Vélræn innsýn í taugavörn af völdum díósmíns og endurbætur á minni í innra heilaslegla-kínólínsýru rottulíkani: endurreisn hvatberaaðgerða og andoxunarefna Part 3

2. Efniviður og aðferðir

2.1. Tilraunadýr. Rannsóknir .is voru leyfðar af Alþjóðaflugmálastofnuninni samkvæmt bókun nr. ASCB/IAEC/14/20/145. AlbinoWistar rottur (hvort kynið, 200 g til 250 g, á aldrinum 8 til 9 mánaða) voru geymdar í pólýprópýlen kubískum girðingum í dæmigerðri stærð við tilbúnar hitastillingar (23 ± 2 gráður), 12:12 klst. myrkur/ljós röð, og raki (40 ± 10%) innan dýrahúss stofnana. .e nagdýrum var gefið venjulegt nærandi matvæli (Ashirwad Manufacturers, Punjab) og hreinsað vatn að vild.

Samband karla og kvenna og minni hefur alltaf vakið mikla athygli. Það er vel þekkt að karlhormón gegna mikilvægu hlutverki í líkamlegum þroska, viðhaldi heilsu og efla kynþroska og kynlíf. Auk þess hafa nýlegar rannsóknir sýnt að karlhormón eru nátengd minni.

Rannsóknir hafa sýnt að karlar standa sig betur en konur í ákveðnum minnisverkefnum. Karlar standa sig til dæmis yfirleitt betur en konur í staðminni og ástæðan er áhrif karlhormóna á hippocampus. Hippocampus er svæðið í heilanum sem vinnur úr staðbundnu minni. Karlkyns hormón geta stuðlað að starfsemi hippocampus og þar með bætt staðbundið minnisgetu karla.

Hins vegar hafa kvenhormón einnig jákvæð áhrif á minni. Rannsóknir hafa leitt í ljós að kvenhormón geta stuðlað að tjáningu minnistengdra gena í heilanum og aukið fjölda og virkni taugafrumna í hippocampus og þar með bætt minni kvenna. Auk þess geta kvenhormón létt á streitu, hindrað frumudauða í taugafrumum, verndað taugafrumur í heila og bætt minni kvenna enn frekar.

Þetta sýnir að bæði karlhormón og kvenhormón hafa jákvæð áhrif á að bæta minni. Karlar og konur hafa mismunandi minnisframmistöðu, hvert með sína kosti og galla, en það þýðir ekki að karlar hafi betra minni en konur eða að konur hafi betra minni en karlar. Þess vegna ættum við ekki að nota kyn sem mælikvarða á minni. Allir ættu að gefa sér fullan leik og bæta minnið stöðugt.

Að lokum, hvort sem við erum karlar eða konur, ættum við að huga að líkamlegri heilsu okkar og andlegu ástandi og velja réttu leiðina til að bæta minni okkar. Til dæmis getur stöðugt að læra nýja hluti, þróa reglulegar lífsvenjur og viðhalda tilfinningalegum stöðugleika haft jákvæð áhrif á að bæta minni. Við skulum vinna saman að því að kanna og æfa stöðugt aðferðir til að bæta minni og skapa betri framtíð fyrir okkur sjálf. Það má sjá að við þurfum að bæta minni okkar. Cistanche getur bætt minnið verulega vegna þess að Cistanche er hefðbundið kínverskt lyf með mörg einstök áhrif, ein þeirra er að bæta minni. Virkni Cistanche kemur frá hinum ýmsu virku innihaldsefnum sem það inniheldur, þar á meðal tannínsýru, fjölsykrur, flavonoid glýkósíð o.fl. Þessi innihaldsefni geta stuðlað að heilsu heilans á margan hátt.

Smelltu á vita 10 leiðir til að bæta minni

Allar dýraaðgerðir eru eingöngu framkvæmdar samkvæmt leiðbeiningum CPCSEA, GOI, Nýju Delí. .e forráðamenn og umsjónarmenn dýra voru blindaðir varðandi mismunandi meðferðaráætlanir sem auðvelda dýrahópum. Rannsóknardýratilraunir voru framkvæmdar, sem tóku að minnsta kosti einnar tvær vikur af kynningartíma.

