Hamlandi áhrif Elaeagnus Umbellata brota á sortumyndun í -MSH-örvuðum B16-F10 sortuæxlisfrumum

Ágrip:

Þegar húð verður fyrir útfjólubláum geislum mynda sortufrumur melanín. Of mikil framleiðsla melaníns leiðir til litarefnis húðar sem veldur ýmsum snyrti- og heilsuvandamálum. Þess vegna er nauðsynlegt að þróa örugga, náttúrulega meðferð sem hamlar framleiðslu melaníns. Elaeagnus umbellata (ESB) hefur lengi verið mikið notað sem lækningajurt fyrir fólk vegna lyfjafræðilegra eiginleika sem fela í sér sársvörn, andoxunarefni og bólgueyðandi eiginleika.

Í þessari rannsókn könnuðum við andoxunarvirkni og hamlandi áhrif á sortumyndun ESB-hluta í B16-F10 sortuæxlafrumum. ESB hlutar sýndu skammtaháða aukningu á andoxunarvirkni í róttæka hreinsivirkni. Að auki metum við áhrif ESB-hluta á týrósínasavirkni og sortumyndun í B16-F10 sortuæxlisfrumum af völdum -melanocyte-örvandi hormóna. EU var ekki frumueitrað við 12,5–50 µg/ml. ESB hlutar hamluðu á áhrifaríkan hátt týrósínasavirkni og sortumyndun, bældu fosfórun CREB og ERK sem taka þátt í sortumyndunarferlinu, og minnkaði tjáningu próteina sem tengjast sortumyndun. Athyglisvert er að and-melanogenesis áhrifin voru áhrifaríkust við styrk upp á 50 µg/mL EU, og áhrif brotanna voru betri en útdráttarins. Þess vegna bendir rannsókn okkar til þess að ESB hafi möguleika á að vera örugg meðferð við of mikilli litarefni eða sem náttúrulegt innihaldsefni í snyrtivörum.

Vaxtarhraði mannshúðarinnar og nýrra frumna í líkama okkar hægir á sér, efnaskipti í húð hægja á, öldrunarfrumum er ekki hægt að umbrotna í tíma og hnökralaust og það er erfitt fyrir melanín að hverfa. Samhliða smám saman tapi náttúrulegra rakagefandi þátta á yfirborði húðarinnar, þykknar og safnast hornlag, melanínið eykst og daufir dökkir blettir birtast smám saman á húðinni. Sama hversu margar blekandi húðvörur eru notaðar, það er erfitt að frásogast húðina. Þess vegna, meðan á rannsóknum okkar stóð, komumst við að því að heildarglýkósíð af Cistanche deserticola, virka innihaldsefnið í Cistanche tubulosa, geta á áhrifaríkan hátt fjarlægt ýmsa virka súrefni sindurefna (O2·-, OH·, H2O2, 1O2), og verndað gegn DNA skemmdum af völdum OH· sindurefna og Cistanche deserticola fjölsykrur geta seinkað lífeðlisfræðilegri hrörnun líffæra og formfræðilegri umbreytingu frumna. Ofangreind innihaldsefni geta öll haft andoxunar- og öldrunaráhrif. Á sama tíma getur Cistanche deserticola einnig hamlað virkni tyrosinasa til að ná fram hvítandi áhrifum.

Smelltu cistanche tubulosa þykkni duft vara

Leitarorð:

Elaeagnus umbellata; húð-hvíttun; andoxunarefni; sortumyndun; -MSH.

1. Inngangur

Húðlitur hjá mönnum fer eftir magni sortukorna sem eru erfðafræðilega til staðar, og hversu mikið þessi sortukorn dreifist í húðinni og hefur einnig áhrif á útsetningu fyrir sólarljósi og umhverfismengun [1]. Melanín er efnasamband með mikla mólþunga sem finnast í dýrum og plöntum og er mikilvægt litarefni sem ákvarðar augn-, húð- og hárlit manna. Melanogenese vísar til framleiðsluferlis melaníns, aðalorsök litarefnis í húð manna. Melanín getur verndað húðina gegn skaðlegri útfjólubláu geislun, en of mikil framleiðsla melaníns getur leitt til fagurfræðilegra vandamála, þar á meðal melasma og freknur, auk heilsufarsvandamála, þar á meðal oflitunar eftir bólgu [2].

Melanín gegnir mikilvægu hlutverki við að vernda húðina fyrir ýmsum áreiti, svo sem útfjólubláu, hvarfgjörnu súrefnistegundum (ROS) og -melanocyte örvandi hormón (-MSH) [3]. Þegar húðin verður fyrir útfjólubláum geislum myndast ROS og húðfrumurnar mynda umfram melanín. Þetta myndaða ROS eyðileggur ein- og tvíþátta DNA og ræðst á prótein- og lípíðsameindir [4]. Melanín og andoxunarensím, eins og peroxidasi, glútaþíon og katalasa, hlutleysa myndaða ROS til að viðhalda ákveðnu stigi [5,6]. Hins vegar leiðir óviðráðanleg óhófleg ROS framleiðsla til margvíslegra vandamála, svo sem krabbameins [7]. Sortfrumur eru staðsettar í grunnlagi yfirhúðarinnar og eru mótaðar af tyrosinasa. Þessar frumur framleiða melanín með sortumyndun og þættir eins og microphthalmia-associated transcription factor (MITF) og tyrosinasa-tengt prótein (TRP-1) taka þátt í þessu ferli [8]. Týrósínasi tekur þátt í ferlinu sem L-týrósín verður að 3,4-díhýdroxýfenýlalaníni (DOPA), sem síðan er breytt í dópakínón sem melanín er myndað úr. Þess vegna er týrósínasi mikilvægur þáttur sem stjórnar sortumyndun í húðfrumum.

Nýlega, til að leysa fagurfræðileg vandamál af völdum litarefna og litarefnasjúkdóma af völdum of mikillar sortumyndunar, hafa margir læknis- og snyrtivöruiðnaður einbeitt sér að týrósínasavirknihemlum [9]. Ýmis efni eins og arbútín, kojínsýra, hýdrókínón og askorbínsýra, sem hamla melanínmyndun, eru notuð sem húðhvítandi efni [10]. Hins vegar komast þessi efni illa inn í húðina og í langan notkun geta þau haft aukaverkanir eins og húðertingu, bólgu, kláða og litarefni [11]. Þess vegna er þörf á að þróa árangursríka hvítunarefni sem geta á öruggan hátt meðhöndlað og komið í veg fyrir oflitun á húð manna án ertingar.

