Aukning í vöðva með HIFN-Alpha 2b eykur BCGphipps-framkallaða vernd í múslíkani af holdsveiki

Ágrip:

Ónæmi hýsils gegn Mycobacterium leprae nær yfir margs konar aðferðir sem eru allt frá frumuónæmisdrifinni vörn til skemmda sem tengjast húmorsónæmi eins og í tegund -2 holdsveikisviðbragða. Þrátt fyrir að interferón af tegund I (IFNs) taki þátt í að útrýma innanfrumu sýkla, er framlag þeirra til framleiðslu mótefna og CD3 plús FOXP3 plús T-frumna (Tregs) í BCG bóluefnismiðlaðri vörn við holdsveiki óþekkt. BCGphipps (BCGph) frumun fylgt eftir með hIFN- 2b í vöðva eykur marktækt minni sárstærð og Mycobacterium lepraemurium vöxt í húðinni. T-follicular regulatory cells (TFR), sem er undirmengi Tregs framkallað af ónæmisaðgerð eða sýkingu, búa í kímstöðvum (GCs) og móta mótefnaframleiðslu.

Við fundum skerta Treg-örvun og bætta GCs í tæmandi eitlum af BCGph-bættum og hIFN- 2b-örvuðum músum. Þar að auki leiddu þessar mýs fram umtalsvert magn af IL-4 og IL-10 í sermi. Þannig styðja niðurstöður okkar hjálpareiginleika hIFN- 2b í samhengi við BCGph grunnun til að auka verndandi ónæmi gegn holdsveiki í húð.

Hlífðarónæmi vísar til getu líkamans til að verjast smitandi sýkla með því að framleiða mótefni, T frumur o.s.frv., og er einn af mikilvægum aðferðum líkamans til að standast sjúkdóma. Ónæmi vísar til getu líkamans til að þekkja og bregðast við ýmsum framandi efnum (þar á meðal sýkla, aðskotahlutum, æxlisfrumum o.s.frv.), þar með talið frumuónæmi og húmorsónæmi. Hlífðarónæmi er hluti af ónæmi og þetta tvennt er náskylt. Gott friðhelgi getur stuðlað að því að bæta verndandi friðhelgi, til að koma betur í veg fyrir að sjúkdómar komi upp. Á sama tíma getur bætt verndandi friðhelgi einnig aukið friðhelgi, sem gerir líkamanum kleift að takast betur á við ýmsar ytri áskoranir. Þess vegna er mikilvægt að viðhalda heilbrigðu ónæmiskerfi, þar með talið góðu verndandi ónæmi, til að viðhalda góðri heilsu. Frá þessu sjónarhorni er friðhelgi líka mjög mikilvægt. Ef við viljum bæta friðhelgi okkar getur Cistanche bætt ónæmi okkar manna verulega. Fjölsykrurnar í Cistanche geta stjórnað ónæmissvörun ónæmiskerfis mannsins og bætt ónæmisfrumur. Streitugeta, eykur bakteríudrepandi áhrif ónæmisfrumna.

Smelltu á heilsuávinning af cistanche

Leitarorð:

Mycobacterium lepraemurium; holdsveiki úr músum; interferón alfa; BCGphipps; kímstöðvar; reglubundnar T frumur.

1. Inngangur

Mycobacterium leprae og Mycobacterium lepromatosis, orsök holdsveikis [1,2], hafa áhrif á húð og úttaugar [3]. Þó fjöllyfjameðferðir (MDT) við holdsveiki séu tiltækar, er fjöldi nýrra tilfella stöðugur (700,000 á ári).

Ennfremur gerir skortur á skilvirkri greiningaraðferð erfitt að fylgjast með smiti M. leprae [4-7]. Erfðafræðileg tilhneiging til snemma holdsveikis [8] leggur áherslu á þörfina fyrir heppilega greiningu og þróun ódýrra ónæmismeðferða til að draga úr tíðni holdsveikis í þróuðum löndum [9,10]. Litróf klínískra einkenna í holdsveiki er í samræmi við tegund ónæmissvörunar sem framkallað er. Til dæmis, berkla holdsveiki (TT), sem einkennist af ríkjandi Th1 svörun, takmarkar vöxt bacilla með IFN-drifinni virkjun á örverueyðandi virkni átfrumna. Aftur á móti hefur framleiðsla klassískra Th2 cýtókína (IL-4 og IL-10) verið tengd við tap á vernd og auknum basillavexti í dreifðum holdsveikum holdsveiki (LL) [10]. Það eru líka milliundirgerðir sem tákna blöndu af Th1 og Th2 svörum [10].

Sýking músa með M. lepraemurium (MLM) [11,12] hefur verið notuð til að rannsaka ónæmisfræðilega virkni holdsveikis manna [11-13], jafnvel þó að MLM sýni ekki tropism fyrir úttauga [11,13] eins og M. leprae gerir [14]. Engu að síður eru báðar sveppabakteríurnar óræktanlegar og vaxa hægt í hýsilnum og tvöfaldast fjöldi þeirra á 1–3 vikum.

Tilraunasýking undir húð með litlum skömmtum af bakteríum líkir náið eftir náttúrulegum sjúkdómi sem kemur venjulega fram þegar truflun á hindrunum auðveldar landnám sveppabaktería, sem kallar fram ónæmisviðbrögð á útlægum vettvangi [13,15-17]. Þó frumumiðlað ónæmi (CMI) sé skert, er húmorónæmi nánast óbreytt í holdsveiki manna og músa [18]. Að auki móta Th1- eða Th2-frumur, aðrar T eitilfrumur, ónæmi hýsilsins gegn M. leprae sýkingu [18,19].

Það er forvitnilegt hvernig M. leprae hefur áhrif á ónæmi hýsils í mismunandi undirtegundum sveppabakteríasjúkdóms. Ein tilgáta er sú að sýkillinn lækki ónæmi hýsils og frumu til að sýkja húðina og úttaugarnar [3,14,15]. Það eru líka vísbendingar um að bacillus hamli virkjun átfrumna. Það dregur einnig úr tjáningu TNF-alfa og sameinda eins og prostaglandína sem örva framleiðslu á IL-1 og hvarfgjörnum súrefnis- og köfnunarefnis milliefnum (ROI og RNI), sem eru mikilvæg í sveppabakteríudrepandi virkni átfrumna [20-22].

Húmorssvörun sem myndast í GCs á efri og háskólastigi eitilvefs taka þátt í verndandi ónæmi gegn sýkla [23-26]. Nýleg skýrsla um holdsveiki lagði áherslu á mikilvægu hlutverki Tregs í hömlun á Th1 og Th17 frumuviðbrögðum [19]. Reyndar, jafnvægið milli þessara undirhópa T-frumna á GCs [27-29] ræður verndandi eða meinafræðilegum afleiðingum smitsjúkdóma og sjálfsofnæmissjúkdóma [30,31] og er mikilvægt fyrir þróun meðferða til að framkalla verndandi ónæmi [26,27 ].

Sérstaklega stilla T hjálpar eggbúsfrumur (TFH) og sérstaklega T follicular regulatory frumur (TFR) GC svörun til að framkalla langvarandi húmorónæmissvörun á sama tíma og koma í veg fyrir framleiðslu sjálfsmótefna [32,33]. Í ljósi þess að tegund I IFN tengist myndun bæði TFH og Tregs, kemur það fram sem efnilegt ónæmisglæði til að örva TFH svörun í GCs í tengslum við BCG bólusetningu [34].

Gjöf í slímhúð IFNs af tegund I framkallar þroskunarfrumuþroska og myndun CXCR5 plús CD4 plús TFH, sem auðveldar þróun GC og framleiðslu mótefna með mikilli sækni í eitlum [34]. Aftur á móti rýma IFNs af tegund I hýsilónæmi í berklum manna með því að hindra framleiðslu á framkallanlegum nituroxíðsyntasa (iNOS), IL-12p40, IL-1A og IL-1 á meðan þeir örva IL-10 og IL-1R mótlyfjar [35–38]. Þannig er þátttaka IFNs af gerð I samhengisháð [38-42]. IFNs af tegund I eru framleidd á jöfnu stigi, en þegar innanfrumu sjúkdómsvaldur hefur ráðist inn í hýsilinn, eru nokkur ólík og flókin meðfædd andveiru- eða bakteríudrepandi viðbrögð framkölluð [43-48], þar á meðal mótefnaflokkaskipti, líkamsstökkbreyting og aukning framboð mótefnavaka í GCs sem mun leiða til sterkra og áhrifaríkra mótefnaviðbragða [34,49].

Við greindum áður frá vörninni sem veitt er með því að auka IFN í vöðva í röð í músum sem voru bólusettar með Mycobacterium bovis BCG og skornar með MLM [42] eða gegn úðaðri M. tuberculosis áskorun [41]. Hjá músum sem fengu MLM, tengdist vernd aukinni framleiðslu iNOS, nituroxíðs og IgG3 mótefna [42]. Í tengslum við M. tuberculosis áskorunina vöktu vernduðu mýsnar Th1 svörun [41].