Allar rannsóknir með dýrum voru gerðar á milli 0900- og 1600-klukkutíma á dag.2.2. Lyf og efni. Díósmín (DSM: 520-27-4), kínólínsýra (QA: 89-00-9) og staðlað greiniefni voru fengin frá Merck (Indlandi).

Natríum tvívetnisfosfat (NaH2PO4), natríumhýdroxíð (NaOH), tvíbasískt kalíumfosfat (K2HPO4), nítróbluetetrasólíum (NBT), fenasínmetósúlfat (5-metýlfenasínmetýlsúlfat), etýlendíamíntetraediksýra (EDTA), {in albúm, {in albúm) 5}}[4-(2-hýdroxýetýl)píperasín-1-ýl]etansúlfónsýra (HEPES), 1,2-bis[2-[bis(karboxýmetýl) amínó]etoxý]etan (EGTA), ríbóflavín, natríumsýaníð (NaCN), natríumasíð (NaN3), tetranatríumpýrófosfat, vetnisperoxíð (H2O2), NADH tvínatríum (DPNH), NADPH tetranatríum (kóensím II minnkað tetranatríumsalt), fosfórsýra Fólín og Ciocalteu's fenól (FCR) og súlfosalisýlsýru (5-SSA) hvarfefni (HiMedia Laboratories, Maharashtra, Indlandi); diglýsín, ísediksýra (CH3COOH), Ellman's hvarfefni (3-karboxý-4-nítrófenýldísúlfíð, DTNB), asabensen (C5H5N) og natríumlárýlsúlfat (SLS) (LobaChemie, Mumbai, Indland); 4,6-Díhýdroxý-2-merkaptópýrimídín (2-TBA), tvínatríumkarbónat(Na2CO3) og (2-merkaptóetýl)trímetýlammóníumjoðíð asetat (TCI efni, Indland); sinksúlfat (ZnSO4), Rochelle salt (kalíumnatríum L(+)-tartrat), 2-(1-nafþýlamínó)etýlamíndíhýdróklóríð, saltsýrunatríum (NaNO2) og p-amínóbensensúlfónamíð (SiscoResearch Laboratories, Indland ); bútýlalkóhól (Fisher Scientific, Indland) var notað.2.3. Inndæling kínólínsýru í heilahellu.

Dýr voru gefin í svæfingu með því að gefa í kviðarhol (ip) ketamín (90 mg/kg) og xýlazín (10 mg/kg) kokteil með því að nota dauðhreinsað vatn til inndælingar. .ebody var lagður í beygjanlegu stöðu á heitum hitapúða, og í festingu á staðalítaxi skurðaðgerð tæki, höfuð var staðsett. .e hársvörðurinn var skorinn í miðbogapunktinn og höfuðkúpan var afhjúpuð með því að draga húðina í sundur.

Einhver af tveim hliðarhvolfunum var valinn af handahófi og í höfuðkúpunni var hryggbeinið borað (stereotaxic hnit -0,8 mm anteropposteriorfrá bregma, ±1,5 mm miðlægt frá midsagittal saum og ±3,6 mm dorsoventral botn frá hryggnum ) til að gera burrholu [21].

Á fyrsta degi var kínólínsýru (QA) lausn nýblanduð (240 nmól) í PBS (Na+-K+ [PO4]2- jafna saltlausn, pH 7,4) og var sprautað smám saman með Hamilton örsprautu með flæðihraða sem nemur 1 µl/mínútu í vinstri eða hægri heilahólf hjá rottum á 5 til 6 mínútum með inndælingarrúmmáli 5 µl ICV-burðarefni [22].

Eftir sáningu á öllu lyfinu var örnálin ekki losuð í 4 til 5 mínútur til að gera dreifingu lyfsins kleift í heila- og mænuvökvanum og hindra uppköst þess. .e jafngildi rúmmáls (10 µl) af PBS-fartæki var gefið ICV í shamrats sem voru með sömu aðgerð, hins vegar var QA ekki sprautað.

Eftir lyfjainndælingar voru götin endurheimt með því að nota bindiefni (sinkfosfat, PYRAX®) og saumað var á húðina. Til að koma í veg fyrir mengun (bakteríavöxt) var Neosporin® borið á pro re nata.

