Rannsókn á örveruensímunum sem framleidd voru við sameinuð gerjun baktería og líffræðileg virkni þeirra ⅲ

3. kafli Rannsókn á andoxunarvirkni ensíma

 

Margir mannsjúkdómar hafa verið sannaðirVirkt súrefni og sindurefni, svo semBólga, Arteriosclerosis,öldrun, sykursýki, Krabbameinosfrv.Óhófleg sindurefniÍ líkamanum getur valdið próteinafræðingu, frumuskemmdum og dauða og jafnvel meinafræðilegum breytingum í líkamanum. Þess vegna eru margar rannsóknir heima og erlendis að leita að matvælum sem eru rík af náttúrulegum andoxunarefni til að koma í veg fyrir og stjórna sjúkdómum af völdum sindurefna í gegnum mataræði. Í dag, með vaxandi lífskjörum, færir fólk smám saman fókus sinn til eigin líkama, svo að fleiri og fleiri heilsuvörur koma fram í endalausum straumi. Hins vegar er það ekki auðvelt að vera sannarlega gagnlegt. Ensím eru eins konar matur sem hægt er að búa til sjálfur í lífi fólks. Kostnaðurinn er ekki mjög mikill og það eru margir kostir.
Örveruensím hafa margvíslegar heilsufarsaðgerðir eins og bakteríudrepandi og bólgueyðandi, stuðla að umbrotum, bæta ónæmi, hvíta og öldrun, afeitrun og krabbamein. Sem stendur eru tiltölulega fáar rannsóknir á andoxunareiginleikum örveruensíma heima og erlendis, svo við ætlum að gera ítarlegar rannsóknir á þeim. Í þessari grein er eplensím sem rannsóknarhlutinn og notar heildar fenólinnihald, dregur úr krafti, DPPH · sindurefnum, · OH sindurefnum, superoxide sindurefnum og ABTs sindurefnum með hreinsun sem ákvörðunarvísitölurnar til að framkvæma alhliða og kerfisbundna rannsókn á epliensími eftir gerjun í 3 mánuði. Samsetning og innihald andoxunarvirkra innihaldsefna var rannsakað og andoxunarvirkni þess var skilið.

Nýjar jurtir cistanche með miklu meiri andoxunarafl en gerjun baktería

Stuðningsþjónusta Wecistanche-stærsti útflutningsaðili Cistanche í Kína:
Netfang: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/sími: +86 15292862950

 

 

 

 

3.1 Efni og aðferðir

3.1.1 Efni

(1) Tilraunaefni
Þvoðu ferskt epli með sæfðu vatni við sæfð skilyrði, þurrkaðu þau náttúrulega í sæfðu vinnuborð, afhýða þau og skerðu þau til síðari notkunar. Bætið hvítum sykri og eplum í sótthreinsaða glerkrukku í massahlutfallinu 1: 1. Virkjaðu bakteríurnar sem krafist er fyrir tilraunina og sáð þeim í ensímið í samræmi við ákjósanlegasta kerfið (þessu aðgerðarskrefi er sleppt í samanburðarhópnum), innsiglaðu það og settu það á köldum og þurrum stað. Eftir 3 mánaða gerjun stofuhita skaltu taka sýnishorn til að fá allan ensímvökvann sem inniheldur kvoða og síaðu það. Taktu flotið sem tilraunasýnið og skilvindu sýnið við 10000 snúninga á mínútu í 15 mínútur í háhraða skilvindu áður en þú ákvarðar viðeigandi gögn. Þess má geta að í því ferli að búa til ensím, til að koma í veg fyrir óþarfa mengun, eru allar aðgerðir okkar framkvæmdar við sæfðar aðstæður.

(2) Helstu hljóðfæri
Spectrophotometer: V -1100, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory;
Stöðugt hitastig vatnsbað: HH -2, Wuhan Litianian Technology Instrument Co., Ltd. Önnur hljóðfæri eru þau sömu og 2.1.3.

