Meta-greining á NAD(P)(H) magngreiningarniðurstöðum sýnir breytileika milli spendýravefja Ⅱ

Áhrif vefjasöfnunar fyrir morð versus eftir slátrun á NAD(P)(H) gildi.

Við spáðum því að það gæti verið nokkur sjáanlegur munur á NAD(P)(H) afoxunarástandi sem er háð aðferðum við uppskeru vefja. Til að svara þessari spurningu skoðuðum við áhrif vefsöfnunaraðgerða fyrir og eftir slátrun á NAD(P)(H) redoxstöðu. Fyrir þessa greiningu bárum við saman gildi úr rottulifrarvef miðað við meiri fjölda rannsókna sem skilgreindu fórnarferli þeirra. Þegar þær voru birtar kom fram í öllum endurskoðuðu rannsóknunum að vefjasýnin voru geymd köld og strax dregin út á ís eða frosin við -80 gráður fyrir NAD(P)(H) mælingar. Þessi greining leiddi í ljós að enginn marktækur munur var á NAD plús styrk í rottu lifur (mynd 6a) milli vefja sem voru dregin út fyrir eða eftir líknardráp. Hins vegar er tilkynnt NADH gildi í rottu lifur marktækt hærri í sýnum eftir slátrun (mynd 6b). Enginn munur á heildarmagni NAD(H) (mynd 6c) sást en NAD plús /NADH hlutfallið var lægra í vefjum sem safnað var eftir líknardráp (mynd 6d), sem er í samræmi við breytileikann sem sást í NADH stigum. NADP plús , NADPH og NADP plús /NADPH hlutfallið leiðir til rottulifrar flokkuð eftir tímapunkti vefuppskeru eru sýndar á aukamynd 9; hins vegar, ófullnægjandi fjöldi sýna eftir slátrun gerir okkur ekki kleift að túlka áhrif tímapunkts vefuppskeru á NADP(H) gildi. Í músalifur var enginn munur á magni NAD plús fyrir og eftir slátrun, hins vegar var fjöldi tilkynningarannsókna takmarkandi (mynd 6e). NeiNADH,NADP plús, eðaNADPHgögn eftir slátrun ímús lifurlá fyrir til samanburðar.

Smelltu hér til að fá Hebrs Cistanche

Umræða

Margar nýlegar rannsóknir hafa sýnt að NAD(P)(H) stjórnun er nauðsynleg fyrir frumujafnvægi og afoxunarstöðu. Gögn sem fengin eru frá nagdýrum hafa leitt til rannsókna þar sem NAD plús gildi í blóði voru skoðaðar, sem minna ífarandi vísbending um magn NAD plús í öllum líkamanum. Nýlegar klínískar rannsóknir sýndu fram á að magn NAD plús var lækkað í sjúkdómsástandi23,47 og hækkað í kjölfar NAD plús örvunaraðferða23,44,48,49. Við gerðum safngreiningu á öllum rannsóknum sem birtar voru á árunum 1946 til 20. júní 2021, sem innihéldu megindlegar upplýsingar um NAD(P)(H) gildi í spendýrategundum með sérstakri áherslu á mýs, rottur og menn þar sem þau eru mest rannsakað tegundir á lífeindasviði. Þessi greining var gerð að hluta til til að ákvarða meðalstaðalstig NAD(P)(H) styrks í venjulegum spendýravef miðað við vel þekkta breytileika þessara mælinga í rannsóknum. Við vonum að þessi gögn geti verið notuð til að örva staðlaðar samskiptareglur á sviði NAD plús rannsókna og til að stuðla að notkun NAD(P)(H) stiga og redoxhlutfalla sem áreiðanlegra lífmerkja fyrir sjúkdóma og meðferðaráætlanir.

Þrátt fyrir töluverðan breytileika í mælingum á vefjum nagdýra sýndi þessi meta-greining svipað meðaltal NAD plús gildi milli vefja með nokkrum undantekningum. Athyglisvert er að beinagrindarvöðvar músa sýndu lægri miðgildi NAD plús (mynd 2a) en aðrir mjög efnaskiptavefir (þ.e. lifur, nýru, hjarta og heili). Þetta getur bent til mismunandi NAD(H) redoxstöðu í beinagrindarvöðvum eða getur bent til meiri vandamála við útdrátt umbrotsefna í trefjavef. Hins vegar var ekki hægt að sannreyna þessar athuganir hjá mönnum vegna skorts á vefjum sem teknir voru fyrir utan blóð og vöðva.