Í nýrri rannsókn breyttu IFNs af tegund I sjálfsát og umbrot í holdsveiki [50]. Við ákváðum í þessari rannsókn að rannsaka frekar vörnina gegn holdsveiki af músum af völdum bólusetningar með M. bovis BCGphipps (BCGph) og lyfjafræðilegri framsetningu á IFN- 2b úr mönnum [51]. Í nýlegum rannsóknum var raðbrigða BCG sem tjáir IFN- 2b úr mönnum notað til að meðhöndla blöðrukrabbamein með góðum árangri [51–55]. Í samræmi við þessi gögn var markmið okkar í þessari rannsókn að greina vörnina sem BCGph frumun og hIFN- 2b örvun hefur í för með sér í múslíkani af holdsveiki. Á heildina litið gera niðurstöður okkar ráð fyrir möguleikum BCGph undirhúðunar og hIFN- 2b örvunar í vöðva til að framkalla verndandi ónæmi gegn holdsveiki manna.

2. Efniviður og aðferðir

2.1. Dýr

Sérstakar sýklalausar Balb/c mýs voru ræktaðar og vistaðar í dýraaðstöðu Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional í Mexíkóborg.

Allar dýratilraunir voru gerðar eftir samþykki (07. mars 2014) af dýraverndunar- og stjórnunarnefnd stofnana (CIE-ENCB ZOO 016/2014).

2.2. Örverur

BCG Phipps-stofninn (ATCC® 35744™) (BCGph) er afbrigði af BCG-stofninum sem hefur misst svæðið RD1 sem kóðar ESAT-6 og CFP10, með lægsta fjölda T-frumueiginleika , 316, á móti BCG Tokyo, 359, og BCG Pasteur, 331, (Zhang o.fl., 2013) [51] og var útvegað af Dr. Hernández-Pando (INCMNSZ, Mexíkóborg, MX). Bóluefnalausnir voru síðan geymdar við –80 ◦C fram að notkun. Mycobacterium lepraemurium (MLM) óræktanlegur stofn var einangraður úr milta músa sem báru fjögurra mánaða sýkingu með aðferð sem lýst er af Prabhakaran et al., 1976 [56], fylgt eftir með hreinsun með því að nota persónulega einangrunaraðferð sem lýst er af Draper P. , 1980 [57]. Í stuttu máli var 4 g af miltisvef dreift í 20 ml af 0,2 M súkrósa og malað í einsleitara gleri af Potter-Elvehjem-gerð. Sviflausnin sem myndaðist var skilin í skilvindu í 20 mínútur við 150 x g til að fjarlægja frumurusl (Sorvall RV5B, númer HB4) (Sorvall Instruments, Wilmington, DE, Bandaríkjunum). Síðan var 9 mL af flotinu lagt ofan á 12 mL af 0,3 M súkrósa og glösin skilin í skilvindu við 3500 × g í 10 mínútur við 4-10 ◦C (Sorvall RC5B). Bacilli-ríkur kögglan sem myndast var endurblandaður í 20 ml af 0,2 M súkrósa og 9 ml deilingar voru lagðir á 12 ml af 1,5 M KCl.

Síðan var rörið skilið í skilvindu við 4 ◦C í 10 mín. við 3500× g. Bakterlunum var safnað saman, þvegið þrisvar sinnum með fosfat-bufferuðu saltvatni (PBS) (0,01 M Na/K fosfati, 0,15 M NaCl, pH 7,4), og endurleyst í 40 ml af lausn sem innihélt blöndu af Percoll (3 hlutar) og 0,1 prósent Tween 80 (7 hlutar). Sviflausnin var skilgreind við 23,000× g. Bækurkúlunni var safnað saman og þvegið fimm sinnum með PBS þar til Percoll var eytt. Hreinleiki bacilary undirbúningsins var staðfestur með Ziehl-Neelsen litun. Hreinsaða bacilary sviflausnin var útbúin í tilbúnum 7H9 Middlebrook seyði OADC miðli (DIFCO, Detroit, MI, USA) (7H9-OADC miðli) og magngreind með nýrnamælingaviðmiðunarferil sem útbúinn var með þekktu magni af bakteríum. Bacilary sviflausnin var skipt í skammta og fryst við -20 ◦C, þar til hún var tilbúin til notkunar.

2.3. Bólusetningar

Hópar átta vikna gamalla Balb/c músa (n=6) voru bólusettir undir húð með 8 × 103 nýlendumyndandi einingum (CFU) af BCGphipps í 200 µL dauðhreinsuðu PBS. Einum mánuði síðar var hver hópur músa aukinn í vöðva á þremur dögum í röð (30, 31 og 32 dögum eftir bólusetningu) með 100 µL af PBS eða með 100, 200 eða 300 alþjóðlegum einingum (ae) af hIFN{{14} }b (Urifron, Probiomed, Azcapotzalco, Mexíkóborg, Mexíkó).

2.4. M. lepraemurium áskorun

Fyrir áskorunartilraunirnar voru mýs sáð í húð með 2 × 106 lífvænlegu MLM í 20 µL af PBS. Síðan voru mýsnar geymdar við staðlaðar aðstæður og þær fengu hreinsað vatn og Purina nagdýraflögur (Cuautitlan Izcalli, Mexíkó) að vild. Fylgst var með sýktum músum í átta vikur, tímapunktarnir þegar sár voru áberandi í húð sýktra dýra. Sjúkdómsframvinda var breytileg í músunum og í tengslum við tilraunameðferð (PBS, BCGph eða hIFN- 2b).

2.5. Ensímtengd ónæmissogandi próf (ELISA)

Mótefni í sermi MLM-sýktra músa voru mæld með óbeinum ensímtengdum ónæmissogandi prófum (ELISA). Í stuttu máli voru 96-brunnsplötur (Nunc, Rochester, NY, USA) húðaðar yfir nótt við 4 ◦C, með 1.0 µg af peptíðóglýkólípíðum uppleyst í etanóli [38]. Eftir uppgufun etanóls við stofuhita [37] var ósértæk binding læst með 3 prósent fitulausri mjólk í PBS frá 2 til 3 klst. Eftir að lokunarlausninni hafði verið hent, var 0,1 ml af sermi þynnt (1:100) í 1 prósent fitulausri mjólk í PBS bætt við brunnana og ræktað yfir nótt við 4 ◦C.

Síðan voru plöturnar þvegnar ítarlega með PBS og bundin mótefni greindust með {{0}}.1 ml af anti-mús IgG (1:4000, BD 550487, BD Pharmingen, San Diego, CA, Bandaríkjunum), IgG1-HRP (1:2500, ab 97240, Abcam, Cambridge, MA, Bandaríkjunum), IgG2a-HRP (1:2500, ab97245, Abcam), IgG2b-HRP (1: 2500, ab97250, Abcam), eða IgG3-HRP (1:2500, ab97260, Abcam), eða bíótín-tengd rotta and-mús IgA einstofna mótefni (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen), fylgt eftir af piparrótarperoxídasa (HRP)-tengd rotta and-mús Ig mótefni (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen) eða avidin-HRP (ab 59653, abcam) Litninga hvarfefnið, tetrametýl-bensidín í 0,05 M sítrat-fosfós. 5.2), bætt við 0,01 prósent vetnisperoxíði (H2O2), var bætt við holurnar til að þróa lit. Hvarfið var stöðvað með 1 M H3PO4. Ljósþéttleiki var mældur við 450 nm í ELISA örplötulesara (LabSystems Multiskan Plus, LabX, Midland, ON, Kanada). IFN-, IL-4, IL-17, IL-6, TNF- og IL-10 voru mæld í sermi með sérstökum samloku ELISA settum (PEPROTEC Inc., Cranbury , NJ, Bandaríkjunum). samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.

2.6. Mælingar á NO í serum músa

Í stuttu máli voru sermi meðhöndlaðir með etanóli (1:1) til að fella út prótein og aðra truflandi þætti. Eftir skilvindu við 3000 rpm í 20 mínútur voru 20 µL af endurheimtu sermiinu sett í brunna á ELISA plötu ásamt 100 µL af Griess hvarfefninu og 80 µL af eimuðu vatni. Griess hvarfefnið er rúmmál til rúmmáls blanda af lausn A (2 prósent súlfanílamíði í 5 prósent fosfórsýru) og lausn B (0,1 prósent N-(1-naftýl) etýlendiamín, díhýdróklóríð. Eftir 30 mínútna ræktun kl. 25◦ C, bleiki liturinn sem myndast var skráður í ELISA lesanda við 595 nm. Gildin voru framreiknuð í staðlaðan feril af natríumnítríti á bilinu 1–100 µM.

2.7. Ónæmisflúrljómun

Aðalmótefni voru fengin frá eftirfarandi fyrirtækjum: Geita and-iNOS (klón M-19, Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), Rabbit and-nítrótýrósín (AB 5411, EMD, Millipore, Burlington, MA, Bandaríkin ), bíótínrotta Ly6C/Ly6G (klón RB6-8C5, BD Pharmingen), geit gegn CD3 epsilon (Clone M-20, Santa Cruz líftækni), rotta andmús FoxP3 (klón FJK{{12} }s, eBioscience, San Diego, CA, USA), geita gegn fjölgun frumna kjarnamótefnavaka (klón C-20, Santa Cruz líftækni), FITC-hnetuagglútínín (L7381- 1MG, SIGMA, St Louis, MO, Bandaríkjunum), og APC-rotta gegn músum CD45R (klón RA3-6B2, BD Pharmingen).

Aðal mótefni komu í ljós með eftirfarandi aukamótefnum: Alexa Fluor 568 asna gegn geit IgG (A11057, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum), Alexa Fluor 488 asna gegn kanínu IgG (711-546, Jackson ImmunoResearch Laboratories , West Grove, PA, Bandaríkjunum), og Alexa Fluor 680 streptavidin (S32358, Thermo Fisher Scientific).

