Í kísil-undirstaða skjár samverkandi lyfjasamsetningar úr jurtalyfjum: tilfelli með Cistanche Tubulosa

Vinsamlegast sendu tölvupósttina.xiang@wecistanche.comeða hafðu samband við WhatsApp: plús 8618283608063 fyrir frekari upplýsingar

Taugabólgaeinkennist af vandaðri bólgusvörunarskrá miðtaugakerfisvefs. Takmarkanir núverandi meðferða við taugabólgu eru vel þekktar aukaverkanir í klínískum rannsóknum á einlyfjameðferð. Samsettar lyfjameðferðir eru efnilegar aðferðir til að vinna bug á jöfnunaraðferðum og áhrifum markmiðsins. Hins vegar er sjaldgæft að uppgötva samverkandi lyfjasamsetningar úr jurtalyfjum. Hvatt af þeim tilfellum sem hafa verið beitt með góðum árangri höldum við áfram að rannsaka árangursríkar lyfjasamsetningar byggðar á kerfislyfjafræði meðal efnasambanda frá Cistanche tubulosa (SCHENK) R. WIGHT. Í fyrsta lagi eru 63 hugsanleg lífvirk efnasambönd, tengd 133 bein og óbein markmið skimuð út með lyfjalíkamati ásamt lyfjamiðunarferlinu. Í öðru lagi er Compound-Target netið byggt til að afla gagnasettsins til að spá fyrir um lyfjasamsetningar. Við listum upp 10 efstu lyfjasamsetningarnar sem eru notaðar af reikniritinu Probability Ensemble Approach (PEA), og Compound-Target-Pathway netið er síðan smíðað af 12 efnasamböndunum af samsetningum, markmiðum og leiðum til að grafa upp samsvarandi lyfjafræðilegar aðgerðir. Að lokum er þróuð samþættingaraðferð til að skýra meðferðaráhrif jurtarinnar í mismunandi líffræðilegum ferlum sem skipta máli fyrir meinafræðilega eiginleika. Á heildina litið getur aðferðin veitt afkastamikil leið til að þróa lyfjasamsett lyf.

Neurogenictaugabólguer skilgreint sem skipulagðar aðgerðir meðfæddra og aðlagandi ónæmisfrumna, æðafrumna og taugafrumna sem koma af stað með meinafræðilegu ástandi og aukinni taugavirkni í miðtaugakerfinu (CNS). Það er líklegt til að gegna hlutverki í frumun miðtaugakerfisinsbólgueyðandiviðbrögð vegna sjúkdóma eins og sársauka, sálræns streitu og flogaveiki eða verða sjúkdómsvaldandi þáttur í taugahrörnunarsjúkdómum. Núverandi lyf til að meðhöndla taugabólgu tilheyrir að mestu einlyfjameðferð, þar á meðal dópamín, sómatóstatín, taugapeptíð, adenósín og svo framvegis. Hins vegar, til dæmis, langtímanotkun á algengu en gömlu lyfjunum COX hemlum, bólgueyðandi gigtarlyfjum (NSAID), gæti valdið aukaverkunum, skemmdum í meltingarvegi eða hjarta- og æðasjúkdómum1,2 og niðurstöður klínískra rannsókna eru enn ófullnægjandi sérstaklega3, 4, þannig að það er ófullnægjandi þörf fyrir nýja meðferð við taugabólgu.

Hin nýja meðferð með samsettri lyfjameðferð getur verið vaxandi aðferð til að mæta þörfum þróunar nýju lyfjanna sem og yfirstíga hindranir í meðferð flókinna sjúkdóma. Sambland af fjölþætta meðferð gæti uppfyllt ofangreindar kröfur, þar sem tvö eða fleiri lyf eru notuð saman5, með tilgreindum kostum: meiri verkun, lágmarks krossónæmi, lágum skömmtum en færri aukaverkanir og minni eituráhrifum samanborið við eitt lyf. umboðsmaður 6. Það hefur verið notað til að meðhöndla flókna sjúkdóma7,8 í næstum 30 ár. Forvitnileg, samsett lyfjameðferð er einnig notuð í rannsóknum á taugasjúkdómum, til dæmis gæti samsetning glímepíríðs og íbúprófens í raun dregið úr bólgu í Alzheimerssjúkdómi (AD)9 eða ketamín/atrópín gæti dregið úr tjáningu bólgueyðandi próteina í flogaveikismúsum10. Samvirkar lyfjasamsetningar geta því fært nýjan innblástur til að rekja árangursríkar meðferðir fyrirtaugabólgu. Þess vegna, hvernig getum við sprungið hörðu hnetuna til að ná fram bestu samsettu lyfjunum?

1Key rannsóknarstofa í auðlindalíffræði og líftækni í Vestur-Kína, Menntamálaráðuneytið, Lífvísindadeild, Northwest University, Xi'an, Kína. 2Lab of Systems Pharmacology, Center of Bioinformatics, College of Life Science, Northwest A&F University, Yangling, Kína. 3State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Jiangsu Kanion Parmaceutical Co. Ltd, Lianyungang, Kína. Jianling Liu og Jinglin Zhu lögðu jafnt sitt af mörkum til þessa verks. Senda skal bréfaskriftum og beiðnum um efni til CZ

Jianling Liu1, Jinglin Zhu1, Jun Xue1, Zonghui Qin1, Fengxia Shen1, Jingjing Liu1, Xuetong Chen2, Xiaogang Li1, Ziyin Wu2, Wei Xiao3, Chunli Zheng1 og Yonghua Wang1

Nú á dögum eru núverandi aðferðir til að skima út lyfjasamsetningar sem hér segir, kerfisbundnar kannanir á lyfjapörum in vitro, svo sem skimunaraðferð með mikilli afköstum11 og „Multiplex skimun eftir víxlverkandi efnasamböndum“ (MuSIC)12 eða mat á pörbundnum lyfjasamsetningum með stórum -kvarðatilraunir13,14. Engu að síður getur of mikil neysla á mannafla, náttúruauðlindum og tími erfiðra reynsluprófa verið óumflýjanlegt vandamál við mat á árangursríkum lyfjasamsetningum. Til að bregðast við því að sigrast á göllunum hafa einnig komið fram aðferðir sem byggjast á netgreiningu, sérstaklega erfðafræðilegum víxlverkunarnetum15, efnafræðilegum kerfislíffræðilegum gögnum16 og sameinda- og lyfjafræðilegum gögnum17 til samsettrar uppgötvunar lyfja. Ennfremur, aukinn hópur rannsakenda18,19 lagði til nýjar netaðferðir til að spá fyrir um bestu samsetningar og bauð upp á samsvarandi tilraunastaðfestingu á meðan, þannig að samþætting netspá og tilraunaprófun gæti verið ný stefna á sviði samsettrar spár.