Toevade blóðsýking eftir aðgerð, Orizolin (Zydus Cadila), skammtur 30 mg/kg (ip), var gefinn. Hver rotta fékk heitt umhverfi (37 ± 0,5 gráður) til að koma í veg fyrir ofkælingu eftir skurðaðgerð. Hver rotta var leyfð hálfföstu fóðri (inni í búrinu) og vatni ókeypis eftir aðgerð í sjö daga og var geymd í sérstöku búri (30 × 23 × 14 cm3).

2.4. Tilraunabókun. DSM var sprautað í skömmtum 50og 100 mg/kg á líkamsþyngd (bw) í rottum í gegnum kviðarhol (ip) leið með því að nota 0,5% dímetýlsúlfoxíðefni í venjulegu saltvatni (skammtarúmmál 5 ml/kg) [17].

Dýrum var úthlutað af handahófi í 5 klasa í einblindri stillingu (n � 5): (i) sýndarmennska (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv)QA + DSM100 og (v) QA + DNP. Rottur voru látnar gangast undir gjöf QA (QA-ICV) innan heilaslegs eða sýndaraðgerð á 1. degi.

DSM var gefið í 21 dag í röð daglega 120 mínútum eftir QA-ICV frá fyrsta degi og áfram. Donepezil (DNP) var notað sem staðlað lyf í þessari rannsókn og sprautað (3 mg/kg, ip) í QAICV rottum í 21 dag í röð.

Dýrum í thesham og QA samanburðarhópum var gefið burðarefni (sæfð 0,5% dímetýlsúlfoxíð í venjulegu saltvatni í skammtarúmmáli 5 ml/kg) frá degi 1 til 21. Öll rannsóknin var framkvæmd samkvæmt áætluninni sem lýst er í Mynd 1.2.5. Hreyfivirkni.

Í öllum rottuþyrpingum var meðalhreyfivirkni skjalfest með því að nota hljóðljósmæli í 5 mínútur. Sérstakt dýr var komið fyrir í atlöguljósmælinum í 3 mínútna aðlögunartíma. .e rottur voru síðan gefnar 5 mínútur og niðurstöðurnar voru gefnar upp sem talningar á 5 mínútur [11].2.6. Rotarod próf.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 sekúndur þegar stöngin snýst með níu snúningum á mínútu (rpm).

Eftir öflunartilraunirnar var sérstök rotta sett á sívalningsskaftið og snúningshraðinn var aukinn með stöðugu 10 sekúndna hléi frá 6 rpm (bráðabirgðahraði) til 30 rpm (lokahraði), sem spannar yfir 50 sekúndur. .e meðaltal fall-off leynd (í sekúndum) frá snúnings sívalurskafti kom fram í niðurstöðunum.2.7.

Fótsporagreining. Meginreglan á bak við að framkvæma fótsporsgreiningu hjá rottum er að meta göngufrávik.

Fyrir fótspor voru rottufætur sökkt í fjórum mismunandi lituðum óeitruðum matarlitum og þeim var leyft að keyra á hallandi göngustíg (70 cm × 10 cm × 8 cm). Flugbrautarbotninn var lokaður með sellulósaplötu af hvítum lit. .e rottur voru hvattar til að fara í daufan hluta upp á við við enda flugbrautarinnar til að ná skýrum fótsporum. .e liturinn var fjarlægður varlega úr hverju dýri með því að nota volgu vatni eftir tilraunirnar. .e fótspor voru skönnuð og „skreflengdin“ mæld með venjulegri reglustiku. Skreflengd var magnmæld með því að reikna út fjarlægðina á milli raðstaða á sömu rottunni [11].

2.8. Novel Object Recognition Task (NORT). Fylgt var stöðluðu samskiptareglum eins og Kumar og Bansal gefa upp [23].

ORT er gagnslaus og ófjandsamleg utanaðkomandi erkitýpa sem notuð er til að meta vinnutegundina sem minnst er sem nýtt er með hvatvísri rannsakandi framleiðni nagdýra. .e rannsókn er framkvæmd í þaki-opið krossviðar kubbaskipi (80 cm × 42 cm × 62 cm), staðsett á rólegu svæði, upplýst af 60W LED til að stjórna stöðugri birtu í skipinu.

