Endurbætur á Echinacoside og Acteoside framleiðslu með tveggja þrepa elicitation í frumufjöðrun ræktun Cistanche Deserticola

fyrir frekari upplýsingar:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen o.fl

Ágrip

Í viðeigandi styrk ýtti pólýamín til vöxt kallus ogechinacosideinnihaldiCistanche deserticolaen Ag plús jók innihald afechinacosideogakteósíð. Á 20-daga ræktunartímabili, þegar putrescine (25 lM) og Ag plús (10 lM) var bætt við á 8. og 16. degi, í sömu röð,echinacosideframleiðslu (1,7 gl–1) ogakteósíðframleiðsla (0.4 gl–1) náði hámarkinu, sem var 1.4-falt og 1.5-falt af þessum stakri putrescine meðferð, 1.6-falt og 1.4-föld af þeim í einni Ag plús meðferð, í sömu röð. Exogen putrescine jók lífvænleika frumna og andoxunarensímvirkni verulega og jók þannig endanlegan lífmassa. Ag plús viðbót jók H2O2 innihald og fenýlalanínammóníak-lyasa virkni verulega sem leiddi til hærriechinacosideogakteósíðinnihald.

LeitarorðActeoside,Cistanche deserticola, Echinacoside, Elicitor, Suspension menning

Skammstafanir

APOX askorbat peroxidasi

CAT Catalase

H2O2 Vetnisperoxíð

PAL Fenýlalanín ammoníak-lýasi

PeGs fenýletanóíð glýkósíð

ROS hvarfgjörn súrefnistegund

SOD Superoxide dismutasi

Cistanche deserticola

Smelltu til að Cistanche UK og Cistanche extract vörur

Kynning

Cistanche deserticolaYC Ma er mikið notað í hefðbundinni kínverskri læknisfræði. Fenýletanóíð glýkósíð (PeGs) eru helstu lífvirk efni í þessari plöntu. Meðal PeGs,echinacosideogakteósíðeru helstu þættirnir til að bæta kynlífsgetu, stjórna ónæmisvirkni, fjarlægja sindurefna og öldrunareiginleika (Song o.fl. 2003). Vegna ofnýtingar, erfiðrar ræktunar og versnandi umhverfi, villt Cistanche deserticolaplöntur eru á mörkum útrýmingar. Plöntufrumuræktun getur verið aðlaðandi valkostur til að fá þessa lífvirku efnisþætti. Helstu vandamálin sem upp koma í vitro menninguCistanche deserticolaeru lágur lífmassi og lágt PeG innihald. Greint var frá því að margir elicitors örvuðu PeGsynthesis (Cheng o.fl. 2005, 2006; Lu og Mei 2003; Ouyang o.fl. 2003a; Xu o.fl. 2005), en því miður minnkuðu flestir elicitorar frumulífmassa.

Á undanförnum árum hefur samsetning mismunandi framkalla verið könnuð í sviflausnarræktun plöntufrumna. Vegna mismunandi aðgerða mismunandi framkalla getur samsetning ólíkra framkalla náð samverkandi áhrifum. Útkallararnir geta beaddað á sama tíma, til dæmis í sviflausnarmenningu Taxus spp. (Yuan o.fl. 2002) og ginseng (Bae o.fl. 2006). Á hinn bóginn gaf það hámarks lífmassa og taxólframleiðslu í sviflausnarræktun Taxus baccata (e. Khosroushahiet al. 2006). Hins vegar eru fáar skýrslur tiltækar um nýtingu sameinandi elicitors í frumuræktun Cistanche deserticola.