Fimm µm formalínfastir paraffínaðir hlutar voru ræktaðir við 60 ◦C yfir nótt fyrir afparaffínhreinsun. Vefjahlutar voru fljótt fluttir yfir í xýlen (247642-2.5L, SIGMA) og vökvaðir með því að dýfa skyggnum í röð í alkóhól, 96 prósent alkóhól, 70 prósent alkóhól og vatn. Glerunum var sökkt í mótefnavakaupptökulausn, soðnar í 30 mínútur og kældar niður í 10 mínútur við stofuhita (RT). Gler voru skolaðar nokkrum sinnum í vatni og færðar yfir í PBS. Ósértæk binding var læst með 5 prósent venjulegu asnasermi í PBS sem innihélt 0,1 prósent Tween 20 og 0,1 prósent Triton-X-100, í 30 mínútur við RT í röku hólfi. Aðalmótefnum var bætt við glærur og ræktuð yfir nótt í röku hólfi við RT. Skyggnur voru þvegnar varlega í PBS og flúrljómandi merkt aukamótefni voru ræktuð í 2 klst, við RT eða yfir nótt í rakaklefa.

Að lokum voru skyggnur skolaðar í 1 klst í PBS og settar upp með Vectashield antifade festingarmiðli með DAPI (H-1200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, Bandaríkjunum). Myndir voru teknar með Zeiss Axioplan smásjá. Allar kímstöðvar (GCs) í eitlahluta voru mældar með sjálfvirku tæki frá Carl Zeiss smásjá og meðalstærð GC var reiknuð út með Prism hugbúnaðinum. CD3 plús FoxP3 plús tregs voru talin í 5 tilviljunarkenndum 200 × reitum á vef til að reikna út meðalfjölda jákvæðra frumna á hverju sviði.

2.8. Tölfræðigreining

Tölfræðilega marktækur munur milli hópa var reiknaður út með einhliða ANOVA, Newman–Keuls margfeldi samanburði, ópöruðu/pöruðu tvíhliða t-prófi nemenda og P gildi < 0.05 voru talin tölfræðilega marktæk. Tölfræðilegur munur var reiknaður út með Graph Pad Prism.

3. Úrslit

3.1. BCGphipps (BCGph)-priming fylgt eftir með hIFN- 2b örvun í vöðva í kjölfarið Ver Balb/c mýs gegn Intradermal Challenge með M. lepraemurium.

Við þróuðum áður prime-boost siðareglur byggða á samfelldri aukningu IFN í vöðva eftir BCG bólusetningu á músum [42] með efnilegum verndarniðurstöðum. Nýlegar rannsóknir notuðu BCG raðbrigða sem tjáir IFN- 2b úr mönnum til að meðhöndla krabbamein í þvagblöðru [51,53]. Þess vegna, í þessari rannsókn, var markmið okkar að greina verndina af völdum BCGph priming fylgt eftir með hIFN- 2b aukningu í múslíkani af holdsveiki, eftir áætluninni sem lýst er á mynd 1.

Mynd 1. Prime-boost siðareglur til að meta vernd músa gegn húðáskorun með M. lepraemurium. Hópar af Balb/c músum (n=6) voru bólusettir undir húð með litlum skammti af BCGph (8 × 103 CFU). Mýs úr hverjum hópi fengu örvun í vöðva á dögum í röð (30, 31 og 32 dögum eftir bólusetningu) með PBS eða hIFN- 2b. Mýsnar fengu 2 × 106 lífvænlega MLM átta vikum eftir síðustu aukningu. Eftir það var músum fórnað og lífsýnum safnað átta vikum eftir áskorun. Fylgst var með þróun húðskemmda og mæld eins og lýst er í Efni og aðferðum.

Í stuttu máli voru mýsnar ögraðar í húð með MLM, átta vikum eftir þriðju aukninguna með 300 ae af hIFN- 2b. Fylgst var með framvindu sjúkdómsins á næstu átta vikum. Í lok þessa tímabils söfnuðum við nára eitlum til að greina GCs og telja upp Tregs og aðra frumuhópa með ónæmisflúrljómun. Við notuðum einnig ónæmisflúrljómun til að sjá íNOS framleiðslu með virkum átfrumum, staðsetningu nítrótýrósíns (NT) leifa og uppsöfnun Gr-1 plús mergfruma í húð tilraunamúsanna okkar. Að auki söfnuðum við sermi til að mæla frumuboðin og mótefnin gegn glýkólípíðum MLM með ELISA (Mynd 1).

Í fyrsta lagi, til að meta verndandi áhrif BCGph priming og hIFN{{0}}b örvunar gegn húðáföllum músa með MLM, mældum við húðskemmdir og sýndum bakteríur landnám húðarinnar með Ziehl–Neelsen litnum (Mynd 2A–E). Húð óhreinsaðra músa sem fengu aðeins burðarefni (PBS), án MLM áskorunar, sýndi enga bacilli (mynd 2A). Mýsnar sem sáðar voru með burðarefninu og ögraðar með MLM sýndu mikið magn af MLM bacilli í húðinni (Mynd 2B) á meðan grunnur músa með BCGph leiddi til minnkunar á vexti sveppabaktería (Mynd 2C). Röð hIFN- 2b gjöf dró einnig úr vexti sveppabaktería í húðinni samanborið við mýs sem fengu MLM (mynd 2D). Mýsnar sem voru grunnaðar með BCGph og auknar með hIFN- 2b höfðu minnsta sveppabakteríavöxt (Mynd 2E). Í samræmi við þessi gögn þróuðu heilbrigðu mýsnar sem fengu MLM sem fengu aðeins burðarefni (PBS) umfangsmestu húðskemmdirnar (35 ± 9,9 mm2), á meðan mýsnar sem voru BCGph-fræstar voru með húðskemmdir af svipaðri stærð og þær sem þróuðust í mýsnar sáðar með burðarefninu og ögraðar með MLM (13,5 ± 4,24 mm2) (Mynd 2F). Mýsnar sem voru sprautaðar undir húð með hIFN- 2b sýndu minni húðskemmdir (20 ± 1,77 µm2). Athygli vekur að mýs sem voru BCGph grunnaðar og auknar með hIFN- 2b sýndu marktæka minnkun á stærð húðskemmda (5 ± 7,07 mm2) (p <0,05) (Mynd 2F).

\

Mynd 2. Húðskemmdir og sveppabakteríavöxtur í Balb/c sem þjáðist af M. lepraemurium. Vörn músa var metin með því að þróa húðskemmdir og sjá vöxt sveppabaktería í húðskemmdum átta vikum eftir áskorun með MLM. Húðskemmdir voru litaðar með Ziehl-Neelsen. Fulltrúar 400× stækkunarmyndir af (A) óforsettum músum og ómótmæltum músum; (B) mýs sáð með PBS og áskorun með MLM; (C) mýs grunnaðar með BCGph og ögraðar með MLM; (D) mýs sem eru sáð í vöðva með hIFN- 2b og ögraðar með MLM; (E) mýs grunnaðar með BCGph, auknar með hIFN- 2b og ögraðar með MLM; (F) Skilvirk vörn jafngildir annað hvort fjarveru á húðskemmdum eða marktækri minnkun á húðskemmdum, gefið upp í mm2, n=6 músum/hópi. * p < 0.05; ** p < 0,005; *** p < 0,0005 var talið vera tölfræðilega marktækt.

3.2. Lágmarkssjúkdómur í húð í músum sem grunnaðar eru með BCGphipps og auknar með hIFNa 2b tengist minni nítrótýrósínsöfnun og skertri íferð daufkyrninga

Nituroxíð er mikilvægt til að drepa innanfrumu sýkla. Hins vegar, óhófleg framleiðsla nituroxíðs, súperoxíðradikala (O,- og vetnisperoxíðs) leiðir til myndunar eitraðs og óstöðugs peroxýnítríts, sameindar sem hvarfast við týrósínleifar á próteinum og myndar stöðugt NT 56-601. Þótt peroxýnítrít drepur sveppabakteríur, það skemmir einnig ónæmisfrumur [57-59].

Þannig ákváðum við að leita að iNOS-framleiðandi frumum og daufkyrningum í húð tilraunamúsanna okkar með ónæmisflúrljómun. Wesaw bakgrunnsmerki fyrir iNOS og NT og mjög fáar Gr-1 plús frumur í húð músa sem fá aðeins PBS (Mynd 3A). Aukið sveppabakteríaálag og stækkuð drepsár í húðinni tengdust uppsöfnun NT leifa á drepandi húðsvæðinu (58,59 af óbólusettum (Mynd 3B) og BCGph grunnuðum músum með MLM (Mynd 3C) Samræmist meira jafnvægi staðbundinni bólgusvörun og úrbót á meinafræði í húð, minnkaði íferð NT og daufkyrninga hjá músum sem fengu í röð sáningar með hIFN- 2b (Mynd 3D) eða músum BCGph grunnað og aukið með hIFN 2b (Mynd 3E). Skert íferð með Gr{{11 }} plús daufkyrninga og minnkuð NT svæði féllu saman við minnsta bólgusvæðið í vefjafræðilegum húðköflum músa sem grunnaðar voru með BCGph og auknar með hIFN- 2b (Mynd 3F).