Sívalningur (hvítur), pýramída (rauður) og teningur (svartur) (12 cm á hæð) viðarhlutir (í eins þrenningum) voru traustir og nægilega þungir til að gera þá óhreyfanlega af nagdýrum. NORT var framkvæmt á 16. degi í 3 þrepum (S): aðlögun (S1), öflun (S2) og greiningarprófun á nýjum hlutum (hald) stigi (S3).

Á meðan á S1 stóð, þremur dögum í röð áður en prófanirnar voru gefnar út til að uppgötva lausan gólfbotn skipsins (5 mínútur) af rottunum. Þegar S1 var lokið var einstaka dýrið venjað við eitthvert sett af föstum hlutum á námsstigi (S2).

Tvíburalíkir hlutir voru staðsettir í 2 geðþóttavalin andstæð horn á skipinu (9 cm til 11 cm bil frá hliðargirðingum). Aðskilið var nagdýr komið fyrir í miðju skipsins sem sneri á móti hinum tveimur föstu hlutum og var leyft að uppgötva tvo svipaða hluti í 5 mínútur. Að stýra trýninu nálægt hlutnum í minna en eða jafnt og 2–3 cm fjarlægð eða líkamleg snerting við hlutinn við trýnið átti að vera rannsóknaraðferð.

Eftir S2 var nagdýrið hýst í búri heima með 60 mínútna millirof (ITR).

Öllum einföstum hlutum sem boðið var upp á í S2 var skipt út fyrir annan solid hlut og nagdýrin voru kynnt aftur fyrir tvíburahlutunum, þ.e. eftirlíkingu af þekkta hlutnum og mismunandi hlutnum. draga úr líklegum fordómum sem hneigð er til ákveðnum stillingum eða hlutum. Skipið og fastir hlutir voru þurrkaðir vandlega (etýlalkóhól 15% og þurr klút) eftir hverja rannsókn til að hefta lyktarmerkin. .e tími sem eykur við að uppgötva hvert atriði í S2 og S3 var skjalfest með skeiðklukku. .e tímalengd sem var eytt í að rannsaka samsvörunaratriðin tvö í S2 (I1 � Ii1 + Ii2) og tímalengdin sem var í að rannsaka hina tveimur ólíku atriðunum, þ.e. kunnugri og ólíkum, í S3 (I2 � Ii3 + Ib) var skráð. .e breytileiki í tímalengd sem varið er í að rannsaka mismunandi hlutinn og tímalengd rannsókna á þekkta hlutnum (Ib–Ii3 � DI) lýsir varðveislu minnis.

DI (mismununarvísitala)/S3 tímalengd/tímar við að rannsaka bæði þekkta og nýja hlutinn (breytt DI) bætir hlutdrægni með frávikum í heildarrannsókninni og gefur til kynna hneigð til mismunandi atriða í mótsögn við þekkta hluti {DI � (Ib–Ii3 )/(Ii3 + Ib)}. Minningarminni var metið með því að mæla hæfileika nagdýra til að útskýra kunnuglega/nýjunga í S3 og var gefið upp sem DI (breytt fyrir heildarrannsóknartímabilið í S3) [24].

2.9. MorrisWater Maze (MWM). Fylgt var stöðluðum siðareglum eins og Kumar og Bansal gefa upp [25]. MWM dæmir rýmisminnið með sundprófum, þar sem nagdýrið finnur undankomuleið að falnum palli.

Svartur, hringlaga tankur (2 m í þvermál, 0,6 m hæð) var með vatni (25 ± 1 gráðu) fyllt að 0,3 m dýpi. Vatnslónið var aðskilið réttsælis í 4 svipuð svæði (R1, R2, R3 og R4) með því að nota tvær nælontrefjar, festar hornrétt á efri jaðar tanksins.

Stofa (10,5 cm × 10,5 cm) var staðsett neðansjávar (1 cm undir vatni) í lónssvæði R4. Bletturinn á pallinum hélst ósnortinn allan yfirtökutímabilið.