EhcinacosideinnCistanche deserticola

Fyrri skýrslur umCistanche deserticolaeinbeitti sér að því að auka PeG innihald, en framkallar eins og pólýamín til að efla lífmassann voru að hluta hunsuð. Pólýamín geta stuðlað að lífmassa kallus með því að auka frumufjölgun og draga úr öldrun frumna (Bais og Ravishankar 2002). Nýlega var greint frá því að pólýamín tengdust víxlverkunum við etýlen og lífræna streituþol, en etýlen og hvarfgjarnar súrefnistegundir (ROS) frá ólífrænum streitu leiddu til öldrunar og dauða frumna (Cona o.fl. 2006). Á hinn bóginn leiddi oxunarálag af völdum framkalla til uppsöfnunar ROS, þar á meðal vetnisperoxíðs (H2O2) og ofuroxíðanjóns (O2–), sem tilkynnt var um að miðla með forrituðum frumudauða og síðari umbrotsefnamyndun sem merkjasameindir (Yuan o.fl. 2001) ; Xu og Dong 2005). Til dæmis olli H2O2 erfðatjáningu fenýlalanín ammóníak-lyasa (EC 4.3.1.5), lykilensím fyrir varnarviðbrögð og aukaefnaskipti (Desikan o.fl. 1998), sem stjórnaði PeG framleiðslu í frumuræktunCistanche deserticola(Cheng o.fl. 2005; Ouyanget al. 2003a). Með hliðsjón af oxunarálagi, ýttu sumar málmjónir, eins og Ni2 plús, Co2 plús, Ag plús, undir nýmyndun efri umbrotsefna á skilvirkan hátt í mörgum plöntum (Zhao o.fl. 2005). Kannski geta þær aukið PAL virkni og PeG framleiðslu. Í þessari rannsókn var pólýamínum og málmjónum, sem og samsetningu þessara framkalla, beitt til að auka kallusvöxt,echinacoside, ogakteósíðinnihaldi Cistanche deserticola. Að auki voru tengsl á milli framkalla og H2O2 innihalds, sem og áhrif þeirra á virkni PAL og andoxunarensíma einnig könnuð.

efni og aðferðir

Plöntuefni

Cistanche deserticolafrumulínur voru framkallaðar frá stofninum. Eftir dauðhreinsun var stilkurinn skorinn í um það bil 1 cm3 bita og ræktaður á B5 miðli (Gamborg o.fl. 1968) sem innihélt 5 lM naftalenediksýru (NAA), 9 lM 6-bensýladenín (6-BA), 4 lM 2,4-díklórfenoxýediksýra (2,4-D), og 30 g súkrósa l–1. Eftir 30 daga var ljósguli kallusinn tekinn út og undirræktaður á B5 miðli með 5 lMNAA, 9 lM 6-BA og 1 lM 2,4-D, og ​​frumufjöðruninni var komið á samkvæmt aðferðunum af Ouyang o.fl. (2003b).

Callus menning

Um 1,5 g ferskur kall (0.125 g DW) frá 20-daggamallri svifræktunCistanche deserticolavar sáð í 250-ml Erlenmeyer-flösku sem innihélt 50 ml B5 miðil. B5medium var bætt við 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D og 30 g súkrósa l-1 við pH 5,6 áður en það var sjálfkrafið. Allar tilraunirnar voru gerðar með þremur endurteknum við 25 gráður í myrkri á snúningshristara (110 snúninga mín-1) í 20 daga.

ActedosieinnCistanche deserticola

Elicitor meðferðir

Í einni útköllunartilraun var síusótthreinsuðum lausnum af pútresíni (Put), spermíni (Spm), spermidíni (Spd), silfurnítrati og kóbaltklóríði bætt við miðilinn í hönnuðum styrkjum til að kanna áhrif þeirra á vöxt á kalsa og PeG innihald. Með ákjósanlegri tegund og styrkleika, voru áhrif fóðrunartíma rannsökuð. Síðan, byggt á ákjósanlegum styrk og fóðrunartíma, var samsetning mismunandi elicitors hönnuð til að auka PeG framleiðslu í tveggja þrepa elicitation tilraun. Kallúsmenningin án elicitors virkaði sem stjórn. Til að kanna verkunarmáta framkalla, var kallinn tekinn út á hönnuðum tíma eftir viðbót til frekari greiningar í tveggja þrepa upptökutilrauninni.

