Melanocyte virkjunarkerfi og skynsamlegar meðferðarmeðferðir á sól Lentigos

Ágrip:Til að einkenna meinafræði sólar lentigos (SLs), leiddu greiningar með hálfmagnsbundinni RT-PCR, Western blotting og ónæmisvefjafræði uppstýrða tjáningu endóþelíns (EDN)-1/endóþelíns B viðtaka (EDNBRs), stofnfrumuþáttar (SCF) )/c-KIT og æxlisdrepsþáttur (TNF) í húðþekju, sem var andstætt niðurstýrðri tjáningu interleukins (IL) 1 . Þessar niðurstöður styðja eindregið tilgátuna um að fyrri endurtekin útsetning fyrir útfjólubláum útfjólubláum útsetningu kveiki á keratínfrumum til að framleiða stöðugt TNF. TNF örvar síðan seytingu EDNs og framleiðslu á SCF á sjálfvirkan hátt, sem leiðir til stöðugrar sortuefnavirkjunar nærliggjandi sortufrumna, sem veldur SLs. Klínísk rannsókn á 36 sjúklingum með SL í sex mánuði sem voru meðhöndlaðir með M. Chamomilla þykkni með öflugri hæfni til að afnema EDN1-framkallaða aukningu á DNA nýmyndun og melanization sortufrumna manna í ræktun leiddi í ljós marktæka bata á litarefnisstigum og litamunur gefinn upp sem L gildi. Önnur klínísk rannsókn þar sem atýrósínasahemill L-askorbat-2-fosfat 3 Na (ASP) sýndi fram á að L-gildi prófunarkrems (6 prósent APS)-meðhöndlaðrar húðar jukust marktækt í SLs og í húð sem ekki er sár með marktækt hærra ∆L gildi í SLs þegar samanborið við húð sem ekki er sár. Summa þessara niðurstaðna bendir eindregið til þess að samsett staðbundin meðferð með EDN merkjablokkum ogtýrósínasahemlar er æskilegt meðferðarval fyrir SLs.

Lykilorð: sólar lentigo; endóþelín; stofnfrumuþáttur; vaxtarþáttur keratínfrumna; interleukin-1; æxlisdrep þáttur; innanfrumuboð; kalsíumhreyfing; merkjablokkari; M. chamomilla; askorbat-fosfat Na; hvítunarefni; tyrosinasa hemill

Cistanche er tyrosinasa hemill.

Smelltu til að fá áhrif til að hindra tyrosinasa

1. Inngangur

Algengasta húðþekjulitunarröskunin í asískri húð er sólar lentigos (SLs), sem venjulega koma fram í andliti og á handarbaki. Öfugt við útfjólubláa litarefni (UVB sortumyndun), sem, allt eftir aldri einstaklingsins, hverfur innan tveggja vikna til nokkurra mánaða eftir að hætt er að gefa út UVB útsetningu, myndast SL á húð sem er útsett fyrir sól, sérstaklega andliti, og hverfa aldrei vegna mögulegs DNA-skemmda í keratínfrumum sem framkallað er með endurtekinni UVB geislun á húðþekju. Almennt er litarefnissjúkdómar almennt miðuð við litarefnishemjandi lyf og fela í sér UVB-melanosis, SLs og melasma. Miðað við tíðni endanlegrar greiningar hjá sjúklingum með ýmsa litarefnasjúkdóma í Japan, hafa SLs hæstu tíðni, sem koma fram hjá um það bil 60 prósent allra sjúklinga með oflitunarsjúkdóma, á meðan sortumyndun og oflitarefni eftir bólgu (þar á meðal UVB-melanosis) koma fram í allt að 5,2 prósent og 3,3 prósent sjúklinga, í sömu röð [1]. Þetta bendir til þess að SL séu ríkjandi skotmark litarefnavarnarefna fyrir asíska húð. Hins vegar hafa fáar ritgerðir verið gefnar út um klínísk áhrif litarefnislyfja á SL vegna þess að mörg litarefnislyf þjóna semtýrósínasahemla og ekki er gert ráð fyrir þvítýrósínasahömlun væri nægjanleg til að bæta oflitarefni SLs. Að auki virðist erfitt að skynsamlega hanna árangursríka staðbundna meðferð fyrir SL vegna þess að lítið er vitað um virkjun sortufrumna í húðþekju. Í þessari yfirlitsgrein auðkennum við meinafræði SLs samkvæmt staðbundinni meðferð fyrir SLs vegna þess að lítið er vitað um virkjun sortufrumna í húðþekju. Í þessari yfirlitsgrein lýsum við meinalíffræði SLs í samræmi við þekkt sortuvaldandi paracrine cytokine netkerfi, og byggt á uppgötvuðum sortufrumuvirkjunaraðferðum í húðþekju SLs, kynnum við skynsamlegar klínískar aðferðir fyrir staðbundna meðferð fyrir SLs til að bæta oflitarefni. stigi.

2. Klínísk einkenni

SLs þróast klínískt sem flatir, vel afmarkaðir húðblettir með mismunandi litum og stærðum, sem koma oft fram í andliti og á handarbaki (Mynd 1a) [2]. Vefjafræði SL-skemmda sem lituð voru með Hemoxylin & Eosin leiddi í ljós lítilsháttar acanthosis og litarefni meðfram grunnfrumulaginu (Mynd 1b) [2]. Það eru tvö mynstur hvað varðar vefjameinafræðilega eiginleika SL í andliti: annað mynstur sýndi fletja húðþekju með basal sortumyndun og hitt mynstrið sýndi húðþekjustækkun með ílangum rete hryggjum sem samanstanda af djúpt litarefnum basaloid frumum [3].