Mynd 3. Vörn tengist minni uppsöfnun nítrótýrósíns, skertri uppsöfnun daufkyrninga og bataðri húðbólgu. Húðskemmdir voru litaðir með samsetningu mótefna sem eru sértæk fyrir iNOs (rautt), NT (grænt) og Gr-1 (hvítt). Fulltrúi 200× myndir frá (A) Húð óhreinsaðra og óáreittra músa, (B) músa sáð með PBS og ögraðar með MLM, (C) músum grunnaðar með BCGphipps og ögraðar með MLM, ( D) mýs sem eru sáð í vöðva með hIFN- 2b og ögnuð með MLM og (E) mýs prufaðar með BCGph, auknar með hIFN- 2b og ögraðar með MLM; (F, G) magngreining á bólgusvæðinu með sjálfvirkum verkfærum Zeiss Axioplan smásjá, húðskemmdum var safnað átta vikum eftir áskorun með MLM, grafík sýnir meðalsvæðið sem bólgufrumur uppteknar af holdsveikum húðskemmdum, gefið upp í µm2. Skalastrik=100 µm. n=6 mýs/hópur * p < 0.05; ** p < 0,005; *** p < 0,0005 var talið tölfræðilega marktækt.

NO framleiðsla var ekki tölfræðilega marktæk samanborið við hina tilraunahópana, en í hópi músa sem BCGph-bætt var og örvað með hIFN- 2b var styrkur NO hærri (68,28 µM/L ± 0 .889) en í PBS og MLM hópunum (62.79 µM/L ± 1.04), BCGph (63.37 µM/L ± 0.225), hIFN- 2b (62.57 µM/L ± 1.028) ) (Mynd 3G).

3.3. Bólgueyðandi cýtókín eru aukin í sermi músa sem grunnaðar eru með BCGphipps og örvaðar með hIFN- 2b

Pro- og bólgueyðandi cýtókín voru mæld í sermi Balb/c músa eftir áskorun með MLM. Í samræmi við ónæmisbælandi ástand af völdum MLM, var styrkur bólgueyðandi cýtókína lágur í sermi Balb/c músa sem sáðar voru með PBS og ögraðar með MLM (IFN- , 625 ± 442 pg/mL; TNF- , 697 ± 436 pg/ mL; IL-6, 68 ± 48 pg/ml; IL-17, 95 ± 67 pg/ml). Aftur á móti höfðu þeir miðlungs bólgueyðandi cýtókín í sermi (IL-10, 1763 ± 124 pg/mL og IL-4, 1250 ± 173 pg/mL). Þrátt fyrir að mýs hafi verið verndaðar með BCGph ræsingu og efla aukningu í röð með hIFN- 2b, var kerfisbundið magn bólgueyðandi cýtókína ekki tölfræðilega frábrugðið því sem var í músum sem voru sáðar með PBS og ögnuðu með MLM. Óvænt jókst styrkur IL-4 (1875 ± 352 pg/ml, p < 0,05) og IL-10 (4250 ± 271 pg/mL) marktækt í sermi þessara músa samanborið við með músum sem voru sáðar með PBS og ögraðar með MLM (tafla 1). Þessar niðurstöður benda til þess að bólusetningaraðferðin okkar gæti verið að virkja bólgueyðandi leiðir til að koma í veg fyrir vefjaskemmdir.

3.4. Skert treg uppsöfnun í tæmandi eitlum (DLNs) músa sem eru grunnaðar með BCGphipps eða auknar með hIFN- 2b

Með hliðsjón af því að Tregs framleiða IL-10 [61,62], ákváðum við að mæla CD3 plús FOXP3 plús tregs í tæmandi eitlum (DLN), sem staðsettir eru nálægt bólusetningarstaðnum. Í ósýktum músum (PBS) voru Tregs enn til staðar (113 ± 9,8 CD3 plús FOXP3 plús Treg/200 × sviði) (Mynd 4A). Eins og búist var við, jukust Tregs marktækt hjá músum sem fengu MLM sem fengu ekki bóluefnið (BCGph) eða hIFN- 2b (214 ± 30 CD3 plús FOXP3 plús Tregs/200 × reit) (Mynd 4B). Í samræmi við það sást lægra magn af Tregs í músunum sem voru grunnaðar með BCGph (160 ± 26 CD3 plús FOXP3 plús Tregs/200 × sviði) (Mynd 4C) og músunum sem fengu hIFN- 2b (162 ± 33 CD3 plús) FOXP3 plús Tregs/200 × reit) (Mynd 4D); mýsnar grunnaðar með BCGph og auknar með hIFN- 2b (127 ± 16 CD3 plús FOXP3 plús Tregs/200 × sviði) (Mynd 4E) höfðu svipaðan þéttleika Tregs og óbólusettar mýs án hIFN- 2b uppörvun. Hins vegar, eftir að hafa talið CD3 plús FOXP3 plús tregs í blindni í DLN tilraunamúsanna okkar, komumst við að því að tregs minnkuðu verulega í DLNs músa eftir BCGph priming (p=0.0013), hIFN- 2 b sáningu (p=0.0074), eða sameinuð BCGph frumun og hIFN- 2b örvun (p=0.0013) samanborið við mýs sem þjást af MLM (Mynd 4E).

Mynd 4. Skert uppsöfnun stjórnandi T-frumna (Tregs) í tæmandi eitlum (DLNs) músa sem grunnaðar eru með BCGphipps og auknar með hIFN- 2b. Músum var fórnað og DLNs safnað átta vikum eftir áskorun með MLM. DLN var litað með mótefnum sem eru sértæk fyrir CD3 (rauð) og FOXP3 (græn kjarna) til að greina CD3 plús FOXP3 plús tregs með ónæmisflúrljómun. (A) Grunnuppsöfnun Tregs í DLNs óbólusettra músa; (B) Tregs í DLNs voru aukin eftir MLM-áskorun og tiltölulega minnkuð í (C) BCGph-frumað, (D) hIFN- 2b sáð og (E) BCGph-primed-hIFN- 2b auknar mýs; (F) formfræðileg greining sýnir marktæka lækkun á tregs í DLNs af BCGph primed/hIFN- 2b örvuðum músum. Kvarðarstika=100 µm, n=6 mýs/hópur * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0,0005 var talið vera tölfræðilega marktækt.

3.5. BCGphipps Priming og hIFN- 2b Aukning hefur áhrif á GC svör í DLN músum

Það eru sérstök Tregs staðsett í GCs þekkt sem T follicular regulatory frumur (TFRT þær móta bæði GCs svörin og koma í veg fyrir myndun sjálfvirkra plasmafrumna (28,33]). Minnkuðu Tregs í DLNs bentu til þess að GCs svörun gæti verið leyst úr læðingi í músum grunnað með BCGph og örvað með hlFN-a 2b. Í samræmi við fjarveru mótefnavakaörvunar, fundum við ekki GCs í DLNs ósýktra músa. Mynd 5A) Lítil GCs voru til staðar í DLNs ómótaðra músa, ögruð með MMLigure 5B).

Mynd 5. BCGphipps grunnur og hFN-a 2b örvun hafa áhrif á GC svörun í DLN eftir MLM áskorun. Músum var aflífað átta vikum eftir áskorun með ML M. Tæmandi eitlar (DLNs) voru litaðir með mótefnisgreinandi frumukjarnamótefnavaka (PCNA, rauðir kjarna), hnetuagglútíníni (PNA, grænt) og CD45R (B22{{13 }}, hvítt) til að bera kennsl á GCs sem innihalda þétta þyrpinga af PCNA*PNA plús * B220lítil GC B frumur. GC B frumur í DL Ns af (A) ómótuðum og ómótmæltum músum; (B) músum sáð með PBS og ögraðar með MLM; (C) mýs grunnaðar með BCGph og áskorun með MLM; (D) mýs örvuðust í vöðva með hlFN-a 2b og ögnuðu með MLM; (E) mýs prufaðar með BCGphboosted með hlFN-a 2b og ögraðar með ML M; (F) GC voru mæld í einstökum DL Ns af tilraunamúsum reikna meðaltal GC stærð. Kvarðarstika=100 um.=6 mýs/hópur. " p < 0.05, * p < 0.005; *** y < 0.0005 var talið vera tölfræðilega marktækt.

Mynd 5. BCGphipps priming og hlFN-a 2b örvun hafa áhrif á GC svörun í DLN eftir ML M áskorun. Músum var fórnað átta vikum eftir áskorun með ML M. Draining lymph nodes (DLNs) voru litaðir með mótefnum sem voru sértæk fyrir fjölgun frumukjarna mótefnavaka (PCNA, rauðir kjarna), hnetuagglútínín (PNA, grænt) og CD45R (B22{{) 13}}, hvítt) til að bera kennsl á GC sem innihalda þétta þyrpinga af PCNAPNA plús plús B220lítil GC B frumur. GC B frumur í DL Ns af (A) ómótuðum og ómótmæltum músum; (B) músum sáð með PBS og ögraðar með MLM; (C) mýs grunnaðar með BCGph og ögraðar með MLM; (D) mýs örvuðust í vöðva með hlFN-a 2b og ögraðar með MLM; (E) mýs prufaðar með BCGphboosted með hlFN-a 2b og ögraðar með MLM; (F) GC voru mæld í einstökum DLNs tilraunamúsa til að reikna út meðalstærð GC. Kvarðarstika=100 um. 1=6 mýs/ hópur. " y < 0.05. * y < 0.005, *** y < 0.0005 var talið vera tölfræðilega marktækt.

