84% og 100,46%, þar sem RSD var 1,26%, 1,67%, 1,03%, 1,39% og 1,71%, í sömu röð, sem gefur til kynna góða nákvæmni.

 

2.4.6 Ákvörðun innihalds

Vigtið nákvæmlega um 1 g af Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa dufti, undirbúið prófunarlausnir í kafla 2.2, greinið samkvæmt kafla 2.3 og reiknið út innihald verbascoside, echinacoside, tubuloside A, ísóakteósíð og 2′-asetýlakteósíð. Niðurstöður eru sýndar í töflu 3.

Tafla 3 Ákvörðunarniðurstöður á innihaldi fimm efnisþátta í Cistanches Herba (mg·g−1)

R1: Echinacoside 4.81|Tubuloside A 0,16|Verbascoside 0,58|Ísóakteósíð 0,26|2'-asetýlakteósíð 0,49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Gæðamat með þyngdaraðferð CRITIC

2.5.1 Gagnastöðlun

Þar sem mæld innihald vísanna var verulega breytileg var hver vísir meðhöndluð sem ávinningsvísir og staðlað á [0, 1] bilinu með formúlu (1).

 

2.5.2 Ákvörðun þyngdar

Stöðluð niðurstöður úr 20 lotunum voru fluttar inn á SPSSPRO gagnavinnsluvettvang á netinu og CRITIC aðferðin var notuð til að reikna út þyngd (tafla 4). Eins og sést í töflu 4 var upplýsingainnihald (1,936) 2′-asetýlakteósíðs marktækt hærra en annarra vísbendinga (0,683–0,758), aðallega vegna mjög mikillar átakamælingar (6,786), sem gefur til kynna mjög litla fylgni við aðra vísbendingar. Þannig gaf það einstakar upplýsingar í matskerfinu og nam 40,112% af heildarþyngd og varð ráðandi vísir. Vægi hinna fjögurra vísanna (echinacoside, tubuloside A, verbascoside og isoacteoside) var tiltölulega jafnvægi.

Tafla 4 Útreikningsniðurstöður vægisþátta

Vísir: Echinacoside|Breytileiki 0,367|Átök 2.064|Upplýsingar 0,758|Þyngd 15,705%

Vísir: Tubuloside A|0,352|1.940|0,683|14,150%

Vísir: Verbascoside|0,392|1.881|0,737|15,275%

Vísir: Ísóakteósíð|0,330|2.157|0,713|14,759%

Vísir: 2′-asetýlakteósíð|0,285|6.786|1.936|40,112%

 

2.5.3 Heildarúttekt

Byggt á ákvörðuðu vægi voru alhliða matseinkunnir fyrir 20 loturnar reiknaðar út með formúlu (2). Niðurstöður eru sýndar í töflu 5. Áberandi stigamunur fannst á milli grasafræðinnar tveggja. Cistanche tubulosa hafði almennt hærra innihald af echinacoside og verbascoside, sem leiddi til hærri yfirgripsmikilla skora en Cistanche deserticola.

Tafla 5 CRITIC alhliða matsskor fyrir Cistanches Herba

R1: 0,307 (staða 14)

R2: 0,386 (staða 10)

R3: 0,292 (staða 15)

R4: 0,432 (staða 8)

R5: 0,258 (staða 17)

R6: 0,313 (staða 13)

R7: 0,351 (staða 12)

R8: 0,147 (staða 20)

R9: 0,265 (staða 16)

R10: 0,179 (staða 19)

R11: 0,236 (staða 18)

R12: 0,335 (staða 12)

R13: 0,533 (staða 4)

R14: 0,632 (staða 2)

R15: 0,667 (staða 1)

R16: 0,497 (staða 6)

R17: 0,530 (staða 5)

R18: 0,469 (staða 7)

R19: 0,565 (staða 3)

R20: 0,425 (staða 9)
 

 

2.6 Klasagreining

Mælt innihald 20 lotanna var flutt inn í SPSS 20.0. Fjarlægsta nágrannaaðferðin og evklíðsfjarlægð í veldi voru notuð sem mæligildi og tenging á milli hópa var beitt fyrir þyrping (sjá mynd 2). Niðurstöðurnar bentu til mismunar á gæðum milli grasauppsprettanna tveggja: Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa sem flokkast í aðskilda hópa. Cistanche deserticola sýndi lítinn breytileika innan hóps, en Cistanche tubulosa sýndi gæðamun milli framleiðslusvæða og hægt var að skipta þeim frekar í þrjá undirhópa, sem var almennt í samræmi við CRITIC byggt yfirgripsmikið mat.