MRNA-undirstaða bóluefni gegn COVID-19: Þau eru ný en ekki óþekkt!

Ágrip:

mRNA bóluefni nýta sér aðferðina sem frumurnar okkar nota til að framleiða prótein. Frumur okkar framleiða prótein byggt á þeirri þekkingu sem er í DNA okkar; hvert gen kóðar einstakt prótein. Erfðaupplýsingarnar eru nauðsynlegar en frumur geta ekki notað þær fyrr en mRNA sameindir breyta þeim í leiðbeiningar um framleiðslu á sérstökum próteinum. mRNA bólusetningar veita tilbúnar mRNA leiðbeiningar til að búa til ákveðið prótein. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) og mRNA-1273 (Moderna) eru bæði nýsamþykkt mRNA-byggð COVID-19 bóluefni sem hafa sýnt framúrskarandi vernd og virkni. Alls eru fimm mRNA-undirstaða bóluefni til viðbótar við COVID-19 á mismunandi stigum klínískrar þróunar. Þessi endurskoðun beinist sérstaklega að mRNA-byggðum bóluefnum fyrir COVID-19 sem nær yfir þróun þess, kerfi og klíníska þætti.

cistanche ávinningur fyrir karla styrkir ónæmiskerfið

Leitarorð:

COVID-19 bóluefni; mRNA bóluefni; þróun bóluefnis; bóluefni sem byggjast á vektor

1. Inngangur

Kórónuveirusjúkdómur{{0}} (COVID-19) heimsfaraldur af völdum alvarlegs bráðs öndunarfæraheilkennis coronavirus-2 (SARS-CoV-2) hefur breiðst út um allan heim. Eins og staðan er núna, á heimsvísu, hafa verið 662 milljónir staðfestra tilfella af COVID-19, þar á meðal 6,6 milljónir dauðsfalla sem tilkynnt hafa verið til Alþjóðaheilbrigðismálastofnunarinnar (WHO) [1]. Veiran hefur áhrif á meira en 200 lönd um allan heim, en megnið af tilfellum greint frá í Brasilíu, Rússlandi og Bandaríkjunum [2]. Fyrsta tilkynning um braust út COVID-19 var frá Wuhan-borg, Hubei-héraði í Kína þann 30. desember 2019. Lungnabólguklasar voru skráðir í Wuhan. Síðar 7. janúar 2020 kom í ljós að ný kórónavírus (2019-nCoV) var orsakavaldurinn. WHO nefndi sjúkdóminn á endanum COVID-19 [3,4]. Áætlað dánartíðni tilfella er á bilinu 0,5–1,5%. SARS-CoV-2 tilheyrir fjölskyldunniCoronaviridaeog röðinniNidovirales. SARS-CoV-2 tilheyrir Betacoronavirus sem hefur náið erfðafræðilegt samband við tvær veirur, SARS-CoV og kórónuveiruna í Mið-Austurlöndum öndunarfæraheilkenni (MERS CoV). Í samanburði við SARS og MERS er SARS-CoV-2 mjög smitandi. COVID-19 er alvarlegur sjúkdómur sem hefur alþjóðlega þýðingu. Ekki er hægt að meðhöndla sjúkdóminn með sérstöku veirueyðandi lyfi, lykillinn að því að koma í veg fyrir útbreiðslu sjúkdómsins er að brjóta smitkeðjuna [5]. Til að draga úr algengi og dánartíðni er fjöldabólusetning gegn heimsfaraldri notuð [6,7]. Síðan SARS-CoV-2 erfðamengisröðin var gefin út 11. janúar 2020, voru meira en 150 bólusetningarverkefni yfirvalda rannsökuð. Meginmarkmið bólusetningar er að framkalla ónæmissvörun sem veitir langtímavörn gegn alvarleika sjúkdómsins [8]. Eins og Paddy Ssentongo og félagar hafa metið [9], minnkaði virkni bóluefnis (VE) gegn öllum SARS-CoV-2 sýkingum úr 83% á fyrsta mánuðinum eftir að fyrstu bólusetningarlotunni lauk í 22% eftir 5 mánuði eða lengur . Á sama hátt lækkaði VE gegn einkennum COVID-19 úr 94% á fyrsta mánuðinum í 64% á fjórða mánuðinum eftir bólusetningu. Á heildina litið var VE gegn alvarlegum COVID-19 sterk á öllum aldri, með 90% (95% CI, 87–92%) fimm mánuðum eða lengur eftir að hafa verið bólusett að fullu.

Kórónavírus hefur toppað (S) prótein á yfirborði þess; þetta S prótein mun hafa samskipti við viðtakabindandi svæði angíótensínbreytandi ensíms (ACE) viðtaka [10,11]. Flestir bóluefnisframbjóðendurnir miða á þetta S prótein veirunnar [12]. Pfizer BioNTech COVID-19 bóluefnið-BNT162b2 er fyrsta bólusetningin sem Matvæla- og lyfjaeftirlitið (FDA) hefur samþykkt. Það er byggt á boðbera RNA (mRNA) framleitt af Pfizer sem fékk leyfi til neyðarnotkunar fyrir 12–15 ára eða eldri til að koma í veg fyrir COVID-19 sjúkdóminn. Matvæla- og lyfjaeftirlit Bandaríkjanna (USFDA) samþykkti Pfizer bóluefnið 23. ágúst 2021 [13]. Ýmsar rannsóknir hafa greint frá því að bólusetning skili 89,1% til að koma í veg fyrir SARS-CoV-2 sýkingu; að auki hafa bóluefni einnig dregið úr COVID-19-tengdri sjúkrahúsinnlögn, dauðsföllum og forvörnum gegn innlögn á gjörgæsludeild. Hægt er að stýra útbreiðslu SARS-CoV-2 fyrr þegar stór hluti íbúanna er bólusettur (td 70–80%). Bólusetning dregur verulega úr tíðni COVID-19. Bóluefnið veitir öflugt og áhrifaríkt ónæmissvörun til að uppræta SARS-CoV-2 sýkingu úr mannslíkamanum. Fólk sem var sýkt hafði öfluga T-frumu svörun við veirunni, sem getur hjálpað til við að ná sér eftir sýkinguna [14,15]. Hlutleysing var áfram í sterkri fylgni við vernd gegn einkennum sýkingar með SARS-CoV-2 afbrigðum sem vakti áhyggjur [16]. Þannig er bólusetning stefnan til að stjórna heimsfaraldri.

cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið

Verið er að þróa COVID-19 bóluefni á ýmsum kerfum. Lifandi veiklað veira, óvirkjuð bóluefni, veiruferjur sem ekki endurtaka sig, RNA og DNA eru dæmi um þetta. Mismunandi gerðir bóluefna með dæmum eru taldar upp á mynd 1. Stefna við þróun bóluefnis er að nota drepna SARS-CoV-2 veiruna, hún er ekki fær um að endurtaka sig en hún getur haldist ósnortinn í líkamanum. Ónæmiskerfið mun kalla fram viðbragð sitt gegn vírusnum með því að búa til mótefni gegn henni. COVAXIN® (BBV152) framleitt af Bharat Biotech, Hyderabad, Indlandi og CoronaVac, einnig þekkt sem sinovac® þróað af Sinovac Biotech, Peking, Kína hefur notað óvirkjaða veiruaðferð til að þróa bóluefnið [17]. Veiruferjurnar sem ekki endurtaka sig er einnig tækni sem fyrirtæki hafa notað til að framleiða bóluefni. Eitlaveiran (Ads) er mikið notaður veiruferja sem hefur tvíþátta erfðamengi sem virkar sem orsakavaldur fyrir kvef. CanSino Biologics Tianjin, Kína hefur þróað Ad5-nCoV (Convidecia®) sem kóðar alla lengd S-prótein SARS-CoV-2 veirunnar. Veiruferjan hefur ekki afritunareiginleika og veldur því ekki raunverulegum sjúkdómum. Þegar það er komið inn í líkamann er veiru-DNA kynnt á frumum sem sýna mótefnavaka og ónæmissvörun myndast gegn því. Oxford/Astrazeneca hefur notað adenovirus frá simpansa (ChAdOx1) sem hefur möguleika á að lágmarka samskipti við algeng mótefni gegn adenovirus. Bóluefnið heitir AZD122 (Vaxzevria™). Gamaleya rannsóknarstofnunin, Moskvu, Rússlandi þróaði Sputnik V™ bóluefnið er einnig veiruferja með raðbrigða Ad26 sermisgerð úr mönnum. Janssen bóluefnið var framleitt af Johnson og Johnson, New Jersey, Bandaríkjunum með sömu aðferð [18].

mRNA er einnig talið ný nálgun við mótun bóluefnis. mRNA bóluefni eru ný fyrir almenning en vísindamenn hafa rannsakað þau í langan tíma. Þessi mRNA bóluefni eru framleidd úr DNA sniðmátinu sem kóðar topppróteinið og er pakkað inn í burðarefnið sem byggir á lípópróteinum til að flýta fyrir innkomu mRNA inn í líkamann og koma í veg fyrir niðurbrot [19]. Þegar bóluefnið er gefið í vöðva er því sprautað í dýpri vefi og mRNA sameindirnar fara inn í frumuna, sem auðveldar þýðingarferlið [20]. Þegar það kemur inn í líkamann verður mRNA viðurkennt sem mótefnavaki og vessavirkt ónæmissvörun verður virkjuð sem mun örva B frumur til að þróast í minni B frumur. Þar af leiðandi útsetning fyrir mótefnavakanum; minni B frumur munu hlutleysa og loka mótefnavakunum [21]. FDA hefur samþykkt mRNA byggt bóluefni, eitt þeirra er Pfizer-BioNTech's, New York, NY, Bandaríkjunum BNT162b2 (Comirnaty®) og annað er Moderna™, Cambridge, MA, Bandaríkjunum mRNA-1273, einnig þekkt sem Spikevax. FDA samþykkti mRNA-1273 fyrir leyfi til neyðarnotkunar (EUA) til notkunar hjá fólki 18 ára og eldri. Núverandi yfirferð mun veita ítarlegar upplýsingar um bóluefni og staðreyndir um COVID-19, mRNA-byggða bóluefnisþróun, hvernig mRNA bóluefni virka, samsetningu og innihaldsefni sem notuð eru, öryggi og verkun, og reglugerðaráskoranir fyrir bóluefni.