Hver einasta rotta fékk fjórar raðtökulotur (5 mínútur ITR) á hverjum degi. .e nagdýrinu var sleppt varlega í vatnslónið sem snýr að tankveggnum, þar sem staðsetningin var mismunandi eftir hverri einustu tilraun frá R1-R4, R2-R1, R3-R2 og R{{ 7}}R3 á dögum 1 til 4, í sömu röð, og það var leyft 120 sekúndur til að greina neðansjávarpallinn. .e nagdýr héldu áfram að hvíla á pallinum í 20 sekúndur.

Bilun til að greina pallinn innan 120 sekúndna gaf til kynna handvirka staðsetningu rottunnar á pallinum og þá var þeim leyft 20 sekúndur á pallinn. Escape latency time (ELT) er tímalengd(ir) þess að uppgötva huldu pallinn í vatnsgeyminum.

Staðbundið nám var merkt af degi eitt á móti degi fjögur ELT. Í rannsóknarrannsókninni (5. dagur) rannsökuðu nagdýrin lónið í 120 sekúndur en voru svipt pallinum. .e. meðallengd í öllu lóninu (4 svæði) var skráð. .e meðallengd sem eytt var í R4 (TSTQ: tími í markfjórðungi) leit að leyndu pallinum var talinn vísitala viðmiðunarminni. .samanburðarstilling tanksins miðað við hlutina á rannsóknarstofunni sem virka sem sjónræn merki og staða rannsakandans hélst ótrufluð [26].

2.10. Mat á lífefnafræðilegum breytum. Eftir að hafa lokið hegðunarprófunum var heila heilans safnað saman og hann settur á ísmola í duftformi, fylgt eftir með baði með frystingu dauðhreinsuðu saltvatni (ísótónískt 308 mOsmol/l NaCl) til að fjarlægja leifar og blóð.

Einsleitni alls heilans náðist samstundis í frystingaraðskilnaðarbuffi (pH 7,4) með samsetningunni 215 mM D-mannitóli, 20 mM 2-[4-(2-hýdroxýetýli )píperasín-1-ýl]etansúlfónsýra, 1 mM 1, 2-bis[2-[bis(karboxýmetýl)amínó]etoxý]etan, 75 mM sakkarósa og 0,1% BSA. .e einsleitt efni var skilið í skilvindu við 4 gráður með 13000 x g krafti í 5 mínútur. .e pillunni var hafnað og flotið var aðskilið í tvo hluta og skilið aftur í skilvindu (4 gráður) við 13000 x g kraft í 5 mínútur. Hrár hvatberakilla var aðskilinn og aftur skilinn í skilvindu með 1,2-bis[2-[bis(karboxýmetýl)amínó]etoxý]etani við 12.500 × g í 11 mínútur (4 gráður). Hálfföstu útfellingin sem þannig var fengin og samanstendur af ómenguðum hvatberum var endurleyst í aðskilnaðarbuffi (pH 7,4) sem innihélt 75 mM sakkarósa, 20 mM 2-[4-(2-hýdroxýetýl)piperasín-1- ýl]etansúlfónsýru og 215 mM D-mannitól [27].

Síðar var hvatberabrot allsheilans einsleitt notað til að ákvarða lífefnafræðilegu merkin með því að nota staðlaðar aðferðir.2.11. Mat á hvatbera flóknu.

2.11.1. NADH: Ubiquinone Oxidoreductase Virkni. Hraði flókins I (NADH dehýdrógenasa) virkni var magngreind (nmól NADH oxað/mínúta/mg prótein) með því að fylgja tækni King og Howard [28]. .eoxunarmyndun NAD+ frá NADH fylgir cýtókróm c lækkun. .e prófunarblanda samanstóð af cýtókróm c (10,5 mM), 6 mM -níkótínamíð adenínkjarna (DPNH) leyst upp með því að nota 2 mM díglýsínbuffa og díglýsín jafnalausn (0,2 M, pH 8,5).

Uppleysanlegur hvatberahluti var settur inn í prófunarblönduna til að koma efnahvarfinu af stað. .e breytileika í ljósþéttni (OD) við λmax � 550 nm var fylgt eftir í 120 sekúndur.