Athyglisvert er að mýs sem prufaðar voru með BCGph höfðu marktækt stærri GCs en mýs sem fengu MLM (Mynd 5C). Mýsnar sem voru bólusettar með hlFN-a 2b (Mynd 5D) höfðu GCs með sambærilegri stærð og þær í músum sem fengu MLM. Mýsnar grunnaðar með BCGph og auknar með hlFN-a 2b höfðu GCs með millistærð (Mynd 5E). Til að hafa meira magn af GC svörunum í DLNs reiknuðum við meðaltal GC stærð í einstökum DLN hlutum. Í samræmi við athuganir okkar fundum við marktæka minnkun á meðalstærð GC í DLN eftir hlFN-a 2b inndælingu og í BCGph priming/hIFN-a 2b örvunaraðferð (Mynd 5E).

3.6. Sambærilegt magn af glýkólípíðsértækum mótefnum í músum sem hafa fengið M. lepraemurium eftir BCGphipps Priming og hIFN- 2b örvun

Samkvæmt þeim mun sem sést á myndun og skipulagi GC, mældum við styrk mótefna sem eru sértæk fyrir glýkólípíð sem dregin eru út úr MLM. Á heimsvísu sýna niðurstöður okkar að kerfisbundið magn mismunandi flokka og ísógerða glýkólípíðsértækra mótefna varð ekki fyrir áhrifum af bólusetningu, gjöf hIFN- 2b í röð eða BCGph priming/hIFN- 2b samskiptareglum ( Tafla 2). Mýs sem örvuðust aðeins með hIFN- 2b kölluðu fram hærra magn af IgG og IgG1 mótefnum í sermi. Hins vegar var IgG og Ig G1 mótefnamagn ekki tölfræðilega marktækt samanborið við hina tilraunahópana (tafla 2).

4. Umræður

Í þessari rannsókn höfum við sýnt fram á að frumhækkunaraðferðin okkar sem byggir á BCGphipps undirhúð undirhúð og aukningu í vöðva í röð með auknu magni af hIFN- 2b verndaði mýs gegn húðáskorun með MLM.

Frumhækkunaraðferðin kom í veg fyrir vöxt MLM í húðinni og bætti staðbundna meinafræði með því að minnka NT framleiðslu og daufkyrningabólgu (Mynd 3E). Það leiddi einnig til örvunar bólgueyðandi cýtókína (IL-4 og IL-10) sem líklega virkuðu gegn of mikilli bólgu í húðinni og komu fram almennt. Óvænt, þó að meðferðaráætlunin hafi minnkað CD3 plús FOXP3 plús tregs í DLNs (Mynd 4E), var GC svörun ekki aukin verulega (Mynd 5E), og sermisþéttni glýkólípíðsértækra mótefna var svipuð í öllum tilraunahópunum nema í mýs sem aðeins eru sáð með hIFN- 2b (tafla 2). Engu að síður styðja tilraunagögn okkar mögulega notkun á BCG priming með ónæmisglæði með IFN 2b örvun í vöðva, sem efnilega ónæmismeðferð sem verðskuldar könnun við holdsveiki manna.

Klínískar einkenni holdsveikis eru í samræmi við ónæmisfræðilega litrófið sem greinist hjá sjúklingum og eru á bilinu LL til TT [2,4,14,18]. Almennt einkennist ónæmi hýsils fyrir M. leprae aðallega af skautuðu T-hjálparsvörun (Th1/Th2). Á annarri hlið litrófsins, þó að LL einkennist af orku, er enn nokkur viðbrögð við sveppabakteríum mótefnavaka og myndun IL-4 og IL-10. Aftur á móti, í TT, leiðir ríkjandi Th1 svörun til IFN-drifnar virkjunar átfrumna, sem flýtir fyrir brotthvarfi bacilli. Mýs sem eru sýktar af MLM þróa venjulega holdsveikilíkan holdsveiki án þess að hafa greinilega yfirburði fyrir húmors- eða frumuónæmi [18-20].

Hlífðarmótefni sem framkallað er með sýkingu eða bólusetningu [63] eru framleidd með ferli sem kallast sækniþroska, sem á sér stað í kímstöðvum sem myndast í efri (milta, eitlum) eða tertíer eitillíffærum (TLO) sem myndast í útlægum vefjum [23,25] . Það er einmitt í GCs þar sem framleiðsla á minni B frumum og langlífum mótefnaseytandi plasmafrumum stuðlar að myndun langtíma ónæmis gegn framtíðarkynningum við sýkla. Skilvirk framkalla GC svörunar veltur á samvinnu margra frumutegunda, þar með talið B frumna, T eggbúshjálparfrumna (TFH), átfrumna með stingandi líkama og eggbús dendritic frumna (FDCs) [64]. Reyndar kalla bóluefni af stað árangursríkum GC viðbrögðum og utanlegs kímstöðvum í eitlum [24,25,31,49].

Þar að auki viðhalda T eggbúshjálparfrumur og T eggbússtýrifrumur [27-30] viðkvæmu jafnvægi milli framkalla árangursríkra mótefnaviðbragða og sjálfsofnæmis. Þó að við útilokuðum ekki sjálfsofnæmisörvun í rannsókninni okkar, einbeitum við okkur samt að áhrifum prime-boost samskiptareglunnar með BCGph og hIFN- 2b á Tregs frá DLNs. Verndaðar mýs höfðu marktækt færri CD3 plús FOXP3 plús tregs í DLN þeirra. Hins vegar eru frekari rannsóknir nauðsynlegar til að ákvarða hvort sumar af þessum Tregs séu T eggbúshjálparfrumur sem stjórna GC viðbrögðum [27-30]. Þessar niðurstöður gætu gefið til kynna að nauðsynlegt sé að framkalla verndandi ónæmi ásamt örlítilli minnkun á tregs í DLNs til að stjórna vexti sveppabaktería og koma í veg fyrir meinafræðilega bólgu í húðinni.

Fyrri rannsóknir hafa greint frá almennum og slímhúðaráhrifum IFN af tegund I á T eggbúshjálparfrumur og T eggbússtýrifrumur [19,32,64]. Reyndar, tegund I IFN eykur óbeint TFH í eitlum með því að örva frumun T-frumna með dendritic frumum [34]. Type I IFN stuðlar einnig að samsætuskipti í GCs. Að auki sýndi nýleg rannsókn að IFN af tegund I kallar á CXCL13-drifna myndun TLO í lungum [49].

Þannig gæti örvun CXCL13 af tegund I IFN aukið nýliðun barnalegra B-frumna í önnur eitilfrumur og aukið framleiðslu á mótefnaseytandi plasmafrumum, sem bætir á heimsvísu langvarandi minni og ónæmissvörun plasmafrumna [23-25,64 ], sérstaklega í viðurvist hjálparefna eins og poly IC [65]. Að auki veldur gjöf IFN af tegund I GC myndun í lungum sjúklinga sem þjást af sjálfsofnæmissjúkdómum [31] eða berklum [66,67]. Þannig gæti CXCL13 blokkun hjálpað til við að meðhöndla þessar langvarandi bólgusjúkdóma [49]. Í þessu samhengi sáum við mjög væga lækkun á GC stærð í DLNs af vernduðum prime-boost músum (Mynd 5E). Hins vegar er þörf á frekari rannsóknum til að skilgreina betur fylgni milli GC myndunar og verndar sem framkallað er í þessum prime-boostuðu músum. Undir tilraunastillingum frumunar með BCGph og hIFN- 2b örvun í vöðva (51), fengu mýsnar í rannsókn okkar meiri vernd með BCGph-hIFN- 2b (80 prósent) gjöf en með BCGph einu sér (60 prósent), eins og ákvarðað er af fjarveru eða smæð húðskemmda (mynd 2) og sambærilegu magni af IgG og IgG1 mótefnum sem eru sértæk fyrir glýkólípíð í MLM (tafla 2). Niðurstöður okkar eru í andstöðu við aukið magn af IgG í músum sem verndaðar eru með bólusetningu með öðrum stofni BCG (Pasteur) [41]. Þessar upplýsingar benda til þess að tegund BCG stofns sem notaður er til að móta bóluefnið gæti haft áhrif á niðurstöðu húmors ónæmissvörunar gegn MLM eða M. leprae [51].

Ennfremur hafa nokkrar rannsóknir á berklum sýnt fram á möguleg og jákvæð áhrif misleitrar prime-boost stefnu í framkalli verndandi ónæmissvörunar [68-70]. Ennfremur er vel þekkt að gerð og leið ónæmisaðgerðar hefur áhrif á umfang mótefna og frumuónæmissvörunar. Það kemur á óvart að verndaðar mýs sýna marktækt hærra IL-4 og IL-10 í sermi samanborið við mýs sem eingöngu eru meðhöndlaðar með PBS, BCGph eða hIFN- 2b eingöngu (tafla 1). Hvernig bólgueyðandi cýtókín hafa áhrif á verndandi ónæmi í holdsveiki er nú til rannsóknar á rannsóknarstofu okkar. Hins vegar hafa nokkrar rannsóknir sýnt að skilvirkt frumuónæmi gegn sveppabakteríum byggir á viðkvæmu jafnvægi milli verndar og fyrirbyggjandi meinafræði [71]. Að auki eru vísbendingar um framköllun beggja cýtókíngerða í öðrum tilraunalíkönum [72-75].

