MiR-214 bætir bráðan nýrnaskaða af völdum blóðsýkingar með PTEN/AKT/mTOR-stýrðri sjálfsát
Feb 28, 2022
Ágrip. Fyrri rannsóknir hafa bent til þess að oxunarálag og sjálfsát hafi í för með sér bráðanýrnaskaða (AKI) við blóðsýkingu og microRNA (miR)-214 gegnir mikilvægu hlutverki í verndunnýruverða fyrir oxunarálagi. Þessi rannsókn miðar að því að prófa hvort endurvörn miR-214 tengist sjálfsát í blóðsýkingu. Hlutverk sjálfsáts var rannsakað í múslíkani af hálsbindi og stungu (CLP). Reverse-umscription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) var notað til að greina tjáningu miR-214. Uppbygging og virkninýruvoru fengnar úr músunum metnar.NýraSjálfsáhrif mældust með ónæmisvefjaefnafræðilegum, ónæmisflúrljómandi og Western blotting. Í ljós kom að miR-214 gæti dregið úr AKI í rotþróa músum með því að hindra magnnýrusjálfsáhrif. Ennfremur hamlaði miR-214 sjálfsát með því að þagga niður PTEN tjáningu ínýruvefi rotþróamúsa. Þessar niðurstöður bentu til þess að miR-214 bætti CLP-framkallað AKI með því að draga úr oxunarálagi og hamla sjálfsát í gegnum stjórnun PTEN/AKT/mTOR ferilsins.
Leitarorð:microRNA-214, blóðsýking, bráður nýrnaskaði, sjálfsát, nýru
Kynning Bráðnýrnaskaða(AKI) er einn af algengustu fylgikvillum blóðsýkingar og kemur fram hjá 40-50 prósentum rotþróasjúklinga, með dánartíðni allt að 60 prósent (1). Hins vegar er meingerð AKI af völdum blóðsýkingar enn óljós. Tilkynnt hefur verið um að sjálfsát gegni lykilhlutverki í blóðsýkingu af völdum blóðsýkingar og hömlun á sjálfsát hefur í för með sér þróun á blóðsýkingu við blóðsýkingu (2,3). Fyrri rannsóknir (4,5) hafa staðfest að blóðsýking veldur sjálfsát í mörgum líffærum, þ.m.t.nýru(6) og sjálfsáfallsferli taka þátt í að fjarlægja skemmda hvatbera og oxunarálag (7). Hins vegar getur of mikil sjálfsát valdið óæskilegum og skaðlegum frumudauða (8). Þess vegna er hófleg sjálfsáhrif lykillinn að því að draga úr blóðsýkingu af völdum blóðsýkingar. Fyrri rannsóknir hafa greint frá því að miR-214 bæti blóðþurrð-endurflæði af völdum AKI með því að hamla frumudauða (9) og miR-214 bælir oxunarálag í nýrnakvilla af völdum sykursýki í gegnum hvarfgjörn súrefnistegund (ROS)/AKT/mTOR merkjaleið (10). Þessi rannsókn leiddi í ljós að miR-214 getur dregið úr blóðsýkingu af völdum hjartavöðvasjúkdóma í músum með því að hindra sjálfsát (11). Hins vegar á eftir að útskýra hvort miR-214 geti bætt blóðsýkingu af völdum blóðsýkingar. Í þessari rannsókn var sú tilgáta sett fram að miR-214 dragi úr CLP-völdum AKI með því að draga úr oxunarálagi og hamla sjálfsát í gegnum stjórnun PTEN/AKT/mTOR ferilsins.