Elaeagnus umbellata (ESB) er planta sem er útbreidd víða um Asíu og hefur lengi verið notuð sem alþýðulækningajurt vegna tilheyrandi lyfjafræðilegra áhrifa. Hefð er fyrir því að blóm og fræ ESB hafa verið notuð til að meðhöndla öndunarfærasjúkdóma, þar á meðal þá sem hafa áhrif á hjarta og lungu, en blöðin hafa verið notuð sem styrkjandi lyf og til að meðhöndla þarmasjúkdóma [12,13]. Auk þess er EU notað sem vöðvaslakandi, verkjastillandi, sárs-, sykursýkis- og hitalækkandi lyf [14]. ESB innihaldsefni hafa krabbameinslyf [15], andoxunarefni og bólgueyðandi áhrif [16], og ESB þykkni hefur áhrif á húðhvíttun og hrukkubætur [17]. Hins vegar hafa enn ekki verið gerðar rannsóknir á áhrifum húðhvítunar með greinum og laufum í ESB-hlutunum. Þess vegna var tilgangur þessarar rannsóknar að fylgjast með in vitro andoxunarvirkni og sortumyndunarhömlun á greinum og laufafleiddum ESB-hlutum á melanínframleiðandi B16-F10 sortuæxlisfrumum úr músum og staðfesta möguleika grein- og blaða- afleitt ESB sem húðhvítunarefni fyrir snyrtivörur.

2. Efni og aðferðir

2.1. Efni og hvarfefni

2.2. Undirbúningur ESB útdráttar og brota sem og sýnishorn

Útibú og laufblöð (1:1) ESB voru veitt af Jeonbuk Institute for Food Bioindustry (Jeonju, Jeonbuk, Kóreu). EU (50 g) var malað með blandara og ESB-duft var dregið út með 70 prósent etanóli í 24 klst. við stofuhita. Leysirinn var dauðhreinsaður síaður í gegnum venjulegt sigti (Advantec MFS, Taipei, Taívan) og gufað upp við lækkaðan þrýsting með því að nota snúningsuppgufunartæki (EYELA, N-1110, Tókýó, Japan). Útdrátturinn var frostþurrkaður með því að nota frostþurrkara (OPERON, FDU-8606, Gimpo, Kóreu) til að fjarlægja afgangs etanóls og fá 2,4 g (afrakstur, 4,8 prósent) af ESB 70 prósent etanólútdrætti (EUEE) dufti. EUEE (2,4 g) var sviflausn í eimuðu vatni og var skipt með etýlasetati (EUEA, 0,19 g) eða bútanól (EUBu, 0,91 g) hlutum. Allir útdrættir og brot voru geymd við 4 ◦C fram að notkun.

2.3. High-performance vökvaskiljun (HPLC) greining

Litskiljunargreiningar voru gerðar með því að nota Elite Lachrom HPLC-DAD kerfi með UV skynjara (Hitachi HighTechnologies Co., Tókýó, Japan). UV skynjari við 260 nm og greiningar YMC ODS-AM (5 mM, 4,6 × 250 mM) dálkur (Kyoto, Japan) var notaður til magngreiningar á grundvelli innri staðalaðferðarinnar. Súluhitastigið var 35 ◦C og hreyfanlegur fasaflæðishraði var 1 ml/mín. Skolunarefnið var halli af leysi (A)=0,1 prósent ediksýru í vatni og leysi (B)=0,1 prósent ediksýru í asetónítríl. Hlaupatíminn var 35 mínútur og hallinn var sem hér segir: (A)/(B)=88/12 (0 mín) → (A)/(B)=78/22 (0– 18 mín.) → (A)/(B)=72/28 (18–28 mín.) → (A)/(B)=62/38 (28–35 mín). HPLC greining er sýnd á mynd 1.

2.4. Frumumenning

Músa sortuæxli B16-F10 frumulína (CRL-6475) var keypt frá American Type Culture Collection (ATCC, VA, Bandaríkjunum). Frumur voru ræktaðar í DMEM bætt við 10 prósent hitavirkjuð FBS og 1 prósent streptomycin (100 µg/mL)/penicillín (100 einingar/ml). B16-F10 frumur voru ræktaðar í rakaðri 5 prósent CO2 við 37 ◦C.

2.5. Frumulífvænleikapróf

Frumueiturhrif sýnanna voru metin með því að nota MTT prófið. B16-F10 sortuæxlisfrumur (1 × 104 frumur/brunn) voru ræktaðar í 96-brunnsplötu og ræktaðar með ýmsum styrkjum af útdrætti og hlutum (12,5, 25, 50 og 100 µg/mL) eða arbútín (100 µg/ml) í 24 klst við 37 ◦C. Eftir ræktun var 500 µg/mL MTT lausn bætt við brunnana og plötunni var ræktað frekar í 4 klst við 37 ◦C. Síðan var miðill hvers brunns fjarlægður og 200 µL dímetýlsúlfoxíði (DMSO) var bætt við til að leysa upp formazan kristallana. Frásog plötunnar greindist við 570 nm á örplötulesara (Synergy HTX Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, Bandaríkjunum).

2.6. DPPH Radical Scavenging Activity

DPPH róteindahreinsandi virkni ESB útdráttarins og -hlutanna var staðfest með því að mæla afoxunarkraft DPPH rótefna í hverju sýni. Ýmsum styrkjum (12,5, 25 og 50 µg/mL) af ESB útdrætti og hlutum eða 20 µg/mL af askorbínsýru (jákvæð viðmiðun) við 500 µL var bætt við 2 mL af 0,15 mM DPPH lausn. Lausninni var hrint í hring í 10 sekúndur til að tryggja ítarlega blöndun og var ræktuð í 30 mínútur við stofuhita í myrkri. Frásog blöndunnar var síðan mæld við 517 nm með því að nota örplötulesara (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.7. ABTS Radical Scavenging Assay

ABTS róteindahreinsunarlausnin var útbúin með því að blanda 7,4 mM af ABTS lausn og 2,6 mM af kalíumpersúlfati í hlutfallinu 1:1 (pH 7,4) og láta lausnina hvarfast við stofuhita í 24 klst. ABTS lausnin var síðan stillt á gleypni upp á 0,70 ± 0,03 við 732 nm. Hvert 10 µL sýni var látið hvarfast við 190 µL af ABTS lausn í 10 mínútur við stofuhita og gleypni var mæld við 732 nm með því að nota örplötulesara (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.8. Sveppir tyrosínasa hindrandi virkni