Lífefnafræðilegar prófanir

Á tilsettum tíma eftir að elicitor var bætt við voru frumurnar síaðar og skolaðar varlega með eimuðu vatni. Síðan var frumulífhæfi ákvörðuð með 2,3,5-trifenýltetrasólíumklóríðlitun samkvæmt aðferð Verleysenet al. (2004), Lífvænleikavísitalan er skilgreind sem gleypni mæld á hvert gramm af ferskum vefjum. H2O2 innihald ferskra frumna var ákvarðað samkvæmt aðferð Velikova et al. (2000). Virkniákvörðun fenýlalanín ammoníak-lyasa (PAL) (EC 4.3.1.5) var byggð á aðferð Koukol og Conn (1961). Aðferðirnar sem notaðar voru við súperoxíð dismutasa (SOD) (EC1.15.1.1), katalasa (CAT) (EC 1.11.1.6), askorbatperoxidasa (APOX) útdrátt og ákvörðun voru þær sömu og Jebara o.fl. (2005).

Mæling á lífmassa, echinacoside og acteoside

Til að ákvarða þurrþyngd (DW) var kallið síað og þvegið með eimuðu vatni og síðan frostþurrkað í stöðugri þyngd til að skrá þurrþyngdina.

Þurrfrumur (20 mg) voru dregnar út með 10 ml af 50 prósentum (v/v) metanóli við stofuhita í ultrasonication (40 kHz, 160 W) í 15 mínútur. Eftir síun í gegnum 0,22 lm síu var 20 ll sýnum sprautað í HPLC-kerfi (Waters 2695) búið C18 súlu (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, 5 μm kornastærð). Hreyfanlegur fasinn samanstóð af metanóli og 0,05 prósent ediksýru-vatnslausn (v/v) í hlutfallinu 35:65 (v/v). Rennslishraði var 1,0 ml mín^–1, súluhitastigið var 30 gráður og UV-skynjunarbylgjulengdin (Waters 2996) var 334 nm.

Kvörðunarferlar afechinacosideogakteósíðvoru í góðu línuleika á bilinu {{0}}.2–6.4 lg(r=0.9997) og 0.16–4.6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995), í sömu röð. Meðalendurheimt echinacoside og acteoside(n=5) var 98,7 prósent (RSD=1,5 prósent ) og 98,2 prósent (RSD=1 .28 prósent), í sömu röð. Nákvæmni og nákvæmnitilraunir sýndu góðan árangur, hlutfallslegt staðalfrávik var minna en 2 prósent. Mörkin fyrir magngreiningu voru 0,04 og 0,06 lg fyrir echinacoside og acteoside, í sömu röð. Echinacoside og acteoside staðlar voru keyptir frá NICPBP (National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Peking, Kína). Echinacoside/acteoside framleiðsla=echinacoside/acteoside innihald (mg g–1 DW) x Lífmassi (g DW l^–1).

Tölfræðilegar greiningar

Allar tilraunir og ákvarðanir voru endurteknar þrisvar sinnum og öll gildi voru meðaltal þrefalda ± SE. Gögnin voru lögð fyrir dreifnigreiningu (einstefnu-ANOVA, Tukey próf) til að greina marktækan mun með PROC ANOVA af SAS útgáfu 6.12.

Niðurstöður

Áhrif pólýamíns á vöxt callus,echinacoside, ogakteósíðefni.

Tafla 1 sýnir áhrif pólýamíns á kallvöxt,echinacoside, ogakteósíðinnihaldiCistanche deserticola. Put og Spm ýttu verulega undir vöxt callus við viðeigandi styrk. Um það bil 25 lM Put var hagkvæmast og lífmassi (11,2 g DW l–1) var 1.3-falt af viðmiðuninni. Samtímis aukið pólýamínechinacosideefni verulega. Þegar 25 lM Put var bætt við,echinacosideinnihald jókst um 46 prósent samanborið við viðmiðunina á meðan engin marktæk aukning á akteósíðinnihaldi fannst.

Áhrif Ag plús og Co2 plús á vöxt callus, echinacoside og acteoside innihald

Áhrif málmjóna á vöxt callus,echinacoside, ogakteósíðInnihald er sýnt í töflu 2. Innihald echinacoside og acteoside var stuðlað mjög að af Ag plús á meðan kallusvöxtur var hamlaður lítillega. Þegar 10 lM Ag plús var bætt við,echinacosideinnihald ogakteósíðinnihald jókst um 73 prósent og 62 prósent í sömu röð miðað við viðmiðið. Samtímis var enginn marktækur munur á lífmassa milli Ag plús meðferðar og samanburðar. Co2 plús sýndi varla jákvæð áhrif á callusvöxt og PeG innihald.