Samanlagðar niðurstöður okkar benda til þess að árangur prime-boost siðareglur okkar sé háður því að framkalla jafnvægi ónæmissvörunar sem útrýma MLM á skilvirkan hátt í húðinni og takmarka vefjaskemmdir með því að framkalla bólgueyðandi frumudrep (IL-4 og IL10) sem vernda líklega ónæmisfrumur [76,77]. Reyndar, IL-10 framleitt af völdum Tregs mótar bólgu á slímhúðflötum, sérstaklega þeim sem tengjast bólgusjúkdómum [77,78]. Þessar niðurstöður réttlæta ítarlega hreyfifræðilega rannsókn á virkjun B frumna, myndun og stjórnun GC, myndun T eggbússtýringarfrumna og NF-KB virkjun í prime-boost kerfi okkar með BCGph og hIFN- 2b fylgt eftir með MLM sýkingu til að hafa meiri vélrænni skilning á hlutverki ónæmisfrumna og NF-KB ferla í framkalli verndarónæmis í húð og eitlum eftir MLM áskorun.

5. Ályktanir

Af þessum gögnum getum við dregið þá ályktun að vöðvauppörvun í röð með hIFN- 2b eykur M. bovis BCG bólusetningu, verndar gegn húðáskorun með MLM og sýnir efnilega ónæmisbælandi eiginleika manna IFN-a 2b í samhengi við BCG bólusetning til að koma í veg fyrir holdsveikisýkingar á landlægum svæðum. Eftir því sem við best vitum er þetta fyrsta skýrslan um meðferðaráhrif BCGphipps ásamt lyfjafræðilegri kynningu á hIFN- 2b í forklínísku líkani af holdsveikilíkum sjúkdómum.

Framlög höfunda:

Námshönnun, GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M.; námsframkvæmd, GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M.; gagnagreining: GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M.; gagnatúlkun, GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M.; handritsgerð, GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M.;endurskoðun handritaefnis, GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M.; GGG, OR-E., SOI-T. og JR-M. taka ábyrgð á heilindum gagnagreiningarinnar. Allir höfundar hafa lesið og samþykkt útgáfu handritsins.

Fjármögnun:

GGG og OR-E. voru studdar af SNI, CONACYT (Mexíkóborg, Mexíkó). GGG fékk stuðning frá Perfil Prodep 2019–2022 og JR-M. var styrkt af innri sjóðum frá læknadeild háskólans í Rochester Medical Center og RO1AI111914.

Yfirlýsing endurskoðunarnefndar stofnana:

Allar dýratilraunir voru gerðar eftir samþykki dýraverndar- og stjórnunarnefndarinnar (ZOO-010-2020). CIE-ENCB Dýragarðurinn 016/2014, 7. mars 2014.

Yfirlýsing um upplýst samþykki:

Á ekki við.

Yfirlýsing um framboð gagna:

Gögn verða miðlað í samræmi við leiðbeiningar stofnana.

Viðurkenningar:

Við erum þakklát Ricardo Villalobos fyrir hjálpina með IHC og Rogelio Hernandez Pando (INCMNSZ, Mexíkóborg), sem útvegaði BCGphipps stofninn.

Hagsmunaárekstrar:

Höfundar lýsa ekki yfir hagsmunaárekstrum.

Heimildir

1. HVER. Alþjóðaheilbrigðismálastofnunin: Berklar—Hnattrænar staðreyndir 2011/2102. Genf: WHO Stop TB Dep. 2012. Aðgengilegt á netinu: http://www.who.int/tb/publications/2011/factsheet_tb_2011.pdf (sótt 1. febrúar 2021).

2. Fínt, PE Holdsveiki: Hverju er verið að "útrýma"? Naut. World Health Organ. 2007, 85, 1–2. [Krossvísun]

3. Rambukkana, A. Hvernig miðar Mycobacterium leprae á úttaugakerfið? Trends Microbiol. 2000, 8, 23–28. [Krossvísun]

4. Rodriguez, JIA; Triellato, GL; Meirelles, NML; Teixeira, CC; Lyon, S.; Esteves, ARM Lepra flokkunaraðferðir: Samanburðarrannsókn á tilvísunarstaf í Brasilíu. Alþj. J. Infect. Dis. 2016, 45, 118–122. [CrossRef] [PubMed]

5. Geluk, A.; van der Ploeg, J.; Teles, OBR; Kees, L.; Franken, MC; Prins, C.; Wouter, DJ; Sarno, NE; Sampaio, EP; Otenhoff, THM Skynsamleg samsetning peptíða úr mismunandi Mycobacterium leprae próteinum eykur næmi fyrir ónæmisgreiningu M. leprae sýkingar. Clin. Vacc. Immunol. 2008, 15, 522–533. [CrossRef] [PubMed]

6. Geluk, A.; Bobosha, K.; Schip, JJVDP-V.; Spencer, JS; Banu, S.; Martins, MVSB; Cho, SN; Franken, KLMC; Kim, HJ; Bekele, Y.; o.fl. Ný lífmerki sem hafa þýðingu fyrir holdsveikisgreiningu sem eiga við á svæðum sem eru ofblandleg fyrir holdsveiki. J. Immunol. 2012, 188, 4782–4791. [Krossvísun]

7. Geluk, A. Lífmerki fyrir holdsveiki: Viltu frekar T (frumur)? Lepr. 2013, 84, 3–12. [CrossRef] [PubMed]

8. Alcaïs, A.; Alter, A.; Antoni, G.; Orlova, M.; Nguyen, VT; Singh, M.; Vanderborght, PR; Katoch, K.; Mira, MT; Vu, HT; o.fl. Skrefskipt afritun greinir lítið-framleiðandi eitilfrumusamsætu sem stóran áhættuþátt fyrir líkþrá snemma. Nat. Genet. 2007, 39, 517–522. [CrossRef] [PubMed]

9. Avanzi, C.; Singh, P.; Truman, RW; Suffys, PN Sameindafaraldsfræði holdsveikis: Uppfærsla. Smitast. Genet. Evol. 2020, 86, 104581. [Krossvísun]

10. Lastoria, JC; Abreu, MA Holdsveiki endurskoðun á faraldsfræðilegum klínískum og etnopathogenic þáttum-hluti 1. Bras. Dermatol. 2014, 89, 205–218. [Krossvísun]

11. Rojas-Espinosa, O. Núverandi efni á sniðum um ónæmisfræðileg svörun gestgjafa við sveppabakteríumsýkingum; Ritdómsbók; Tomioka, H., Ed.; Vegvísir rannsókna: Trivandrum, Indland, 2009; bls 97–140.

12. Adams, LB; Pena, TM; Sharma, R.; Hagge, AD; Schurr, E.; Truman, RW Innsýn úr dýralíkönum um ónæmingargetu holdsveikis. Umsögn. Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. 2012, 107, 197–208. [Krossvísun]

13. Rojas-Espinosa, O.; Becerril-Villanueva, E.; Wek-Rodriguez, K.; Arce-Paredes, P.; Reyes-Maldonado, E. Lömun á aftari útlimum í Mycobacterium lepraemurium sýktum músum stafar af beinskemmdum en ekki af taugaáhrifum. Clin. Exp. Immunol. 2005, 140, 436–442. [Krossvísun]

14. Modlin, LR Meðfædda ónæmissvörun í holdsveiki. Curr. Opin. Immunol. 2010, 22, 48–54. [Krossvísun]

15. Oliveira, RB; Ochoa, MT; Sieling, PA; Rea, TH; Rambukkana, A.; Sarno, EN; Modlin, RL Tjáning á tolllíkum viðtaka 2 á mönnum Schwann frumur: A Mechanism of Nerve Skade in Leprasy. Smitast. Ónæmi. 2003, 71, 1427–1433. [CrossRef] 16. MacMicking, J.; Xie, QW; Nathan, C. Nituroxíð og átfrumuvirkni. Annu. Séra Immunol. 1997, 15, 323–350. [Krossvísun]

17. Evans, T.; Buttery, L.; Smiður, A.; Springall, DR; Polak, J.; Cohen, J. Cytokine-meðhöndlaðir daufkyrningar úr mönnum innihalda framkallanlegan nituroxíðsyntasa sem framleiðir nítrun af innteknum bakteríum. Frv. Natl. Acad. Sci. Bandaríkin 1996, 93, 9553–9554. [CrossRef] [PubMed]

18. Fonseca, AB; Simon, læknir; Cazzaniga, RA; de Moura, TR; de Almeida, RP; Duthie, MS; Reed, SG; de Jesus, AR Áhrif meðfæddra og aðlagandi ónæmissvörunar á mismunandi klínískar niðurstöður holdsveiki. Smitast. Dis. Fátækt 2017, 6, 5–13. [CrossRef] [PubMed]

19. Sadhu, S.; Khaitan, BK; Joshi, B.; Sengupta, U.; Nautiyal, AK; Mitra, DK Gagnkvæmni milli reglubundinna T frumna og Th17 frumna: þýðingu fyrir skautað ónæmi í holdsveiki. PLoS Negl. Trop. Dis. 2016, 10, e0004338. [CrossRef] [PubMed]

20. Rojas-Espinosa, O.; Wek-Rodríguez, K.; Arce-Paredes, P. Áhrif utanaðkomandi peroxídasa á þróun múslípra. Alþj. J. Lepr. Annað Mycobact. Dis. 2002, 70, 191–200.