CISTANCHE mun bæta nýrna-/nýrnasjúkdóm
efni og aðferðir
Dýr.Alls voru 100 Kunming karlkyns mýs (þyngd, 20,40±2,92 g; aldur, 6-8 vikur) frá Medical Laboratory Animal Center við Hebei Medical University (Shijiazhuang, Kína) notaðar í þessari rannsókn. Allar mýsnar voru aðlagaðar við 12 klst ljós/myrkur hringrás við 24˚C með 50 prósent raka og fengu ókeypis aðgang að mat og vatni við meira en eða jafnt og 1 viku fyrir tilraunirnar. Allar tilraunaaðgerðir voru gerðar í ströngu samræmi við viðmiðunarreglur National Institute of Health (NIH útgáfu nr. 85-23, endurskoðuð 1996) og samþykki dýraverndar- og notkunarnefnda á Cangzhou Central Hospital (samþykki nr. 2017-020-020) 01). Allar skurðaðgerðir voru gerðar undir svæfingu og reynt var að lágmarka þjáningar.
Cecal ligation and puncture (CLP).CLP var framkvæmt á músum til að búa til músasepsilíkan, eins og áður hefur verið lýst (12). Eftir svæfingu með ísóflúran innöndun (framkallað við 3 prósent og haldið við 0,5 prósent ), var skorinn 1 cm miðlínuskurður. Óvarinn cecum (1 cm fjarlægð frá endanum) var bundinn með tveimur stungum með 23-gauge nál. Cecum þrýsti varlega út lítið magn af saur og var sett aftur í líffærafræðilega stöðu sína. Kviðveggurinn var saumaður í lög með 3-0 silkifléttu. Eftir aðgerðina var 1 ml af 0,9 prósent saltvatni sprautað undir húð. Músunum var aðeins veittur ókeypis aðgangur að vatni. Sham líkan mýs voru reknar á sama hátt og CLP líkanið án CLP.
Tilraunahönnun. Mýs (n=6 fyrir sýndaraðgerðir og CLP) var skipt af handahófi í sjö hópa: Sýndarhópur, CLP hópur, adenovirus (Ad)-grænt flúrljómandi prótein (GFP) auk CLP hópur, Ad-miR-214 auk CLP hópur , and-miR-214 plús CLP hópur, PTEN hemlar plús CLP hópur og Ad-miR-214 plús PTEN hemlar plús CLP hópur. Sham-hópamýsnar voru útsettar fyrir sömu aðferð en án bindingar og gata á cecum. Mýs í hinum hópunum fengu hálsbindingu og götun. Allar mýsnar voru fljótt svæfðar með isoflurani innöndun til að safna blóði, þvagi ognýrusýni 24 klst eftir síðustu meðferð.
Adenovirus miðlað Ad-miR-214, anti-miR-214 eða Ad-GFPgenaflutningur in vivo og innspýting PTEN hemla. Ad-miR-214, anti-miR-214 eða Ad-GFP (Shanghai GenePharma Co., Ltd.) var afhent í kviðarhol músa 4 dögum fyrir CLP. Í stuttu máli voru mýs svæfðar með ísóflúran innöndun. Leggur sem innihélt 200 µl af adenóveiru (2x1011 pfu, sem tjáir miR-214, anti-miR-214 eða Ad-GFP) var gefið venjulegum músum með inndælingu í kviðarhol. PTEN hemillinn (VO‑OHpic, í kviðarhol, Sigma-Aldrich; Merck KGaA) var gefinn CLP músum sem höfðu fengið and-miR-214 með inndælingu í kviðarhol í einum 10 µg/kg skammti 30 mínútum fyrir gjöf adenoveiru .
Mat á nýrnastarfsemi. Blóðsýni voru tekin úr músahjarta, fylgt eftir með skilvindu (við stofuhita í 15 mínútur við 3,000 xg) til að safna sermi. Sermisþéttni þvagefnis köfnunarefnis í blóði (BUN) og kreatíníns í sermi (Cr) var ákvarðað með Hitachi 7600 sjálfvirkum greiningartæki (Hitachi, Ltd.). ELISA var notað til að greina magn afnýrnaskaðasameind-1 (KIM-1; cat. no. RKM100; R&D Systems, Inc.) og daufkyrninga gelatínasa-tengt lípocalin (NGAL; cat. no. DY3508; R&D Systems, Inc.) í þvagsýnum.