Náttúrulyf fela í sér töluverðan fjölda formúla (Fang-Ji á mandarín) og efnafræðilegra innihaldsefna, sem myndar gagnagrunn fyrir náttúruvörur, þannig að það gæti veitt nýstárlegar vísbendingar, grundvallar líffræðileg gögn fyrir þróun lyfjasamsetninga, eins og prófessor Li20,21 og prófessor Liu22 kynnti heildrænar greiningaraðferðir byggðar á samþættri líffræði til að ráða saman sameindakerfi náttúrulyfja: Liu-Wei-Di-Huang pilla eða Reducing Injection. Í fyrri vinnu okkar fundum við ekki aðeins tvær dæmigerðar jurtir Lonicera japonica og Fructus Forsythia sýna samverkandi áhrif á inflúensu eða bólgu23 heldur einnig efnasambönd rútín og amentoflavon hafa samverkandi áhrif til að koma í veg fyrir þunglyndi24.

Í núverandi starfi okkar þróum við kerfislyfjafræðinálgun til að uppgötva samverkandi lyfjasamsetningar meðal efnasambanda úr jurtinniCistanche tubulosa(SCHENK) R. WIGHT, eftirfarandi skref eru lögð til: Í fyrsta lagi veljum við út lífvirk efnasambönd með forspá um lyfjalíkingu, sem eru notuð sem beita til að veiða tengd skotmörk. Og svo, innblásin af hugmyndafræði sem byggir á „netmarkmiðum“ til að forgangsraða samverkandi lyfjasamsetningum á hátt afköst25, öðlumst við árangursríkar lyfjasamsetningar meðal hugsanlegra efnasambanda sem byggjast á eigin reiknirit sem kallast Probability Ensemble Approach (PEA)26 með mikil þjálfunarskilvirkni, mikið notagildi og tvær megindlegar vísitölur til að lýsa eiginleikum lyfjasamsetningar. Að lokum notum við markmiðin sem fengust og efnasambönd umsækjendapöra til að byggja upp net/feril og útvegum síðan greiningu til að kóða kerfiCistanche tubulosaátaugabólguheildstætt. Sem dæmi er það í fyrsta skipti að skima út árangursríkar lyfjasamsetningar úr náttúrulegum vörum sem byggjast á lyfjafræði kerfisins með því að samþætta reikniaðferðir og tilraunaprófun til að samþykkja áreiðanleika spánnar. Við teljum að þetta gæti hjálpað til við að sérsníðataugabólgumeðferð, auka skilning okkar á árangursríkri taugavarnarþróun og mun aðstoða framtíðar forklínískar rannsóknir.

Niðurstöður

Markmið Cistanche tubulosa.

Til að fá markmiðin sem tengjasttaugabólguvið náum fyrst innihaldsefnum íCistanche tubulosa(SCHENK)R. WIGHT með því að leita í TCMSP gagnagrunninum (http://lsp.nwu.edu. cn/), sem leiðir til 103 efnasambanda (viðbótartöflu S1, sjá efni og aðferðir). Síðan greinum við lyfjalíki þeirra með því að beita DL-spálíkaninu sem var smíðað í fyrri verkum okkar (Sjá efni og aðferðir). Þannig náum við fram 63 mögulegum lífvirkum efnasamböndum (viðbótartafla S2) með DL-stuðul Stærri en eða jafn og 0,18. Í kjölfarið, með Sys DT og WES reikniritunum, auðkennum við 117 markmið þessara hugsanlegu lífvirku efnasambanda. Að lokum eru 43 möguleg markmið (viðbótartafla S3) nátengd taugabólgu náð eftir að hafa eytt hávaða og villum, með því að kortleggja 117 markmið efnasambandanna í CTD gagnagrunninn.

GOBP auðgunargreining fyrir skotmörk.

Til að athuga hvort próteinin sem hugsanleg lífvirk efnasambönd miða á séu náskyldtaugabólgu, við framkvæmum GOBP auðgunargreiningu með því að kortleggja markmið til DAVID. Mynd 1 sýnir GO tré sem sýnir niðurstöður marktækt auðgaðra GOBP hugtaka (P gildi minna en eða jafnt og 0.05), þar sem markmiðin eru flokkuð í 20 mismunandi hópa, svo sem jákvæða stjórnun á sléttum vöðvum í æðum frumufjölgun og jákvæð stjórnun á flutningi hvítkorna. Meðal þessara hópa, efnafræðileg taugamótasending,bólgueyðandisvörun, frumuboð og svo framvegis eru öll nátengdtaugabólgu. Til dæmis eru taugabólgubreytingar sem eiga sér stað við taugabólgusjúkdóma að mestu leyti miðlaðar afbólgueyðandicýtókín sem losna frá íferðar T-frumum og frá virkum örverum og eru að minnsta kosti að hluta ábyrg fyrir óafturkræfum dendritic meinafræði, (samanlagt benda þessar athuganir til þess að fyrirhuguð markmið geti líklega stuðlað að meðhöndlun átaugabólgu.

Comound-Target netbygging og greining.

Almennt séð eru framkvæmanlegar og árangursríkar samsettar meðferðir samsetningar lífvirkra efnasambanda með ákjósanlega lyfjahvarfaeiginleika, sem geta komið jafnvægi á sjúkdómsnetið með því að stjórna sérstökum markmiðum. Þess vegna smíðum við frekar kyrrstætt samsett-markmiðanet til að athuga staðfræðileg tengsl þeirra. Eins og sýnt er á mynd 2 sýnir tvíhliða efnasamband-markmið (CT) netið 482 víxlverkanir milli 63 efnasambanda og 43 miða á sjónrænan aðlaðandi hátt. Við greinum gráðu hnútanna í efnasambands-markmiða netinu sem leiðir til meðalgráðu á hvert efnasamband upp á 11.209 og 7.651 á hvert mark, í sömu röð. Við sjáum að meðal 63 efnasambandanna, stilla 38 þeirra meira en 7 markmið (stærri en meðalstig), sem sýnir hugsanleg samlegðaráhrif meðal þeirra.

Til dæmis, syringin (mol30) hefur samskipti við stærsta fjölda skotmarka, sem getur gegnt miðstöð hlutverki í netinu. Athyglisvert er að rannsókn sannar að fenólefnið syringin einangrað úr Euonymus alatus(Thunb.) Sieb. (Celastraceae) hefur taugabólgueyðandi áhrif með því að hindra NO framleiðslu2.2'-asetýlakteósíð (mól42) hefur stjórn á 10 mismunandi markmiðum (gráður=10). Meðal þessara marka, HSPB1 (einnig þekkt sem HSP27), eins og sem dæmi, er sameindaleiðtogi sem sýnir taugaverndandi eiginleika í mörgum sjúkdómum og meiðslum. Fyrir verbascoside (mól33) fela taugaverndareiginleikar þessa lífvirka efnasambands í sér mótun á umritunarþáttum og þar af leiðandi breyttri genatjáningu, sem leiðir til niðurstýringar á bólgu30. Rétt er að taka fram að þrátt fyrir að staðfræðieiginleiki netkerfisins snúi ekki að echinacoside (mól41, gráðu=7), þá er það hugsanlegt nýtt munnvirkt efnasamband til að stjórna taugabólgu og tengdum merkjum við Parkinsonsveiki og gæti gefið nýtt möguleika á klínískri meðferð. Samanlagt benda þessar niðurstöður til þess að skimuðu hugsanlegu virku efnasamböndin séu öll tengd taugabólgu og má líta á þær sem gagnasett til að spá fyrir um lyfjasamsetningar.