Mynd 1. Mismunandi gerðir af bóluefni fyrir COVID-19 sýkingu. (Búið til með BioRender.com aðgengilegt 31. desember 2022)

2. Bóluefnafræði og staðreyndir um COVID-19

Í desember 2019 var tilkynnt um hóp einstaklinga sem þjáðust af lungnasjúkdómum af óþekktri ástæðu í Kína. Kínverska miðstöðin fyrir eftirlit og forvarnir gegn sjúkdómum (CDC) kannaði síðan óvissu í lungnabólgutengdum tilfellum og uppruna þeirra með því að safna sýnum úr líkama sjúklingsins sem greindust með rauntíma pólýmerasa keðjuverkun [22]. Síðar var vitað um orsök lungnasjúkdómsins og kom í ljós að hún stafaði af kórónuveirunni, sem var frekar nefnd SARS-CoV-2 (alvarlegt bráða öndunarfæraheilkenni) eða COVID-19. Síðan þá hefur það breyst í heimsfaraldur. Það tilheyrir hópi -kórónuveira. Byggingarlega séð er það hjúpuð, óhlutbundin, sem tilheyrir undirættkvísl Sarbecovirus og Orthocoronavirinae undirfjölskyldu. Erfðafræðilega efnið sem er til staðar í byggingu þess er einþátta jákvæða skynjun RNA röð [23]. Þeir finnast fyrst og fremst í fuglahýslum og spendýrum. Erfðafræðileg uppbygging kransæðaveirunnar hefur verið sýnd á mynd 2, sem sýnir að veirubyggingin býr yfir topppróteinum, með undireiningar, S1 og S2, á ytri himnunni. RNA veiru erfðamengi er hjúpað inni í himnunni ásamt núkleókapsíðinu. Þannig getum við sagt að það séu fjögur byggingarprótein, þ.e. topppróteinið (S), núkleókapsíðprótein (N), himnuprótein (M) og hjúpprótein (E) [24]. Auk þessa eru prótein sem ekki eru uppbyggjandi (Nsp) sem eru alls sextán. Gaddapróteinin eru áberandi bindistaður viðtaka, þar sem próteinin geta haft samskipti við viðtaka sem eru til staðar í líkamanum [25]. S1 undireiningin felur í sér receptor binding domain (RBD), þar sem angíótensín umbreytandi ensímið II binst spike próteininu. Það samanstendur einnig af N-enda léninu (NDT). S2 undireiningin býr yfir samrunapróteinum (FP) og transmembrane próteinum (TM) [26]. Þegar veiran kemst inn í hýsilfrumurnar leiðir hún til samruna og afhjúpunar veiruhimnunnar, fylgt eftir með umritun og þýðingu á mRNA, sem er nauðsynlegt fyrir myndun veirusamsetningar, sem flyst síðan út úr hýsilnum með frumufrumu til að smita. aðrar frumur. Innkoma veiruagna inn í aðrar frumur líkamans leiðir til örvunar ónæmissvörunar og myndunar mótefna [27].

Mynd 2. Erfðafræðileg uppbygging kransæðaveiru. (Búið til með BioRender.com aðgengilegt 31. desember 2022).

Á heimsvísu hafa bólusetningar verið mikið notaðar og eru duglegar við að lækka dánartíðni. Byggt á traustum vísindum og þekkingu er hægt að auka mat á öryggi og verkun bóluefna og mat á upptöku þeirra [28]. Bóluefni hafa þróast frá hefðbundnum bóluefnum eins og lifandi veiklaðum eða drepnum bóluefnum yfir í undireiningabóluefni og að lokum, einsleitar eða misleitar prime-boost bólusetningaraðferðir [29]. Mismunandi bólusetningaraðferðir hafa verið sýndar á mynd 3. Í fornöld hefur verið sýnt fram á að lifandi veiklað bóluefni eru björgunarmaður gegn ýmsum sjúkdómsvaldandi veirum og eru talin örugg gegn milljónum íbúa, en þau eru oft vanrækt. Mörg bóluefni, þar á meðal MMR (mislingar, hettusótt, rauðir hundar) og hlaupabólubóluefni eru lifandi veikt bóluefni [25,30]. Hægt er að fá veikt form veirunnar með því að verða fyrir skaðlegum aðstæðum eða með erfðabreytingum. Þessa tegund af bóluefni, sérstaklega mænusóttarbóluefni til inntöku (OPV), er hægt að gefa með óífarandi leiðum. Aftur á móti hafa drepin bóluefni, sem eru óvirkju útgáfur vírusanna, takmarkaða notkun hvað varðar ónæmissvörun en indverska bóluefnið sem nú er notað, COVAXIN®, framleitt af Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, Indlandi notar óvirkju útgáfuna af vírusinn í bóluefnissamsetningu sinni [31]. Óvirkjaða vírusinn er nógu hæfur til að halda ímyndarsamræmi sínu sem hjálpar til við að stilla húmorsónæmissvörun [32].

Mynd 3. Samspil bóluefna við hýsilfrumurnar og veiruögnina. (Búið til með BioRender.com aðgengilegt 31. desember 2022)

Nýleg tækni eins og bóluefni sem byggjast á mRNA eða bóluefni sem byggjast á vektor nýta þau til hins ýtrasta fyrir öryggi og verkun COVID-19 bóluefna [33]. Bóluefnin sem byggjast á vektor eru einnig þekkt sem heterologous prime-boost bólusetning, sem hjálpar til við að framkalla bæði frumu- og humoral ónæmissvörun, en lifandi undireiningabóluefnin vekja aðeins húmorssvörun [34-39]. Samkvæmt rannsókn, 5-10 sinnum aukning á T-frumumiðluðu ónæmissvörun ef um er að ræða misleitt bóluefni sem byggir á vektor í samanburði við sömu efnablönduna, útbúið með einsleitri nálgun [40]. Þess vegna eru bóluefni sem byggjast á vektor, þ.e. DNA og RNA byggð, frekar ákjósanleg en undireininga byggð, oft talin öflugri samanborið við RNA bóluefni, og áhrifarík þar sem þau umrita toppprótein veirunnar. Þegar um Chikungunya vírusinn er að ræða, framkallaði samnæmisaðferðin með því að nota DNA og veirulíkar agnir betri ónæmissvörun í dýrarannsóknum [41]. Stundum þurfa DNA bóluefni sérhæfð afhendingarkerfi eins og rafdrætti, örnálafylki og kerfi sem byggir á burðarefni eins og lípósóm til að auka gegndræpi. Fjölmjólkur-kó-glýkólsýru-undirstaða örkúlur voru samdar fyrir HIV-1 DNA bóluefnisgjöf í vöðva [42]. Hins vegar mynda DNA-undirstaða bóluefni lítil ónæmissvörun og þurfa oft aðra skömmtun. Þetta er hægt að vinna bug á með því að nota mRNA byggt bóluefni [25,43].

cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið

3. Þróun bóluefnis sem byggir á mRNA

Áður fyrr voru mismunandi gerðir af RNA notuð fyrir bóluefnissamsetninguna, þar á meðal in vitro umritað mRNA, siRNA (small interference RNA), RNA-undirstaða aptamer, ríbóswitch, andsense sameindir og síðar mRNA. Meðvitundin um boðberi ríbónsýru, þ.e. mRNA er upprunnin frá grunnlegri, ennfremur hagkvæmri sköpun hennar, tímabundinni hreyfingu hennar og hægu niðurbroti í markfrumum, og öryggisávinningi hennar í mótsögn við DNA meðferð þar sem það samhæfir ekki erfðamengi mannsins, sem hindrar innsetningu. stökkbreytingu, og er tafarlaust aðgengilegt til túlkunar í prótein í umfrymi frumunnar [44]. Snemma á tíunda áratugnum unnu vísindamenn mikið að því að ná árangri í þróun mRNA-byggðra bóluefna. Ýmsar tilraunir voru gerðar in vitro og sýndu niðurstöður framleiðsla á æskilegum próteinum í kjölfarið; Þess vegna var komist að þeirri niðurstöðu að þar sem mRNA er nógu hæft til að framleiða prótein, þá getur það verið líkleg meðferðaráætlun til að meðhöndla kvilla [45]. Samkvæmt Martinon o.fl., var mRNA bóluefnið sem byggir á kjarnapróteinum til meðhöndlunar á inflúensu framleitt með in vitro umritun og var fellt inn í fituæðablöðrur. Niðurstöðurnar sýndu framköllun frumudrepandi T-frumna og mótefna, in vivo [46]. Síðan þá hefur stigvaxandi þróun átt sér stað í notkun mRNA sem lækningatækis vegna umtalsverðrar virkni þess, auðveldrar uppbyggingar og hagkvæmni, sem er frumskilyrði fyrir meðferð á mjög smitandi sjúkdómum og krabbameinsmeðferð. Nýlegar rannsóknir leiddu í ljós að mRNA byggðar meðferðir vernduðu mýs verulega gegn Chikungunya einkennum og héldu æskilegu magni mótefna eftir tvo skammta [47]. RNA-undirstaða bóluefni miða á ónæmisfrumur líkamans með því að breyta starfsemi þeirra, miða á ríbósóm til þýðinga og mynda þar með ónæmissvörun [19].