Próf fyrir bólgusýtókín í sermi.Sermi TNF- (cat. nr. H052) og IL-6 (cat. no. H007) voru skoðuð með því að nota ELISA-sett í verslunum (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.Mæling á oxunarálagsmerkjum. Samsvarandi prófunarbúnaður (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kína) var notaður til að mæla magn malondialdehýðs (MDA) og prófa virkni súperoxíð dismutasa (SOD) í samræmi við leiðbeiningar framleiðanda.
Vefjafræði og pípulaga meiðslaskor. Allar mýs urðu fyrirnýrugegnflæði undir svæfingu 24 klst. eftir CLP. ThenýruSýni voru fest í 4 prósent paraformaldehýði í 72 klst við 4˚C. Vefsýnin voru síðan þurrkuð í röð af etanóllausnum, felld inn í paraffín og skorin í 4-µm hluta. Sneiðar (4 µm) voru skornar með míkrótómi og vefjasneiðarnar litaðar með hematoxýlíni (5 mín) og eósíni (1 mín) við stofuhita til vefjafræðilegrar skoðunar. Glerurnar voru metnar og flokkaðar með smásjá (BX51, Olympus Corporation).Nýrutissues with the following histopathological changes were judged injured: Loss of brush border, vacuolization, cast formation, tubular dilation and disruption, cell lysis and cellular necrosis. Tissue damage was checked in a blinded manner and scored by the percentage of damaged tubules: 0, no damage; 1, 0‑25; 2, 25‑50; 3, 50‑75; 4, >75 prósent (13).
Sendingar rafeindasmásjá (TEM).Fersktnýruvoru þvegin í fosfatbúðuðu saltvatni og skorin í 1 mm teninga og fest í röð í 2,5 prósent glútaraldehýði í 24 klst við 4˚C. Hlutarnir voru sökktir í 1 prósent osmíumtetroxíð í 2 klst við 4˚C, þurrkaðir í flokkuðu etanóli og felldir inn í epoxýresín. Að lokum voru ofurþunnu hlutarnir (60 nm) tvöfaldaðir litaðir með úranýlasetati og blýsítrati við 20˚C í 60 mín. Athugunin var gerð á rafeindasmásjá (Tecnai; Hitachi, Ltd.) við 80 kV með rafeindasmásjáfilmu 4489 (ESTAR þykkur grunnur; Kodak).
Ónæmisvefjaefnafræði (IHC).Fersktnýruvefir voru festir í 4 prósent paraformaldehýð (í 72 klst við 4˚C) og felldir inn í paraffín. Sýni voru skorin í 4 µm þykka hluta og afparaffínuð í xýleni. Eftir að vefjahlutar voru þvegnir með PBS voru þeir soðnir í 10 mM sítratbuffi (pH 6.0) í 4 mínútur til að endurheimta mótefnavaka og síðan lokað með 10 prósent geitasermi í PBS við stofuhita í 1 klst. Aðalmótefninu (anti-LC3B; 1:400; vörunúmer 4412; Cell Signaling Technology, Inc.) var bætt við í samræmi við leiðbeiningarnar og ræktað við 4˚C í 12 klst. Auka mótefnið (geita-antikanínu HRP; 1:2,000; vörunúmer BS13278; Bioworld Technology, Inc.) var bætt við og ræktað við stofuhita í 10 mínútur. DAB (100 µl) var bætt við og mótlitað í 5 mínútur með lituninni sem sést í ljóssmásjá (Model CX31‑P; Olympus Corporation). Styrkur jákvæðrar litunar, sem virtist brúnn, var ákvarðaður með Image-Pro Plus 6.0 myndgreiningarhugbúnaði (Media Cybernetics, Inc.). Integral optical density (IOD) var reiknaður út til að tákna styrkleikann. IOD gildi jukust eftir því sem próteintjáning jókst.