Til að greina hamlandi virkni týrósínasa, sem gegnir mikilvægu hlutverki í sortumyndun, voru sveppir týrósínasa og L-DOPA hvarfefni notuð. Fyrst var 150 µL af 0,1 M fosfatbuffi (pH 6,8), 20 µL af 5 mM L-DOPA lausn og 20 µL af mismunandi styrkjum af ESB útdrætti og hlutum bætt í röð og 100 µL af 250 U/ml sveppatýrósínasa var bætt við til að koma hvarfinu af stað. Blöndurnar voru ræktaðar við 37 ◦C í 10 mínútur og gleypni var mæld við 475 nm með því að nota örplötulesara (Biotek, Winooski, VT, USA). Týrósínasa hindrandi virkni var reiknuð út með eftirfarandi formúlu:

2.9. Ákvörðun á frumu tyrosínasavirkni

B16-F10 sortuæxlisfrumum var sáð með þéttleika 1 × 105 frumur/holu í sex-brunnu plötum sem innihéldu 2 ml af DMEM. Sex hópar voru stofnaðir: samanburðarhópur, ómeðhöndlaðir; -MSH hópur, 100 nM -MSH eingöngu; arbútín hópur, -MSH og arbútín (10 mM); EUEE hópur, -MSH og EUEE útdráttur (12,5, 25 og 50 µg/ml); EUEA hópur, -MSH og EUEA brot (12,5, 25 og 50 µg/ml); og EUBu hópur, -MSH og EUBu hlutar (12,5, 25 og 50 µg/mL). Sex holna plötur voru ræktaðar yfir nótt við 37 ◦C í 5 prósent CO2 útungunarvél. Síðan voru frumur útsettar fyrir -MSH (100 nM) í 48 klst og meðhöndlaðar með ýmsum styrkjum af EUEE, EUEA og EUBu eða arbútíni (10 mM) í 24 klst. Frumur voru þvegnar með fosfat-bufferuðu saltvatni (PBS) þrisvar sinnum og ljósar. Lysatið var skilið í skilvindu við 16,000× g í 20 mín.

Næst var próteininnihald hvers lýsis ákvarðað með því að nota BCA próteingreiningarsettið (Thermo Scientific, Vantaa, Finnland). Próteinmagn var síðan stillt í 20 µg í öllum sýnum. Lýsöt (100 µL) sem innihéldu 2,5 mM af L-DOPA í 0,1 M fosfatbuffi voru flutt í brunna í 96-brunnsplötu og ræktuð í 1 klst við 37 ◦C. Frásog lýsatanna var mæld við 475 nm með því að nota örplötulesara (Biotek, Winooski, VT, USA). Týrósínasavirkni milli frumna var reiknuð út með eftirfarandi formúlu:

OD táknar gleypni sýnisins og ODb táknar gleypni eftirlitsins. Arbutin var notað sem staðall.

2.10. Mæling á melaníninnihaldi

Til að ákvarða magn melaníns í B16-F10 frumum var þeim sáð í 24-brunnsplötu með þéttleikanum 2 × 104 frumur/brunn og ræktaðar í 24 klst í DMEM með 10 prósent FBS. B16-F10 frumur voru formeðhöndlaðar með ýmsum styrkjum af EUEE, EUEA og EUBu (12,5, 25 og 50 µg/mL) og jákvæðri samanburðararbútíni (10 mM) í 1 klst., síðan hvarfast við 100 nM af - MSH í 72 klst. Síðan voru frumur safnað eftir þvott með PBS. Kögglan sem fékkst með skilvindu (12,000× g, 10 mín) var leyst í 1N NaOH sem innihélt 10 prósent DMSO við 90 ◦C í 30 mínútur. Melaníninnihald hvers brunns var mælt við 405 nm með því að nota örplötulesara (Biotek, Winooski, VT, USA). Til að ákvarða magn melaníns var litið á heildarmagnið sem framleitt var í tilrauninni sem staðall (100 prósent), og hömlunarhlutfall hvers útdráttar og hluta meðferðarhóps var ákvarðað í hlutfalli við þennan staðal.

2.11. Western Blot greining

B{{0}}F10 sortuæxlisfrumurnar úr músum (1 × 106 frumur/brunn) voru ræktaðar í 6 cm diskum og ræktaðar yfir nótt við 37 ◦C og frumur voru formeðhöndlaðar með -MSH (10 µM) í 24 h. Síðan voru frumur meðhöndlaðar með ýmsum styrkjum (12,5, 25 og 50 µg/mL) af ESB útdrætti og hlutum eða 100 µg/ml arbutin í 24 klst. Frumur voru teknar með PBS og síðan skilið í skilvindu við 12,000× g í 15 mínútur við 4 ◦C. Eftir að flotið hefur verið fjarlægt voru frumur ljósaðar með því að nota ísköld Pro-prep próteinlýsubuffi með því að bæta við 1 prósent próteasa- og fosfatasahemlum og þeim haldið á ís í 40 mín. Hlutdeildu próteinin voru magngreind með því að nota Bradford próteingreininguna. Jafnt magn af próteinum (25 µg) var hlaðið og aðskilið með 8 prósent eða 10 prósent natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð hlaup rafskaut og flutt yfir á pólývínýlídenflúoríð (PVDF) himnu. PVDF himnurnar voru læstar með 5 prósenta undanrennu í Tris-bufferuðu saltvatni (TBS) með 0,1 prósent Tween 20 (TBS-T) jafnalausn í 1 klst við stofuhita og ræktaðar með sérstökum frummótefnum gegn p-CREB, CREB, p -ERK, ERK, MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinasi og -aktín yfir nótt við 4 ◦C.

Síðan voru himnurnar skolaðar með TBS-T jafnalausn þrisvar sinnum í 10 mínútur og hvarfast í 2 klst með piparrótarperoxídasa-tengdu aukamótefni við stofuhita. Himnur voru skolaðar með TBS-T buffer fimm sinnum og prótein greind með aukinni efnaljómunarlausn. Hljómsveitarmyndirnar voru fengnar með Davinch-In vivo og vestrænum myndgreiningarkerfi (Davinch-K, Seoul, Kóreu).

2.12. Tölfræðigreining

Öll gildi eru sett fram sem meðaltal ± SEM (staðalvilla á meðaltali) að minnsta kosti þriggja sjálfstæðra tilrauna og GraphPad Prism hugbúnaður 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA) var notaður við tölfræðilega greiningu. Einhliða dreifnigreining fylgt eftir með Bonferroni post hoc greiningu var notuð til að bera saman tölfræðilegan mun á milli hópa. P-gildi minna en 0.05 (p < 0,05) var talið tölfræðilega marktækt.