Samsett-Target-Pathway netbygging og greining.

Með því að nota PEA reikniritið fáum við 10 mismunandi lyfjasamsetningar (tafla 1.), sem fela í sér 12 efnasambönd. Þessar lyfjasamsetningar eru allar með miklar samvirknilíkur, sem táknar möguleikann á að framkalla samvirkni milli tveggja efnasambanda. Þess vegna, upp að vissu marki, eru þessi efnasambönd talin vera lyfjafræðileg grundvallarefni Cistanche tubulosa. Byggt á markupplýsingum þessara efnasambanda og ferlum sem fengnar eru frá DAVID, smíðum við efnasamband-markferil (CTP) netið til að lýsa fyrst á sameindakerfi þessara efnasambanda. Samsett-markmið-brautarnetið sem myndast samanstendur af 47 hnútum og 99 brúnum. Eins og sýnt er á mynd 3, geta þessi efnasambönd virkað á ekki aðeins prótein í andstreymis heldur einnig niðurstreymis brautanna sem tengjast taugabólgu, sérstaklega beinar vísbendingar um bólgumerki.

Sérstaklega miðar mikill meirihluti efnasambanda við andstreymis prótein eins og HSPB1, HTR2A, NTSRl, og fleiri, sem gefur til kynna að þessi efnasambönd séu regluleg til að meðhöndla taugabólgu. Til dæmis, efnasamband echinacoside(mól41) miðar á VEGF leið í gegnum prótein HSPB1 (viðbótarmynd 1). Sem betur fer sýna rannsóknir að HSPB1 hefur umtalsverða frumuverndandi eiginleika í nokkrum gerðum af taugasjúkdómum in vivo eða in vitro og það getur gegnt hlutverki í bólgueyðandi áhrifum með því að stjórna kjarnaþátt-KB(NF-KB) boðleiðinni435. rannsókn sýnir einnig fram á að R-Ras gæti stjórnað æðamyndunarvirkni æðaþelsfrumna að hluta með hömlun á p38 mítógenvirkjaðri próteinkínasa (p38 MAPK)-HSPB1 ás VEGF merkjaleiðarinnar*.

Við getum fengið að efnasamband tubuloside A (mol56) miðar á kalsíumboðaleiðina í gegnum prótein NTSRl í netinu. Það er allt vitað að kalsíumjónir (Ca² plús) eru alhliða annar boðberi í frumum ónæmiskerfisins. Minnkun á taugamótavirkni eða aukin utantaugamótandi N-metýl-D-asparssýru (NMDA) viðtakaboð getur leitt til kjarnakalsíumvandamála37,38, og þar með aukið tíðni taugahrörnunar og vitræna truflun. Ennfremur er markpróteinið NTSRl meðlimur í stóru yfirfjölskyldunni af G-prótein tengdum viðtökum og boð eru mynduð með því að binda G-prótein sem geta virkjað fosfatidýlínósítól-kalsíum annað boðberakerfi og niðurstreymis MAP kínasa9.

Annað dæmi er að efnasamband 2'-asetýlakteósíð(mól42) miðar á GnRH boðleiðina í gegnum prótein PRKCD. PRKCD, eitt af PKC ísóformunum, er helsti miðill virkjunar utanfrumu-stýrðra próteinkínasa1/2 MAPK(ERK1/2 MAPK),c-Jun N-enda próteinkínasa MAPK(JNK MAPK) og p38 MAPK með gónadótrópín- losunarhormón (GnRH)0. Og, þar sem lykilferlar í GnRH-örvuðu merkjanetinu, gætu MAPK fossarnir og arakídonsýru(AA) umbrotsefnin framleittbólgueyðandiprótein, COX-2. Hvað varðar kankanósíð O (mól18) og syringín (mól30), hafa þau bein samskipti við niðurstreymispróteinin PTGS2, NOS2 og önnurbólgueyðandivísbendingar, sem er leiðandi endurspeglun á virkni efnasambandanna. Rannsókn sýnir að syringin gæti bælt framleiðslu æxlisdrepsþáttar-c (TNF-c) í fitufjölsykrum (LPS)-örvuðum RAW264.7 frumum42. Og hinar rannsóknirnar sýna að svringin gæti einnig lækkað NO styrk og NOS virkni eða framleiðslu á prostaglandín E2. Ísóakteósíð (mól43)miðað MMP9, er mikilvægur leikmaður í miðtaugakerfinu og væri hugsanlegt miðlunarensím fyrir taugageðræna sjúkdóma eins og geðklofa og geðhvarfasjúkdóma5, niðurbrot NF-KB og fosfórun p38, ERK1/2, JNK MAPK eða Akt (prótein kínasa B) frá andstreymis boðleiðum gæti stýrt MMP9 genatjáningu og hömlun á MMP9 sem gæti dregið úr tjáningu á framkallanlegum nituroxíðsyntasa (iNOS) óvirkjuðum frumum46-48

Ferðagreining.

Innbyggð „taugabólguferill“ er smíðaður með því að samþætta lykilleiðirnar sem fengnar eru með greiningu á samsettum markferlum, þar á meðal Alzheimer sjúkdómsferlið, kalsíumboðaferil, GnRH merkjaferil, VEGF merkjaferil og serótónvirk taugamót. Af 43 skotmörkum er hægt að kortleggja 19 á „taugabólguferli“. Eins og sýnt er á mynd 4, táknar Cistanche tubulosa markmið virku efnasambandanna sem dreifast í "taugabólguferlinu. "Taugabólguferillinn" er flokkaður í 13 mismunandi meðferðareiningar, svo sem frumudauða, frumudauða, bólgu og taugavörn. Í þessari rannsókn tökum við frumudauða, bólgu og taugavarnareiningar sem dæmi til að skýra fyrirkomulag Cistanche tubulosa fyrir taugabólgu.

Frumudauðaeining. Markmið sem staðsett eru í Alzheimer-sjúkdómsferlinu taka aðallega þátt í frumudauðaferlinu, sem bendir til þess að frumudauði sé nátengdur taugabólgu. Rannsóknir sýna fram á að taugabólga sem miðlað er af microglia stuðlar að frumudauða í taugafrumum, sem er ekki bundinn við ákveðinn sjúkdóm heldur tengist ýmsum sjúkdómum eins og blóðþurrð4, Parkinsonsveiki og Alzheimerssjúkdómi5l. Eins og sýnt er á mynd 4,

miðunum APP, GRIN2B og MAPT er stjórnað af virku efnasamböndunum frá Cistanche tubulosa sem gefur til kynna að þau geti hamlað frumudauða og þar með boðið upp á meðferð við taugabólgu. Athyglisvert er að APP innanfrumu lén skerðir taugamyndun fullorðinna í erfðabreyttum músum með því að framkalla taugabólgu52. Vanhæfni MAPT stjórnar almennilega gangverki taugafrumna örpípla og miðlar þannig taugafrumudauða53. Allt þetta bendir til þess að Cistanche tubulosa geti meðhöndlað taugabólgu með því að hindra frumudauða.