mRNA-undirstaða ónæmisaðgerðir samanstanda af einþátta mRNA, sem kóðar mótefnavakann sem óskað er eftir. Þeir geta verið fluttir sem nakið mRNA eða hjúpað í viðeigandi burðarkerfi til að auðvelda afhendingu inn í frumurnar. Þegar mRNA fer inn í frumuna er það þýtt yfir í prótein-undirstaða mannvirki með náttúrulegum aðferðum frumunnar. Það er ennfremur sett undir breytingar eftir þýðingu til að fá prótein sem vekur áhuga og myndar ónæmissvörun eins og ákvarðað er af merkjapeptíðunum [44,48]. mRNA byggt bóluefni standa frammi fyrir að minnsta kosti tveimur hindrunum: niðurbroti kjarna þegar þeim er sprautað í dýr og meðfædd ónæmingargeta svipað og mótefnavaka [49]. Til að útrýma þessu vandamáli er gervi-úridín (Ψ) vel þekkt RNA breyting. Ψ skipta um uridín fyrir in vitro umritað (IVT) mRNA, sem er mjög algengt og náttúrulegt núkleótíð í öllum frumum með RNA. Bólusetning gegn COVID-19, framleidd af bæði Moderna og Pfizer-BioNTech, samanstendur af nýju breyttu Ψ sem hefur allt að 90% verkun gegn einkennum [50]. Þar sem bóluefni þróað af CureVac NV vantaði Ψ-breytt mRNA og klínískar rannsóknir staðfestu aðeins 48% verkun [51].

Í þýðingarferlinu eru fyrst og fremst tveir mismunandi flokkar mRNA bóluefna til, nefnilega ómagnandi mRNA (NMR) og sjálfmagnandi mRNA (SMR). Vinnuháttur ómagnandi mRNA og sjálfsmagnandi mRNA er útskýrður á mynd 4. Byggingarlega séð, eins og sýnt er á mynd 5, hafa bæði mannvirkin CAP, 50 og 30 óþýtt svæði (UTR), opnunarramma (ORF), og hestahali sameiginlegur [52,53].

Mynd 4. Flokkar mRNA. (Búið til með BioRender.com aðgengilegt 31. desember 2022)

Í viðbót við þetta býr SMR yfir afritun sem hluta sem hjálpar við mögnun mRNA innanfrumu. Ennfremur eru hlutar þýddir af ríbósómum til að framleiða prótein sem vekur áhuga. Próteinin sem eru seytt leiða til myndunar ónæmissvörunar [54]. SMR eru tiltölulega stærri en NMR og anjónískar sameindir. Nýlegar rannsóknir á sjálf-afritunar RNA sýndu betri in vitro undirerfðaefnis tjáningu á próteinum sem ekki eru uppbyggingar af venesúela equine encephalitis (VEE) eftirmynd þegar mismunandi stökkbreytingar sáust. Svipuð klínísk rannsókn var gerð til að miða á Rabies glýkópróteinið með því að nota VEE-Sindbis veiru sjálfmagnandi RNA sem er samsett í nanófleyti er nú í gangi [55]. Helstu mikilvægu gæðaeiginleikar (CQAs) sem skilgreina virkni mRNA meðferða eru teknar saman í töflu 1 [54].

Mynd 5. Hagræðing á mRNA röð. (Aðlagað frá [56] með réttindum og heimildum).

Tafla 1. CQAs fyrir mRNA bóluefni.

Framleiðsla á mRNA er tveggja þrepa ferli, sem felur í sér framleiðslu og hreinsun. Engin óhreinindi eru til staðar í mRNA framleiðslukerfum þar sem það inniheldur engin dýra- eða frumuafleidd hráefni, framleiðslan er tiltölulega öruggari [65]. Framleiðsla á mRNA röð getur verið eins þrepa ensímferli eða tveggja þrepa ensímferli. Hliðstæða með loki er notað þegar um er að ræða eins þrepa framleiðsluferli, sem almennt er notað á rannsóknarstofu mælikvarða. Ferlið er síðan framkvæmt með hreinsun, sem felur í sér aðskilnað með litskiljunaraðferðum eins og sýnt er á mynd 6. Tveggja þrepa ensímhvarfið fyrir framleiðslu á mRNA nær til in vitro umritunar á DNA sniðmátinu til að mynda RNA pólýmerasa röð [66]. Hægt er að loka mRNA sniðmátinu sem þannig er myndað með því að nota vaccinia lokunarensím og metýlgjafa. Framleiðsla á mRNA er tiltölulega mikil og á iðnaðarkvarða er erfitt að ná fram endurgerðanleika [67].

Mynd 6. Framleiðsluferli mRNA röð. (Búið til með BioRender.com aðgengilegt 1. janúar 2023)

4. Hvernig virka mRNA bóluefni?

mRNA er óstöðug neikvætt hlaðin sameind sem er hjúpuð í lípíð nanóögnum. Í gegnum endocytosis fara þessar lípíð nanóagnir inn í frumur. Þegar þau eru komin inn í umfrymið er þessum innkirtlum strax beint að leysisómum til niðurbrots. Rannsóknir sýna að jónanleg lípíð gegna mikilvægu hlutverki í flótta endosomes og losun mRNA. Höfuðhópur lípíða er prótónaður í súru umhverfi endósóma og þetta katjóníska ástand er síðan fest við anjónískan höfuð fosfólípíðsins í innhimnu innhimnu. Vatnsfælinn hali katjónískra lípíðs og fosfólípíðs teygir sig síðan út, truflar tvílaga fosfólípíðbygginguna og gerir mRNA kleift að sleppa inn í umfrymishólfið. Ríbósóm umbreyta mRNA í prótein þegar það losnar. Þetta prótein getur virkjað ónæmissvörun á tvo vegu: (1) Próteasómið brýtur niður þessi prótein í peptíð, sem síðan birtast sem mótefnavaki á yfirborði frumna með MHC (major histocompatibility complex) flokki I sameindum, sem bindast TCR (T) frumuviðtaka) til að virkja CD8+ T frumur, sem drepa sýktar frumur; próteinið sjálft getur virkjað ónæmissvörun á tvo vegu. (2) Prótein sem seytt eru utan frumu eru upptekin af APCs (antigen-presenting frumur) og brotnar niður í peptíð sem koma fram á yfirborði frumunnar af MHC flokki II og þekkjast af CD4+ T frumum, sem seyta frumur til að framleiða frumu svörun og samvirkja B frumur til að framleiða húmorískt ónæmissvörun, eins og sýnt er á mynd 7. Ennfremur gáfu mRNA bóluefni tvíþátta og einþátta RNA sem binst TLR (Toll-like receptor) í innkirtlinum, sem leiddi til þess að örvun á fjölmörgum IFN-1 (tegund I interferóni) örvuðum genum og virkjar þar af leiðandi meðfædd ónæmissvörun gegn veiru.

Mynd 7. Verkunarháttur þar sem mRNA bóluefni vekur ónæmi fyrir hýsilnum. (Búið til með BioRender.com aðgengilegt 1. janúar 2023)

5. Samsetningarþættir mRNA-undirstaða bóluefna

Þegar umritaða mRNA er sprautað mun það tjá prótein inni í líkamanum. Ónæmisfræðileg svörun sést vegna tjáðs próteins frá mRNA. Þetta ferli er aðallega grundvöllur mRNA bóluefnisþróunar [68].

5.1. DNA sniðmát

Að bera kennsl á mótefnavakann frá marksjúkdómsvaldinu er fremsta skrefið. Þróun mRNA ónæmisaðgerðar þarf að bæta við kóðaða mótefnavakanum í DNA sniðmát, sem mun hjálpa við þýðingu mRNA in vitro. Sértæki mótefnavakinn verður framleiddur in vivo með umritun á umritaða mRNA, sem nær aðeins til umfrymis; þetta mun hjálpa til við að kalla fram ónæmissvörun. Plasmíð DNA (pDNA) inniheldur hreyfiröð með mikla sækni í DNA-háðan RNA pólýmerasa, eins og T7, SP6 eða T3, auk viðeigandi röð fyrir mRNA smíðina. Ensímið mun fara eftir sniðmátinu og lengja RNA umritið þar til það nær enda sniðmátsins [69].

5.2. Capping Enzyme

Fyrir skilvirka þýðingu á mRNA frá DNA sniðmátslokinu á 50 enda mRNA er mjög mikilvægt. Ennfremur er krafist 50 þaks í þroskuðu mRNA fyrir mRNA vernd gegn niðurbroti, genatjáningu og nýliðun ríbósóma. 5 0 -50 -þrífosfatbrú tengir 50 húfurnar af heilkjörnunga-mRNA við 7-metýlgúanósín (m7G) (m7GpppN). Ný sam-umritunartækni sem notaði hreint lokunarsett til að bæta nákvæmlega náttúrulegri 50 cap1 uppbyggingu við upphafsstaðinn meðan á IVT viðbrögðum stendur hefur gert myndun 50 capped mRNA með T7 pólýmerasa að algengri lokunaraðferð með góðri þýðingu og lágmarks hvarfvirkni. Í COVID-19 BNT162b1 mRNA bóluefninu var 5 0 hettum bætt við með því að nota hreint lokunaraðferðina [70]. Höfuðhliðstæða umritað mRNA hefur fjöl 1 hala og 30 (fjöl-A) hali er til staðar í 30 endum heilkjörnunga mRNA. Þessi fjöl A hali sinnir flutningi, þýðingu og stöðugleika mRNA. 30 pólý A skottið og 50 húfan munu búa til stöðuga lokaða lykkjubyggingu með eIF4F flókinni til að hefja þýðingarferlið. Vegna 120 núkleótíða (nt) í 30 pólý(A) hala, hefur BioNTech mRNA bóluefnið yfirburða stöðugleika og þýðingarvirkni [71].