3. Úrslit

3.1. HPLC greining ESB

Lokaávöxtun (prósent) af EUEE, EUEA og EUBu var 4,8 prósent, 0,18 prósent og 1,82 prósent, í sömu röð, miðað við ferska þyngd. HPLC var notað til að greina innihald lúteólíns, vísbendingasambands úr ESB útdrætti og hlutum. Í samanburði við hámark staðalþáttarins var hámark lúteólíns í ESB útdrættinum og hlutunum staðfest. Styrkur lúteólíns í EUEE, EUEA og EUBu var 499,03, 1948,05 og 994.00 mg/ml, í sömu röð (Mynd 1).

3.2. Áhrif ESB á andoxunarvirkni og týrósínasahamlandi virkni

Andoxunarvirkni mismunandi styrkleika EUEE, EUEA og EUBu var mæld með því að nota DPPH/ABTS prófið. DPPH og ABTS róttæka hreinsunarvirkni EUEE, EUEA og EUBu jókst á skammtaháðan hátt (Mynd 2A, B), með askorbínsýru sem jákvæða stjórn. DPPH og ABTS róttæka hreinsunarvirkni við 50 ug/mL af ESB útdrættinum og hlutunum voru bæði hærri og sýndu svipaðar niðurstöður og jákvæða samanburðurinn, askorbínsýra. Til að mæla hamlandi áhrif melanogenesmiðaðra ensíma í ESB útdrættinum og hlutum, var gerð sveppa tyrosinasa hindrunarpróf (Mynd 2C) með L-DOPA sem hvarfefni við frumulausar aðstæður. Niðurstöðurnar sýndu að virkni tyrosinasa var hamlað af ESB útdrættinum og hlutunum á skammtaháðan hátt. Sérstaklega sýndi týrósínasahemjandi virkni 50 ug/mL af EUextract og hlutar svipaðar niðurstöður og arbútín,

Þess vegna eru týrósínasahemjandi áhrif EU tengd oxun L-DOPA í DOPA kínón í sortumyndun Á heildina litið höfðu ESB hlutar meiri andoxunar- og týrósínasahamlandi áhrif en útdrátturinn. Að auki fóru ESB-hlutarnir, sérstaklega EUBu, að sýna svipuð áhrif og jákvæði samanburðarhópurinn við 25 ug/ml skammt.

Mynd 2. Andoxunarvirkni og sveppir tyrosinasa hindrunarvirkni ESB. Róttæk hreinsunarvirkni DPPH (A) og ABTS (B) úr ESB útdrætti og brotum. Askorbínsýra (20 µg/ml) var notuð sem jákvæð viðmiðun. Týrósínasa hamlandi áhrif með því að nota L-DOPA úr ESB útdrætti og hlutum (C). Arbútín (10 mM) var notað sem jákvæð viðmiðun. Öll línurit sýna hlutfallstölur stjórnunar og gögn eru gefin upp sem meðaltal ± SEM (n=3). Tölfræðileg marktekt var stillt á * p < 0.05, ** p < 0.01 og *** p < 0.001 í samanburði við askorbínsýru eða arbútín hópinn.

3.3. Áhrif ESB á lífvænleika B16-F10 frumna

Til að meta frumueiturhrif EU voru B16-F10 sortuæxlisfrumur meðhöndlaðir með ýmsum styrkjum (12,5, 25, 50 og 100 ug/mL) af ESB útdrætti og hlutum í 24 klst. og lífvænleiki frumna var greind með MTT próf. Niðurstöðurnar eru sýndar sem hundraðshluti lífvænleika frumna miðað við samanburðarhópinn. ESB útdrátturinn og hlutarnir voru ekki frumudrepandi á prófuðu styrkleikabilinu 12,5 50 ug/mL til B16-F10 frumur. Hins vegar var frumueiturhrif staðfest í B16-F10 frumum við styrk upp á 100 ug/mL af ESB hlutunum (EUEA og EUBu) (mynd 3). Þess vegna voru síðari tilraunir gerðar með styrkjum upp á 12,5, 25 og 50 ug/mL af ESB útdrætti og hlutum.

3.4. Áhrif ESB á myndun melaníns

Til að ákvarða mótefnavaldandi áhrif ESB voru hamlandi áhrif ESB útdráttar og hluta á myndun melaníns skoðuð í B16-F10 frumum. B16-F10 frumurnar voru meðhöndlaðar með ESB útdrættinum og hlutum við 12,5, 25 og 50 µg/ml eða með arbútíni við 10 mM í 1 klst. og síðan örvað með -MSH (100 mM) í 72 klst. . Melaníninnihaldið jókst um 305,44 prósent þegar það var örvað með -MSH samanborið við samanburðinn (Mynd 4A). Hins vegar höfðu EU-meðhöndluðu hóparnir í styrkleikanum 50 µg/ml marktækt lækkað melanínmagn samanborið við hópinn sem var aðeins örvaður með -MSH, og niðurstöðurnar voru svipaðar og í samanburðarhópnum. Að auki, samanborið við arbútín-jákvæða samanburðinn, sýndu ESB-hlutarnir í styrknum 50 µg/mL minni melanínframleiðslu. Í samræmi við þessar niðurstöður, eftir því sem styrkur ESB útdráttar og -brota jókst, jókst hömlun á melanínmyndun í B16-F10 frumum (Mynd 4B).

Sérstaklega var hömlun á melanínmyndun í ESB hlutunum við styrk 50 µg/ml marktækt hærri en arbútíns. Þess vegna höfðu ESB brotin marktæk skammtaháð hamlandi áhrif á myndun melaníns í B16-F10 sortuæxlisfrumum.

3.5. Áhrif ESB á myndun melaníns og frumu-týrósínasavirkni

Við staðfestum áhrif ESB útdráttar og hluta á innanfrumu týrósínasavirkni sem tekur þátt í kerfi sortumyndunar í B16-F10 sortuæxlafrumum. Allir hópar, nema viðmiðunarhópurinn, voru örvaðir með a-MSH (100 nM) í 48 klst. og síðan meðhöndlaðir með ýmsum styrkjum af ESB útdrætti og hlutum (12,5, 25 og 50 ug/ml) eða arbútíni ( 10 mM) í 24 klst. Fyrir vikið hindraði ESB útdráttur og hlutar marktækt MSH-framkallaða týrósínasavirkni í B16-F10 frumum á skammtaháðan hátt (Mynd 4C). Innanfrumuvirkni tyrosínasa jókst um 251,00 prósent þegar hún var örvuð með a-MSH samanborið við viðmiðunarhópinn. Samt sem áður dró verulega úr virkni týrósínasa hjá hópunum sem fengu meðferð í ESB í styrkleikanum 50 ug/mL samanborið við a-MSHonly örvaða hópinn.