3.1.2 Aðferðir

(1) Ákvörðun á heildar fenólinnihaldi [53]
① Undirbúningur venjulegs ferils:
Vigtið nákvæmlega {{0}}. Taktu 8 hreinsa 1 {{1 0}} ml rúmmál, bætið við 0}, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0, 1,2 og 1,4 ml af gallsýru stöðluðu, hver um sig, útþynnt við merkið með eimuðu vatni, hitanum í folin -batri og 2 ml af 20% naco3 til að fá, hita í folin hvarfefni fyrir 20 ml af 20% naco3, hita í folin -hvarfefni fyrir 20 ml af 20% Naco3, hita í folin -hvarfefni og 2 ml af 20% Naco3 til að vera, hita í folin -hvarfefni og 2 ml af 20% Naco “við hver 1 mín., Kælið og þynnt í 20 ml, og setjið við stofuhita í 30 mín. Notaðu litrófsmæli til að mæla frásog A við bylgjulengd 650 nm og teiknaðu staðalferil með frásog A sem lárétta ás og sýnisstyrk sem lóðrétta ásinn. ② Greining
Bætið eimuðu vatni við 100 mμl, 200 μl, 300 μl, 400 μl og 500 μl sýni lausna við 46 ml, bætið síðan við 1 ml af folin-fenól hvarfefni, blandið jafnt, bregst við í 3min, síðan bætið 3 ml af 20% nacO3, hristu í 25 gráðu stöðugu hitastigi vatnsbaðs í 2H, notaðu eimað vatn sem autt stjórn, og mælir það Absoring A við A Wows A Wows a Wase of A Wasle of of Distilled Water, og mæla það A Absobance A við A við A Wows A Wavelled of Of Distilled Water, og mæla það Absobance A við A við A Wowalldy. 760nm með litrófsmæli. Heildar fenólinnihald er gefið upp sem gallínsýruígildi og heildar fenólinnihaldið er reiknað samkvæmt stöðluðu feriljöfnunni.

(2) Lækkunarpróf [54]
Bætið við 1 0 0 μl, 2 0} 0μl, 300 μl, 400 μl og 500 μl af sýni í 2,5 ml af fosfatjafnalausn með styrkur 0,2 mól/l og pH gildi með 6,6, þá bætið við 2,5 ml af kalíumsýru (W/v) með massa standandi og og hvarfar og og hvarfar og og hvarfar og og hvarfar og við og hvarfar og hvarfar og og hvarfar og hvarfst við og hvarfst við og hvarfst við 1,5 ml af Poassium. við 50 gráðu í 30 mínútur. Bætið síðan við 2,5 ml af tríklórediksýru (w/v) með massaþéttni 10%og skilvindu við 3000 snúninga á mínútu í 10 mínútur í háhraða skilvindu. Strax eftir að hafa tekið út skaltu taka 2,5 ml af flotvatninu í rúmmálskolbu skaltu bæta við 2,5 ml af eimuðu vatni og 0,5 ml af járnklóríði (w/v) með massaþéttni 0,1%. Notaðu eimað vatn sem autt stjórn og mældu frásog A við bylgjulengd 700 nm með litrófsmæli. Hægt er að dæma styrkur minnkunarvaldsins með frásogsgildinu. Því hærra sem frásogsgildið er, því sterkari er minnkandi kraftur.

 

(3) Ákvörðun á superoxide anjón frjálsri róttæku áhrifum [55]

Taktu 4,5 ml af 0. 0 5 mól/l pH 8,2 Tris-HCl biðminni og hita það í 25 gráðu vatnsbaði fyrir 2 0 mín. Bætið við 1 ml af ensímsýni með styrk 10%, 20%, 30%, 40%og 50%og 0,4 ml af 25 mmól/l pyrogallol lausn í sömu röð. Blandið vel saman og bregst við í 25 gráðu vatnsbaði í 5 mín. Bætið við 1,0 ml af 8 mól/l HCl til að slíta viðbrögðum. Notaðu Tris-HCl biðminni sem tilvísun og notaðu litrófsmæli til að mæla frásog A við bylgjulengd 299 nm til að reikna út hreinsunarhraðann. Fyrir auða samanburðarhópinn var 1 ml af leysi notaður í stað sýnisins. O 2- hreinsunarhraði var reiknað út samkvæmt formúlu 3.1: o 2- hreinsunarhraði (%)=(a 1- a2)/a1 × 100 (3.1) þar sem: a1 er frásog auða rörsins; A2 er frásog sýnisins.