Bólgueining.

Hugtakið taugabólga er bólguviðbrögð í miðtaugakerfi sem svar við taugavirkni1. Í þessari rannsókn greinum við GnRH boðleiðina og VEGF boðleiðina þátttöku í bólgueiningunni (mynd 4). Til dæmis tilheyrir MMP2 í GnRH merkjaleiðinni MMP fjölskyldunni, sem er tjáð í lífeðlisfræðilegum aðstæðum og meinafræðilegum aðstæðum sem fela í sér bólgu. Og MMPs stjórna nokkrum aðgerðum sem tengjast bólgu, þar með talið aðgengi og virkni bólgusýtókína og kemokína54. Að auki getur VEGF boðleiðin leitt til myndunar NOS2, þar að auki tekur hún þátt í bráðri bólgusvörun við LPS með margvíslegum aðferðum: þátttöku í bólgueyðandi cýtókínboðum og breytingu á tjáningu ýmissa gena sem hafa áhrif á bólgu-ónæmissvörun við LPS55. Samanlagt benda allt þetta til þess að Cistanche tubulosa geti læknað taugabólgu með því að stjórna bólgukerfinu.

Taugaverndareining.

Taugavörn er aðferðin og aðferðir sem notaðar eru til að verjast taugafrumum eða hrörnun í miðtaugakerfi í kjölfar bráðra sjúkdóma (td heilablóðfalls eða taugakerfisskaða/áverka) eða vegna langvinnra taugahrörnunarsjúkdóma (td Parkinsons, Alzheimers, MS). Markmið taugaverndar er að takmarka truflun/dauða taugafruma eftir áverka á miðtaugakerfi og reyna að viðhalda sem mestum heilindum frumusamskipta í heilanum sem leiðir til ótruflaða taugastarfsemi. Eins og sést á mynd 4, eru sum markmið á Serotonergic taugamótaleiðinni þátt í virkni taugaverndar. Til dæmis er framleiðsla prostaglandína í gegnum PTGS1 og PTGS2 (einnig þekkt sem COX-1 og COX-2) nauðsynlegur miðill til að kalla fram bólgueyðandi og nýjar lausnaraðferðir56. Nýleg rannsókn hefur sýnt fram á að genatjáning ADCY5, ensíms sem hvatar myndun cAMP57, minnkar með metýleringu á frumkvöðlum í COX-2-framkölluðum HCC frumulínum úr mönnum58. Byggt á ofangreindri greiningu getum við velt því fyrir okkur að COX-2 uppsöfnun geti haft áhrif á seytingu sAPP, klofnun APP sem er klofið af -secretasa sem er mótað af cAMP og beitt enn frekar taugaverndandi áhrifum59,60. Niðurstöður okkar sýna að taugavörn gegnir mikilvægu hlutverki við meðferð taugabólgu.

Tilraunaprófun

Lífvænleiki BV2 microglial frumna sem eru meðhöndlaðir af efnasamböndunum.

BV2 microglial frumur (8×104 frumur/ml) eru fóðraðar með styrkleika 37,5 til 300 uM á millilítra ræktunarmiðils án sermi af efnasamböndunum fjórum í 24 klst. Við lítum á lífvænleika frumna í samanburðarhópnum sem er ræktaður í fjarveru sermi með minna en 0,1 prósent DMSO sem 100 prósent (mynd 5 (ad)). Svo virðist sem engin marktæk frumueiturhrif sést við ávísaða skammta hópanna.

Staðfesting á samvirkni lyfja og hugsanlegum bólgueyðandi áhrifum in vitro.

Til að meta frekar niðurstöðurnar í silico eru fjögur efnasambönd sem ná yfir þrjú samverkandi pör, þ.e. ísóakteósíð, 2'-asetýlakteósíð, echinakósíð og verbaskósíð, valin til að skoða samverkandi áhrif lyfja og hugsanlega bólgueyðandi áhrif með því að nota BV2 frumur meðhöndlaðar með LPS. Sérstaklega gerum við Western blot greiningu fyrir tjáningu iNOS og COX-2 próteina til að vera í samræmi við samvirkni og bólgueyðandi áhrif lyfjasamsetninga sem spáð er fyrir um.

Eins og sýnt er á mynd 5(td), er greint frá magni iNOS og COX-2 próteina í hópnum af BV2 frumulínu sem prófuð voru. Við sjáum að annað hvort ísóakteósíð eða 2'-asetýlakteósíð meðferð, prótein tjáning iNOS og COX -2 í BV2 frumum minnkar bæði verulega við mismunandi skammtastig. Hins vegar, meðhöndlun með blöndu af ísóakteósíði og 2'-asetýlakteósíði veldur marktækri aukningu á bólguþáttunum iNOS og COX-2(Mynd 5(e)). Mynd 5(1) sýnir að meðferð með echinacoside eða verbascoside, sem eitt lyf, veldur lækkun á iNOS og COX-2 tjáningu. Þar að auki, eins og búist var við, leiddi meðferð með echinacoside ásamt verbascoside í styrkleikanum 150 μM til meira áberandi lækkunar á magni próteintjáningar (iNOS og COX-2), sem gefur til kynna samverkandi bólgueyðandi áhrif þessa. lyfjasamsetning. Eins og sýnt er á mynd 5(g), sýnir samsetning echinacosides og 2'-asetýlakteósíðs marktæk samverkandi áhrif á hömlun COX-2 við styrkleikann 75μM eða 300 μM. Hins vegar, fyrir iNOS, við skammtinn 300 μM, táknar samsetningin áberandi bælingu á próteininu. Aftur á móti komumst við að því að það eru engin augljós hindrunaráhrif á bæði iNOS og COX -2 um samsetningu ísóakteósíðs og 2'-asetýlakteósíðs eða echinakósíðs og verbaskósíðs í styrkleikanum 75μM (viðbótarmynd 2), auk meðferðar með öðrum pörum sýnir mun veikari áhrif samanborið við staka lyfið í skömmtum 150 eða 300μuM sem sést á mynd 5 (td).

Til að draga saman, gefur in vitro rannsóknin viðbótarupplýsingar til að skima lyfjasamsetningar með öflugum bólgueyðandi áhrifum og sýnir fram á áreiðanleika in silico screen stefnu.

Umræða

Taugabólga er fólgin í meirihluta taugasjúkdóma, geðsjúkdóma og taugaþroskasjúkdóma vegna þess að það er ekki aðeins afleiðing heldur gæti verið kveikja að meinafræðinni6!. Hins vegar eru núverandi meðferðir við taugabólgu að mestu einlyfjameðferð, takmörkuð af vel þekktum aukaverkunum eins og við vitum. COX-2 hemlar geta leitt til hjarta- og æðagalla sem svara langtímameðferð og TNF-miðuð meðferð gæti valdið sýkingu með ónæmisbælingu62. Samsettar meðferðaraðferðir geta verið nauðsynlegar til að bæta meðhöndlun flókinna sjúkdóma með eftirfarandi kostum: gegn styrkleika netsins og skaðabætur. aukin klínísk verkun á meðan lágmarkseitrun á mönnum er viðhaldið og minni skammtur hvers efnasambands63. Hins vegar er könnun á samverkandi lyfjasamsetningum meðal efnasambanda sem eru unnin úr jurtalyfjum sem byggjast á lyfjafræði kerfisins fáar takmarkaðar af hugsanlegri meginástæðu fyrir miklu magni efnasambanda.