Þannig var týrósínasavirkni hamlað á skammtaháðan hátt með ESB meðferð í B16-F10 frumum, og áhrifin voru sérstaklega mikil þegar þau voru óvirk. styrkur 50 ug/ml. Hömlun á tyrosinasavirkni af hálfu EUEE í styrk 50 ug/ml var minni en arbútíns (85,13 prósent), en hömlun á tyrosinasavirkni ESB hluta (EUEA og EUBu) var meiri en arbútíns (121,99 og 128,11 prósent) , í sömu röð). Í samræmi við þessar niðurstöður, eftir því sem styrkur ESB útdráttar og hluta jókst, jókst hömlunarhraði týrósínasavirkni innanfrumu í B16-F10 frumum (Mynd 4D).

Mynd 4. Melanín myndun og frumu tyrosinasa starfsemi ESB. Melaníninnihald ESB útdráttar og hluta í B16-F10 sortuæxlisfrumum (A). Hindrunarhraði melanínmyndunar ESB útdráttar og hluta í B16-F10 sortuæxlisfrumum (B). Innanfrumu týrósínasavirkni ESB útdráttar og hluta í B16-F10 sortuæxlisfrumum (C). Hömlun á innanfrumu tyrosinasavirkni ESB útdráttar og hluta í B16-F10 sortuæxlisfrumum (D). Niðurstöður (A, C) eru settar fram sem prósentur miðað við -MSH hópinn. Niðurstöður (B, D) eru settar fram sem prósentur miðað við samanburðarhópinn. Gögnin eru gefin upp sem meðaltal ± SEM (n=3). Tölfræðileg marktekt var stillt á *** p < 0,001 í samanburði við -MSH-örvaða B16-F10 frumur, og # p < 0,05, ## p < 0,01 og ### p < 0,001 samanborið við arbutin hópnum.

3.6. Áhrif ESB á melanogenesis-tengda CREB og ERK prótein tjáningu

Melanogenese verndar húð manna fyrir ýmsum utanaðkomandi áreiti og ýmsir aðgerðir taka þátt í þessu ferli. -MSH, hormón sem tekur þátt í fyrsta stigi sortufrumna, örvar sortufrumur til að fosfóra CREB og ERK, sem örvar myndun niðurmerkispróteina sem tengjast sortufrumum [18]. Í þessari rannsókn könnuðum við sortumyndunarstýrða próteinin, þar á meðal CREB og ERK, til að ákvarða sortumyndunarhamlandi kerfi EU á -MSH-framkallaðri melanínmyndun í B16-F10 sortuæxlisfrumum. Fyrir vikið staðfestum við að CREB og ERK fosfórun jókst marktækt þegar B16-F10 frumur voru örvaðar með -MSH. Hins vegar, þegar frumur voru meðhöndlaðar með ESB útdrætti og hlutum, var -MSH-framkallað fosfórýlering bælt á skammtaháðan hátt. Sérstaklega má sjá að ESB útdrátturinn og brot með 50 µg/mL styrk eru áhrifaríkust meðal mismunandi meðferðarstyrkja (Mynd 5A–D).

3.7. Áhrif ESB á melanogenesis-tengda MITF, TRP-1, TRP-2 og týrósínasa prótein tjáningu

Til að kanna hvort ESB útdrátturinn og -brotin hafi áhrif á tjáningu sortumyndunartengdra próteina af völdum -MSH, var Western blotting framkvæmd til að meta tjáningu MITF, TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa próteina. Magn allra próteina sem tengjast sortumyndun jókst marktækt með -MSH örvun, en ESB útdráttur og hlutar bæla í raun tjáningu MITF, TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa próteina í -MSH örvuðum B16-F10 frumur (mynd 6). Í samræmi við fyrri niðurstöður, sérstaklega með flestum ESB útdrætti og hlutum við 50 µg/mL, var tjáning þessara próteina hindraðari en sá sem fannst eftir meðferð með jákvæðri samanburðararbútíni. Að auki olli meðferðin með ESB-hlutum meiri áhrifum við sama styrk samanborið við ESB-útdráttinn.

Mynd 6. Hamlandi áhrif ESB á tjáningu MITF, TRP-1, TRP-2 og týrósínasa próteina sem tengist sortumyndun. Fulltrúi vestrænnar blettabandsmyndar af MITF, TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa af EUEE (A), EUEA (B) og EUBu (C). Með því að nota GelQuantNET forritið er hlutfallslegur styrkleiki vestræna blettabandsins sýndur sem eftirfarandi súlurit; MITF/ -aktín, TRP-1/ -aktín, TRP-2/ -aktín og týrósínasi/ -aktín. -aktín var notað sem innra eftirlit með Western blotting. Gögnin eru gefin upp sem meðaltal ± SEM (n=3). Tölfræðileg marktækni var stillt á * p < 0.05, **p < 0.01 og *** p < 0.001 miðað við -MSH-örvaða B{ {22}}F10 frumur.

4. Umræður

Sortufrumur eru staðsettar í grunnlagi húðarinnar og hversu mikið melanín nýmyndun er í sortufrumum ræður lit á húð manna [19]. Melanín er húðlitarefni sem verndar húðina með því að draga úr magni ROS sem myndast af skaðlegum útfjólubláum geislum. Þegar húðin verður fyrir útfjólubláum geislum virkjast a-MSH, sem örvar sortufrumur, og sortufrumur framleiða melanín (20). Hins vegar getur of mikil framleiðsla melaníns valdið litarefnum á húðinni, sem veldur fagurfræðilegum vandamálum.

Binding a-MSH við sortufrumuviðtaka sortufrumusértæka melanocortin-1 viðtaka (MC1R) virkjar merkjaprótein adenýlat sýklasa og eykur innanfrumuþéttni cAMP 121]. Þegar magn cAMP í sortufrumum eykst, virkjast CREB og ERK boðleiðir sem stuðla að framleiðslu próteina sem taka þátt í sortumyndun. 18,22]. Þessi virkjaða CREB og ERK merkjaleið stjórnar tjáningu MITF og stuðlar síðan að tjáningu TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa (23MITF er umritunarþáttur fyrir týrósínasastjórnun og gegnir aðalhlutverki við að stjórna nýmyndun melaníns, þar með talið að stjórna útbreiðslu, aðgreiningu og lifun sortufrumna (24). Þetta prótein stjórnar ekki aðeins sortumyndun með því að stjórna undirpróteinum. þar á meðal TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa, en tekur einnig þátt í að stjórna framvindu frumuhrings (25]. Samanlagt virkjar a-MSH-MC1R binding af völdum ytri örvunar, svo sem útfjólubláa geislun, aðallega CREB og ERK boðleiðir í sortufrumum og eykur þar með tjáningu MITF, TRP. -1, TRP-2 og tyrosinasa prótein til að örva framleiðslu á melaníni. Þess vegna getur hömlun á þessu ferli leitt til hömlunar á melanínmyndun í sortufrumum.