3. Aðgerðir sortufrumnavirkjunar í sólarlengju byggt á melanogenic Paracrine Cytokine Network

3.1. Fjöldi sortufrumna og Týrósínasa tjáning

Þrátt fyrir að nokkur rök hafi verið fyrir um aukinn fjölda sortufrumna í SL, sýndi ónæmisvefjaefnafræðileg greining með því að nota sortufrumusértæka merkið MART-1 aukinn fjölda sortufrumna í sólarlentigo [5-7]. Hins vegar er raunverulegur þéttleiki sortufrumna meðfram landamærum leðurhúðarinnar og húðþekjunnar í SLs svipaður og í hættustjórnunarhúð vegna aukinnar útbreiðslu keratínfrumna [7]. Ónæmisvefjafræði með því að nota and-týrósínasaleiddi það í ljóstýrósínasa-jákvæðum sortufrumum fjölgaði marktækt um 2-falt í húðþekju SLs [4]. Gengreining með hálfmagnsbundinni RT-PCR leiddi í ljós að tjáningarmagn tyrosinasa mRNA er marktækt uppstýrt um 2.3-falt í vefjahúðinni [4]. Ofangreindar niðurstöður styðja þann möguleika að það sé örvun á bæði fjölgun og melanization í SL meinsemdar sortufrumum. Þess vegna settum við fram tilgátu um að örlítið fjölgandi keratínfrumur í SL kveiki á virkjun nærliggjandi sortufrumna með því að seyta sortufrumuörvandi frumufrumur.

3.2. Melanogenic Paracrine Cytokine Networks

Við, og aðrir hópar, höfum útskýrt að það eru nokkur mikilvæg sortuvaldandi paracrine cýtókínet á milli húðfrumna (Mynd 2). Þetta eru aðallega endóþelín (EDN)-1 [8–15], himnubundinn stofnfrumuþáttur (mSCF) [16], própíómelanókortín (POMC) [17–20], prostaglandín E2 [21], kyrningaátfrumur nýlenduörvunarþáttur (GM-CSF) [22], basal fibroblast vaxtarþáttur [23], vaxtartengdur krabbameinsgeni [24] og keratínfrumuvaxtarþáttur (KGF) [25,26] sem taka þátt í milliverkunum keratínfrumna/melanocyta og leysanlegt SCF [27 ], lifrarfrumuvaxtarþáttur (HGF) [8,10,27-29] og KGF [30] sem taka þátt í milliverkunum vefjafrumu/melanfruma. Byggt á útskýrðum melanogenic paracrinecytokine netum, þ.mt samsvarandi viðtökum þeirra, er mikilvægt að ákvarða hvaða sortuvaldandi paracrine cýtókín net eru þátt í og ​​eru sérstaklega virkjuð in vivo í oflitunaraðferðum í húðþekju SLs.

3.3. Helstu paracrine frumufrumur og viðtakar sem bera ábyrgð á melanocyte virkjun í SLs

Meðal ofangreindra melanogenic cýtókína og samsvarandi viðtaka þeirra, ákváðum við fyrst hlutverk basísks fibroblast growth factor (bFGF) og vaxtartengds krabbameinsgena (GRO ) í húðþekju SLs. Basic FGF reyndist oftjáð í UVB-útsettum keratínfrumum úr mönnum, en einsleit efni þeirra höfðu sérstaka möguleika til að örva sortumyndun og fjölgun sortufrumna manna í ræktun, þó að meðvirkar með getu til að auka hringlaga AMP gildi séu í meginatriðum nauðsynlegar fyrir sortuefnaörvun [23 ]. GRO var auðkenndur af rannsóknarhópnum okkar sem sortuvaldandi cýtókín sem gegnir mikilvægu hlutverki í oflitunarmyndun af völdum fenýlazo-naftóls eftir ofnæmisviðbrögð þess í brúngulum naggrísahúð [24,31]. Hálfmagnsbundin RT-PCR leiddi í ljós að engin breyting var á genatjáningargildum bFGF og GRO í SL vefjahúðinni samanborið við húðþekju án meiðsla [2]. Í samræmi við mRNA tjáningarstig bFGF og GRO leiddi ónæmisvefjaefnafræði í ljós að enginn munur var á styrk ónæmislitunar með and-bFGF (Mynd 1c,d) og and-GRO (Mynd 1e,f) á milli SL-skemmdarinnar og non-skemmdarinnar. húðþekju [2]. Þessar niðurstöður gáfu til kynna enga þátttöku bFGF eða GRO sem innri sortuvaldandi frumuefna fyrir virkjun sortufrumna í SLs.

Í líffræðilegum aðferðum UVB-framkallaðrar oflitunar er tjáning EDN1, æðaþrengjandi peptíðs sem upphaflega var einangrað úr æðaþelsfrumum úr svína [32], og mSCF [16] uppstýrt á sjálfvirkan hátt með verkun UVB-örvaðrar losunar interleukins ( IL)-1 með myndun hvarfgjarnra súrefnistegunda (ROS) [15]. Þessi frumufrumur valda því að nærliggjandi sortufrumur auka tjáningu þeirra á mikilvægu melanínmyndunarensímunum tyrosinasa [14,33], EDNBR [34] og melanósóm fylkispróteini PMEL17 [34] auk útbreiðslutengdra ensíma eins og hringlaga háðs kínasa (CDK)2 [34], sem leiða til oflitunar í húð sem er útsett fyrir UVB. Byggt á helstu sortuvaldandi cýtókínum sem í meginatriðum taka þátt í UVB-melanosis, ákváðum við næst hlutverk EDN1 í sortufrumnavirkjunarkerfi í húðþekju SLs. Lýsing mRNA tjáningarstigs EDN1 í húðþekju með hálfmagnsbundinni RT-PCR greiningu sýndi að það var marktæk aukning á tjáningu að meðaltali um 3.2-falt í SL húðþekju samanborið við húðþekju sem ekki var sár. [4]. Í samræmi við aukna genatjáningu EDN1, var aukin ónæmislitun með and-EDN1 í gegnum SL vefjahúðina (Mynd 1g, h) [4].