In the work, we firstly gain 63 potential bioactive compounds from the herb Cistanche tubulosa, fulfilling the criteria (DL>0.18) til frekari greiningar með hjálp spánnar sem er ómissandi til að skima út efnilegri sameindir með æskilega eiginleika. Eftir að hafa kortlagt 133 markmið 63 hugsanlegra lífvirkra efnasambanda í gagnagrunninn fáum við 43 markmið sem tengjast taugabólgu, og þá getur GOBP klasagreining á fyrirhuguðum markmiðum líklega stuðlað að meðhöndlun á taugabólgu. Greiningarniðurstaða CT-netsins sýndi meðalgráðu á hvert efnasamband upp á 11.209 og 7.651 á hvert skotmark, í sömu röð, og 38 þeirra stilla meira en 7 markmið (stærri en meðalstig). Til dæmis gæti echinacoside (mol41)4- spáð með 7 markmiðum, verbascoside (mol33)3067 með 9 markmiðum, eða tubuloside B(mol57)686 með 8 markmiðum, gegnt lykilhlutverki í taugavernd í samræmi við vaxandi bókmenntir.

Við náum beinum lækningalegum markmiðum eins og APP, MAPT (einnig þekkt sem Tau), PPARG70, MMP9, MMP27172 og HTR2A (einnig þekkt sem 5-HT2A), GRIN2B (glútamat jónótrópísk viðtaka NMDA gerð undireining 2B) og GRIA1( jónótrópískir glútamatviðtaka AMPA undireining 1) eða möguleg markmið eins og PTGS274 eða NOS27 sem tengjast taugabólgu eða ýmsum sjúkdómum í taugakerfinu,

Greiningin á Compound-Target-Pathway netinu sýnir 12 efnasambönd úr efstu 10 lyfjapörunum í gegnum PEA reikniritið, tengt við 43 möguleg markmið og leiðir sem tengjast taugabólgu, til dæmis kalsíumboðaleið, taugavirkur bindill-viðtaka víxlverkun eða TNF merkjaleið og svo framvegis. Í kerfinu gætu þessi spáðu efnasambönd virkað á ekki aðeins prótein andstreymis heldur einnig niðurstreymis leiða sem tengjast taugabólgu og bólgulífsmerkjum. sérstaklega, Þar að auki eru viðbótarupplýsingar til að skima lyfjasamsetningar með hugsanlega bólgueyðandi áhrifum veittar og áreiðanleiki in silico screen stefnu er sannreyndur með tilraunastaðfestingu. Taugabólguferillinn samanstendur af Alzheimer-sjúkdómsleiðinni, kalsíumboðaleiðinni, GnRH-boðaleiðinni, VEGF-boðaleiðinni og Serótónvirkum taugamótum. Greiningarniðurstöðurnar skýrðu okkur greinilega að frumudauði, bólgur og taugavarnareiningar eru sýndar til að ráða hvernig Cistanche tubulosa er til meðferðar á taugabólgu.

Taugabólgu fylgir ýmsum taugahrörnunarsjúkdómum sem gætu ekki aðeins verið afleiðing heldur kveikja á meinafræði, þannig að bólgueyðandi meðferðir eru vænleg meðferðaraðferð! Okkur til vonbrigða, þó að við höfum áttað okkur á takmörkunum einlyfjameðferða, eru mat og undirliggjandi aðferðir samsettra meðferða enn helsta áskorunin í þróun hinnar nýju valstefnu. Þessi vinna gæti því boðið upp á ný lækningatækifæri fyrir taugabólgu og gæti opnað nýja leið til að uppgötva lyfjasamsetningar úr náttúrulegum vörum.

Efni og aðferðir

Safn efnasambanda.

Alls eru 66 kemísk innihaldsefni Cistanche tubulosa handvirkt safnað úr TCMSP (http://lsp.nwuedu.cn/)6, þar á meðal 26 fenýletanóíð glýkósíð, 22 iridoids, 4 lignans, 7 mónó-terpen glýkósíð, 2 niturefni, 3 bensen akrýlóýlsykur, 1 steról, 1 ketól. Í ljósi þess að glýkósíð í Cistanche tubulosa eru venjulega vatnsrofið til að losa aglýkón sem síðan frásogast í slímhúð í þörmum, þannig tökum við sameindirnar án glýkóls til greina, sem eru merktar sem qt. Þetta leiddi til myndunar 103 efnasambandanna. Þessar sameindir eru í viðbótartöflu S1.

Mat á líkum á lyfjum. Til að fá hugsanleg lífvirk efnasambönd úr Cistanche tubulosa, metum við lyfjalíkt þessara innihaldsefna með því að reikna Tanimoto líkindi77 á milli jurtaefnasambanda og meðalsameindaeiginleika allra efna í Drugbank gagnagrunninum8. Og DL spálíkaninu hefur verið beitt með góðum árangri í mörgum rannsóknum98 til að velja lífvirk efnasambönd. Í verkinu er DL-vísitalan Stærri en eða jafn og 0.18 af umsækjendum skilgreind sem þröskuldsgildi til að henta betur síðari greiningu.

Spá um lyfjamarkmið.

Að bera kennsl á virknimarkmið fyrir leiðandi efnasambönd er áfram lykilskref til að koma efnasamböndum í þróun lyfja. Hér eru tvö verkfæri innanhúss: SysDT og WES unnin til að leiða út upplýsingar um sameindamarkmið fyrir fíkniefnaveiðar. Sys DT er in silio líkan sem er framkvæmt með blöndu af efnafræðilegum, erfðafræðilegum og lyfjafræðilegum upplýsingum byggt á tveimur öflugum stærðfræðilegum verkfærum: Random Forest (RF) og Support Vector Machine (SVM) til að takast á við vandamálið um markauðkenningu á áhrifaríkan hátt2. Líkanið sem fæst er þjónað sem dýrmætur vettvangur til að spá fyrir um milliverkanir lyfja og markmiða með heildarnákvæmni upp á 97,3 prósent, virkjuð spánákvæmni upp á 87,7 prósent og hindruð spánákvæmni upp á 99,8 prósent. síunarviðmið eru skilgreind sem RF gildi Stærra en eða jafnt og 0.7 eða SVM Stærra en eða jafnt og 0.8 í þessari rannsókn.