Sem stendur eru hin ýmsu húðhvítunarefni, þar á meðal hýdrókínón og hýdrókortisón í notkun, aðallega skaðleg efni og langtímanotkun getur valdið aukaverkunum, þar með talið ertingu í húð og kláða [1,26-28]. Þess vegna er nauðsynlegt að einbeita sér að þróun öruggra og áhrifaríkra náttúrulegra húðhvítandi efna með lágmarks aukaverkunum eins og ESB [29].

Í þessari rannsókn könnuðum við hvernig ESB-brot hindra myndun melaníns og draga úr framleiðslu melaníns, sem leiðir til húðhvítandi áhrifa í B16-F10 sortuæxlisfrumum.

Þar sem oxunarálag af völdum útfjólubláa geislunar veldur útfellingu melanín litarefna, eru róttæka hreinsunarvirkni og hömlun á ROS virkni áhrifarík til að bæla sortumyndun og náttúrulegar vörur með slíka andoxunarvirkni geta haft framúrskarandi hvítandi áhrif [30,31]. Þess vegna könnuðum við fyrst andoxunarvirkni ESB útdráttar og hluta í B16/F10 sortuæxlisfrumum með því að nota DPPH og ABTS próf, sem eru algengar og einfaldar aðferðir til að greina andoxunarvirkni plantna in vitro. DPPH er stöðugt sindurefna og er notað til að greina virkni vatnsfælna efnasambanda sem hreinsar róteindir með því að nota afoxunarefni, svo sem askorbínsýru og tókóferól. ABTS prófið getur mælt róttæka hreinsunarvirkni fyrir vatnsfælin og vatnssækin efnasambönd, keðjubrotandi andoxunarefni og vetnisgjafa andoxunarefni [24]. Við staðfestum mikla DPPH og ABTS róttæka hreinsunarvirkni ESB útdrátta og brota. Sérstaklega voru áhrifin sterkust við styrkinn 50 µg/ml og ESB-hlutarnir höfðu betri andoxunarvirkni samanborið við útdráttinn.

Týrósínasi er stórt ensím sem tekur þátt í sortumyndun og mörg húðhvítandi efni eru fyrst og fremst týrósínasahemlar. Þess vegna skoðuðum við áhrif ESB brota á virkni tyrosinasa, sem stuðlar að sortumyndun. Við staðfestum hamlandi áhrif L-DOPA á frumu tyrosinasa virkni til að ákvarða hvort ESB útdráttur og hlutar hamli beint tyrosinasa virkni. Fyrir vikið urðu fyrir aukningu á týrósínasahamlandi áhrifum í ESB útdrættinum og hlutunum á skammtaháðan hátt. Að auki, í samræmi við ofangreindar niðurstöður, var EU áhrifaríkast í styrkleikanum 50 µg/mL og ESB-brotin höfðu meiri áhrif en útdrátturinn. Einkum hafði styrkur EUBu (50 µg/ml) meiri áhrif en arbútín, jákvæð viðmiðun.

Næst könnuðum við húðhvítandi áhrif ESB útdráttar og hluta á sortumyndun í -MSH-völdum B16-F10 sortuæxlisfrumum. Við notuðum fyrst MTT prófið til að ákvarða styrkleikasvið þar sem ESB útdrátturinn og brotin voru ekki frumudrepandi fyrir B16-F10 frumur. Niðurstöður okkar staðfestu að engin frumueiturhrif voru á styrkleikabilinu 12,5 til 50 µg/ml.

Eftir að hafa örvað B16-F10 frumur með -MSH til að framkalla melanínmyndun, komu fram húðhvítandi áhrif ESB útdráttar og hluta á melaníninnihald og virkni tyrosinasa innan frumunnar. Mynstur ESB útdráttar og hluta á melaníninnihaldi og innanfrumu tyrosinasavirkni sýndu svipaðar niðurstöður. Meðferð með öllum ESB útdrættum og hlutum sýndi að melaníninnihald og innanfrumu týrósínasavirkni voru skammtaháð bæld. Sérstaklega, við styrk upp á 50 µg/mL af ESB hlutum, sást meira en 50 prósent tap á melaníninnihaldi og innanfrumu týrósínasavirkni samanborið við -MSH-örvaða hópinn (Mynd 4A, C).

CREB og ERK boðleiðir eru helstu boðleiðir sem eru virkjaðar með örvun -MSH í sortumyndun. Þess vegna gegna CREB og ERK, sem taka þátt í ýmsum aðferðum, lykilhlutverki í myndun melaníns. Örvun -MSH í B16-F10 sortuæxlisfrumum jók tjáningu MITF og sortumyndunartengda tyrosinasa genfjölskyldu (TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa) með virkjun CREB og ERK. Í þessari rannsókn leggjum við fram vísbendingar um að ESB útdráttur og -hlutir hamli nýmyndun melaníns sem og viðkomandi uppstreymisboðaleiðir, CREB og ERK.

Þegar magn TRP-1 og TRP-2 var aukið með uppstýrðri tjáningu MITF, var tjáning tyrosinasa ýtt undir og sortumyndunartengd ensím framleiddu melanín [18,32]. Tjáning sortumyndunarmiðlaðra próteina sást með því að nota Western blotting til að ákvarða and-melanogenic áhrif ESB útdráttar og hluta í B16-F10 sortuæxlafrumum. Niðurstöður okkar staðfestu að tjáning MITF, TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa próteina jókst marktækt í hópnum sem örvaði -MSH.

Hins vegar, meðhöndlun með ESB útdrætti og brotum minnkaði tjáningu þessara sortumyndunartengdu próteina á skammtaháðan hátt. Sérstaklega sást marktæk minnkun á tjáningu við styrk upp á 50 µg/mL af ESB brotum. Niðurstöður okkar sýna að 50 µg/mL af ESB hlutum hamlaði tjáningu MITF, mikilvægs umritunarþáttar, hamlaði marktækt tjáningu týrósínasa og hindraði þar með melanínframleiðslu.

Á grundvelli þessara niðurstaðna komumst við að því að 50 µg/mL af ESB hlutum hamlaði framleiðslu á -MSH-örvuðum melanínframleiðslu í B16-F10 sortuæxlisfrumum með því að minnka boðefni sem tengjast sortumyndun á grundvelli framúrskarandi andoxunaráhrifa. Þess vegna benda niðurstöður okkar til þess að ESB-hlutinn gæti verið hugsanlegur kandídat fyrir hvítunarmeðferð sem stjórnar sortumyndun á áhrifaríkan hátt.5. Ályktanir

Í þessari rannsókn metum við andoxunar- og sortueyðandi áhrif á -MSH-framkallaða sortumyndun í B16-F10 sortuæxlisfrumum til að staðfesta virkni ESB-hluta sem húðhvítandi efni. Að lokum komumst við að því að ESB hlutar hafa sterk andoxunaráhrif og hamla prótein sem tengjast sortumyndun, eins og TRP-1, TRP-2 og tyrosinasa, með því að stjórna MITF og eru því dýrmætir náttúrulegir hemlar sortumyndunar.