5.3. Núkleótíð þrífosfat undirlag (NTP)

Þegar DNA plasmíð eru samþætt T7 pólýmerasa og núkleótíð þrífosfötum er mRNA þýtt á skilvirkari hátt og meiri afrakstur myndast. Eftir gjöf bóluefnisins vaknar áhyggjuefni ónæmingargetu. Við virkjun niðurstraumsmerkja mun líkaminn þekkja og bregðast við veiru RNA. Þessi viðurkenning á einþátta og tvíþátta RNA er af innkirtlaviðtökum eins og Toll-like viðtökum (TLR3), TLR7 og TLR8. Tvíþátta og 50 -þrífosfat-breytt RNA er þekkt af retínósýru-framkallanlegu geni-I (RIG-1) og sortuæxlaaðgreiningartengd prótein 5 (MDA-5) frumtómsviðtakans. Tilkynnt var um ofnæmisviðbrögð og bráðaofnæmislost þegar ónæmiskerfi líkamans var virkjað á stjórnlausan hátt. Þessi oförvun ónæmiskerfisins á sameindastigi mun takmarka próteinþýðingu, tjáningu mótefnavaka og virkni bóluefnisins. Hægt er að yfirstíga þessa takmörkun með breytingum á kjarnabasa. N1-metýl pseudouridine, breyttur núkleóbasi, mun auka próteinframleiðslu og draga úr virkjun TLR3. Breytt kirni í gegnum RIG-1 hafa ekki aðeins áhrif á prótein-RNA-víxlverkun heldur dregur það einnig úr getu mRNA til að dreifa ónæmisfræðilegum merkjum. Þýðingarvirkni mRNA í prótein er bætt vegna N1-metýlpseudouridins. Upphaf þýðinga sem á sér stað hratt mun samræmt auka helmingunartíma mRNA [50].

cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið

Smelltu hér til að skoða Cistanche Enhance Immunity vörur

【Biðja um meira】 Netfang:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Lipid nanóagnahlutir fyrir mRNA afhendingu

Í samanburði við öll önnur bóluefni þróast mRNA bóluefni tiltölulega hratt og eru áhrifaríkari. Hins vegar er mesta áskorunin við framleiðslu mRNA bóluefna lélegur stöðugleiki þeirra. Stöðugleiki bóluefnisins og getu til að meðhöndla COVID-19 sýkinguna minnkar vegna þess að bóluefnið er hratt niðurbrotið af ríbónúklesum eftir fæðingu, sem framleiðir niðurbrotna þætti sem skilast út um nýrun. Til að takast á við þessa áskorun er hægt að móta mRNA með lípíð nanóögnum (LNP). mRNA-LNP bóluefnið mun vernda mRNA frá ótímabæru niðurbroti og mun auðvelda afhendingu umfrymis til frumna sem sýna mótefnavaka [72]. Lipíð eru fullkomin efni til að skila mRNA á frumusvæðinu, þar sem samruni þeirra er samhæft við lípíð frumuhimnur; sem leiðir til markvissrar og áhrifaríkrar losunar mRNA. LNP eru agnir í nanóstærð með minna en eina míkron í þvermál sem innihalda tvö eða fleiri lípíð í mismunandi hlutföllum. LNP eru frábrugðin lípósómum vegna nærveru lípíðþátta í kjarnanum sem ósamfelld blanda. LNPs sem gengust undir mótun hafa fjöllaga blöðrubyggingu, einsleita kjarnaskel og nanóskipulagðan kjarna [73]. Það er til staðar vatn inni í kjarna LNPs, sem afhjúpar mRNA fyrir samskipti við vatnskenndan miðil. Eins og sýnt er á mynd 8 er mRNA staðsett inni í LNP, sem verndar það fyrir ytra umhverfi. Algengasta samsetningin, sem myndar mRNA LNP kerfin, eru katjónísk/jónanleg lípíð, fosfólípíð ("hjálparlípíð"), kólesteról og pólýetýlen-glýkól (PEG). Eðlisefnafræðilegir eiginleikar inni í LNP afhendingarkerfinu, svo sem virkni hjúpunar, ytri yfirborðshleðslu, kornastærð og lögun er auðvelt að breyta með því að stilla lípíðsamsetninguna. Hlutföllin eru stillt eftir því hvaða markvef er óskað [74].

Mynd 8. Uppbygging lípíð nanóagna sem notuð eru til skilvirkrar mRNA afhendingu. (Búið til með BioRender. com skoðað 1. janúar 2023)

5.4.1. Katjónísk lípíð

Með amínhópi sem gefur nettó jákvæða hleðslu, vatnsfælin keðju og tengihóp sem gerir kleift að tengja vatnssækna hlutann við vatnsfælna keðjuna, sýna katjónísk lípíð amfífískan eiginleika. Þeir eru með varanlega jákvæða hleðslu á skauthausnum, sem hjálpar til við samspil við neikvætt hlaðnar kjarnsýrur, sem eykur skilvirkni fanga. Innhimnuflótti LNP kerfisins og frumuupptaka eykst einnig vegna nettó jákvæðrar hleðslu. Fyrir mRNA gjöf hafa katjónísk lípíð, jónanleg lípíð og aðrar lípíðgerðir verið rannsökuð. Í samanburði við ójónanleg katjónísk lípíð eru jónanleg lípíð, sem eru jákvætt hlaðin við lágt pH og við lífeðlisfræðilegt pH hlutlaus, tiltölulega minna eitruð vegna breytileika í pH. Inni í frumuhimnunni eru þær jákvætt hlaðnar og í blóðrásinni hafa þær óhlaðna eiginleika. BNT162b2 bóluefni inniheldur katjónískt lípíð ALC-0315 en mRNA-1273 samanstendur af SM-102; við lágt pH eru bæði lípíðin prótóneruð sem myndar auðveldlega flókið með mRNA. Straumur af mRNA í vatni er blandaður saman við lípíðblöndu í etanóli með því að nota örvökvabúnað. Til að fanga neikvætt hlaðið mRNA sameinast þættir þessara tveggja strauma fljótt og mynda nanóagnir [75]. Fyrir BNT162b2 bóluefnið eru mólhlutföll katjóníska lípíðsins: PEG-lípíðs: kólesteróls: DSPC (46.3:1.6:42.7:9.4) og fyrir mRNA-1273 er það (50:1.5:38.5:10). Nanóagnirnar eru með þvermál 80–100 nm og um það bil 100 mRNA sameindir eru til staðar fyrir eina lípíð nanóögn [73].

5.4.2. Pólýetýlen glýkól (PEG) lípíð

Til að tryggja stöðugleika kvoða og koma í veg fyrir próteinbindingu við nanóögnina eru pólýetýlen glýkól lípíð notuð. Þeir veita lengri kerfisbundna blóðrás með því að lágmarka úthreinsun nanóagnanna. LNP getur valdið líkamlegri samloðun í lausninni, sem getur aukið kornastærð LNPs, og PEG lípíð geta sigrast á hugsanlega jafnvel ótímabærri losun á hjúpuðu mRNA vandamálinu. Þar að auki mun geymslustöðugleiki LNPs einnig aukast [76].

5.4.3. Kólesteról

Fyrir flutning frumna og til að koma á stöðugleika LNPs hefur kólesteról mikilvægt hlutverk. Lægra umbreytingarhitastig næst þegar innihald kólesteróls er aukið í LNP, þetta mun hjálpa til við að losa mRNA frá LNP og flutning þess yfir leghimnu [77]. Í rannsókn sem gerð var af Zhang et al., voru breytt lípósóm mótuð með því að nota kólesteról-breytt katjónískt peptíð DP7 ásamt Dioleoyl-3- trímetýlammoníum própani (DOTAP) sem burðarefni fyrir mRNA afhendingu. Fitusómin voru unnin með filmuvökvunartækni og síðan metin með tilliti til flutningsvirkni þeirra. In vitro leiddu transfemingarrannsóknir í ljós aukningu á transfection skilvirkni með aukningu á styrk DP7 peptíðs. Auk þessa sýndu æxlisrannsóknir in vivo að flókið hafði betri virkni gegn æxlinu [78].

5.4.4. Önnur hjálparefni

mRNA bóluefnin eru samsett úr stöðugleika td. Trómetamín, sem jafnar til að viðhalda pH 7–8, sölt: Hjálpar til við að koma jafnvægi á sýrustig líkamans, sykur sem hjálpar sameindunum að viðhalda lögun sinni við frystingu, virkar sem frostvörn og viðheldur langtímastöðugleika lípíð nanóagna-mRNA samsetningar. [73]. Samantekt á helstu innihaldsefnum sem notuð eru í mRNA-byggð bóluefni er að finna í töflum 2 og 3.

Tafla 2. Lykilefni sem notuð eru í bóluefni sem byggjast á mRNA.

Tafla 3. Innihaldsefni fyrir Pfizer og Moderna mRNA bóluefni.

5.5. Annað afhendingarkerfi fyrir mRNA

5.5.1. Fjölliða nanóagnir

Hægt er að búa til fjölliða nanóagnir úr tilbúnum eða náttúrulegum fjölliðum eins og PLGA [pólý (mjólkur-kó-glýkólsýra)], kítósan, PLA (fjölmjólkursýra), pólýkaprólaktón, gelatín og pólý-alkýl-sýanókrýlöt. Þessar fjölliða nanóagnir geta hjúpað vatnsfælin og vatnssækin efnasambönd og prótein, langt geymsluþol; og getur breytt afhendingu lækningaefnasambanda. RNA er hægt að hjúpa í sjálfsamsettum katjónískum fjölliðum með vatnsfælinum breytingum [80,81].