(4) Ákvörðun á hreinsunaráhrifum á hýdroxýl radíkala [56]

1 0 0μl, 200μl, 300 μl, 400 μl, 500μl sýni lausn var bætt við vatn í 2 ml, síðan bætt við 1,4 ml af vetnisperoxíði með mólmassa styrk með 6mmól/L, síðan bætt við 0,6 ml af natríumsalisýli með mólmassa af 20 mmól/l og 2ml af ferrerískum súlfum með mólmassa af 20mmól/l og 2ml af ferrerusi með mólstyrk af 20mmól/L og 2ml af ferrerískum súlfum með mólþéttni 20mmól/L og 2ml af ferrerusi með mólþéttni af 20mmól/L og 2ml af ferrerískum súlfum með mólstyrk af 20 mól Massastyrkur 1,5 mm/l, og hitaður í stöðugu hitastigi vatnsbaðs við 37 gráðu í 1 klst. Stilltu að núlli með eimuðu vatni og mældu frásog A við bylgjulengd 562nm með litrófsmæli. Framkvæma 3 endurtekningar fyrir hverja meðferð. Reiknaðu hýdroxýl róttækan hrærsluhraða samkvæmt formúlu 3.2: hýdroxýl róttæku hreinsunarhraði (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (3.2) þar sem: A1 er meðalgleypni autt; A2 er meðaltal frásogs sýnislausnarinnar. (5) Ákvörðun á DPPH sindurefnum með róttækum áhrifum [57]

Nýjar jurtir cistanche með miklu meiri andoxunarafl en gerjun baktería

 

Nákvæmlega pípettu 2 ml af ensímsýni lausn með styrk 1 0%, 20%, 30%, 40%og 50%í 10 ml rúmmálsflösku, bætið síðan við 2 ml af 80%dpph etanólvatnslausn við rúmmálsköpunina. Styrkur mólmassa er 2 × 10-4 mól/l. Eftir að hafa blandað, láttu það standa við stofuhita í 30 mín. Með því að nota 80% etanóllausn til viðmiðunar skaltu mæla frásog sýnisins við bylgjulengd 517 nm, sem er skráð sem A1. Blandið 2 ml af DPPH lausn og 2 ml af etanóllausn með massaþéttni 80% og mælið frásog þeirra á sömu bylgjulengd, sem er skráð sem A0. Blandið 2 ml af ensímlausn og 2 ml af etanóllausn með massaþéttni 80% og mælið frásog þeirra á sömu bylgjulengd, sem er skráð sem A2. Reiknið DPPH sindurefnahraðahraða samkvæmt formúlu 3.3:
DPPH Free Radical Scavenging Rate (%) {{0}} [1- (A 1- A2)/A {16}}] × 100 (3,3) þar sem: A1 er frásog 2 ml DPPH 80% etanólvatnslausnar og 2 ml enzyy -lausn; A2 er frásog blandaðrar lausnar með 2 ml ensímlausn og 2 ml 80% etanól með massaþéttni; A0 er frásog blandaðrar lausnar með 2 ml dppH lausn og 2 ml 80% etanól með massaþéttni.

(6) Abts sindureftirlit með radíkum [58]
Bætið ákveðnu magni af kalíumsúlfati við 7 mmól/L ABTS lausn þar til lokastyrkur blandaðrar lausnar er 2,45 mmól/l. Settu blandaða lausnina á köldum og þurrum stað við stofuhita í 12 til 16 klukkustundir. 1μl, 3L, 5L, 7L og 9L af sýnishorni var bætt við 10 μl með 5mmól/L Ph7.4 fosfatjafnalausn, og síðan blandað jafnt við 10 ml af ofangreindu kalíumsúlfati og ABTs blandaðri lausn, og leyft að bregðast við við hvarfhitastig 30 gráðu og viðbragðstíma 5Min. Núll með eimuðu vatni og mældu frásog A við bylgjulengd 734nm með litrófsmæli. Reiknið ABTS sindurefnahraðahraða samkvæmt formúlu 3.4:
Abts sindurefna hrærsluhraði (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (3.4) þar sem: a1 er frásog auða stjórnunarhópsins; A2 er frásog tilraunahópsins

 

3.2 Niðurstöður og greining

3.2.1 Heildar fenólinnihald

(1) Venjulegur ferill
Staðalferillinn með heildar fenólinnihaldi var dreginn með styrk gallínsýru sem lárétta ásinn og frásogsgildið A sem lóðrétta ásinn, eins og sýnt er á mynd 3.1.