2.11.2. Súksínat: Ubiquinone Oxidoreductase Virkni..e hlutfall súksínat dehýdrógenasa (flókið II) virkni var magnmælt (nmól súksínat oxað/mínúta/mg prótein) með því að fylgja tækni King [29].

Rúnsteinssýruoxun kemur af stað með gervi rafeindamóttakara, kalíumsýanóferrati (K3Fe(CN)6). .e greiningarblanda samanstendur af súrsteinssýru (0,63 M), 1% BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M), og Na+-K+ [PO4]2- jafnalausn (0,23 M, pH 7,6). Uppleysanlegur hvatberahluti var settur inn í prófunarblönduna til að koma efnahvarfinu af stað. .e breytileika í OD atλmax � 420 nm var fylgt eftir í 120 sekúndur.2.12. Ákvörðun lífmerkja oxunarálags2.12.1. iobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS).

Til að meta TBARS (nmól á hvert mg prótein) [30], greiningasamsetningin (lokamagn ~4 ml) sem samanstendur af 0.10 ml einsleitum heila, 1.51 ml 4,{{ 7}}díhýdroxý-2-merkaptópýrimídín (0,8%), 200 µl SLS (8,18%), 1,49 ml jökulsýra (21%, pH 3,51) og 0,71 ml afjónaðs vatns var hitað í vatnsbaði við 96 gráður í 60 mínútur.

15:1 hlutfall af bútýlalkóhóli/asabenseni (5,1 ml) var bætt við greiningarblöndu sem var skilið í skilvindu við 4,000 x gpower (10 mínútur), og flotið var lokað.

Með tvígeisla UV1700 litrófsmæli (Shimadzu, Japan), litninga malondialdehýð-4,6-díhýdroxý-2-merkaptópýrimídín OD var metið við bylgjulengd (λmax � 532 nm) og ε,5� × 105/M/cm (mólútrýmingarstuðull) var notaður til að reikna út 4,6-díhýdroxý-2-merkaptópýrimídín adducts.

2.12.2. Lækkað magn glútaþíons (Lc-glútamýl-L-sýsteinýlglýsíns). Aðferð Ellmans [31] var útfærð til að meta L-glútaþíon (GSH) innihald. .e prófsamsetning sem inniheldur einsleitt efni (1,1 ml) og 1 ml af 4% 2-hýdroxý-5-súlfóbensósýru (5-SSA) var skilið í skilvindu (4 gráður) í 11 mínútur við 2.500 × g afl .

Síðar, 2,8 ml Na+-K+[PO4]2- jafnalausn (51,2 mM, pH 7,77) og {{10}},21 ml 3-karboxý{{13 }}nítrófenýl tvísúlfíð (0.12 mM, pH 7.89) var blandað saman við ofangreinda flotann (0.12 ml).

Þrípeptíð (µmólGSH á hvert mg prótein) var magnmælt með tvígeisla UV1700 litrófsmælinum (λmax � 412 nm). beitir � 1,36 × 104/M/cm.2.12.3.

Virkni glútaþíon peroxidasa. .e virkni glútaþíon peroxidasa (GPx) (EC 1.11.1.9) var metin með því að innleiða tækni Mohandas et al. [32]. .eanalyze blanda sem samanstendur af 100 µl af 10% einsleitu efni, 100 µl natríumazíð (1,11 mM), 100 µl EDTA (1,13 mM), 40 µl glútaþíon-dísúlfíð afoxíð (GSR, 1 ae/ml) (EC1.8.1.7), 10 µl H2O2 (0,28 mM), 40 µl Lc-glútamýl-L-sýsteinýl-glýsín (1,2 mM), 100 µl kóensím II afoxað tetranatríumsalt (0,22 mM) ), og 0,12 M 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-buffer (pH 7,4) í heilu magni upp á 2000 µl. .e tap á kóensím II-skertu tetranatríum við λmax � 340 nm var skráð við 25 gráðu hita. GPx hraði var reiknaður sem nmól NADPH oxað/mínúta/mg prótein með því að nota ε � af 6,22 × 103/M/cm.

For more information:1950477648nn@gmail.com