5.5.2. Katjónísk nanófleyti

Katjónísk nanófleyti hefur verið sannað sem áhrifaríkt flutningstæki til að afhenda kjarnsýrur. Katjónísk lípíð sem eru til staðar í nanófleytunum eru mikilvæg fyrir fléttur með kjarnsýru í gegnum rafstöðueiginleikar og bæta flutningsskilvirkni kjarnsýru og stöðugleika hennar. Rannsóknir sýna að mRNA katjónísk nanófleyti afhendingarkerfið eykur ónæmissvörun með því að fá ónæmisfrumur og hvetja frumuviðbrögð við mótefnum og T-prímatum í tiltölulega litlum skömmtum [80,82].

5.5.3. Kísil nanóagnir

Mesoporous kísil nanóagnir samanstanda af myndlausu kísilfylki með vel raðað gropi á mesoporous sviðinu. Þessar nanóagnir hafa stór yfirborðsflöt með stórum holurúmmáli og auðvelt er að breyta yfirborði þeirra með ákveðnum jákvætt hlaðnum hlutum til að flytja neikvætt hlaðið RNA á áhrifaríkan hátt. Þar að auki getur markviss sending RNA verið möguleg með því að tengja sérstaka bindla á yfirborðið [81]. Samkvæmt rannsókn sem gerð var af Adam o.fl., var mótað nefbóluefni sem byggir á umbreyttu porous silicon microparticle (mPSM) fyrir COVID-19. Samsetningin leiddi til aukningar á T-hjálparfrumum (Th1) og ónæmissvörun og mPSM olli upptöku mótefnavaka um nefferil. Í ljós kom að veirumagnið minnkaði verulega [83].

5.5.4. Kolefni og gull nanóefni

Kolefni nanórör, gull nanóagnir, nanógrafenoxíð og skammtapunktar, eru tilbúnar nanóbyggingar sem hafa einnig tilhneigingu til að skila RNA á marksvæðið og einnig vernda það gegn niðurbroti [81].

6. Áskoranir fyrir geymslu bóluefnis

Stöðugleiki og geymsluþörf eru aðal áhyggjuefni mRNA bóluefna. Stöðugleiki fer eftir þáttum eins og hjálparefnum, pH og hitastigi. COVID-19 bóluefnið frá BioNTech/Pfizer þarf að geyma við -80 ◦C og hefur allt að 6 mánuði geymsluþol, en COVID-19 bóluefnið frá Moderna þarf að geyma við -20 ◦C og hefur sama geymsluþol. BioNTech/Pfizer bóluefni krefst umbúða með þurrís við flutning. Dreifing beggja bóluefna í fátækum löndum heims er krefjandi, þar sem geyma þarf mRNA bóluefni við ofurköld hitastig. Þessar kröfur eru dýrar og á svæðum heimsins með takmarkað fjármagn er fyrirkomulag erfitt. Þróun á hitastöðugu mRNA bóluefni sem er klínískt áhrifaríkt og hægt er að geyma í lengri tíma án þess að hafa mikinn geymslukostnað í för með sér er eitt af vandamálunum. Samkvæmt ráðleggingum EMA um geymslu eru mRNA bóluefni framleidd af Moderna og BioNTech stöðug þegar þau eru fryst í allt að 6 mánuði við -25 ◦C, í allt að 30 daga við kælihita (4 ◦C) og í allt að 6 klst. við stofuhita [ 84].

7. Öryggi og verkun mRNA bóluefna

7.1. Öryggi mRNA-undirstaða bóluefna

Mat á öryggistengdum niðurstöðum var framkvæmt fyrir mRNA bóluefni. 1. stigs skammtastærð, opnar rannsóknir á mRNA-1273 voru gerðar á þátttakendum á aldrinum 18 til 70 ára eða eldri [85]. Rannsóknin var gerð í tveimur hópum þar sem þátttakendur á aldrinum 18–55 ára fengu 250 µg bóluefnisskammtinn og eldri einstaklingar fengu 25 µg eða 100 µg af skammtinum. Eftir bólusetningu komu fram staðbundnar og almennar aukaverkanir sem óskað var eftir, óumbeðnar aukaverkanir, alvarlegar aukaverkanir og þróun nýrra langvinnra sjúkdóma. Niðurstöðurnar sýndu enga þróun alvarlegra aukaverkana. Dæmigerðustu aukaverkanirnar sem greint var frá voru höfuðverkur, þreyta, vöðvaverkir, kuldahrollur og eymsli á stungustað. Sýnt hefur verið fram á að hlutleysandi mótefnamagn tengist vörn gegn ýmsum veirum í mönnum og vörn gegn SARS-CoV-2 í dýrasjúkdómum. mRNA-1273 bóluefnið hjá eldri fullorðnum framleiddi mikið magn af bindandi og hlutleysandi mótefnum og tíma- og skammtaháð þróun var svipuð og svörun hjá yngri fullorðnum. Viðbrögðin eftir seinni bólusetninguna voru sambærileg við þau sem sáust hjá sjúklingum sem höfðu náð sér af COVID-19 og höfðu gefið líknandi sermi, þar á meðal sumir sem voru alvarlega veikir. Eldri sjúklingar sem fengu 100 µg skammt sýndu hærri mótefna- og T-frumu svörun í samanburði við þá sem fengu 25 µg og svörunin var eins og viðbrögðin hjá þátttakendum á aldrinum 18 til 55 ára sem fengu 100 µg skammtinn. Sjúklingar eldri en 56 ára þurfa að fá annan skammt af bóluefninu til að fá hlutleysandi mótefni. Þegar örvunarskammtur er færður hækka mótefnatítrar hratt. Lykilöryggisniðurstöður Moderna og Pfizer bóluefna sem komu fram í ýmsum klínískum rannsóknum hafa verið taldar upp í töflu 4.

Tafla 4. Rannsóknir á öryggi og verkun mRNA bóluefna í klínískum rannsóknum

Tafla 4. Frh.

Eftir seinni skammtinn af bóluefninu jukust staðbundin og almenn viðbrögð við tíðni og voru fyrst og fremst miðlungs alvarleg. Tíðni roða fannst hjá þremur þátttakendum og stóð í 5 til 7 daga. Umbeðnar almennar aukaverkanir eins og hiti og þreyta komu fram hjá eldri undirhópnum. Allar þessar niðurstöður benda til þess að aukaverkanirnar sem óskað var eftir eða óumbeðnar hafi verið vægar til miðlungs alvarlegar. Þannig var mRNA-1273 prófað frekar fyrir 2/3 stigs rannsóknir til að meta öryggi og verkun hjá stærri hópum [95]. 3. stigs klínísk rannsókn var slembiraðað, lagskipt, áhorfendablind og samanburðarrannsókn með lyfleysu, þar sem 3 0.420 sjálfboðaliðar 18 ára eða eldri tóku þátt í slembivali til að fá bóluefni (0,5 ml með 100 µg af skammtur) eða lyfleysu. Staðbundin viðbrögð í 7 daga eftir bólusetningu, almennar aukaverkanir, óvæntar aukaverkanir eftir 28 daga skammtagjöf og allar marktækar aukaverkanir voru raktar til öryggismats. Umbeðnar aukaverkanir voru ríkjandi í mRNA- 1273 í samanburði við lyfleysuhópinn (84,2%, á móti 19,8%). Sumir af þeim atvikum sem mest komu fram voru verkir á stungustað eftir bólusetningu, roði, eymsli og þrenging. Þessir atburðir voru leystir upp innan 4-5 daga eftir bólusetningu. Eftir seinni skammtinn óskaði mRNA-1273 hópurinn eftir almennum atvikum sem urðu alvarlegri. Tilvist ofnæmisviðbragða var til staðar hjá 1,5% og 1,1% þátttakenda í bóluefninu og lyfleysuhópnum, í sömu röð. Fyrir utan þessar kvartanir komu engar öryggisáhyggjur fram eftir bólusetningargjöf [106].

Þriðja skammtinn af bóluefni var nauðsynlegur vegna minnkandi verndar eftir tvær SARS CoV-2 mRNA inndælingar og tilkomu afbrigða. Eftir að þriðji skammtur af mRNA bóluefninu var gefinn fyrir fólk sem áður hafði fengið mRNA-1273 frumseríuna í 1. stigs rannsókninni, var snemma öryggi þeirra og ónæmingargeta metið. Þversniðsrannsókn sem gerð var í Napólí (Ítalíu) lagði mat á viðbúnað til að taka COVID-19 bóluefnisörvun. Í þessum hópi var samþykki örvunarskammtsins næstum 86%. Ennfremur voru eldri einstaklingar við betri heilsu eftir helstu bóluefnisseríuna, þeir sem bjuggu hjá vinum eða fjölskyldumeðlimum sem reyndust jákvætt fyrir COVID-19 og þeir sem höfðu fengið sjúkdómstengdar upplýsingar frá opinberum opinberum stofnunum tilbúnir til að fá örvunina skammtur [107].