Öfug umritun - magnbundin(RT-q) PCR. Heildar-RNA var dregið úrnýrnavefeftir framköllun líkansins með því að nota TRIzol hvarfefni (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Samkvæmt leiðbeiningum TaqMan öfugumritunarsettsins (cat. nr. N8080234; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), var RNA öfugt umritað í cDNA. Eftirfarandi hitahringrásarskilyrði voru notuð (miR‑214): Upphafsdenaturation við 95˚C í 5 mínútur; fylgt eftir með 40 hringjum af eðlisbreytingu við 95˚C í 30 sekúndur, glæðing við 60˚C í 30 sekúndur og lengingu við 72˚C í 30 sek. RT-qPCR var framkvæmt með því að nota ABI Prism 7500 Sequence Detection System (PerkinElmer, Inc.) og venjulegt SYBR Green PCR sett (Toyobo Life Science). U6 var notað sem innra eftirlit fyrir miR-214. Grunnraðir voru sem hér segir: miR-214, áfram, 5'-AGCATAATACAGCAGGCACAGAC-3' og afturábak, 5'-AAAGGTTGTTCTCCACTCTCTCAC-3'; U6, áfram, 5'-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3' og afturábak, 5'-GGAACGCTTCACGAATTTG-3'. Þessar tilraunir voru endurteknar sex sinnum. Niðurstöður voru greindar með 2‑ΔΔCq aðferðinni (14). MRNA tjáningarstig LC3, p62, PTEN, AKT og mTOR voru metin með RT-qPCR. Með ‑aktín sem innri viðmiðun þessara gena var 2‑ΔΔCq notað til að mæla hlutfallslega tjáningu markgena. Grunnraðirnar sem sýndar eru í töflu I voru smíðaðar af Sangon Biotech Co., Ltd.
Western blotting. Nýravefjum var blandað saman við RIPA lýsati (Beyotime Institute of Biotechnology) til að gera einsleitan og leysingu var hætt þegar enginn sjáanlegur vefur sást. Sýnin voru skilin í skilvindu við 13,000 xg í 10 mínútur við -4˚C og flotið var endurheimt fyrir Western blot greiningu. Í stuttu máli var styrkur próteins ákvarðaður með því að nota micro BCA próteinprófunarbúnaðinn (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Próteinsýni (80 µg á sýni) voru skilin að með því að draga úr 12 prósent natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamidegel rafdrætti og síðan flutt yfir á pólývínýliden tvíflúoríð himnur við 4˚C yfir nótt. Aðskilin prótein voru flutt yfir á PVDF himnur. Eftir lokun í 5 prósenta undanrennu við stofuhita í 2 klst, voru himnur ræktaðar yfir nótt (við 4˚C) með frummótefnum. Eftirfarandi aðal mótefni (öll Cell Signaling Technology, Inc.) voru notuð: Létt keðja 3B (1:1,000; vörunúmer 4412), p62 (1:1,000; köttur . nr. 4412), Anti-PTEN (1:1,000; cat. nr. 9188), and-fosfórýleruð (p)-AKT (Ser473) (1:1,000; köttur . nr. 4060), anti-AKT (1:1,000; vörunúmer 9272), anti-p-mTOR (Ser 2448) (1:1,000; vörunúmer nr. . 5536), and-mTOR (1:1,000; vörunúmer. 2972) og -aktín (1:2,000; vörunúmer. 4970). Eftir þvott voru himnurnar ræktaðar (við stofuhita í 2 klst) með HRP-tengdum aukamótefnum gegn kanínum (1:3,000; vörunúmer A0208; Beyotime Institute of Biotechnology). Próteinbönd voru greind með Immobilon Western (MilliporeSigma) og greind með Total-Lab TL120 hugbúnaði (Nonlinear Dynamics, 2.01). Tjáning próteins var staðlað í -aktín.