21. Ischiropoulos, H. Líffræðileg týrósínnítrun: meinalífeðlisfræðileg virkni nituroxíðs og hvarfgjarnra súrefnistegunda. Arch. Biochem. Lífeðlisfræði. 1998, 356, 1–11. [Krossvísun]

22. Ungt, DB Holdsveikislípíð veitir lykilinn að inngöngu Schwann frumna. Trends Microbiol. 2001, 9, 52–54. [Krossvísun]

23. Bannard, O.; Cyster, JG Germinal miðstöðvar: Forritaðar fyrir sækniþroska og mótefnafjölbreytni. Curr. Opin. Immunol. 2017, 45, 21–30. [CrossRef] [PubMed] 24. Victora, DG; Nussenweig, MC Germinal miðlar. Annu. Séra Immunol. 2012, 30, 429–457. [CrossRef] [PubMed]

25. Cirelli, KM; Crotty, SH Germinal miðstöð aukning með auknu framboði mótefnavaka. Curr. Opin. Immunol. 2017, 47, 64–69. [Krossvísun]

26. Good-Jacobson, KL; Szumilas, CG; Chen, L.; Sharpe, AH; Tomayko, MM; Shlomchik, MJ PD-1 stjórnar lifun B frumna í kímstöð og myndun og sækni langlífra plasmafrumna. Nat. Immunol. 2010, 11, 535–542. [Krossvísun]

27. Wollenberg, I.; Agua-Doce, A.; Hernández, A.; Almeida, C.; Oliveira, VG; Faro, J.; Graca, L. Reglugerð um germinal Center Reaction með Foxp3 auk Follicular Regulatory T frumur. J. Immunol. 2011, 187, 4553–4560. [CrossRef] [PubMed]

28. Litterman, MA; Pierson, W.; Lee, SK; Kallies, A.; Kawamoto, S.; Rayner, TF; Srivastava, M.; Divekar, DP; Beaton, L.; Hogan, JJ; o.fl. FOXP3 plús eggbússtýrandi T frumur stjórna kímstöðvum. Nat. Med. 2011, 17, 975–982. [Krossvísun]

29. Miles, B.; Connick, E. Control of the germinal Center by Follicular Regulatory T frumur meðan á sýkingu stendur. Framan. Immunol. 2018, 9, 2704–3710. [Krossvísun]

30. Fu, W.; Liu, X.; Lin, X.; Feng, H.; Sun, L.; Li, S.; Chen, H.; Tang, H.; Lu, L.; Jin, W.; o.fl. Skortur á T eggbússtýringarfrumum stuðlar að sjálfsofnæmi. J. Exp. Med. 2018, 215, 815–825. [Krossvísun]

31. Pitzalis, C.; Jones, GW; Bombardieri, M.; Jones, SA utanlegs eitilfrumulíkar mannvirki í sýkingu, krabbameini og sjálfsofnæmi. Nat. Séra Immunol. 2014, 14, 447–462. [Krossvísun]

32. Aloulou, M.; Carr, EJ; Gador, M.; Bignon, A.; Liblau, RS; Fazilleau, N.; Linterman, MA Follicular Regulatory T-frumur geta verið sértækar fyrir ónæmisvaldandi mótefnavaka og komið frá barnalegum T-frumum. Nat. Commun. 2016, 7, 10579–10589. [Krossvísun]

33. Vinuesa, CG; Sanz, I.; Cook, MC Vanstjórnun á kímstöðvum í sjálfsofnæmissjúkdómum. Nat. Séra Immunol. 2009, 9, 845–857. [Krossvísun]

34. Cucak, H.; Yrlid, U.; Reizis, B.; Kalinke, U.; Johansson-Lindborn, B. Type I Interferon boð í dendritic frumum örvar þróun eitla-Resident T follicular hjálparfrumna. Ónæmi 2009, 31, 491–501. [Krossvísun]

35. Desvignes, L.; Úlfur, AJ; Ernst, JD Kvik hlutverk IFNs af tegund I og tegund II við snemma sýkingu af Mycobacterium berklum. J. Immunol. 2012, 188, 6205–6215. [Krossvísun]

36. Teles, MBR; Graeber, GT; Krutzik, RS; Montoya, D.; Schenk, M.; Lee, JD; Komisopoulou, E.; Kelly-Scumpia, K.; Chun, R.; Iyer, SS; o.fl. Interferón af tegund I bælir interferón af tegund II af völdum sveppabakteríusvörunar manna. Vísindi 2013, 339, 1448–1453. [Krossvísun]

37. Ji, DX; Yamashiro, LH; Chen, KJ; Mukaida, N.; Kramnik, I.; Darwin, KH; Vance, RE Type I interferon-drifið næmi fyrir Mycobacterium tuberculosis er miðlað af IL-1Ra. Nat. Örverur. 2019, 4, 2128–2135. [Krossvísun]

38. Manca, C.; Tsenova, L.; Bergtold, A.; Freeman, SH; Tovey, M.; Musser, MJ; Barry, EM, 3.; Freedman, HV; Kaplan, G. Virulence of a Mycobacterium tuberculosis klínískt einangrunarefni í músum ákvarðast af því að ekki er hægt að framkalla Th1 gerð ónæmis og tengist örvun IFN-/. Frv. Natl. Acad. Sci. Bandaríkin 2007, 98, 5752–5757. [CrossRef] [PubMed]

39. Telesca, C.; Angelico, M.; Piccolo, P.; Nosotti, L.; Morrone, A.; Longhi, C.; Carbone, M.; Baiocchi, L. Interferon-alfa meðferð við lifrarbólgu D veldur versnun berkla hjá innflytjanda. J. Infect. 2007, 54, e223–e226. [CrossRef] [PubMed]

40. Giacomini, E.; Remoli, ME; Gafa, V.; Pardini, M.; Fattorini, L.; Coccia, EM IFN- bætir BCG ónæmingargetu með því að virka á DC þroska. J. Leukoc. Biol. 2008, 85, 462–468. [CrossRef] [PubMed]

41. Rivas-Santiago, CE; Guerrero, GG IFN- Uppörvun Mycobacterium bovis Bacillus Calmette Güerin-bóluefni stuðlað að Th1 gerð frumusvörun og vernd gegn M. tuberculosis sýkingu. BioMed Res. Alþj. 2017, 2017, 6760. [Krossvísun]

42. Guerrero, GG; Rangel-Moreno, J.; Islas-Trujillo, S.; Rojas-Espinosa, O. Snögg vöðvauppörvun með IFN-Alpha verndar Mycobacterium bovis BCG-bólusettar mýs gegn M. lepraemurium sýkingu. BioMed Med. Res. Alþj. 2015, 2015, 414027.

43. McNab, F.; Mayer-Barber, K.; Sher, A.; Wack, A.; O'Garra, A. Interferón af tegund I í smitsjúkdómum. Nat. Séra Immunol. 2015, 15, 67–103. [Krossvísun]

44. O'Shea, JJ; Visconti, R. Type I IFNs og stjórnun á TH1 svörun: Enigmas bæði leyst og komu fram. Nat. Immunol. 2000, 1, 17–19. [Krossvísun]

45. González-Navajas, JM; Lee, J.; Davíð, M.; Raz, E. Ónæmisbælandi virkni interferóna af tegund I. Nat. Séra Immunol. 2012, 12, 125–135. [Krossvísun]

46. ​​Le Bon, A.; Sterkt, DF Type I interferón sem hvati fyrir kross-priming. Staðreynd frumuvaxtar Rev. 2008, 19, 33–40. [Krossvísun]

47. Bracci, L.; Canini, I.; Puzelli, S.; Sestili, P.; Venditti, M.; Spada, M.; Donatelli, I.; Belardelli, F.; Proietti, E. Type I IFN er öflugt slímhúð hjálparefni fyrir sértæka bólusetningu í nef gegn inflúensuveiru í músum og hefur áhrif á mótefnavakafanga á slímhúðstigi. Bóluefni 2005, 23, 2994–3004. [Krossvísun]

48. Sófi, RB; Atmar, RL; Cate, TR; Quarles, JM; Keitel, WA; Arden, NH; Wells, J.; Niño, D.; Wyde, PR Andstæður áhrif interferóns af tegund I sem slímhúð hjálparefni fyrir inflúensubóluefni í músum og mönnum. Bóluefni 2009, 27, 5344–5348. [CrossRef] [PubMed]

49. Denton, AE; Innocentin, S.; Carr, EJ; Bradford, BM; Lafouresse, F.; Mabbott, NA; Mörbe, U.; Ludewig, B.; Brúðgumi, JR; Good-Jacobson, KL; o.fl. Interferón af tegund I örvar CXCL13 til að styðja við myndun utanlegs kímstöðva. J. Exp. Med. 2019, 216, 621–637. [Krossvísun]

50. Toledo, PTG; Batista-Silva, LR; Medeiros, RCA; Lara, FA; Moraes, MO tegund I interferón, sjálfsát og hýsilefnaskipti í holdsveiki. Framan. Immunol. 2018, 23, 806–817. [Krossvísun]

51. Zhang, W.; Zhang, Y.; Zheng, H.; Pan, Y.; Liu, H.; Du, P.; Wan, L.; Liu, J.; Zhu, B.; Zhag, G.; o.fl. Erfðamengi raðgreining og greining á BCG bóluefnisstofnum. PLoS ONE 2013, 8, e071243. [Krossvísun]