Til viðbótar við EDN1, ákváðum við næst hlutverk EDN viðtaka í virkjun sortufrumna sem liggur að baki SLs. Binding EDN við viðtaka þess er fyrsta skrefið í helstu paracrine ætterni milli keratínfrumna og sortufrumna sem stjórnar litarefni húðarinnar [11,14,35,36]. EDN viðtakar eru sjö-transhimnu G-prótein tengdir viðtakar með tveimur ísóformum (A og B) sem hafa samskipti sérstaklega við EDN1 og við allar gerðir EDN (EDN1, EDN2 og EDN3), í sömu röð [37]. Varðandi hamlandi áhrif EDN-viðtakablokka á EDN-örvaða útbreiðslu sortufrumna manna í ræktun, komu marktæk hamlandi áhrif aðeins fram í nærveru BQ 788, anendóþelín B viðtaka (EDNBR) mótlyf, en ekki BQ123 eða BQ610, sem er endothelin. Viðtaka (EDNAR) mótlyf [9], sem benti til þess að EDN1/EDN viðtaka boð eru miðuð með EDNBR. Hálfmagnsbundin RT-PCR greining á tjáningu EDNBR mRNA leiddi í ljós að meðal hinna ýmsu tegunda húðfrumna eru sortufrumur eina mikilvæga tegundin af frumum sem tjá EDNBR. Þar sem við höfum þegar sýnt fram á að EDN1 sem er seytt af keratínfrumum kveikir á virkjun innanfrumu próteinkínasa C (PKC) með EDNBR [35], ákváðum við hvort tjáningarstig EDNBR væri einnig aukið í sortufrumum í SL húðþekju. Hálfmagnsbundin RT-PCR greining á EDNBRmRNA í húðþekju SLs sýndi verulega aukna tjáningu að meðaltali 6.8-falt í SL húðþekju [4]. Í samræmi við aukna tjáningu EDNBR mRNA, var aukin ónæmislitun með and-EDNBR staðbundið í sortufrumum í SL húðþekjunni (Mynd 1i,j) [4]. Summa þessara niðurstaðna bendir eindregið til samræmdrar aukningar á tjáningu EDN1 og viðtakatengingar þess í húðþekju SLs.

Byggt á helstu sortuvaldandi cýtókínum sem taka þátt í UVB-melanosis, ákváðum við næst hlutverk SCF í virkjun sortufrumna í SL húðþekju. Við höfum þegar greint frá því að UVB útsetning ræktaðra keratínfrumna úr mönnum sem og húðþekju manna örvar marktækt tjáningu SCF bæði á gena- og próteinstigi [15,16]. Hálfmagnsbundin RT-PCR greining á SCF mRNA í húðþekju SL sýndi fram á verulega aukna tjáningu að meðaltali um 3.9-falt í SL húðþekju sem ekki er sár samanborið við húðþekju sem ekki er sár [2]. Western blotting fyrir SCF í húð sex sjúklinga með SL sýndi fram á að það var marktæk aukning að meðaltali um 1.6-falt á SCF próteini í SL húðþekju sem ekki er sár samanborið við húðþekju sem ekki er sár [2].

Í samræmi við aukið gena- og próteintjáningarstig SCF, var aukin ónæmislitun með and-SCF um SL húðþekjuna (Mynd 1k,l) [2]. Það var rifrildi um hvort SCF sem uppstillt er á próteinstigi í húðþekju sé leysanlega gerð eða himnubundin gerð. Ef grunnhimnu-gegndræpi-leysanlegt SCF er uppstýrt í húðþekju, ætti að virkja mastfrumur sem eru til staðar í húðinni til að fjölga og fjölga. Þar sem tólúidínblátt litun í SLs sýndi enga aukningu á fjölda mastfrumna í SL-húðinni [2], er líklegt að tegund SCF sem er uppstillt í SLs sé himnubundin gerð.

Auk SCF ákváðum við næst hlutverk SCF viðtakans c-KIT í virkjun sortufrumna sem liggur að baki SLs. Við höfum þegar greint frá því að UVB útsetning ræktaðra sortufrumna úr mönnum sem og húðþekju manna örvar marktækt tjáningu c-KIT bæði á gena- og próteinstigi [15,38]. Ennfremur, í UVB-örvuðum litarefnum á brúngulri naggrísahúð, stöðvaði mótefni gegn c-KIT verulega aukinn fjölda dópa-jákvæðra sortufrumna sem og oflitun á frumstigi litunarferlisins af völdum UVB [16] , sem gefur sterklega til kynna að binding SCF við c-KIT gegnir mikilvægu hlutverki í UVB-örvuðu virkjun sortufrumna, sem leiðir til oflitunar. Samhliða aukinni tjáningu SCF á gena- og próteinstigum jókst genatjáning c-KIT viðtaka þess einnig um 2.14-falt að meðaltali í SL húðþekju [2]. Í samræmi við aukna tjáningu á c-KIT mRNA var aukin ónæmislitun með c-KIT mótefninu sem staðsett var í sortufrumum í SL húðþekjunni (Mynd 1m,n) [2]. Þetta bendir til þess að það sé samræmd aukning á tjáningu SCF og c-KIT viðtaka þess í SL húðþekju.