Það eru margir hugsanlegir þættir sem gætu haft áhrif á nákvæmni lífeðlisfræðilegra NAD(P)(H) mælinga í vefjasýnum. Þegar greint var frá lýstu allar rannsóknir að vefjum væri safnað og beint á kaf í fljótandi köfnunarefni eða haldið á ís fyrir frystingu eða vinnslu til að varðveita hitaviðkvæmu brotin (NAD plús og NADP plús). Áhrif sýrustigs á hina ýmsu NAD(P)(H) hluta, svo sem sýruóþolið eðli minnkaðra NAD(P)H formanna, hefur leitt til þess að meirihluti rannsóknanna hefur notað pH-hlutlausa útdráttarleysi. . Hins vegar, í ljósi hraðrar umbreytingar minnkaðra og oxaðra umbrotsefna og áhrifa anoxíu á NAD(H)50–53, er einnig mikilvægt að tryggja hraðan útdrátt á umbrotsefnum vefja og viðeigandi aðferðir til að slökkva á frumu NAD(P)(H) )-redox/neysluensím, svo sem í gegnum afpróteinvæðingu. Í samræmi við þessar línur bendir greining okkar á vefsöfnun fyrir og eftir slátrun til þess að greining eftir slátrun styðji lækkun NAD plús. Minnkun á NAD plús vefja hefur áður verið lýst in vivo í heila, hjarta og lifur hjá rottum sem verða fyrir 2.5-klst. súrefnissýra andrúmslofti54, umhverfi sem getur verið að hluta til tekið saman eftir langan tíma eftir- fórna vefjasöfnun fyrir skyndifrystingu. Þetta gæti bent til þess að útdráttur vefja á meðan hann er í svæfingu eða forgangsröðun tafarlausrar uppskeru vefja sem ætlað er að nota til greiningar á umbrotsefnum eftir fórn, ætti að eiga sér stað til að fá dæmigerðar NAD(P)(H) mælingar.

Það er líka möguleiki fyrir ýmsar magngreiningaraðferðir, sem hver um sig hefur mismunandi takmarkanir, til að stuðla að heildarbreytileika NAD(P)(H) mælinga innan rannsóknarinnar. Á síðustu tveimur áratugum voru aðferðirnar sem oftast voru notaðar ensímhringrásarpróf, LC–MS og HPLC. Hver þessara aðferða hefur áhrif á útdráttaraðferðir umbrotsefna, magngreiningarbreytur og innleiðingu á réttu gæðaeftirliti. Með því að nota LC–MS, Lu o.fl. hafa sýnt að innbyrðis umbreyting milli minnkaðra og oxaðra forma NAD(P)(H) umbrotsefna á sér stað með mismunandi hraða í ýmsum útdráttarjafna eða leysiefnum með asetónítríl:metanóli: vatni með 0.1 M maurasýrublöndu sem gefur af sér hæsta endurheimt með minnstu millibreytingum31. Hins vegar, þegar LC–MS er notað er hægt að fylgjast með þessari innbyrðis umbreytingu á milli einstakra sýna úr rannsókn með því að fylla innri stýringu eins og NAD(P)(H) samsætur, sem er kostur LC–MS tækninnar umfram HPLC og ensím. hjólreiðapróf31,33,55. Engu að síður, jafnvel með vel stýrðri LC–MS tækni, geta ýmsir þættir truflað mælda merkið, þar á meðal fylkisáhrif og breytileiki í jónunarvirkni. Til dæmis nota sumar rannsóknir 13C-merkta gerþykkni sem innri staðla í LC–MS-undirstaða efnaskiptafræði. Hins vegar getur það að fylla 13C-merkt umbrotsefnisfylki úr gerþykkni haft ýmsar afleiðingar, svo sem jónabælingu, sem dregur úr merki merktra og/eða ómerktra umbrotsefna og getur leitt til villna í algerri magngreiningu ef ekki. greint með ítarlegu gæðamati56. Jafnframt, þó að LC–MS tækni geri fræðilega kleift að mæla mörg NAD(P)(H) umbrotsefni í einni tilraun, þá eru enn takmarkanir þar sem ákjósanlegar þynningar verða að keyra ef umbrotsefnin sem vekur áhuga hafa mikinn mun á styrk. Þannig, þrátt fyrir kosti þeirra fram yfir einfaldari ensímhringrásarprófanir, krefst flókið LC-MS aðferða nauðsyn á ítarlegri hagræðingu. Nýlega hafa verið þróaðar nýjar greiningaraðferðir eins og NAD plús lífskynjarar og massagreiningar sem byggjast á myndgreiningu, en það er enn ófullnægjandi magngögn sem myndast úr þessum aðferðum til að taka með í safngreiningu. Þó, ein rannsókn sem tekin var inn í meta-greiningu okkar notaði pappírsbundinn lífljómandi lífskynjara til að mæla NAD plús magn í músalifur og öðrum sýnistegundum57. Þessi rannsókn var innifalin í líflýsandi prófunarhópnum vegna svipaðrar uppgötvunaraðferðar (mynd 1a).