Tvígilda bólusetningin innihélt 25 mcg af hverju mRNA-1273 og mRNA-1273.351, en örvunarbóluefnisblöndurnar innihéldu 100 mcg af mRNA-1273 og 50 mcg af mRNA-1273 .351, sem kóðar Beta afbrigði spike prótein. Þriðji skammtur af mRNA bóluefninu sýndi fullnægjandi hvarfvirkni og öryggi. Þegar borið er saman við hámarkssvörun eftir seinni skammtinn var aukning af völdum bólusetningar á bindandi og hlutleysandi mótefnatítrum við D614G, Beta og Delta afbrigði svipaðar eða meiri. Það var tekið eftir því að hlutleysandi og bindandi mótefni minnkuðu stöðugt. Hins vegar var mótefnagreining til staðar eftir 10-11 mánuði (fyrir þriðja skammt) hjá þátttakendum óháð aldri og upphafsskammti (td 25, 50, 100 og 250 µg). Verkir á stungustað, þreyta, vöðvaverkir og kuldahrollur voru algengustu aukaverkanirnar sem tilkynnt var um eftir þriðja skammtinn af mRNA bóluefninu og tíðni þessara tilvika var sambærileg meðal þriggja örvunarbóluefna (eingild frumgerð, eingild afbrigði og tvígildir hópar ). Með notkun á eingildu eða tvígildu Beta afbrigði bóluefninu, sást enginn sérstakur kostur eða ókostur í frumuviðbrögðum við epitópunum innan beta-stökkbreyttu peptíðanna. Allar þessar niðurstöður styðja núverandi tillögu um að eingild frumgerð mRNA-1273 uppörvun sé notuð til að veita víðtæka ónæmisfræðilega krossvörn milli afbrigða [95]. Samkvæmt könnun sýndi Heterologous BNT162b2 (BNT) gjöf í ChAdOx1 (ChAd)-primed þátttakendum (ChAd/BNT) óæðri ónæmingargetu en samhæfa BNT gjöf (bæði prime og örvunarefni voru BNT bóluefni, BNT/BNT), með þolanlega hvarfgetu og meiri T frumu svörun. Í samanburði við einsleita ChA dOX1 bólusetningu (ChAd/ChAd), olli ólík ChAd/BNT bólusetning sterkari ónæmingargetu (ChAd/BNT vs. ChAd/ChAd, mótefnatítrahlutfall: 9,2) [108].

1. stigs rannsókn fyrir BNT162b2 var gerð á 76 þátttakendum; þeim var slembiraðað til að fá 10 µg, 30 µg og 100 µg bóluefnisskammta og hinn hópurinn fékk lyfleysu. 58,3% einstaklinga sem fengu 10 µg og 100% af 30 µg og 100 µg fundu fyrir umbeðnum staðbundnum verkjum á stungustað eftir fyrsta skammtinn. Alvarleiki allra staðbundinna viðbragða var væg til í meðallagi alvarleg. Þreyta og höfuðverkur í BNT162b2 voru algengir almennir atburðir. Að auki sáust kuldahrollur, vöðvaverkir og liðverkir. Við aukna skammta var meira greint frá almennum tilfellum eftir að seinni skammturinn var gefinn. Alls tilkynntu 50,0 prósent þátttakenda sem fengu annað hvort 10 eða 30 g af BNT162b1, 58,3 prósent einstaklinga sem fengu 100 g af BNT162b1 og 11,1 prósent þeirra sem fengu lyfleysu að þeir hafi upplifað aukaverkanir. Engar alvarlegar aukaverkanir voru tilkynntar [109].

Í klínískri rannsókn á Pfizer/BioNTech bóluefninu (BNT162b2) sem var fjölþjóðleg, lyfleysustýrð, áhorfendablind, slembiraðað og lykilverkunarrannsókn, var 43.548 þátttakendum 16 ára eða eldri úthlutað af handahófi. Alls fengu 21.720 sjálfboðaliðar 30 µg í hverjum skammti af BNT162b2 og 21.728 með lyfleysu. Til að ákvarða öryggissnið BNT162b2 einkenna eins og sársauka á stungustað, sem er til skamms tíma, vægur til í meðallagi mikill ef um alvarleika var að ræða, var þreyta og höfuðverkur metinn. Tvær inndælingar af BNT162b2 eða lyfleysu voru gefnar öllum þátttakendum, samkvæmt slembivali með 21 dags millibili, í axlarvöðva [98]. Fleiri var tilkynnt um staðbundin viðbrögð hjá þeim sem fengu BNT162b2 bóluefnið samanborið við lyfleysuhópinn. Vægur til miðlungs sársauki á stungustað var algengasta kvörtunin sem skráð var hjá þeim sem fengu BNT162b2 innan viku. Greint var frá alvarlegum verkjum hjá innan við 1% íbúanna. Sársauki sást minna hjá eldri þátttakendum en hjá þeim yngri. Roði eða þroti sást minna. Eftir gjöf seinni skammtsins var minna tilkynnt um staðbundin viðbrögð [110].

Yngri þátttakendur sem fengu bóluefnið fundu fyrir fleiri altækum atvikum en eldri viðtakendur. Þreyta og höfuðverkur (59% og 52%) voru algengustu tilvikin og mjög minna bólusettir einstaklingar (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Virkni mRNA bóluefna

Fyrir mat á virkni mRNA-1273 voru aðalendapunktar bóluefnisins virkni til að koma í veg fyrir einkenna COVID-19 sýkingu eftir 14 daga af öðrum skammti af bóluefninu. Sem aukaendapunktur var notuð til að koma í veg fyrir alvarlega COVID-19 sýkingu með þrálátum einkennum. Niðurstöður eftir bólusetningu sýna að 11 tilfelli af COVID-19 voru í bólusetta hópnum og 185 tilfelli í lyfleysuhópnum, sem gefur til kynna 94,1% virkni mRNA-1273 bóluefnisins til að meðhöndla COVID með einkennum-19 . Fyrir aukaendapunkta verkunar var mat á því að koma í veg fyrir alvarlegt COVID-19 framkvæmt. Niðurstöðurnar bentu til 100% virkni bóluefnisins þar sem 30 þátttakendur með veirusýkingu voru í lyfleysuhópnum. Rannsókn sem gerð var í Katar sýndi bóluefnisvirkni (VE) mRNA-1273 95.7% gegn alvarlegri, alvarlegri eða banvænri COVID-19 sýkingu. Eftir meira en eða jafnt og 14 daga af fyrsta skammtinum var virkni 88,1% á móti B.1.1.7 (alfa) afbrigðinu og var 100% eftir annan skammt. Tilkynnt var um 61,3% og 96,4% af VE eftir fyrsta og annan skammt af bólusetningu gegn B.1.351 (beta) stofninum. Þess vegna er bóluefnið mjög vel við bæði stofninn, hvort sem hann er með einkennum eða einkennalausum, og gegn hvers kyns COVID-19 sjúkrahúsvist og dauða, jafnvel eftir stakan skammt [112].

Verkun BNT162b2 bóluefnis (VE) gegn staðfestri COVID-19 sem byrjaði að minnsta kosti 7 dögum eftir seinni skammtinn hjá einstaklingum sem voru lausir við veiru- eða sermisfræðilegar vísbendingar um SARS-CoV-2 sýkingu var fyrsta aðal endapunktur. Annar aðalendapunkturinn mældi virkni þátttakenda með og án vísbendinga um fyrri sýkingu og forvarnir gegn alvarlegri COVID-19 sýkingu. Í rannsóknum með samtals 36.523 manns komu 8 tilvik af COVID-19 sem hófust 7 dögum eftir seinni skammtinn upp í bólusetningarhópnum, samanborið við 162 tilvik í lyfleysuhópnum. Þetta sýnir 95% af virkni bóluefnisins. Hins vegar sást VE gegn veirusjúkdómnum 52% á milli fyrsta og annars skammts, og það var 91% á fyrstu 7 dögum eftir skammt 2, sem náði fullkominni virkni gegn sjúkdómnum með upphaf að minnsta kosti 7 dögum eftir skammt 2. Aðeins 1 af 10 alvarlegum COVID-19 tilfellum sem sáust eftir fyrsta skammtinn átti sér stað í hópnum sem fékk bólusetninguna. Þessi athugun er í samræmi við frábæra heildarvirkni gegn öllum COVID-19 sjúklingum. Tvö tilfelli af sýkingu voru þar hjá bóluefnisþegum meðal háþrýstingssjúklinga og 44 tilvik í lyfleysuhópnum. Í þessu tilviki er greint frá 94,6% af virkni bóluefnisins hjá sjúklingum með háþrýsting. Þannig uppfyllir BNT162b2 bóluefnið bæði frum- og aukaendapunkta verkunar hjá bólusettum þátttakendum [113]. Fyrir utan SARS-CoV-2 sýkingu, með einum skammti af BNT162b2 bóluefninu, var spáð bólusetningarvirkni gegn einkennasjúkdómum með delta afbrigðinu (B.1.617.2) um 36%. Eftir tvo skammta var VE um 88 prósent [114].