Weighted Ensemble Similarity (WES) er nýtt öflugt reiknilíkan til að finna bein markmið lyfsins raunverulegu lífvirku innihaldsefnanna. Sem nýtt tól, gengur líkanið sem fæst vel við að spá fyrir um bindingu með meðalnæmni upp á 85 prósent (SEN) og óbindandi mynstur með 71 prósent (SPE) með meðalsvæði undir rekstri móttakara (ROC, AUC) 85,2 prósent og meðalsamræmi 77,5 prósent. Markmiðin sem fengust eru kortlögð á Uniprot (http://www,uniprot.org) til að staðla nöfn þeirra og lífverur í kjölfarið. Hér veljum við aðeins skotmörk Homo sapiens til frekari greiningar. Markmið umsækjenda valinna efnasambanda eru kortlögð í CTD gagnagrunninn (http://ctdbase.org/) til að fá tengda sjúkdóma þeirra og við skimum loks út hugsanleg skotmörk sem tengjast taugabólgu.

GO auðgun og greining fyrir markmið. Til að kanna líffræðilega ferla tiltekinna marka, kortleggjum við markmiðin til DAVID(http://david.abcc.ncifcrf.gov)8 og hugtökin með P-gildi minna en 0.05 eru valdir í þessum kafla.

Lyfjasamsetningargreining.

Í fyrri vinnu okkar var kerfislyfjafræði rammi nýttur til að spá fyrir um lyfjasamsetningar á nýhönnuðu líkani, sem kallast Probability Ensemble Approach (PEA) í þeim tilgangi að greina klíníska verkun og skaðleg áhrif lyfjasamsetninga. Í smáatriðum var Bayesískt net sem samþættist líkt reiknirit þróað til að móta samsetningarnar út frá sameinda- og lyfjafræðilegum áhrifum. Samsetta matið sem sýndi klíníska virkni og skaðleg áhrif fyrir spáð pör var kynnt þá26. Í stuttu máli sýnir það að PEA gæti spáð fyrir um virkni pöranna með mikilli sértækni og næmi (AUC=0.90) í vinnu okkar. Í þessari vinnu veljum við tíu efstu lyfjasamsetningarnar út frá samvirknilíkum þeirra, sem tákna möguleikann á að framkalla samvirkni milli tveggja efnasambanda.

Uppbygging og greining neta/brauta.

Til að kanna tengsl virku innihaldsefnanna og bólgusjúkdómanna, eru efnasamband-markmið (CT) net og efnasamband-markferilkerfi (CTP) framleitt af Cytoscape 2.8.1, vinsælum lífupplýsingapakka fyrir sjónræna líffræðilega netkerfi og samþættingu gagna※. Megindlegir eiginleikar netsins eru greindir með tveimur eftirfarandi viðbótum Network Analyzer og CentiScaPe 1.2. Í myndræna netinu gefa hnútar annaðhvort til kynna efnasambönd, markmið eða ferla á meðan brúnir kóða samspil lyfja og markmiða. Til að kanna frekar líffræðileg áhrif þess hvernig frumumarkmið virka með því að móta margar efnaskiptaferlar og innbyggð "ferill" er settur saman í samræmi við nýjustu upplýsingar um taugabólgumeinafræði. Í fyrsta lagi, með því að kortleggja þau á KEGG gagnagrunninn (http://www.genome.jp/kegg/), er markmiðssniðunum sem náðst hafa safnað saman í nokkrar leiðir. Eftir að hafa yfirgefið óbeinu hlutana er tiltölulega samsett leið samþætt handvirkt vegna meinafræðilegra og klínískra gagna.

Tilraunaprófun

Undirbúningur sýna.

Echinacoside, verbascoside, isoacteoside og 2'-acetylacteoside eru keypt frá Nanjing Zelang Biological Technology Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, Kína). Prófsýni eru leyst upp í dímetýlsúlfoxíði(DMSO)(Sigma, Bandaríkjunum) til að fá 100 mM, sem stofnlausn, og síðan geymd við 4C. Lokaþynningin af DMSO sem bætt var við ræktunarmiðilinn fór aldrei yfir 0,1 prósent sem tryggði það hefur engin áhrif á lífvænleika frumna.

Frumuræktun. BV2 mús microglia frumur eru upphaflega þróaðar af kínversku vísindaakademíunni Shanghai frumubankanum og ræktaðar í 25 eða 75 cm2 flöskum með Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM/25mM HEPES) (Gibco BRL, USA) ásamt 10% nautgripafóstursermi (FBS)( Gibco BRL, Bandaríkjunum), penicillín G (100 einingar/ml) og streptómýsín (100 mg/ml) í rakaðri hitakassa með 5 prósent CO,/95 prósent O, við 37 gráður ,5 prósent CO2.

Western blot greining. Frumupróteinið er dregið úr frumulínum með Qproteome Mammalian Protein Prep Kit (Qiagen, Þýskalandi) eftir tilgreindar aðgerðir í samræmi við siðareglur framleiðanda. Quick Stari Bradford próteingreiningarsett (Bio-Rad, Bandaríkjunum) er notað til að mæla magn próteina. Samsvarandi magn af próteini (50ug) er eðlisbreytt með því að sjóða við 100 gráður í 10 mínútur með 2*laemmli sýnishleðslubuffi (Bio-Rad, USA) auk 5 prósenta 3-merkaptóetanóls í hlutfalli af 1:1 og hlaðið á hverja braut á 12 prósent SDS-PAGE (natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð smágel), rafflutt á 0,45um pólývínýlídenflúoríðhimnur (PDVF) (Millipore, Bedford, MA, USA) í 150 mínútur við 200 mA. Í kjölfarið eru himnurnar stíflaðar í 3 prósenta sermi albúmíni (BSA) úr nautgripum við stofuhita og ræktaðar með aðal mótefnum iNOS og COX-2 (Abcam) við 4 gráður yfir nótt. Eftir þrjár ítarlegar þvott í Tris-buffered Saline-Tween (TBST) hver í 5 mínútur, eru himnurnar rannsakaðar með piparrótarperoxídasa (HRP)-tengdum aukamótefnum (1:10000 þynningar; Abcam) í 1,5 klst við stofuhita. Ónæmisvirku böndin eru síðan sýnd með því að nota ECL efnaljómunargreiningarbúnað (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Kaliforníu, Bandaríkjunum) eftir þvott tvisvar í TBST og einu sinni TBS, í hvert skipti í 5 mín. Densitometric gildi eru staðlað með því að nota -actin sem hleðslu innra eftirlit.

Tölfræðigreining. Gögn eru sett fram sem meðaltal± staðalvilla, Western blot greining er endurtekin þrjár sjálfstæðar tilraunir með sömu niðurstöðu. Einhliða dreifnigreining er notuð til að bera saman meðaltalsmun þriggja eða fleiri hópa, tölfræðileg marktekt er greind með Nemendaprófinu milli tveggja hópa. Búnaður og stillingar. Excel af Microsoft Office2013 var notað í mynd 1.

Cytoscape 2.8.1 var notað á mynd 2. Cytoscape 2.8.1 var notað á mynd 3.

Visio af Microsoft Office2013 var notað á mynd 4.

Graphpad Prism 6and Visio af Microsoft Office2013 var notað á mynd 5.

Aðgengi gagna. Gagnasöfnin sem myndast við og/eða greind meðan á yfirstandandi rannsókn stendur eru fáanleg hjá samsvarandi höfundi gegn sanngjörnu beiðni.