Aðferðir

Gagnaútdráttur.

Töluleg gögn fyrir NAD(P)(H) umbrotsefni voru annaðhvort fengin beint úr greinunum eða dregin út úr greinarmyndum með því að nota hálfsjálfvirkan gagnaútdráttarhugbúnað (WebPlotDigitizer58). Auk þess voru, þar sem við á, skráðir tímapunktar vefsýnatöku miðað við fórn og/eða vef-/blóðsýnatökuaðferðir (þ.e. aðferð við svæfingu og/eða líknardráp, meðhöndlun vefja og geymsluhitastig). Fyrir dýralíkön voru skráðar tegundir, eiginleikar (td stofn, arfgerð, aldur og þyngd) og umhverfisaðstæður (td svefnhringur, tegund mataræðis, fóðrunartíðni og fóðrunarástand miðað við vefsýnatöku). Að auki, fyrir allar rannsóknir, voru meðferðir (td lyfjafræðilegar meðferðir, skurðaðgerðir, geislun, æxlisframleiðsla og aðrar aðferðir sem beittar eru á rannsóknaraðilana) og allar rannsóknarhópaupplýsingar (td meðferðar- eða sjúkdómshópar og samsvarandi viðmiðunarhópar) dregnar út. Að lokum, aðferð NAD(P)(H) magngreiningaraðferðar (td ensímpróf, byggt á massagreiningu, HPLC, NMR, lífljómun) og birtingarupplýsingar (þ.e. útgáfutitill, tilvísunarkóði [DOI, Medline UI, PMID] eða tengill og útgáfuár) var tekið fram (viðbótarefni 2).

Gagnagreining. Fyrir greiningu var öllum styrkjum breytt í nmól/g af vefjum eða nmól/g af próteinum fyrir vefjasýni eða nmól/ml fyrir blóðhluta. Vegna fárra niðurstaðna sem eru staðlaðar með próteininnihaldi sýnum við aðeins niðurstöður sem eru staðlaðar miðað við vefjaþyngd og blóðrúmmál. Tölfræðileg greining var gerð með GraphPad Prism útgáfu 9.3.1 (GraphPad Sofware Inc., San Diego, Kaliforníu, Bandaríkjunum,Aðgengi gagnaÖll gögn sem dregin eru út og greind í þessari rannsókn eru innifalin í þessari birtu grein og viðbót við hanaupplýsingar fles.Móttekið: 29. apríl 2022; Samþykkt: 7. febrúar 2023

Heimildir

10. Love, NR o.fl. NAD kínasi stjórnar NADP lífmyndun dýra og er stýrt með þróunarlega ólíkum calmodulinháðum aðferðum. Frv. Natl. Acad. Sci. 112, 1386–1391 (2015).

Biðja um meira:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plús 86 15292862950