Á hinn bóginn hafa aðrir hópar sett fram þá tilgátu að keratínfrumuvaxtarþáttur (KGF)/KGF viðtaka (KGFR) gegni mikilvægu hlutverki í upphafi SL-myndunar og í aukinni litarefni aðeins í húðþekju á fyrri stigum SLs [25]. Í húðþekju [30] og/eða leðurhúð [25] á SLs er KGF tjáning aðeins uppstýrt á ónæmislitunarstigi þó frekari rannsóknir á gena- og próteintjáningu þess séu nauðsynlegar fyrir allar endanlegar niðurstöður um það sem innra cýtókín sem veldur SLs. Þó að vitað sé að IL-1 veldur keratínfrumum til að örva framleiðslu KGF, er enn óljóst hvernig KGF tjáning er stjórnað upp í húðþekju þar sem IL-1 tjáning er frekar niðurstýrð [2]. Auðvitað ætti að ákvarða hvort TNF (sem er uppstýrt í húðþekju) hafi getu til að örva KGF framleiðslu. Þar sem KGF tjáning í húðinni er fyrst og fremst bundin við trefjafrumur í húð, er líklegt að aukin tjáning á KGF með trefjafrumum í húð í húðskemmdum SLs [25] tengist bæði aukinni útbreiðslu keratínfrumna og örvaðri sortumyndun. Þannig er líklegt að húðtrefjafrumur séu viðvarandi virkjaðar með UV útsetningu til að losa KGF, sem virkar beint eða óbeint ítarlegar keratínfrumur til að móta tjáningu SCF, sem stuðlar að oflitun SL [25].

Næst ákváðum við líffræðilega aðferðir þar sem EDN1 seytingu er uppstýrt í húðþekju SLs. Það er vel þekkt að líffræðilegir þættir sem tengjast örvun EDN seytingar með keratínfrumum úr mönnum eru ma IL-1, æxlisdrep (TNF) og endothelin converting enzyme (ECE)-1. Niðurstöður okkar um sjálfkrana frumuvakaörvun sem tengist UVB sortumyndun sýndu að uppstjórnun IL-1 er aðallega ábyrg fyrir því að örva framleiðslu á EDN1 og SCF í UVB-útsettum keratínfrumum úr mönnum [12,16]. Þannig hefur IL-1 og reynst vera öflugir örvandi EDN seytingar með seinkað hámarki í mönnum keratínfrumum í rækt sem líkist mynstur UVB-framkallaðrar seytingar EDN [11]. Það er líka vel þekkt að UVB geislun örvar marktækt losun IL-1 en ekki IL-1 í ræktuðum hormónafrumum úr mönnum og að blokkandi mótefni gegn IL-1 dregur verulega úr aukinni seytingu EDN1 [11], sem gefur til kynna að oflitarefni af völdum UVB sé miðlað með virkjun húðþekju sortufrumna sem stafar af aukinni seytingu EDN1 með UVB-útsettum keratínfrumum. Að auki hefur verið sýnt fram á að tjáning mSCF próteins er verulega örvuð með meðferð með IL-1 í keratínfrumum úr mönnum í ræktun [16]. Þess vegna ákváðum við næst hvort IL-1 væri einnig uppstýrt til að örva tjáningu EDN1 og/eða SCF í húðþekju SLs. Athyglisvert er að hálfmagnsbundin RT-PCR greining leiddi í ljós að tjáning á IL-1 mRNA er frekar niðurstýrt í húðþekjunni [16]. Í samræmi við þá RT-PCR greiningu leiddi ónæmisvefjaefnafræði með IL-1 mótefni í ljós veikari ónæmislitun í húðþekju vefjaskemmda en í húðþekju sem ekki var sár (Mynd 1o,p) [2], sem benti til þess að IL{ {33}} ber ekki ábyrgð á aukinni tjáningu EDN1 og SCF í húðþekju SL.

Varðandi aðferðir sem liggja að baki aukinni tjáningu EDN1 í SLs, auk IL-1, var TNF við 10 ng/ml tilkynnt af Tsuboiet al. að vera öflugur örvandi (10-falt) á EDN seytingu með ræktuðum keratínfrumum úr mönnum [39]. Hvað varðar gangverkið sem liggur að baki aukinni tjáningu SCF í SLs, skoðuðum við næst áhrif TNF á SCF tjáningu í ræktuðum keratínfrumum úr mönnum. Western blotting með því að nota and-SCF mótefni sýndi að TNF örvar verulega framleiðslu á mSCF [15]. Þess vegna ákváðum við næst hvort TNF er uppstýrt til að örva tjáningu EDN1 og/eða SCF í húðþekju SLs. Athyglisvert er að hálfmagnsbundin RT-PCR greining leiddi í ljós að tjáning TNF mRNA er marktækt uppstýrt í SL húðþekjunni [2]. Í samræmi við RT-PCR greininguna sýndi ónæmisvefjaefnafræði með and-TNF mótefni sterkari ónæmislitun í SL húðþekjunni en í húðþekju sem ekki er sár (Mynd 1q,r) [2]. Þannig var hægt að hugsa sér að uppstýrð tjáning TNF sé aðallega ábyrg fyrir aukinni tjáningu EDN1 og SCF í húðþekju SLs.