Heimildir

1.Xanthos,DN& Sandkühler,J. Taugabólga: bólguviðbrögð í miðtaugakerfi sem svar við taugavirkni

Nature Reviews Neuroscience 15,43-53(2014).

2. Funk, CD&FitzGerald, GACOX-2 hemlar og hætta á hjarta- og æðasjúkdómum. Journal of cardiovascular pharmacology 50,470-479 (2007).

3. Reines, S. et al. Rofecoaxib Engin áhrif á Alzheimerssjúkdóm á 1-ári, slembiraðað, blindað, samanburðarrannsókn. Neurology 62,66-71 (2004).

4. Trepanier, CH& Milgram, NW Taugabólga í Alzheimerssjúkdómi: eru bólgueyðandi gigtarlyf og sértækir COX-2 hemlar næstir

meðferðarlína? Journal of Alzheimer's Disease 21,1089-1099 (2010).

5. Fitzgerald, JB, Schoeberl, B.,Nielsen, UB& Sorger, PKSystems líffræði og samsett meðferð í leit að klínískri virkni. Náttúruefnalíffræði 2,458-466 (2006).

6. Sun, X. Vilar,S.& Tatonetti.NPHHigh-throughput methods for combinatorial drug discovery.Si TranslMed5,205rv201-205rv201 (2013).

7. Manchado, E. o.fl. Samsett aðferð til að meðhöndla KRAS-stökkbreytt lungnakrabbamein. Náttúra (2016).

8. Musumeci, G. o.fl. M48U1 og Tenofovir samsetning hamlar HIV sýkingu á samverkandi hátt í virkjaðum PBMC og leghálsi manna. Vísindaskýrslur 7, 41018 (2017).

9. Anastasio, TJ Reiknigreining á mögulegum fjöllyfjasamsetningum til að draga úr örverubólgu í Alzheimerssjúkdómi. Front Pharmacol 6 (2015).

10. Dhote, F. o.fl. Samsetningar ketamíns og atrópíns eru taugaverndandi og draga úr taugabólgu eftir flogaveiki í músum. Toxicol Appl Pharm 259, 195–209 (2012).

11. Lehár, J. o.fl. Samvirkar lyfjasamsetningar hafa tilhneigingu til að bæta lækningalega viðeigandi sértækni. Náttúrulíftækni 27, 659–666 (2009).

12. Tan, X. o.fl. Kerfisbundin auðkenning samverkandi lyfjapöra sem miða að HIV. Náttúrulíftækni 30, 1125–1130 (2012).

13. Cokol, M. o.fl. Kerfisbundin könnun á samverkandi lyfjapörum. Sameindakerfislíffræði 7, 544 (2011).

14. Winter, GE o.fl. Kerfis-lyfjafræði krufning á samvirkni lyfja í imatinibi ónæmri CML. Náttúruefnalíffræði 8, 905–912 (2012).

15. Wang, Y.-Y., Xu, K.-J., Song, J. & Zhao, X.-M. Að kanna lyfjasamsetningar í erfðafræðilegu milliverkunarnetinu. BMC lífupplýsingafræði 13, S7 (2012).

16. Ryall, KA & Tan, AC Systems líffræðiaðferðir til að efla uppgötvun árangursríkra lyfjasamsetninga. Journal of cheminformatics 7, 7 (2015).

17. Zhao, X.-M. o.fl. Spá um lyfjasamsetningar með því að samþætta sameinda- og lyfjafræðileg gögn. PLoS computational biology 7, e1002323 (2011).

18. Sun, Y. o.fl. Að sameina erfðafræðilega og neteiginleika fyrir aukna getu til að spá fyrir um samverkandi lyf við krabbameini. Náttúrusamskipti 6, 8481 (2015).

19. Jaeger, S. o.fl. Magngreining á víxltali leiðir í ljós nýjar samverkandi lyfjasamsetningar fyrir brjóstakrabbamein. Krabbameinsrannsóknir 77, 459–469 (2017).

20. Li, S., Zhang, B., Jiang, D., Wei, Y. & Zhang, N. Herb netbygging og sameiningargreining til að afhjúpa samsetningarreglu hefðbundinna kínverskra jurtaformúla. BMC lífupplýsingafræði 11, S6 (2010).

21. Liang, X., Li, H. & Li, S. Ný netlyfjafræðiaðferð til að greina hefðbundnar jurtaformúlur: Liu-Wei-Di-Huang pillan sem dæmisögu. Mol. BioSyst. 10, 1014–1022, https://doi.org/10.1039/c3mb70507b (2014).

22. Liu, J. o.fl. Leið sem lyfjafræðilegt markmið fyrir náttúrulyf: rannsókn frá því að draga úr inndælingu. PLoS One 10, e0123109, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0123109 (2015).

23. Wang, X. o.fl. Kerfislyfjafræði afhjúpar Janus virkni grasalyfja: virkjun varnarkerfis hýsilsins og hömlun á afritun inflúensuveiru. Integrative Biology 5, 351–371 (2013).

24. Huang, C. o.fl. Kerfislyfjafræði í lyfjauppgötvun og lækningalegri innsýn fyrir náttúrulyf. Kynningar í lífupplýsingafræði 15, 710–733 (2014).

25. Li, S., Zhang, B. & Zhang, N. Netmarkmið til að skima samvirkar lyfjasamsetningar með notkun á hefðbundna kínverska læknisfræði. BMC kerfislíffræði 5, S10 (2011).

26. Li, P. o.fl. Stórfelld könnun og greining lyfjasamsetninga. Lífupplýsingafræði 31, 2007–2016 (2015).

27. Jeong, EJ o.fl. Hindrandi innihaldsefni Euonymus alatus laufa og kvista á framleiðslu nituroxíðs í BV2 microglia frumum. Matvæla- og efnaeiturfræði 49, 1394–1398 (2011).

28. Read, DE & Gorman, AM Hitastokksprótein 27 í lifun taugafrumna og útvöxt taugafruma. Lífefnafræðileg og lífeðlisfræðileg rannsóknasamskipti 382, ​​6–8 (2009).

29. Sharp, P. o.fl. Hitastuðsprótein 27 bjargar hreyfitaugafrumum í kjölfar taugaáverka og varðveitir starfsemi vöðva. Exp Neurol 198, 511–518 (2006).

30. Esposito, E. o.fl. Verndaráhrif verbascosides í virkum C6 glioma frumum: möguleg sameindaaðferð. Lyfjasafn Naunyn Schmiedeberg 381, 93–105 (2010).

31. Sharp, PS o.fl. Verndaráhrif hitaáfallspróteins 27 í líkani af ALS koma fram á fyrstu stigum framvindu sjúkdómsins. Neurobiol Dis 30, 42–55 (2008).

32. Chang, KH o.fl. Möguleiki indól/indólýlkínólíns efnasambanda í Tau Misfolding minnkun með því að auka HSPB1. Cns Neurosci Ter 23, 45–56 (2017).