 

Fig.3.1 Staðalferillinn með heildar fenólinnihaldi

Frá mynd.3.1 getum við séð að venjuleg feriljöfnuð er y =11. 375x +0. 2593 (x er sýnisstyrkur, y er frásogið), r 2=0. 9981.

(2) Ákvörðun sýnishorna

Niðurstöður heildarákvörðunar fenólinnihalds á eplensímum í samanburðarhópnum og tilraunahópnum við mismunandi styrk eru sýnd á mynd 3.2.

 

 

 

Mynd 3.2 Ferill heildar fenólinnihalds

Eins og sýnt er á mynd 3.2 hafa eplensímin bæði í samanburðarhópnum og tilraunahópnum mikið heildar fenólinnihald og bæði aukast með aukningu á magni sýnislausnar sem bætt er við. Í sama styrkleiki jókst heildar fenólinnihald eplensímsins í samanburðarhópnum úr 0. 673 mg í 2,8 0 7mg, og heildar fenólinnihald tilraunahópsins jókst úr 0,961 mg í 4.185 mg. Heildar fenólinnihald tilraunahópsins er mun hærra en í samanburðarhópnum og uppsveiflu er augljósari. Samkvæmt heildar fenólinnihaldi er heildar andoxunarvirkni tilraunahópsins meiri en hjá samanburðarhópnum.

 

3.2.2 Að draga úr krafti

Niðurstöður til að draga úr orkuákvörðun eplensíma í samanburðarhópnum og tilraunahópnum við mismunandi styrk eru sýndar á mynd 3.3.

 

Eins og sýnt er á mynd 3.3 er breytt þróun að draga úr krafti eplensíma svipað og breytt þróun heildar fenólinnihalds. Minnkunarkraftur tilraunahópsins er hærri en í samanburðarhópnum og hvort það er tilraunahópurinn eða samanburðarhópurinn, innan styrkssviðsins sem kynnt er í tilrauninni, sýnir minnkunaraflið aukna þróun með aukningu á magni sýnislausnar sem bætt er við. Tilraunagögnin staðfestu einnig að hvað varðar minnkandi afl er andoxunarvirkni tilraunahópsins meiri en í samanburðarhópnum.

 

 

3.2.3 Superoxide anjón sindurefni

Niðurstöður superoxide anjóns sindurefnis hreinsunargetu eplensíma í samanburðarhópnum og tilraunahópnum við mismunandi styrk eru sýnd á mynd 3.4.

Eins og sýnt er á mynd 3.4 er mikill munur á superoxide anjón sindurefnum hreinsunargetu milli tilraunahópsins og samanburðarhópsins. Innan styrkleikasviðsins sem kynnt var í tilrauninni breytist superoxide anjón sindurefnisgetu tilraunahópsins verulega þegar styrkur sýnisins er 10%til 20%og breytingin er ekki augljós eftir að styrkur er meiri en 20%; Þegar styrkur er 50%er superoxide anjón sindurefnum hreinsunargetu allt að 85,4%. Hægt er að sjá superoxide sindurefna sem sýndar eru af samanburðarhópnum sem sýndar eru af stefnuritinu. Þegar styrkur ensímsins eykst eykst þessi frjáls róttæknihæfni einnig, breytist hægt og hefur smám saman til stöðugs ástands. Hreinsunargetan nær að hámarki 42,6%. Tilraunahópurinn er næstum tvöfalt hærri en samanburðarhópurinn.

 

 

3.2.4 Hýdroxýl frjáls róttækni

Breytingarnar á hýdroxýlfrjálsu róttækni getu eplensímanna í samanburðarhópnum og tilraunahópurinn við mismunandi styrk eru sýndir á mynd 3.5.