Hvað varðar gangverkið sem tekur þátt í aukinni tjáningu EDN1, ákváðum við næst hvort ECE-1 sé uppstýrt í SL húðþekju. Þar sem engin rannsókn hefur lýst tjáningu ECE-1 í hornfrumum úr mönnum á þessum tíma, auðkenndum við ECE-1 í ræktuðum keratínfrumum úr mönnum samanborið við æðaþelsfrumur. Greining á ECE-1 virkni í ýmsum gerðum húðfrumna leiddi í ljós að keratínfrumur úr mönnum en ekki sortufrumur úr mönnum hafa ECE-1 virkni, sem á sér stað í minna mæli en í æðaþelsfrumum [40]. Western blotting, með því að nota mótefni sem við undirbjuggum gegn ECE-1, sýndi fram á að ECE-1 próteinið er til í æðaþelsfrumum manna, trefjafrumum og keratínfrumum úr mönnum, en ekki í sortufrumum manna [40]. Mælingar á ECE-1 virkni í floti eftir ónæmisútfellingu með ECE-1 mótefninu sýndu fram á að æðaþelsfrumur og keratínfrumur úr mönnum hafa greinanlega virkni ECE-1 við pH 6,8, sem samsvarar vel við ECE-1 {15}} ónæmisútfellt með mótefninu okkar gegn ECE-1 [40]. Hálfmagnsbundin RT-PCR greining á ECE-1 mRNA gildum leiddi í ljós að IL-1, en ekki TNF, hafði lítilsháttar örvandi áhrif á tjáningu ECE-1 gena í ræktuðum keratínfrumum úr mönnum [40]. Í samræmi við RT-PCR greininguna leiddi Western blotting í ljós að IL-1, en ekki TNF, örvaði tjáningu ECE-1 próteina í ræktuðum keratínfrumum úr mönnum [40]. Að lokum ákváðum við hvort ECE-1 sé einnig uppstýrt til að örva EDN1 tjáningu í húðþekju SL. Í samræmi við skort á örvandi áhrifum TNF , sem er uppstýrt í SLs, var enginn munur á mRNA tjáningarstigi ECE-1 á milli skaðvalda og húðþekju sem ekki er sár í SLs [2], sem bendir til þess að ECE-1 ber ekki ábyrgð á aukinni seytingu EDN1 í SL.

Mynd 3 sýnir samantekt á sjálfsáhrifaörvun í keratínfrumum úr mönnum í ræktun. Hvað varðar líffræðilega aðferðir sem leiða til virkjunar EDN og SCF merkjafalla [9], benda in vitro rannsóknir okkar til áhugaverðrar andstæðu þess að þó að uppstjórnun IL-1 sé aðallega ábyrg fyrir því að örva EDN1 og SCF framleiðslu í UVB- sortusjúkdómur, er uppstjórnun TNF aðallega tengd örvuðu framleiðslu þessara sömu tveggja frumuefna í SL.

3.4. Samverkandi örvandi áhrif samsetningar EDN1 og SCF

Við höfum þegar greint frá því að það sé samvirkni í örvaðri DNA myndun í ræktuðum sortufrumum úr mönnum eins og mæld er með 14C-týmidín innlimun í samveru SCF og EDN1 [41]. Það var líka svipuð samvirkni í örvun melanínmyndunar sem mæld var með 14C-þíúrasíl innlimun í ræktuðum sortufrumum úr mönnum í samhliða viðveru SCF og EDN1 [41]. Aftur á móti var engin slík samvirkni milli EDN1 og granulocyte macrophage colony stimulatory factor (GM-CSF) eða HGF [13,42]. Að því er varðar boðunaraðferðirnar sem taka þátt í þessum samverkandi áhrifum, komumst við að því að krossspjallið milli SCF og EDN1 merkja var hafið með týrósínfosfórun c-KIT sem er örvað óbeint af virkjaðri PKC, sem eykur myndun Shc-Grb{ {18}}SOS flókið sem leiðir aftur til samverkandi virkjunar Ras/Raf-1/MEK/MAP kínasa lykkjunnar [41].

3.5. Gagnkvæm samskipti EDN/EDNBR og SCF/c-KIT

Næst ákváðum við hvort aukin framleiðsla SCF kveiki á EDNBR tjáningu eða skyldleika þess við EDN bindilinn í sortufrumum manna auk örvandi áhrifa þess á útbreiðslu þeirra. Western blotting greining leiddi í ljós að SCF getur örvað tjáningu EDNBR próteins í ræktuðum sortufrumum úr mönnum [43]. Þegar sækni EDNBR við bindil þess var metin í ræktuðum sortufrumum úr mönnum með bindibindingarprófi, kom í ljós að binding 125I-merkts EDN1 við EDNBR jókst marktækt tveimur dögum eftir ræktun með SCF [43]. Samanlagt benda þessar niðurstöður til þess að SCF tjáð í upphafi fasa geti aukið tjáningu EDNBR, sem veldur því að sortufrumur verða næmari fyrir síðari seytingu EDN1. Á hinn bóginn, þegar ræktaðar sortufrumur úr mönnum voru meðhöndlaðar í 48 klst með EDN1 við 10 nM, leiddi bindilbindingarprófið með því að nota 125I-SCF í ljós að EDN1 jók greinilega bindandi sækni SCF við c-KITviðtaka [43].

4. Samantekt um meinafræði SL

Tafla 1 sýnir samantekt á paracrine cýtókínetum sem eiga sér stað í ýmsum húðlitunarsjúkdómum. Með tilliti til þessara neta, eru SL mjög lík UVB-melanosis, nema hvað varðar frumuvaka eins og TNF fyrir aukna framleiðslu á EDN1 og SCF.