Tölfræðigreining. Tölfræðileg greining var gerð með því að nota GraphPad Prism 9.0 (GraphPad Software, Inc.). Öll gögn voru sett fram sem meðaltal ± staðalfrávik eða miðgildi (millikvartilasvið) fyrir samfelldar breytur, allt eftir dreifingu þeirra. Grunneinkenni og niðurstöður voru bornar saman með því að nota einhliða ANOVA og fylgt eftir með Tukey's posthoc prófi, eða Kruskal-Wallis prófi fylgt eftir með Dunn's prófi eftir því sem við á. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Niðurstöður
Tímapunktur 24 klst. eftir CLP. Fyrri rannsóknir hafa greint frá (6,15,16) að lífefnafræðileg (þ.e. LC3 og p62) greining leiði í ljós að sjálfsátsflæði er bælt með versnun blóðsýkingar eftir 6-8 klst. CLP. Í þessari rannsókn er fjöldi autolysosomes ínýruCLP-meðhöndluðum músum fjölgaði innan 24 klst. eftir aðgerð. Að auki er greining á merkjum ánýrnaskaðasýndi þaðnýrnastarfsemivar alvarlegastur 24 klst. eftir CLP. Þess vegna var tímapunkturinn 24 klst eftir CLP valinn fyrir eftirfarandi tilraunir.
Stjórnunaráhrif á miR-214 í nýrnavef. RT-qPCR greining var notuð til að greina miR-214 tjáningu í CLP-meðhöndluðum músum. Það kom í ljós að miR-214 tjáning var örlítið uppstillt ínýruvefjum eftir CLP skurðaðgerð 24 klst. samanborið við sýndarhópinn (1,47-falt, P<0.01, fig.="" 1a).="" the="" present="" study="" examined="" the="" reactive="" increase="" in="" mir‑214="" expression="" during="" sepsis="" as="" a="" compensatory="" protective="" mechanism.="" therefore,="" it="" evaluated="" the="" role="" of="" mir‑214="" in="" aki="" during="" sepsis="" by="" regulating="" its="" expression.="" as="" shown="" in="" fig.="" 1b,="" ad‑mir‑214="" increased="" mir‑214="" expression="" by="" 4.13‑fold="" 4="" days="" after="" intraperitoneally="" injecting="" 2x1011="" pfu/mice="" adenovirus,="" whereas="" anti‑mir‑214="" decreased="" mir‑214="" expression="" by="" 81.16%="" in="" the="">nýruvefjum, samanborið við sýndarhópinn (bæði P<0.01). by="" contrast,="" ad‑gfp="" as="" a="" control="" group="" did="" not="" affect="" mir‑214‑3p="" expression,="" compared="" with="" the="" sham="" group="" (both="" p="">0.05).
CISTANCHE mun bæta nýrna-/nýrnabilun
Áhrif miR-214 á skerta nýrnastarfsemi í rotþróa músum.Öllum músum var fórnað til að safna blóði, þvagi ognýrusýni 24 klst. eftir CLP aðgerðina. BUN og Cr eru mikilvægar vísbendingar um alvarleikanýruskerðing (17). Ennfremur hafa NGAL og KIM-1 verið auðkennd sem sérstök lífmerki fyrirnýrnaskaðaog aukin tjáning þeirra tengist snemmanýrupípulaga áverka í AKI (17). Eins og sýnt er á mynd 2A-D var magn BUN, Cr, KIM-1 og NGAL marktækt aukið eftir CLP skurðaðgerð samanborið við sýndarhópinn. Hins vegar lækkaði Ad-miR-214 verulega BUN, Cr, KIM-1 og NGAL gildi í samanburði við CLP hópinn (allir P<0.01), whereas="" anti‑mir‑214="" exhibited="" opposite="" effects="" in="" these="">nýrnastarfsemibreytur. Hins vegar, eftir formeðferð með PTEN hemli, jukust verndaráhrif Ad-miR-214. Niðurstöðurnar sýna að miR-214 dregur úr nýrnastarfsemi í rotþróa músum.