cistanche plöntuaukning ónæmiskerfi

8. Reglugerðaráskoranir

Regluvísindi eru grunnurinn sem ákvarðanir eru teknar á. Meginmarkmið þess er að þróa nýjar aðferðir, verkfæri og staðla til að meta öryggi, verkun, gæði og frammistöðu eftirlitsskyldra vara á öllum stigum lífsferils þeirra [115]. mRNA bóluefni standa frammi fyrir sams konar reglugerðarhindrunum og allar aðrar tegundir bóluefna, þar á meðal þörfina á að sýna fram á öryggi og verkun í forklínískum rannsóknum, klínískum rannsóknum og eftirliti eftir markaðssetningu, auk þess að viðhalda háum staðli fyrir hráefni sem notuð eru í framleiðslu og samkvæmni í framleiðslu. Bóluefnapróf byggir að miklu leyti á áreiðanleika og endurgerðanleika ensíma, núkleótíða og línulegra DNA sniðmáta [116]. Hráefni, eins og lípíð, ætti að vera stranglega stjórnað og hreinleiki þeirra ætti að vera sannaður. Fylgja skal gildandi góðum framleiðsluháttum (cGMPs) þegar búið er til línulega DNA sniðmátið. Til að tryggja að lyfið sé í hæsta gæðaflokki er nauðsynlegt að fylgjast með hlutfalli af lokuðu og pólýadenýleruðu mRNA, fjölda stuttra umrita og tilvist tvíþátta RNA. Pólýadenýlering og lokun á 50 enda mRNA tryggja stöðugleika og skilvirka þýðingu [21]. Þýðingarskilvirkni er nátengd fjöl (A) hala [114]. Að mæla magn mRNA sem er hjúpað í ögninni og ákvarða stærðardreifingu agna er mikilvægt fyrir lyfið vegna þess að það gerir framleiðandanum kleift að tryggja einsleitni í framleiðslu. Vöktun er venjulega framkvæmt á fjölda eiginleika, þar á meðal þeim sem lúta að stöðugleika, auðkenni og ófrjósemi. Eitt af vandamálunum fyrir bóluefnisframleiðendur, eftirlitsaðila og notendur er hitastöðugleiki mRNA bóluefna [115]. Hefðbundnar bólusetningar eru gerðar álagsprófanir, þar á meðal langvarandi útsetningu fyrir hækkuðu hitastigi, til að ákvarða stöðugleika þeirra við margvíslegar geymsluaðstæður. Þetta verður einnig að fara fram fyrir mRNA bóluefni, þar sem nauðsynlegt er að meta ekki aðeins stöðugleika mRNA sameindarinnar heldur einnig varðveislu uppbyggingu bóluefnisagnarinnar sjálfrar. Heildarprófunaraðferðir fyrir einstaka mRNA íhluti í fjölþátta mRNA bóluefnum eru enn í þörf fyrir þróun. Auðkenning kjarnsýrubóluefnis ræðst af röð þess. Almennt séð nægir röð fyrsta DNA plasmíðsins sem notað er sem sniðmát fyrir mRNA bólusetningar. Þetta er vegna þess að DNA er samstundis þýtt yfir í RNA. Ekki er vitað að raðgreining á mRNA, hvorki beint né með því að breyta því í cDNA og síðan raðgreiningu á því DNA, veitir frekari upplýsingar. Jafnvel þó að villuhlutfall RNA-pólýmerasa sé umtalsvert hærra en DNA-pólýmerasa, væri uppgefið villuhlutfall 1 villu á 104–105 núkleótíðum erfitt að greina í RNA vegna tilviljunarkenndar villanna. Byggt á núverandi rannsóknum sem benda til þess að mRNA bóluefni veiti verndandi ónæmi í dýralíkönum, virðist þessi villutíðni ekki breyta myndun ónæmisvaldandi mótefnavaka. Hægt er að framkvæma magn fitu með LC-MS/MS [116]. Ef próteinið er þýtt of hratt getur verið að það sé ekki brotið á viðeigandi hátt í virkan mótefnavaka, sem getur haft þær óviljandi afleiðingar að lækka virkni bóluefnisins.

9. Umræður

Árið 2021 vöktu mRNA bóluefni athygli fyrir mikilvæga stöðu sína í viðbrögðum lyfjaiðnaðarins við COVID-19. Ólíkt hefðbundnum veirubóluefnum, sem nota veikt afrit af veirum sem ekki endurtaka sig, til að sýna mótefnavaka og kalla fram ónæmissvörun, notar mRNA aðferðin bjartsýni einþátta mRNA sameindir sem geta veitt líffræðilega örvun. Þegar þú hefur fengið bóluefnið munu frumurnar taka það inn, „lesa“ mRNA röðina og framleiða topppróteinið. Þar sem líkama þinn skortir prótein sem líkjast þessum toppi túlkar ónæmiskerfið það sem skaðlegt og gerir árás á hann. Að auki, ef þú ert sýktur af kransæðaveirunni síðar, man ónæmiskerfið eftir topppróteininu og þekkir það jafnvel. Hinn ótrúlegi hraði sem fyrstu tvö COVID-19 bóluefnin voru þróuð og gerð aðgengileg almenningi í Bandaríkjunum styður þá hugmynd að mRNA bóluefni frá Pfizer og Moderna hafi fengið leyfi til neyðarnotkunar frá FDA í desember 2020-minna en ári eftir að kínverskir vísindamenn tilkynntu um genasamsetningu kransæðaveirunnar. Helsti ávinningurinn af mRNA-byggðri bóluefnistækni er möguleiki þeirra á að vera fljótt breytt fyrir ýmsa sjúkdóma þar sem vinnslu markmótefnavakans er „útvistað“ til hýsilfrumna, sem þýðir að aðeins erfðakóði mótefnavakans er notaður til að hanna bóluefni. frambjóðandi. Tíminn frá því að kínversk stjórnvöld skiptust á SARS-CoV-2 erfðafræðilegri uppbyggingu og þar til Moderna flutti bóluefnisframbjóðanda sinn til National Institute of Health (NIH) í Bandaríkjunum fyrir fyrsta stigs rannsóknir var aðeins 44 dagar. mRNA bóluefni bóluefnis hafa í gegnum tíðina ekki fengið eftirlitsúthreinsun til notkunar fyrir mannkynið vegna skorts á klínískum rannsóknum fyrir þessa aðferð, auk tæknilegra áskorana sem tengjast stöðugleika og dreifingu vöru. Með slíkri aukningu á mRNA bóluefnum á markaðnum er nákvæmari ráðgjöf til að hjálpa við þróun og mat á nýjum mRNA bóluefnum möguleg. Eftirlit er annað svið þar sem mRNA bóluefnisvísindi eru á frumstigi. Sem stendur eru engar opinberar leiðbeiningar frá Matvæla- og lyfjaeftirliti Bandaríkjanna eða Lyfjastofnun Evrópu um mRNA bóluefni, jafnvel þó að lyfin séu nógu örugg fyrir stórar klínískar rannsóknir.

10. Lokaorð og framtíðarhorfur

Fyrir 2020 var mRNA ekki vel þekkt vísindahugtak í bóluefnaheiminum. Meira en ár frá því að hinn skelfilega heimsfaraldur COVID-19 hófst hefur mRNA-undirstaða klínískra áætlanir orðið fyrir verulegri aukningu á stuðningi, bæði frá almenningi og frá stórum lyfjafyrirtækjum. Meira en 80 milljónir Bandaríkjamanna hafa verið bólusettar gegn SARS CoV-2-vírusnum sem veldur COVID-19, með því að nota breytilega möguleika mRNA tækninnar. „Bóluefnasviðinu hefur verið umbreytt að eilífu og að eilífu þróað vegna COVID-19,“ segir Dan Barouch, læknir, doktor, forstöðumaður Miðstöðvar fyrir veirufræði og bóluefnisrannsóknir við Harvard Medical School. Aðallega við aðstæður með COVID-19 bóluefninu er mRNA þráðurinn hannaður til að framleiða „gaddaprótein“ hins einstaka kórónavírus, sem framkallar ónæmissvörun sem gæti varið sýkingu af raunverulegu vírusnum. Bóluefnin sem hafa verið þróuð af Moderna og Pfizer/BioNTech hafa verið einu mRNA-byggðu bóluefnin til að fá neyðarsamþykki frá helstu eftirlitsaðilum og raunverulegar vísbendingar frá hnattrænni COVID-19 kynningu myndu skipta sköpum til að sanna langtímavirkni þeirra og öryggiseiginleikar gegn kransæðaveirunni og sumum öðrum veiruefnum. Exosome-undirstaða mRNA sending mun einnig vera framtíð mRNA-undirstaða lækninga [117,118]. Aðallega með vísbendingar um mRNA-byggða tækni sem kemur í ljós þegar byrjað er að beita þessum fyrstu kynslóðar bóluefnum á heimsvísu, nú er uppsveifla í mRNA klínískum rannsóknum fyrir smitsjúkdóma og vísindamenn í iðnaði sjá fram á aukinn áhuga á mRNA vettvangi fyrir önnur lækningasvið , sérstaklega krabbameinsfræði, en jafnvel sjaldgæfar sjálfsofnæmissjúkdómar og taugafrumugen.

Heimildir

1. HVER. Mælaborð WHO Coronavirus (COVID-19) 2023. Aðgengilegt á netinu: https://covid19.who.int/ (skoðað 17. janúar 2023).

2. Pal, R.; Yadav, Bandaríkin COVID-19 heimsfaraldur á Indlandi: Núverandi sviðsmynd og bratt klifur framundan. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alexander, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: Tilkoma, útbreiðsla, hugsanlegar meðferðir og alþjóðleg byrði. Framan. Lýðheilsa 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Áhrif COVID-19 á krabbameinshjálp: uppfærsla. Bóluefni 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): Bókmenntarýni. J. Infect. Lýðheilsa 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Chavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Aldraðir íbúar og ónæmisbældir sjúklingar: Áhrif á SARS-CoV-2 afbrigði og meðferðarárangur. Líffræði 2022, 2, 165–170. [Krossvísun]

7. Chavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Immunopeptidomics og aðrar ónæmisfræðilegar rannsóknir. Bóluefni 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO SARS-CoV-2 bólusetningaraðferðir: Alhliða endurskoðun á 3. áfanga umsækjendum. Npj Vaccines 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Sun, A.; Ba, DM; Nunez, J.; Foreldri, LJ; Chinchilli, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Virkni bóluefnis gegn sýkingum, einkennum og alvarlegum COVID-19: Kerfisbundin endurskoðun og meta-greining. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [Krossvísun]

10. Chavda, VP; Vora, LK; Vihol, DR COVAX-19® bóluefni: Lokar algjörlega vírussendingum til einstaklinga sem ekki eru ónæmir. Clin. Viðbót Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [Krossvísun]