Hvað varðar líffræðilega aðferðir sem leiða til aukinnar virkni EDN- og SCF-merkjafallanna, bentu in vitro rannsóknir okkar til þess að þó að uppstjórnun IL-1 sé aðallega ábyrg fyrir því að örva EDN1- og SCF-framleiðslu í UVB-melanosis, þá benti uppstillingin TNF tengist örvuðu framleiðslu þessara sömu tveggja frumuefna í SL. Mynd 4 sýnir samantekt á flóknu sambandi milli SCF og EDN1 tengsla í húðþekju SLs. Það felur í sér samvirkni milli SCF og EDN1 sem og virkjun EDNBR og c-KIT af SCF og með EDN1, í sömu röð. Losun TNF af keratínfrumum líkir eftir framleiðslu á SCF og EDN á sjálfkraninn hátt, sem bæði hafa samverkandi áhrif á virkjun sortufrumna sem og örvandi áhrif á tjáningu samsvarandi viðtaka þeirra, c-KIT og EDNBR. Þessar samverkandi og millifrumu milliverkanir auðvelda virkjun sortufrumna í meira mæli í vefjahúð SLs en í húðþekju sem er útsett fyrir UVB, sem leiðir til öflugri oflitunar á SLs.

Samanlagt benda niðurstöður okkar til þess að tvö merkjafall, EDN1/EDNBR og mSCF/c-KIT, gegni eðlislægu og samræmdu hlutverki sem ýtir undir mítógenmyndun og sortumyndun sortufrumna í oflitaðri húðþekju SLs. Mynd 5 sýnir líffræðilega röð fyrir oflitunarferli sem taka þátt í SLs, þar sem óþekktir æxlismyndandi þættir vegna uppsafnaðs DNA skemmda í fjarlægri fortíð valda keratínfrumum til að framleiða og seyta TNF. Þannig veldur TNF því að keratínfrumur offramleiða sortuvaldandi frumufrumur eins og SCF og EDN1 á sjálfvirkan hátt, sem kallar á aðliggjandi sortufrumur til að örva melanínmyndun, sem leiðir til oflitunar í húðþekju.

5. Staðbundin meðferðaraðferðir

Byggt á samræmdu melanogenic paracrine netinu og virkjaðri boðunaraðferðum sem leiða til virkjun sortufrumna í lesional SL epidermis, er blokkun á nauðsynlegum melanogenic innanfrumuboðum æskileg meðferðaraðferð til að ná litarefnisvörnandi áhrifum á SLs. Slík nálgun gæti valdið vanlitamyndun, en ætti ekki að vera árangursrík í húð sem ekki er sár þar sem slík merki eru ekki virkjuð í sortufrumum. Á hinn bóginn er hindrun á virkni tyrosinasa önnur aðferð til að bæta oflitarmyndun í SLs, þó að það gæti valdið vanlitamyndun og gæti einnig verið áhrifarík í húð sem ekki er sár.

5.1. Hindrar ómissandi melanogenic Intracellular Signaling

Þar sem næstum allar stökkbreytingar sem leiða til erfðafræðilegra litarefnaraskana eiga sér stað á EDN1/EDNBR og SCF/c-KIT ásnum [44] og þar sem það eru samverkandi örvandi áhrif EDN1/SCF á frumufjölgun og melanization í ræktuðum sortufrumum úr mönnum, er hugsanlegt að hindra annað hvort EDN1/EDNBR eða SCF/c-KIT merkjasendingar gætu komið í veg fyrir oflitun vegna samræmdrar aukinnar tjáningar EDN1 og SCF vegna þess að samverkandi örvandi áhrif koma ekki fram. Þess vegna reyndum við að ná litarefnisáhrifum á SL með því að hindra EDN/EDNBR merkjalínuna.

EDN-virkjaða innanfrumuboðaleiðin samanstendur af bindingu við EDNBR, virkjun PKC, MAP kínasafallsins og cAMP/PKA fallins [34,35,41]. Þessar frumuaðgerðir eru því hafnar með bindingu EDN1 við G-prótein-tengda EDNBR, fylgt eftir með raðbundnum merkjaferlum sem samanstanda aðallega af PKC og MAPK. Eftir að hafa binst við viðtaka þess kveikir EDN1 vatnsrof á polyphosphoinositide með því að virkja fosfólípasa C, sem myndar inositol-trísfosföt (IP3) og díacýlglýseról, virkja innanfrumu Ca plús plús og virkja PKC, í sömu röð. PKC virkjun næst með flutningi þess frá frumu til plasmahimnunnar og virkjar Raf-1 með fosfórýleringu. Þannig virðist Raf-1 vera sameiningarpunktur milli PKC og MAPK ferilanna. Raf-1 virkjun leiðir til virkjunar á röð MAPK ferli milliefna sem samanstanda af MEK, ERK og RSK. Fosfórýlerað Raf-1 virkjar MEK með fosfórun og virkjað MEK fosfórýlerar ERK. Virkjaða ERK fosfórýlerar síðan microphthalmia-associated transscription factor (MITF) við serín 75, sem leiðir til nýliðunar á meðvirkja til að stjórna tjáningu gena nokkurra sortuvaldandi þátta [41]. Á sama tíma leiðir virkjað MAPK til virkjunar á RSK, sem fosfórar CREB, sem leiðir til umritunar MITF. Á hinn bóginn hefur virkjað PKC víxlspjall við adenýlsýklasafallið til að framleiða cAMP[8], sem leiðir til virkjunar á PKA, sem virkjar einnig CREB með fosfórun, sem leiðir til aukinnar tjáningar MITF. Aukið magn MITF próteins örvar tjáningu sortufrumnasértækra gena þar á meðal tyrosinasa, PMEL17, EDNBR, c-KIT og CDK2.