52. Wek-Rodriguez, K.; Silva-Miranda, M.; Arce-Paredes, P.; Rojas-Espinosa, O. Áhrif hvarfgjarnra súrefnis milliliða á lífvænleika og smithæfni Mycobacterium lepraemurium. Alþj. J. Exp. Pathol. 2007, 88, 137–145. [Krossvísun]

53. Kim, SH; Cohen, B.; Novick, D.; Rubinstein, M. Spendýrategund I interferónviðtaka samanstendur af tveimur undireiningum: IFN-R1 og IFN-R2. Gene 1997, 196, 279–286. [Krossvísun]

54. Luo, Y.; Chen, X.; Han, RA; O'Donnell, M. Raðbrigðabacillus Calmette-Guérin (BCG) sem tjáir interferón-alfa 2B úr mönnum sýnir aukna ónæmingargetu. Clin. Exp. Immunol. 2001, 123, 264–270. [CrossRef] [PubMed]

55. Sun, E.; Nian, X.; Liu, C.; Fan, X.; Han, R. Smíði raðbrigða manna IFN -2b BCG og æxlishemjandi áhrif þess á krabbameinsfrumur í þvagblöðru in vitro. Genet. Mol. Res. 2015, 14, 3436–3449. [CrossRef] [PubMed]

56. Prabhakaran, K.; Harris, EB; Kirchheimer, WF Binding 14C-merkts dopa af Mycobacterium leprae in vitro. Alþj. J. Lepr. Annað Mycobact. Dis. 1976, 44, 58–64.

57. Draper, P. Hreinsun Mycobacterium leprae. Í viðauka 4 í skýrslu fimmta fundar vísindavinnuhópsins um ónæmisfræði holdsveikis (IMMLEP), Genf, Sviss, 24.–26. júní 1980; Alþjóðaheilbrigðismálastofnunin: Genf, Sviss, 1980.

58. Ischiropoulos, H.; Nelson, J.; Duran, D.; Al-Mehdi, A. Hvörf nituroxíðs og peroxýnítríts við lífrænar sameindir og ferripiparrótarperoxíðasa: Truflun á ákvörðun vetnisperoxíðs. Free Radic. Biol. Med. 1996, 20, 373–381. [Krossvísun]

59. Schön, T.; Hernandez-Pando, R.; Negesse, Y.; Leekassa, R.; Sundqvist, T.; Britton, S. Tjáning á framkallanlegum nituroxíðsyntasa og nítrótýrósíni í líkþráskemmdum á mörkum. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 809–815. [Krossvísun]

60. Silva-Miranda, M.; WeK-Rodriguez, K.; Martinez, CE; Rojas-Espinosa, O. Tjáning sýklóoxýgenasa-2, alfa 1-sýru glýkópróteins og framkallanlegs nituroxíðsyntasa í sárum sem myndast af holdsveiki í músum. Alþj. J. Exp. Leið. 2006, 87, 485–494. [Krossvísun]

61. Hernández-Pando, R.; Schön, T.; Orozco, EH; Serafín, T.; Estrada-Garcia, I. Tjáning á framkallanlegum nituroxíðsyntasa og nítrótýrósíni við þróun tilrauna lungnaberkla. Exp. Eitrað. Pathol. 2001, 53, 257–265. [Krossvísun]

62. Izcue, A.; Coombes, JL; Powrie, F. Regulatory eitilfrumur og þarmabólga. Annu. Séra Immunol. 2009, 27, 313–338. [Krossvísun]

63. Sakaguchi, S.; Miyara, M.; Costantino, CM; Hafler, DA FOXP3 plús stjórnandi T frumur í ónæmiskerfi manna. Nat. Séra Immunol. 2010, 10, 490–500. [Krossvísun]

64. Plotkin, SA Fylgni um vernd af völdum bólusetningar. Clin. Bóluefni Immunol. 2010, 17, 1055–1065. [CrossRef] [PubMed]

65. Wu, H.; Chen, Y.; Liu, H.; Xu, L.-L.; Teuscher, P.; Wang, S.; Lu, S.; Dent, AL Follicular Regulatory T-frumur bæla úr cýtókínframleiðslu hjá T-frumur í eggbúshjálp og hámarka IgG svörun í músum. Eur. J. Immunol. 2016, 46, 1152–1161. [CrossRef] [PubMed]

66. Jeyanathan, M.; Damjanovic, D.; Shaler, CR; Lai, R.; Wortzman, M.; Yin, C.; Zganiacz, A.; Lichty, D.; Xing, Z. Mismunandi áprentað meðfædd ónæmi með slímhúðbólusetningu ákvarðar ónæmisvörn gegn berkla, óháð T-frumuónæmi. Mucosal Immunol. 2013, 6, 612–625. [CrossRef] [PubMed]

67. Jeyanathan, M.; Shao, Z.; Yu, X.; Harkness, R.; Jiang, R.; Li, J.; Xing, Z.; Zhu, T. AdHu5Ag85A Bólusetning fyrir öndunarfæraslímhúð eykur vernd gegn lungnaberklum í BCG-prímuðum prímötum sem ekki eru úr mönnum. PLoS ONE 2015, 10, e0135009. [Krossvísun]

68. Afhami, S.; Drumond, VA; D'Agositnio, MR; Jeyanathan, M.; Gillgrass, A.; Xing, Z. Að efla ónæmismeðferðarbólusetningaraðferðir gegn lungnaberklum. Framan. Immunol. 2020, 11, 557809. [Krossvísun]

69. Torrado, E.; Robinson, RT; Cooper, AM Frumuviðbrögð við sveppabakteríum: jafnvægisvörn og meinafræði. Trends Immunol. 2011, 32, 66–72. [Krossvísun]

70. Xu, X.; Gao, W.; Cheng, S.; Yin, D.; Li, F.; Wu, Y.; Sun, D.; Zhou, S.; Wang, D.; Zhang, Y.; o.fl. Bólgueyðandi og ónæmisbælandi aðferðir atorvastatíns í múslíkani af áverka heilaskaða. J. Neuroinflamm. 2017, 14, 167–182. [Krossvísun]

71. Azeem, W.; Maukon, BR; Appel, S.; Maegrete, AO; Kalland, KH Tvöfaldur Pro- og bólgueyðandi eiginleikar einfrumnaafleiddra dendritic frumna. Framan. Immunol. 2020, 11, 438–453. [Krossvísun]

72. Sultana, S.; Bishay, B. Hlutleysing á TNFR-1 og TNFR-2 mótar rotþróargigt af völdum S. aureus með því að stjórna magni bólgueyðandi og bólgueyðandi cýtókína meðan á framvindu sjúkdómsins stendur. Immunol. Lett. 2018, 196, 33–51. [Krossvísun]

73. Klám, D.; Gilligan, MM; Huang, S.; Gartung, A.; Cortes-Puch, I.; Sime, PJ; Phipps, RP; Serhan, CHN; Hengirúm, BD Bólgaupplausn: Tvíþætt nálgun til að afstýra frumustormum í COVID-19 krabbameinsmeinvörpum Rev. 2020, 39, 337–340. [Krossvísun]

74. Longhi, þingmaður; Trumpfheller, C.; Idoyaga, J.; Caskey, M.; Matos, I.; Kluger, C.; Salazar, AM; Colonna, M.; Steinman, RM Dendritic frumur þurfa almennt interferónsvörun af tegund I til að þroskast og framkalla CD4 plús Th1 ónæmi með fjöl IC sem hjálparefni. J. Exp. Med. 2009, 206, 1589–1602. [Krossvísun]

75. Khader, SA; Guglani, L.; Rangel-Moreno, J.; Gopal, R.; Junecko, BAF; Gosbrunnur, JJ; Martino, C.; Perla, JE; Tighe, M.; Lin, Y.-Y.; o.fl. IL-23 er krafist fyrir langtímastjórnun á Mycobacterium berklum og B-frumu eggbúsmyndun í sýktu lungu. J. Immunol. 2011, 187, 5402–5407. [CrossRef] [PubMed]

76. Choreño-Parra, JA; Bobba, S.; Rangel-Moreno, J.; Ahmed, M.; Mehra, S.; Rósa, B.; Martin, J.; Mitreva, M.; Kaushal, D.; Zúñiga, J.; o.fl. Mycobacterium tuberculosis HN878 sýking veldur mannalíkum B-frumu eggbúum í músum. J. Infect. Dis. 2020, 221, 1636–1646. [CrossRef] [PubMed]

77. Schmidt, EG; Haribhai, D.; Williams, JB; Aggarwal, P.; Jia, S.; Charbonnier, LM; Yan, K.; Lorier, R.; Turner, A.; Ziegelbauer, J.; o.fl. IL-10 framleitt af iTreg frumum stjórnar ristilbólgu og sjúkdómsvaldandi td. Treg frumur meðan á ónæmismeðferð stendur. J. Immunol. 2012, 189, 5628–5648. [Krossvísun]

78. Rubtsovo, YP; Rasmussen, JP; Chi, Y.; Fontenot, J.; Castelli, I.; Já, X.; Treuting, P.; Siewe, I.; Roers, A.; Henderson, WRJ; o.fl. Regulatory T-frumu-afleidd interleukin-10 takmarkar bólgu á umhverfissviðum. Ónæmi 2018, 28, 546–558. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com