Sérstaklega þurfti styrk (50 µg/mL) af ESB útdrætti og hlutum til að hindra myndun melaníns í -MSH-örvuðum B16F10 frumum. Að auki staðfestum við að ESB hlutar hafa betri andoxunar- og hamlandi áhrif á melanínframleiðslu. Þar af leiðandi gæti ESB verið gagnlegt fyrir náttúruleg lækningaefni til að meðhöndla húðsjúkdóma og sem húðhvítandi efni í snyrtivöruiðnaðinum.

Framlög höfunda:

Hugtakavæðing, J.-HL, og D.-KK; Gagnavörslu, BL; Formleg greining, J.-HL; Fjáröflun, Y.-ML; Rannsókn, J.-HL, og Y.-DJ; Aðferðafræði, BL, H.-WS og B.-JS; Verkefnastjórnun, Y.-ML, og D.-KK; Hugbúnaður, D.-KK; Umsjón, Y.-ML, og D.-KK; Visualization, J.-HL; Ritun—frumuppkast, J.-HL; Ritun—rýni og klipping, J.-HL og Y.-DJ Allir höfundar hafa lesið og samþykkt útgefna útgáfu handritsins.

Fjármögnun:

Þessar rannsóknir voru studdar af viðskipta-, iðnaðar- og orkumálaráðuneytinu (MOTIE), Kóreustofnun fyrir tækniframfarir (KIAT) í gegnum hvatningaráætlunina fyrir atvinnugreinar efnahagssamvinnusvæðisins (P0004749).

Hagsmunaárekstrar:

Höfundar lýsa því yfir að þeir hafi engra hagsmunatengsla.

Dæmi um framboð:

Sýni af efnasamböndunum eru ekki fáanleg hjá höfundum.

Skammstafanir

-MSH -melanocyte-örvandi hormón

CREB cAMP svar frumefni bindandi prótein

DOPA 3,4-díhýdroxýfenýlalanín

ESB Elaeagnus umbellata

EUEE EU 70 prósent etanól þykkni

EUEA ESB etýlasetathluti

EUBu EU bútanólhluti

MC1R sortufrumusértækur melanocortin-1 viðtaki

MITF Microphthalmia-tengdur umritunarþáttur

ROS Hvarfgjarnar súrefnistegundir

TRP Tyrosinasa tengt prótein

Heimildir

1. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Yfirlit yfir húðhvítunarefni með innsýn í ólöglegan snyrtivörumarkað í Evrópu. J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2016, 30, 943–950. [CrossRef] [PubMed]

2. Costin, GE; Heyrn, VJ Húðlitarefni manna: Sortfrumur móta húðlit til að bregðast við streitu. Faseb J. 2007, 21, 976–994. [Krossvísun]

3. Lin, YS; Wu, WC; Lin, SY; Hou, WC Glýsínhýdroxamat hamlar virkni týrósínasa og melaníninnihaldi með því að minnka cAMP/PKA boðleiðir. Amínósýrur 2015, 47, 617-625. [Krossvísun]

4. Fernandez-Garcia, E. Húðvörn gegn UV-ljósi með andoxunarefnum í mataræði. Matur. Virka. 2014, 5, 1994–2003. [Krossvísun]

5. Kowalska, J.; Banach, K.; Rok, J.; Beberok, A.; Rzepka, Z.; Wrze´sniok, D. Sameinda- og lífefnafræðilegur grundvöllur flúorókínólóna af völdum ljóseiturhrifa — Rannsóknin á andoxunarkerfi í sortufrumum manna sem verða fyrir UV-A geislun. Alþj. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9714. [CrossRef] [PubMed]

6. MatÉs, JM; Pérez-Gómez, C.; Castro, IND Andoxunarensím og sjúkdómar í mönnum. Clin. Biochem. 1999, 32, 595–603. [Krossvísun]

7. Bickers, DR; Athar, M. Oxunarálag í meingerð húðsjúkdóma. J. Rannsókn. Dermatol. 2006, 126, 2565–2575. [Krossvísun]

8. Kim, YJ; Uyama, H. Tyrosinasa hemlar frá náttúrulegum og tilbúnum uppruna: Uppbygging, hömlunarkerfi og sjónarhorn til framtíðar. Cell. Mol. Lífvísindi. 2005, 62, 1707–1723. [Krossvísun]

9. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Húðhvítunarefni: Lyfjaefnafræðileg sjónarmið týrósínasahemla. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [Krossvísun]

10. Smit, N.; Vilanova, J.; Pavel, S. Leitin að náttúrulegum húðhvítunarefnum. Alþj. J. Mol. Sci. 2009, 10, 5326–5349. [Krossvísun]

11. Draelos, ZD Húðléttingarblöndur og hýdrókínóndeilan. Dermatol. Þr. 2007, 20, 308–313. [Krossvísun]

12. Anna, MI; Chiara, G.; Marinella, DL; Deborah, P.; Fabiano, C.; Nunziatina, DT; Claudia, M.; Maria, LT; Alessandra, B. Andoxunarvirkni efnasambanda sem eru einangruð úr Elaeagnus umbellata stuðlar að vellíðan í tannholdsvefjafrumum manna. J. Nat. Framl. 2020, 83, 626–637.

13. Sabir, SM; Dilnawaz, S.; Imtiaz, A.; Hussain, M.; Kaleem, MT Sýklalyfjavirkni Elaeagnus umbellata (Thunb.) lækningajurt frá Pakistan. Sádi. Med. J. 2007, 28, 259–263.

14. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Khan, I.; Karim, N.; Abdel-Halim, H.; Ali, A. Plantefnafræðileg greining og sykursýkislyfjamöguleiki Elaeagnus umbellata (Thunb.) í streptozotocin-völdum sykursýkisrottum: Lyfjafræðileg og reiknifræðileg nálgun. BMC viðbót. Varamaður. Med. 2018, 18, 332. [Krossvísun]

15. Wang, SY; Bowman, L.; Ding, M. Variations in Free Radical Scavenging Capacity and Anti-proliferative Activity Meðal mismunandi arfgerða af Autumn Olive (Elaeagnus umbellate). Planta. Med. 2007, 73, 468–477. [CrossRef] [PubMed]

16. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Karim, N.; Latif, A.; Ahmad, S.; Uddin, Z. Mat á taugaverndandi og anamnesískum áhrifum Elaeagnus umbellate Thunb. Um minnisskerðingu af völdum skopólamíns í músum. BMC viðbót. Varamaður. Med. 2020, 20, 143.