Þar sem nokkrir innanfrumuboðaleiðir leiða til örvaðrar sortumyndunar innan sortufrumna og EDN merkjafallið er sérstaklega tengt PKC leiðinni, sem felur í sér kalsíumlosun frá endoplasmic reticulum [13], notuðum við kalsíumhreyfingarpróf til að skima fyrir EDNBR mótlyfjum frá ýmsum af jurtaseyði. Kalsíumhreyfing frá endoplasmic reticulum á sér stað eftir myndun IP3 og díacýlglýseróls vegna vatnsrofs pólýfosfóínósíðs í gegnum virkan fosfólípasa C. Þegar sortufrumur úr mönnum eru meðhöndlaðar í rækt með EDN1, myndar losun kalsíums sem fura-2AM hvarfefnið greinir flúrljómun eftir bindingu við losað kalsíum, eins og sést af hröðum útliti guls litar sem hægt er að mæla í rauntíma með stafræn myndsmásjá. Frá því að skima marga jurtaseyði, komumst við að því að forræktun með Matricaria chamomilla útdrætti truflaði kalsíumhreyfinguna sem EDN1 [1] framkallaði, sem benti til þess að það gæti þjónað sem áhrifaríkur mótefni gegn EDNBR. M. chamomilla, almennt þekkt sem chamomile, er árleg planta af samsettri fjölskyldu Asteraceae. M. chamomilla er vinsælasta uppspretta jurtaafurðarinnar kamille, þó aðrar tegundir séu einnig notaðar sem kamille.

Byggt á hamlandi áhrifum sýna sem eru brotin úr M. chamomilla útdrættinum á EDN{0}}framkallað kalsíumlosun í ræktuðum sortufrumum úr mönnum, auðkenndum við spíróeter sem virka efnasamband þess með öfluga getu til að trufla kalsíumlosun (mynd 6) ) [1]. Það eru tvær hverfur af spíróeter (E og Z) og spíróeter E-hverfur getur alveg afnumið kalsíumlosun í styrk meira en 1 µM. Meðferð með spíróeter E-hverfunni í 0,2 og 1,0 prósent styrk dró marktækt úr UVB-örvuðum litarefnum í brúngulri naggrísahúð eins og metið var með ∆L gildinu, sem benti til þess að hindra EDN-miðlaða merkjafallið. er áhrifaríkt til að koma í veg fyrir oflitunarmyndun af völdum UVB. Þetta er mikilvæg sönnunargögn in vivo sem sýna innri þátttöku EDN-fallsins í UVB-melanosis. Á hinn bóginn, eins og búist var við, þegar það var for- eða samræktað í sortufrumnarækt, hafði M. chamomilla útdrátturinn öfluga getu til að afnema EDN1-örvaði aukningu á DNA nýmyndun (mælt með 14C-týmidín innlimun) sem og melanínmyndun (eins og mæld er með 14C-thiouracil innlimun) með ræktuðum sortufrumum úr mönnum. Í samhliða rannsókn þar sem notaðar voru ræktaðar keratínfrumur úr mönnum, staðfestum við að M.chamomilla útdrátturinn hefði engin hamlandi áhrif á IL-1 -framkallaða seytingu EDN1 [1]. Að auki, með því að nota týrósínasa sem eru unnin úr melanocytum úr mönnum, staðfestum við að M. chamomilla þykkniið hafði engin hamlandi áhrif á virkni tyrosínasa in vitro öfugt við mismunandi hamlandi áhrif þekktra hvítunarefna, kojínsýru og arbútíns [1]. Þegar M. chamomilla þykkni var borið á daglega á brúnleitt gult marsvínaskinn í tvær vikur strax eftir UVB geislun, minnkaði styrkleiki UVB framkallaðrar litarefnis verulega samanborið við meðferð með 10 prósent arbútíni eða eingöngu burðarefni [1].

Í klínískri rannsókn á mönnum kom í ljós að staðbundin notkun M. chamomilla útdrættanna á UVB-útsetta framhandleggshúð manna í sex vikur strax eftir geislunina kom marktækt í veg fyrir oflitarefni af völdum UVB, mæld með litamunarmæli og gefið upp sem ∆ L gildi.

Með því að nota vax sem inniheldur M. chamomilla þykkni, skoðuðum við klínísk áhrif á litarefni inSLs. Í þessari klínísku rannsókn var hver litarefni blettur skoðaður með tilliti til litabreytinga og stig klínískrar bata og réttmæti metið. Klínískt mat sem framkvæmt var við Tokyo Women's Medical University leiddi í ljós að meðferð í tvo mánuði með M.chamomilla útdrættinum leiddi til þess að 48 prósent einstaklinga sýndu verulegan bata og 40 prósent með lítilsháttar bata [1]. Í breytingum á litarefnisstigi mæld með ∆L gildum, höfðu allir sjúklingar með SLs áberandi hækkun yfir tvær á ∆L gildi sínu, sýnilega auðþekkjanlegt gildi, eftir meðferð í 2~3 mánuði. Marktæk lækkun varð á litarefnisstigi eins og mælt var með ∆L gildum á milli 0, 1 og 2 mánuðum eftir meðferð (Mynd 7). Á heildina litið leiddi klínískt mat í þrjá mánuði í ljós að meðferð með M. chamomilla útdrættinum leiddi til þess að 42 prósent einstaklinga sýndu verulegan bata, 12 prósent með í meðallagi bata og 25 prósent með smávægilegum framförum. Önnur klínísk rannsókn sem gerð var á tveimur tengdum húðsjúkdómasjúkrahúsum í Tókýó sýndi fram á að meðferð með M. chamomilla útdrættinum minnkaði smám saman litarmyndunina og eftir sex mánuði leiddi það til þess að um það bil 70 prósent einstaklinga sýndu meira en lítinn bata þar á meðal 10 prósent með hvarfi og 15 prósent með áberandi bata . Tvö tilvik voru þar sem SL hvarf algjörlega eftir um það bil sex mánaða meðferð, þar sem ∆L gildi hækkuðu upp í 8,4 og 6,9 eftir sex mánaða meðferð (Mynd 8) [1].