11. Chavda, VP; Vora, LK; Pandya, AK; Patravale, VB Innrennslisbóluefni fyrir SARS-CoV-2: Frá áskorunum til möguleika í COVID-19 stjórnun. Drug Discoverv. Í dag 2021, 26, 2619–2636. [Krossvísun]

12. Kaur, SP; Gupta, V. COVID-19 bóluefni: Alhliða stöðuskýrsla. Virus Res. 2020, 288, 198114. [Krossvísun]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Yfirferð yfir COVID-19 bóluefni samþykkt í Bandaríkjunum í neyðartilvikum. J. Clin. Med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Real-World Effectiveness of COVID-19 Vaccines: A Literature Review and Meta-Aalysis. Alþj. J. Infect. Dis. 2022, 114, 252–260. [Krossvísun]

15. Alagoz, O.; Sethi, AK; Patterson, BW; Churpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. Áhrif bólusetningar til að stjórna COVID-19 byrði í Bandaríkjunum: Simulation Modeling Approach. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [Krossvísun]

16. Cromer, D.; Steinn, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, AK; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, þingmaður hlutleysandi mótefnatítra sem spá um vörn gegn SARS-CoV-2 afbrigðum og áhrifum eflingar: safngreining. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [Krossvísun]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; o.fl. COVID-19: Uppfærslur á þróun bóluefnis gegn kransæðaveiru. Framan. Immunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID-19 bólusetningarframleiðendur og nanótæknihönnun þeirra. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, NA Messenger RNA-undirstaða bóluefni: Fortíð, nútíð og framtíðarleiðbeiningar í tengslum við COVID-19 heimsfaraldurinn. Adv. Drug Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; o.fl. Alvarlegt bráða öndunarfæraheilkenni-kórónaveiru-2 bóluefni (S) bóluefni sem byggir á próteini: stöðu tækni og framtíðarhorfur. Séra Med. Virol. 2021, 31, e2183. [Krossvísun]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, RH MRNA bóluefni gegn COVID-19: Hvað, hvers vegna og hvernig. Alþj. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [Krossvísun]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Söngur, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; o.fl. Ný kórónavírus frá sjúklingum með lungnabólgu í Kína, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, MÍN; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Uppbygging, líffræði og uppbyggingarbundin meðferðarþróun. Framan. Cell. Smitast. Örverur. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, VP; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Nucleic Acid Vaccines for COVID-19: A Paradigm Shift in the Vaccine Development Arena. Líffræði 2021, 1, 337–356. [Krossvísun]

25. Chavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. DNA bólusetningar fyrir SARS-CoV-2: Toward Third-Generation Vaccination Era. Sérfræðingur séra bóluefni 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Byggingarlíffræði SARS-CoV-2 og afleiðingar fyrir meðferðarþróun. Nat. Séra Microbiol. 2021, 19, 685–700. [Krossvísun]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK Host ónæmissvörun og ónæmislíffræði SARS-CoV-2 sýkingar í mönnum. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [Krossvísun]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Advanced bóluefnafræði menntun: Landmótun vöxtur þess og alþjóðlegt fótspor. Bóluefni 2020, 38, 4664–4670. [Krossvísun]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Prime-Boost bóluefnisáætlun gegn veirusýkingum: Aðgerðir og ávinningur. Bóluefni 2016, 34, 413–423. [Krossvísun]

30. Chen, JM Ætti heimurinn að vinna bráðlega að því að þróa vanrækt lifandi veikt bóluefni gegn COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [Krossvísun]

31. Chavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. The Vaccine World of COVID-19: Framlag Indlands. Bóluefni 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Bae, YS COVID-19 bóluefni (endurskoðað) og munnslímhúðvektorkerfi sem hugsanlegur bóluefnisvettvangur. Bóluefni 2021, 9, 171. [Krossvísun]

33. Lesser, K.; Whittaker, GR Bólusetning gegn COVID-19: Viðmið í lýðheilsu og vírussendingum. Lýðheilsa 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. Er örvunarskammtaáætlun nægjanleg fyrir Omicron afbrigði af SARS-CoV-2? Vaccines 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Eftirlíking af veiruvektorsbundnum bóluefnum fyrir COVID-19: Potential Avenue í Vaccination Arena. Veirur 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID-19 bólusetningarhönnun og bólusetningaráætlun fyrir nýjar afbrigði. Sérfræðingur Rev. Vaccines 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. Chavda, VP; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Nýleg endurskoðun á COVID-19 stjórnun: Greining, meðferð og bólusetning. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [Krossvísun]

38. Chavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uversky, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 og bólusetning: Goðsögn vs vísindi. Sérfræðingur séra bólusetningar 2022, 21, 1603–1620. [Krossvísun]

39. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. Delta og Omicron afbrigði af SARS-CoV-2: Það sem við vitum hingað til. Bóluefni 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. DNA bólusetningar: Að þróa nýjar aðferðir gegn krabbameini. J. Biomed. Líftækni. 2010, 2010, 174378. [Krossvísun]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Söngur, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; o.fl. Samhliða bólusetning með CHIKV VLP og DNA bóluefnum veldur vænlegri húmorsvörun í músum. Framan. Immunol. 2021, 12, 925. [Krossvísun]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Öryggi og samanburðar ónæmingargetu HIV-1 DNA bóluefnis í samsettri meðferð með plasmíð interleukin 12 og áhrif raforvunar í vöðva fyrir afhendingu. J. Infect. Dis. 2013, 208, 818–829. [Krossvísun]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, VP; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Nanoparticle-Based Delivery Systems for bóluefni. Vaccines 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. MRNA bóluefni: Fortíð, nútíð, framtíð. Asíski J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. The Tangled History of MRNA Vaccines. Náttúra 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined In Vivo Notkun RNA leiðir til örvunar á sértækum frumudrepandi T eitilfrumum og mótefnum. Eur. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [Krossvísun]

47. Kose, N.; Refur, JM; Sappapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; o.fl. Lípíð-hjúpað MRNA sem kóðar mögulega hlutleysandi einstofna mótefni úr mönnum verndar gegn Chikungunya sýkingu. Sci. Immunol. 2019, 4, eaaw6647. [Krossvísun]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. MRNA-undirstaða meðferðarfræði-Þróun nýs flokks lyfja. Nat. Séra Drug Discoverv. 2014, 13, 759–780. [Krossvísun]

49. Moss, P. T frumu ónæmissvörun gegn SARS-CoV-2. Nat. Immunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Breytingar í neyðartilvikum: Hlutverk N1-metýlpseudúridíns í COVID-19 bóluefnum. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [Krossvísun]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; o.fl. Virkni og öryggi CVnCoV SARS-CoV-2 MRNA bóluefnis í tíu löndum í Evrópu og Rómönsku Ameríku (HERALD): Slembiraðað, áheyrnarblindað, lyfleysu-stýrt, 2b/3 stigs rannsókn. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [Krossvísun]

52. Blakney, AK; Ip, S.; Geall, AJ. Uppfærsla á sjálf-magnandi MRNA bóluefni þróun. Bóluefni 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. Nýjar vonir í bóluefnistækni: mRNA bólusetningar. Örverur. Bul. 2021, 55, 265–284. [Krossvísun]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Loforð um MRNA bóluefni: Líftækni og iðnaðarsjónarmið. Npj Vaccines 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Blóm, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Sjálfmagnandi RNA bóluefni fyrir smitsjúkdóma. Gen. Þr. 2021, 28, 117–129. [Krossvísun]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Meginreglur um hönnun á besta MRNA lípíð nanóagna bóluefni. Curr. Opin. Líftækni. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. In Vitro Evolution of Enhanced RNA Replicons for Immunotherapy. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Að sníða MRNA bóluefni til að koma jafnvægi á meðfædd/aðlögunarhæf ónæmissvörun. Trends Mol. Med. 2020, 26, 311–323. [Krossvísun]

59. Dæmi, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR hönnun og spá um afbrigðiáhrif frá gríðarlega samhliða þýðingarprófi. Nat. Líftækni. 2019, 37, 803–809. [Krossvísun]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, sjónvarpshömlun á þýðingum IFIT fjölskyldumeðlima ræðst af getu þeirra til að hafa valin samskipti við 50 -endasvæði Cap0-, Cap1-og 50 Ppp-MRNA. Nucleic Acids Res. 2014, 42, 3228–3245. [Krossvísun]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; o.fl. Höfuðhliðstæður breyttar með 1,2-díþíódífosfathluta Vernda MRNA gegn afhjúpun og auka þýðingarmöguleika þess. Nucleic Acids Res. 2016, 44, 9578–9590. [Krossvísun]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; o.fl. MRNA Cap hliðstæður skipt út í tetrafosfatkeðjunni með CX2: Auðkenning O-til-CCl2 sem fyrsta brúarbreytingin sem veitir mótstöðu gegn afhjúpun án þess að skerða þýðingu. Nucleic Acids Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Tales of Detailed Poly (A) hala. Trends Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Skipulagsreglur nýliðunar heilkjörnungaríbósóma. Annu. Séra Chem. 2019, 88, 307–335. [Krossvísun]

65. Pascolo, S. Stóri boðskapur sendiboðans um bólusetningu. Sérfræðingur séra bóluefni 2014, 14, 153–156. [Krossvísun]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC MRNA bóluefnisframleiðsla: áskoranir og flöskuhálsar. Bóluefni 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: The Inexpensive Biopharmaceutical. J. Fjölgreina. Eng. Sci. Tækni. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Roman, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. The COVID-19 bóluefnisþróunarlandslag. Nat. Séra Drug Discoverv. 2020, 19, 305–306. [Krossvísun]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA sem umbreytandi tækni til að þróa bóluefni til að stjórna smitsjúkdómum. Mol. Þr. 2019, 27, 757–772. [Krossvísun]