Áhrif miR-214 á nýrnabólgu og oxunarálag.Eins og sést á mynd 3A og B, hækkaði CLP marktækt magn TNF- og IL-6, en Ad-miR-214 lækkaði marktækt magn þessara merkja. Í samanburði við
Áhrif miR-214 á sjálfsáhrif nýrna í rotþróa músum.Þessi rannsókn skoðaði breytingar á LC3 ínýruvefjum með IHC litun. Eins og sýnt er á mynd 6, jókst LC3 styrkleiki jákvæðrar litunar verulega í CLP hópnum samanborið við sýndarhópinn (P<0.01) due="" to="" the="" activated="" autophagy.="" the="" expression="" level="" of="" lc3="" was="" lower="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group="" and="" higher="" in="" the="" anti‑mir‑214="" group="" in="" comparison="" with="" the="" clp="" group=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" pten="" inhibitor="" enhanced="" the="" inhibition="" of="" autophagy="" effect="" of="">
miR-214 virkjar AKT/mTOR ferlið til að hindraautophagy með því að þagga niður PTEN í nýrnavef.Áhrif CLP á sjálfsát ínýruvefir voru rannsakaðir með því að meta magn LC3-II/I og p62. PTEN/AKT/mTOR merkjaleiðin gegnir mikilvægu hlutverki í sjálfsát (18). Til að kanna áhrif miR-214 á PTEN-AKT/mTOR ferlið voru próteinmagn LC3-II/I, p62, AKT, p-AKT, mTOR, p-mTOR og PTEN greind með Western blotting og RT- qPCR greiningu. Eins og sýnt er á mynd 7A-C, eiga sér stað breytingar á þessum próteinum hratt, með aukningu á hraða LC3-II/LC3-I og lækkun á magni p62 (bæði P<0.01) in="" the="" clp‑induced="" sepsis="" group.="" compared="" with="" the="" clp="" group,="" the="" rate="" of="" lc3‑ii/lc3‑i="" was="" significantly="" decreased,="" while="" the="" level="" of="" p62="" (both=""><0.01) was="" significantly="" increased="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group.="" however,="" the="" inhibition="" of="" mir‑214="" displayed="" an="" opposite="" tendency="" to="" the="" above="" indicators="" (both=""><0.01). by="" contrast,="" the="" negative="" control="" had="" no="" effect="" on="" the="" changes="" in="" the="" rate="" of="" lc3‑ii/lc3‑i="" and="" the="" levels="" of="" p62="" in="">nýru tissues (both P>0.05). The two indicators of LC3‑II/LC3‑I and p62 had no significant difference among the Ad‑miR‑214 group, the PTEN inhibitor group and the Ad‑miR‑214 + PTEN inhibitor group (all P>0.05). Þessar niðurstöður sýndu að sjálfsát var framkallað af CLP og oftjáning miR-214 gæti hindrað hana að hluta.
Eins og sýnt er á mynd 7A og D‑F er tjáningarstig PTEN (P<0.01) was="" increased,="" and="" the="" expression="" levels="" of="" p‑akt="" (ser473)="" and="" p‑mtor="" (ser2448)=""><0.01) were="" decreased="" by="" clp.="" compared="" with="" the="" clp="" group,="" the="" expression="" level="" of="" pten="" was="" reduced,="" while="" those="" of="" p‑akt="" and="" p‑mtor="" (all=""><0.01) were="" subsequently="" increased="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group.="" by="" contrast,="" the="" negative="" control="" had="" no="" effect="" on="" the="" changes="" in="" the="" expression="" levels="" of="" pten,="" p‑akt="" and="" p‑mtor="">nýru tissues (all P>0.05). There was no signifi‑ cant difference in the above indicators among the Ad‑miR‑214 group, the PTEN inhibitor group and the Ad‑miR‑214 + PTEN inhibitor group (all P>0.05). Þessar niðurstöður benda til þess að CLP valdinýrusjálfsáhrif vefja með því að hindra AKT/mTOR leiðina. Ad‑miR‑214 virkjaði AKT/mTOR ferlið með því að þagga niður í PTEN ínýruvefjum. Hins vegar, samanborið við CLP hópinn, hamlaði anti-miR-214 ekki marktækt tjáningu mTOR. Þess vegna var RT-qPCR notað frekar til að ákvarða tjáningu mRNA gena sem tengjast PTEN/AKT/mTOR boðleiðinni. Samkvæmt niðurstöðum RT-qPCR (mynd 8), í samanburði við Sham hópinn, voru mRNA tjáningarstig p62, LC3 og PTEN verulega aukin, en mRNA tjáning AKT og mTOR minnkaði í CLP hópnum. Í samanburði við CLP hópinn, Ad-miR-214, PTEN
hemla og Ad-miR-214 plús PTEN hemla hópar sýndu minni mRNA tjáningu á LC3 og PTEN, en aukna mRNA tjáningu á p62, AKT og mTOR (allt P<0.05); in="" the="" anti‑mir‑214="" group,="" an="" opposite="" changing="" tendency="" was="" observed="" (all=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" above="" indicators="" among="" the="" ad‑mir‑214="" group,="" the="" pten="" inhibitor="" group="" and="" the="" ad‑mir‑214="" +="" pten="" inhibitor="" group="" (all="" p="">0.05). Þannig geta áhrif p62 á sjálfsát komið fram á umritunarstigi frekar en eftir umritun. Núverandi niðurstöður sýndu fram á að miR-214 lækkaði tjáningu PTEN og virkjaði AKT/mTOR merkjaferilinn.