Að lokum, varðandi meðferðaraðferðir fyrir SLs með því að hindra nauðsynlega sortuvaldandi innanfrumuboð, benda ofangreindar klínískar rannsóknir til þess að blokkun EDN1/EDNBR-tengdra boðefna sé áhrifarík meðferðarmeðferð fyrir SLs án nokkurra blóðlitunaráhrifa.

5.2. Hamlar virkni tyrósínasa

Að hindra virkni tyrosinasa er önnur aðferð til að bæta oflitun í SL sem hefur mögulega galla við blóðlitunarbreytingu, en hugsanlegan ávinning af því að vera einnig áhrifarík í húð sem ekki er sár. Þar sem hvítunarefni eru almennt hönnuð til að meðhöndla UVB-melanosis, hefur ekki verið gerð klínísk tvíblind rannsókn á hugsanlegum litarvarnaráhrifum hvítunarefna á SL. Við gerðum tvíblinda hálfandlitsrannsókn á 27 japönskum kvenkyns sjálfboðaliðum með SL. Í þeirri klínísku rannsókn var húðkrem með eða án 6 prósenta L-askorbats-2-fosfats 3 Na (APS) (prófunarkrem/lyfleysukrem, í sömu röð) borið á andlitið tvisvar á dag á andlitið í 24 vikur [45]. Fulltrúarmyndir af andlitum einstaklinga nr. 012 og nr. 016 fyrir og eftir meðferð sýndu fram á að litarefnamagn SL sem meðhöndluð var með krem ​​virtist minnka lítillega samhliða lítilsháttar lækkun á húð sem var meðhöndluð með húðkremi [ 45]. Aftur á móti virtust litarefnisstig SL sem fengu lyfleysukrem og húð sem ekki var sár vera óbreytt. Þar sem L gildi í SL sem fengu húðkrem jukust marktækt eftir 24 vikna meðferð, héldust L gildi í lyfleysu húðmeðferð óbreytt (Mynd 9) [45]. Samanburður á oL gildi fyrir og eftir meðferð leiddi í ljós marktækt hærra oL gildi í SLs sem fengu meðferð með húðkremi en í lyfleysu húðkremmeðhöndluðum SLs (mynd 9). Þessar niðurstöður benda til þess að prófunarkremið sem innihélt APS hafi marktækt sterkari litarefnahemjandi áhrif á SL en lyfleysukremið. Þar sem L gildin í húðinni sem var meðhöndluð með húðkremi sem var meðhöndluð með lyfleysu jókst marktækt eftir meðferðina í 24 vikur, héldust L gildin í húðinni sem var meðhöndluð með lyfleysu og var óbreytt. Samanburður á oL-gildum fyrir og eftir meðferðirnar leiddi í ljós marktækt hærra oL-gildi í húðinni sem var meðhöndluð með húðkremi sem var meðhöndluð með húð en í húðinni sem var meðhöndluð með lyfleysukremi [45]. Þessar niðurstöður benda til þess að prófunarkremið hafi marktækt sterkari hvítandi áhrif á húð sem ekki er sár en lyfleysukremið. Samanburður á litarefnislosandi áhrifum milli SLs og húðar sem ekki er sár leiddi í ljós að þó að það voru marktækt hærri oL gildi á milli fyrir og eftir meðferð með prófunarkreminu í SLs en í húð sem ekki var sár, þá komu oL gildin á svipuðu stigi í SL og húð sem ekki er sár án þess að marktækur munur sé á þeim [45].

Cistanche hamlar virkni tyrosinasa.

Sambandið á milli L-gilda og melanínvísitalna fyrir allar mælingar meðan á þessari klínísku rannsókn stóð leiddi í ljós marktæka fylgni á milli þeirra beggja. Þessi niðurstaða gaf til kynna að 2.0 ∆L gildi væri um það bil jafngilt 20 ∆ melanínstuðul með 10-falt hærra næmi í melanínstuðul en L gildi. Samanburður á L-gildum og melanínvísitölum fyrir hverja mælingu í viku 0 og 24 á SL leiddi í ljós marktæk fylgni. Þessi samanburður á L-gildum og melanínvísitölum benti til þess að það væri marktæk dreifingarbreyting í átt að ljósari lit eins og hærra L-gildi og minni melanínstuðul í SL-prófunum sem fengu húðkrem á meðan það var engin svo greinileg dreifingarbreyting í lyfleysukreminu. -meðhöndluð SLs [45].

Að lokum, varðandi meðferðaraðferð fyrir SLs með því að nota tyrosinasa hemla, bendir summan af ofangreindum niðurstöðum eindregið til þess að APS hafi veik en marktæk andlitunaráhrif á SLs og marktæk hvítandi áhrif jafnvel á eðlilega litaða, heilbrigða húð, án nokkurra blóðlitunaráhrifa.

6. Ályktanir

Að lokum, varðandi virkjun sortufrumna og staðbundna meðferð á SLs, byggt á ofangreindum niðurstöðum um virkjun sortufrumna í SLs sem og klínískri virkni sem fæst með því að nota EDN merkjablokka og tyrosinaseinhemla, er eindregið lagt til að samsett meðferð með EDN merkjablokki og týrósínasahemill er æskileg meðferðarmeðferð fyrir SL.

cistanche töflur

Fyrir frekari upplýsingar, vinsamlegast smelltu á myndina.