33. Evgrafov, OV o.fl. Stökkbreytt lítið hitasjokkprótein 27 veldur axonal Charcot-Marie-Tooth sjúkdómi og fjarlægum arfgengum hreyfitaugakvilla. Náttúruerfðafræði 36, 602–606 (2004).

34. Voegeli, TS & Currie, RW siRNA dregur úr Hsp27 og eykur angíótensín II-framkallað fosfórýlerað NF-KB p65 gildi í ósæðar sléttum vöðvafrumum. Infamm Res 58, 336–343 (2009).

35. Lim, W. o.fl. Stöðlun á NF-KB boðunarleið af völdum fitufjölsykru með 635 nm geislun með hitasjokkpróteini 27 í tannholdsfrumum úr mönnum. Ljósefnafræði og ljóslíffræði 89, 199–207 (2013).

36. Sawada, J., Li, F. & Komatsu, M. R-Ras hindrar VEGF-framkallaða p38MAPK virkjun og HSP27 fosfórun í æðaþelsfrumum. Journal of vascular research 52, 347–359 (2015).

37. Feske, S. Kalsíumboð í eitilfrumuvirkjun og sjúkdómum. Nature Reviews Immunology 7, 690–702 (2007).

38. Bading, H. Kjarnakalsíumboð til að stjórna heilastarfsemi. Nature Reviews Neuroscience 14, 593–608 (2013).

39. Heakal, Y. o.fl. Neyrótensínviðtaka-1 framkallanleg palmitóýlering er nauðsynleg fyrir skilvirka viðtakamiðlaða mítógenboðaboð innan uppbyggðra himnukróléna. Krabbameinslíffræði og meðferð 12, 427–435 (2011).

40. Naor, Z. Merking með G-prótein-tengdum viðtaka (GPCR): rannsóknir á GnRH viðtaka. Frontiers in neuroendocrinology 30, 10–29 (2009).

41. Mugami, S., Dobkin-Bekman, M., Navi, LRB & Naor, Z. Mismunandi hlutverk PKC ísóforma (PKCs) í GnRH örvun MAPK fosfórunar í frumum sem eru afleiddar af gonadótrópum. Sameinda- og frumuinnkirtlafræði (2017).

42. Cho, JY o.fl. In vitro og in vivo ónæmisbælandi áhrif syringins. J Pharm Pharmacol 53, 1287–1294 (2001).

43. Cui, Y., Zhang, Y. & Liu, G. Syringin getur haft svefnhækkandi áhrif í gegnum NOS/NO leiðina. Fund Clin Pharmacol 29, 178–184 (2015).

44. Yamazaki, T. o.fl. ( plús )-Syringaresinol-di-O- -d-glúkósíð, fenólefnasamband frá Acanthopanax senticosus Harms, bælir bólgueyðandi miðla í SW982 liðsarkmeinfrumum úr mönnum með því að hindra virkjunarprótein-1 og/eða kjarnaþátt- κB starfsemi. Eiturefnafræði in Vitro 21, 1530–1537 (2007).

45. Rybakowski, JK Matrix metalloproteinase-9 (MMP9)—miðlunarensím í hjarta- og æðasjúkdómum, krabbameini og taugageðrænum kvillum. Hjarta- og æðageðlækningar og taugalækningar 2009 (2009).

46. ​​Suh, S.-J. o.fl. Deoxypodophyllotoxin, favolignan, frá Anthriscus sylvestris Hofm. hindrar fólksflutninga og MMP-9 í gegnum MAPK ferla í TNF- -framkölluðum HASMC. Æðalyfjafræði 51, 13–20 (2009).

47. Lee, E.-J. & Kim, H.-S. Hindrandi aðferð við tjáningu MMP-9 gena með etýlpýruvati í lípópólýsykruörvuðum BV2 örglíafrumum. Taugavísindabréf 493, 38–43 (2011).

48. Kim, S.-S. Í 4. alþjóðlegri ráðstefnu um lífeðlisfræðiverkfræði í Víetnam. 238–243 (Springer).

49. Gehrmann, J., Bonnekoh, P., Miyazawa, T., Hossmann, K.-A. & Kreutzberg, GW Ónæmisfrumuefnafræðileg rannsókn á snemmbúinni örvun í blóðþurrð. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism 12, 257–269 (1992).

50. Le, W.-d. o.fl. Örvun örvökva og dópamínvirk frumuáverka: in vitro líkan sem skiptir máli fyrir Parkinsonsveiki. J Neurosci 21, 8447–8455 (2001).

Viðurkenningarrannsóknir eru studdar fjárhagslega af National Natural Science Foundation of China (NO. U1603285, NO. 81373892 and NO. 31540008) og iðnvæðingu tilraunaverkefnisins í Shaanxi-héraði menntamálaráðuneytisins: iðnvæðingu grænna mengunarlausra örverugerjunarfóðuraukefna. (NR. 2010JC22).

Framlög höfunda

Framlag höfunda til getnaðar og hönnunar: JLL, YHW og CLZ hugsuðu og hönnuðu rannsóknina. Forspá lyfjamarkmiða og GO auðgun og greining fyrir skotmörk: XTC og ZHQ Lyfjasamsetningargreining og Net/brautaruppbygging og greining: JLZ, ZHQ, FXS og JJL Tilraunir og öflun gagna JLZ, JX og ZHQ Greining og túlkun gagna JLZ , JX, ZYW og WX Handritsgerð: JLZ, og CLZA samþykktu lokaútgáfu innsends handrits: J.LL, CL.Z.and YH.W.Revised by CLZ, JLZand XGL

Viðbótarupplýsingar

Viðbótarupplýsingar fylgja þessari grein á https://doi.org/10.1038/s41598-017-16571-3. Samkeppnishagsmunir: Höfundar lýsa því yfir að þeir hafi enga samkeppnishagsmuni.

Athugasemd útgefanda: Springer Nature er hlutlaus með tilliti til kröfugerða um lögsögu í útgefnum kortum og stofnanatengslum.

Open Access Þessi grein er með leyfi samkvæmt Creative Commons Attribution 4.0 alþjóðlegu leyfi, sem leyfir notkun, deilingu, aðlögun, dreifingu og fjölföldun á hvaða miðli eða sniði sem er, svo framarlega sem þú gefur upprunalega höfundinum viðeigandi viðurkenningu (s) og uppspretta, gefa upp hlekk á Creative Commons leyfið og gefa til kynna hvort breytingar hafi verið gerðar. Myndirnar eða annað efni frá þriðja aðila í þessari grein er innifalið í Creative Commons leyfi greinarinnar nema annað sé tekið fram í lánalínu til efnisins. Ef efni er ekki innifalið í Creative Commons leyfi greinarinnar og fyrirhuguð notkun þín er ekki leyfð samkvæmt lögum eða umfram leyfilega notkun þarftu að fá leyfi beint frá höfundarréttarhafa. Til að skoða afrit af þessu leyfi skaltu fara á http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. © Höfundur(ar) 2017

© 2017. Þetta verk er birt undir http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ („leyfið“). Þrátt fyrir skilmála og skilyrði ProQuest geturðu notað þetta efni í samræmi við skilmála leyfisins.