Umræða
Þessi rannsókn leiddi í ljós að of mikil sjálfsát var skaðlegnýrnastarfsemií rotþróa músum. Fyrri rannsóknir hafa sýnt að miR-214 tengist aukinni fjölgun, meinvörpum, innrás og virkar sem krabbameinsgen fyrir frumur og vefi (19-22). Rannsóknir skýra frá því að miR-214 þjónar verndaróli gegn AKI með því að draga úr frumudauða, oxunarálagi og draga úr bólguþáttum (21,23). Þessi rannsókn skoðaði frekar aðferðirnar sem liggja að baki verndaráhrifum miR-214 á blóðsýkingu af völdum blóðsýkingar með því að einblína á hugsanlega þátttöku miR-214 í mótun sjálfsáts. Niðurstöðurnar sýndu að oxunarálag átti sér stað ínýrueftir gjöf CLP skurðaðgerðar. Á sama tíma á sér stað virkjun autophagy ínýru.Hækkuð LC3 II/I og lækkun p62 ínýrusást eftir meðferð með CLP skurðaðgerð. Eins og búist var við dró verulega úr oftjáningu miR-214nýrusjúkleg meiðsli ognýrutruflun af völdum blóðsýkingar. Hins vegar sýndi hömlun á miR-214 gagnstæða tilhneigingu til endurverndar. Að auki voru verndaráhrif Ad-miR-214 aukin með PTEN hemli.
Í rotþrónýru, of mikilli bólgu fylgir gífurleg aukning á framleiðslu ROS og mikill fjöldi ROS kallar fram breytingar á uppbyggingu hvatbera og skerðir starfsemi hvatbera, sem veldur því að líkaminn fer í vítahring sem versnarnýruskemmdir (24,25). Þess vegna getur oxunarálag verið einn helsti meinafræðilegur aðbúnaður AKI af völdum blóðsýkingar. Þessi rannsókn gaf frekari vísbendingar sem sýndu of mikið oxunarálag, sem var gefið til kynna með aukinni MDA framleiðslu og minni SOD virkni ínýruvefjum eftir CLP aðgerð. Ennfremur kom í ljós að oftjáning miR-214 gæti verndaðnýrugegn oxunaráverka af völdum CLP, sem tekur þátt í sjálfsátahömlun. Þetta er í samræmi við fyrri rannsóknir um að miR-214 verndar ýmsar frumur og vefi gegn oxunarálagi (26,27).