17. Park, SH; Jhee, KH; Yang, SA Verndaráhrif etanólútdráttar úr laufum Elaeagnus umbellata á -MSH-framkallaða melanínframleiðslu í B16-F0 frumum og UVB-framkallaða skemmdir í CCD-986sk frumum. J. Life Sci. 2019, 29, 555–563.

18. Qian, W.; Liu, W.; Zhu, D.; Cao, Y.; Tang, A.; Gong, G.; Su, H. Náttúruleg húðhvítandi efnasambönd til að meðhöndla sortumyndun (Review). Exp. Þr. Med. 2020, 20, 173–185. [Krossvísun]

19. Gillbro, JM; Olsson, MJ Sortumyndun og aðferðir húðlýsandi efna – núverandi og nýjar aðferðir. Alþj. J. Snyrtivörur. Sci. 2011, 33, 210–221. [Krossvísun]

20. Saba, E.; Kim, SH; Lee, YY; Park, CK; Ó, JW; Kim, TH; Kim, HK; Roh, SS; Rhee, MH Kóreskt rautt ginseng þykkni bætir sortumyndun hjá mönnum og framkallar andljósmyndandi áhrif í útfjólubláum, beirgeislaðum hárlausum músum. J. Ginseng. Res. 2020, 44, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

21. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmia genaafurð sem merkjabreytir í cAMP-völdum aðgreiningu sortufrumna. J. Cell. Biol. 1998, 142, 827–835. [Krossvísun]

22. Lee, HJ; Lee, WJ; Chang, SE; Lee, GY Hesperidin, vinsælt andoxunarefni hamlar sortumyndun með erk1/2 miðluðu MITF niðurbroti. Alþj. J. Mol. Sci. 2015, 16, 18384–18395. [Krossvísun]

23. Verð, ER; Horstmann, MA; Wells, AG; Weilbaecher, KN; Takemoto, CM; Landis, MW; Fisher, DE, alfa-melanocyte-stimulating hormónasending stjórnar tjáningu á microphthalmia, gen sem skortir á Waardenburg heilkenni. J. Biol. Chem. 1998, 273, 33042–33047. [Krossvísun]

24. Vance, KW; Goding, CR Umritunarnetið sem stjórnar þróun sortufrumna og sortuæxlum. Litarefni. Cell. Res. 2004, 17, 318–325. [Krossvísun]

25. Bondurand, N.; Pingault, V.; Goerich, DE; Lemort, N.; Sokkur, E.; Le Caignec, C.; Wegner, M.; Goossens, M. Samspil SOX10, PAX3 og MITF, þrjú gena breytt í Waardenburg heilkenni. Humm. Mol. Genet. 2000, 9, 1907–1917. [Krossvísun]

26. McGregor, D. Hydroquinone: Mat á áhættu manna vegna krabbameinsvaldandi og stökkbreytandi eiginleika þess. Crit. Séra Toxicol. 2007, 37, 887–914. [Krossvísun]

27. Kolbe, L.; Kligman, AM; Schreiner, V.; Stoudemayer, T. Rýrnun af völdum barkstera og skerðing á hindrunum mæld með ekki ífarandi aðferðum í húð manna. Húð. Res. Tækni. 2001, 7, 73–77. [CrossRef] [PubMed]

28. Huang, HC; Chang, SJ; Wu, CY; Ke, HJ; Chang, TM [6]-Shogaol hindrar -MSH-framkallaða sortumyndun með hröðun ERK og PI3K/Akt miðlaðrar MITF niðurbrots. Biomed. Res. Alþj. 2014, 2014, 842569. [Krossvísun]

29. Ozen, T.; Yenigun, S.; Altun, M.; Demirtas, I. Phytochemical Constituents, ChEs and Urease inhibitions, Anti-fjölgunar- og andoxunareiginleikar Elaeagnus umbellata Thunb. Greiði. Chem. Hár. Afköst. Skjár. 2017, 20, 559–578. [Krossvísun]

30. Floegel, A.; Kim, DO; Chung, SJ; Koo, SI; Chun, OK Samanburður á ABTS/DPPH prófum til að mæla andoxunargetu í vinsælum andoxunarríkum bandarískum matvælum. J. Food Compos. endaþarm. 2011, 24, 1043–1048. [Krossvísun]

31. Hseu, YC; Chen, XZ; Gowrisankar, YV; Yen, HR; Chuang, JY; Yang, HL Húðhvítandi áhrif ektóíns með bælingu á -MSH-örvuðum sortumyndun og virkjun andoxunarefna Nrf2 ferla í UVA-geisluðum keratínfrumum. Andoxunarefni 2020, 9, 63. [CrossRef] [PubMed]

32. Jang, EJ; Shin, Y.; Park, HJ; Kim, D.; Jung, C.; Hong, JY; Kim, S.; Lee, SK Andstæðingur-melanogenic virkni phytosphingosine með mótun á microphthalmia-tengda umritunarþátta merkjaleiðinni. J. Dermatol. Sci. 2017, 87, 19–28. [CrossRef] [PubMed]

Ji-Hyun Lee 1,†, Bori Lee 2,†, Yong-Deok Jeon 3, Hyun-Woo Song 2, Young-Mi Lee 2, Bong-Joon Song 4 og Dae-Ki Kim 1,*

1 Department of Immunology and Institute of Medical Science, Jeonbuk National University Medical School, 20, Geonji-ro, Deokjin-gu, Jeonju-si 54907, Jeollabuk-do, Korea; jihyunsh1211@naver.com

2 Department of Oriental Pharmacy, College of Pharmacy og Wonkwang-Oriental Medicines Research Institute, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Kóreu; leebori1004@naver.com (BL); cristblack@naver.com (H.-WS); ymlee@wku.ac.kr (Y.-ML)

3 Department of Korean Pharmacy, Woosuk University, 443 Samnye-ro, Samnye-up, Wanju-Gun 55338, Jeollabuk-do, Kóreu; ydjeon1211jh@woosuk.ac.kr

4 Department of Food Science and Biotechnology, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; twinf1@hanmail.net

Bréfaskipti: daekim@jbnu.ac.kr; Sími: plús 82-63-2703080

Þessir höfundar lögðu jafnt sitt af mörkum til þessa verks.

For more information:1950477648nn@gmail.com