 

 

Fig.3.5 Ferill hreinsunarhýdroxýl sindurefna

 

Það má sjá á mynd 3.5 að innan styrkssviðsins sem kynnt var í tilrauninni jókst hýdroxýlfrjálsu róttækni ensím í tilraunahópnum og samanburðarhópurinn jókst með aukningu á auknu magni. Hýdroxýlfrjálsu róttæknihæfni tilraunahópsins var lægri en í samanburðarhópnum og hann stóð sig mjög illa við lágan styrk. Við háan styrk jókst hýdroxýlfrjálsu róttæknihæfni verulega. Ástæðan getur verið sú að meðan á gerjunarferlinu stóð voru tegundir og innihald örvera í eplensímunum í tilraunahópnum og samanburðarhópurinn mismunandi og innihald efri umbrotsefna og íhluta hverrar vöru sem framleidd var með gerjuninni var mismunandi, svo að andoxunargeta sem sýnd var var mismunandi.

 

3.2.5 DPPH · Hreinsunarhæfni sindurefna

Í samanburði við aðrar uppgötvunaraðferðir er DPPH · Hreinsunargeta sindurefna mikið notuð til að meta andoxunarvirkni á stuttum tíma [59]. DPPH · Hreyfingargeta sindurefna við mismunandi styrk var samsærð í samræmi við niðurstöður samanburðarhópsins og tilraunahóps eplensíma, eins og sýnt er á mynd 3.6.

Eins og sýnt er á mynd 3.6, þegar styrkur Appleensímsins samanburðarhópsins var lægri en 30%, var DPPH · sindurefnisgeislunargetan minni en 50%, en tilraunahópurinn Apple ensímið sýndi einnig hærri DPPH · hreinsunargetu sindurefna við lágan styrk. Niðurstöður tilrauna sýna að viðbót Aspergillus oryzae, ger, hitauppstreymis Streptococcus og búlgarska lactobacillus er gagnlegt fyrir DPPH · sindurefna hreinsunargetu ensímsins. Þegar styrkur ensímsins er 50%er þessi hæfileiki allt að 91,4%, sem er mun hærri en 69,8%samanburðarhópsins í sama styrk.

 

3.2.6 Abts Radical Scavenging getu

Niðurstöður ABTS róttækra hreinsunargetu eplensímanna í samanburðarhópnum og tilraunahópurinn við mismunandi styrk eru sýndir á mynd 3.7.

Mynd 3.7 Ferill ABTS róttækrar hreinsunargetu
Það má sjá á mynd 3.7 að hreinsunarhraði eplensímanna í tilraunahópnum er hærra þegar viðbótarmagn ensímsins er meira en 5 μl. Rannsókn Erel o.fl. sýndi að hreinsunargeta ABT -róttækla veltur að miklu leyti á hærri styrk fenólefna [60]. Niðurstöður heildarákvörðunar fenólinnihalds sýndu að heildar fenólinnihald tilraunahópsins var hærra en í samanburðarhópnum. Niðurstöður tilrauna á mynd 3.7 staðfestu bara að hreinsunargeta ABT -róttækni er meiri en í samanburðarhópnum.

 

3.3 Yfirlit yfir þennan kafla

Í þessum kafla er rannsakað sambandið milli andoxunarvirkni eplensíma sem framleidd eru með gerjun við fjóra valda stofna af eplum, styrkur ensímssýna og samanburð á andoxunarefnum virkum íhlutum og sindurefnum með radíkum milli tilraunahópsins og samanburðarhópsins. Niðurstöður tilrauna sýna að heildar fenólinnihald eplensímsins í samanburðarhópnum er lægra en í tilraunahópnum og minnkandi kraftur þess, superoxide anjón sindurefna, DPPH sindurefna og ABTS sindureftirlitshæfni er betri en í samanburðarhópnum; Ensímið í samanburðarhópnum hefur sérstaklega góða hreinsunargetu fyrir hýdroxýl sindurefni.
Almennt sýndi tilraunahópurinn meiri andoxunarvirkni, sem staðfesti enn frekar hagkvæmni þess að bæta stofna tilbúnar til að búa til örveruensím. Með þessum hætti hafa örveruensím matvæli fleiri efni sem eru gagnleg fyrir heilsu manna á grundvelli upprunalegu náttúrulegu gerjunarinnar og geta betur þróast í þá átt sem fólk gerir ráð fyrir.