Sjálfsát virkar sem „tvíeggjað sverð“ við þróun blóðsýkingar: Grunnsjálfát getur haft verndandi áhrif með því að fjarlægja eitruð oxunarprótein, en óhófleg sjálfsát getur leitt til sjálfsáts frumudauða við alvarlegt álag, svo sem ROS-gos (28,29) . Sýnt hefur verið fram á að sjálfsát virkjast í upphafi við blóðsýkingu, fylgt eftir með vanstarfsemi í kjölfarið vegna sjálfsáts frumudauða (30), sem eykur oxunaráverka af völdum blóðsýkingar. Í þessari rannsókn sýndi PTEN hemill eða oftjáning á miR-214 andoxunarvörn í CLP-meðhöndluðum músum. Hins vegar sýndi hömlun á miR-214 gagnstæða tilhneigingu til andoxunarefnis endurvörn. Svo óhófleg eða ófullnægjandi autophagy getur valdiðnýrnaskemmdir; báðar eru vanhæfar og valda að lokum frumudauða. Þess vegna er lykillinn að því að draga úr oxunarskaða í rotþróarástandi að halda hóflegu magni sjálfsáfalls.
CISTANCHE MUN BÆTA NÝRA/NÝRAVERKI
Uppsöfnuð sönnunargögn hafa bent til þess að miR-214 hamli sjálfsát í ýmsum frumum og vefjum (31-33). Í þessari rannsókn kom í ljós að oftjáning miR-214 hamlar sjálfsát af völdum CLP ínýrnavef,eins og breytingin á próteinmerkjum gefur til kynna, eins og LC3-II/I og p62. Ennfremur sýndu niðurstöðurnar að oftjáning á miR-214 dró úr CLP-völdum oxunaráverka með því að hindra óhóflega sjálfsát. Þessi rannsókn rannsakaði einnig sameindakerfin sem miR-214 mótarnýrusjálfsát í blóðsýkingu af völdum AKI. PTEN/AKT/mTOR er mikilvæg boðleið sem stjórnarnýruautophagy (34,35) og þjónar lykilhlutverki í blóðsýkingu af völdum AKI, og PTEN er neikvæður hemill á PI3K/AKT/mTOR boðleiðina. Fyrri rannsóknir greindu frá því að miR-214 geti stjórnað sjálfsát í gegnum PI3K/AKT/mTOR merkjaleiðina í ýmsum gerðum (36-38). Ma et al (39) komust að því að miR-214 getur dregið úr sjálfsát í nýrum með sykursýki. Þess vegna var tilgáta sett fram að áhrif miR-214 á CLP-framkallað AKI gætu átt þátt í stjórnun PTEN/AKT/mTOR ferilsins. Sérstaklega sýndu niðurstöður þessarar rannsóknar að CLP skurðaðgerð hækkaði marktækt magn PTEN en lækkaði magn p-AKT og p-mTOR, sem bendir til þess að CLP skurðaðgerð hafi gert AKT/mTOR ferlið óvirkt. Að auki virkjaði oftjáning miR-214 AKT/mTOR leiðina með því að þagga niður PTEN í sjálfsát af völdum CLP ínýruvefjum. Hins vegar hindraði and-miR-214 ekki marktækt tjáningu mTOR í Western blot-greiningum. Þannig var RT-qPCR notað frekar til að ákvarða tjáningu mRNA gena sem tengjast PTEN/AKT/mTOR boðleiðinni. Þessi rannsókn leiddi í ljós að miR-214 minnkaði tjáningu PTEN og virkjaði AKT/mTOR merkjaleiðina til að hindra sjálfsát. Hins vegar ætti að gera frekari tæmandi rannsóknir til að fá frekari upplýsingar sem tengjast fyrirkomulaginýruautophagy í rotþróa ástandi.
Til að álykta má nefna að niðurstöður þessarar rannsóknar bentu til þess að miR-214 gegndi verndandi hlutverki gegn blóðsýkingu af völdumnýrnaskaðameð því að draga úr oxunarálagi og hamla sjálfsát með því að stjórna PTEN/AKT/mTOR leiðinni. Núverandi niðurstöður benda til þess að miR-214 gæti verið hugsanlegt meðferðarmarkmið fyrir blóðsýkingu af völdum blóðsýkingar. Hins vegar notaði þessi rannsókn mýs 6-8 vikna gamlar, þannig að frekari rannsókna á verkunarháttum miR-214 er þörf hjá fullorðnum músum.