Áhrif fóðrunartíma á vöxt callus, echinacoside og acteoside innihald

Put (25 lM) og Ag plús (10 lM) voru valdir fyrir frekari tilraunir. Áhrif fóðrunartíma á vöxt callus,echinacoside, ogakteósíðinnihald er sýnt í töflu 3. Þegar Put (25 lM) var bætt við á degi 8, fékkst hámarkslífmassi (11,8 g DW l–1). Í millitíðinni, theechinacosideinnihald var hækkað í 107,2 mg g–1 DW á meðanakteósíðinnihald var nánast það sama og eftirlitsins.

Ag plús viðbót á fyrri tíma leiddi til minni lífmassa. Bæta við Ag plús (10 lM) á degi 16, bæðiechinacosideinnihald (127,9 mg g–1 DW) ogakteósíðinnihald (34,2 mg g–1 DW) náði hámarkinu, sem var 2.2-falt og 1.4-falt af þeim sem voru í viðmiðuninni, í sömu röð.

Samsett áhrif Put og Ag plús á kallusvöxt, echinacoside og acteoside framleiðslu

Eins og sést í niðurstöðum einstakra framleiðenda, bætti viðbót við snemma stigs lífmassann, og Ag plús viðbót á seint stigi stuðlaði að echinacoside og acteoside innihaldi án þess að minnka lífmassann verulega. Þannig að tveggja þrepa elicitation siðareglur var hönnuð. Put (25 lM) og Ag plús (10 lM) var bætt við á sitt hvoru kjörstigi.

Mynd 1 sýnir áhrif þess að sameina íblöndun Putand Ag plús á vöxt callus,echinacoside, ogakteósíðframleiðslu í mótsögn við stjórnina. Þegar Put (25 lM) var bætt við á degi 8 og Ag plús (10 lM) var bætt við á degi 16, var ákjósanlegur lífmassi (11,4 g DW l–1), echinacoside innihald (152,4 mg g–1 DW) og akteósíðinnihald (36,1) mg g–1 DW) náðust á degi 20 (mynd 1). Theechinacosideframleiðslu (1,7 gl–1) ogakteósíðframleiðsla (0.4 gl–1) nam 3.3-falt og 2.1-falt af þeim sem voru í viðmiðunarhópnum, í sömu röð, sem voru hærri en þeir sem voru í stakri framköllun (tafla 3) . Í samanburði við einn elicitor meðferð, theechinacosideogakteósíðframleiðsla með því að sameina elicitors voru 1.4-falt og 1.5-falt af þeim í einni Put meðferð, 1.6-falt og 1.4-falt af þessum einfaldu Ag plús meðferð , í sömu röð. Langvarandi menning minnkaði lífmassa, echinacoside framleiðslu og acteosideframleiðsla (mynd 1)

Mynd 1 Snið lífmassa (A),echinacoside, ogakteósíðframleiðslu (B) með/án þess að sameina elicitors í sviflausn ræktun áCistanche deserticola. Lóðréttar stikur tákna staðlaða villu þriggja endurtekninga. Callus, 0.125 g DW, var sáð í 250-ml Erlenmeyer flöskur sem innihéldu 50 ml B5 miðil. Put (25 lM) og Ag plús (10 lM) var bætt við á degi 8 og degi 16, í sömu röð. Tilraunirnar voru gerðar við 25 gráður í myrkri á snúningshristara (110 snúningur mín–1) í 20 daga

Áhrif Put og Ag plus á lífvænleika frumna, H2O2 innihald og virkni PAL og andoxunarensíma

Til að skilja verkunarhátt elicitors á frumuvöxt og efri umbrotCistanche deserticolaBreytingar á lífvænleika frumna, H2O2 innihald og virkni PAL og andoxunarensíma eftir að Put og Ag plús var bætt við voru skoðuð í tveggja þrepa framkallaræktinni. Þegar Put var bætt við á 8. degi (0 klst. á mynd 2) minnkaði H2O2-innihaldið hratt, sem var aðeins 48,9 prósent af viðmiðunarhópnum á 6. klukkustund, í sömu röð, og jafnaði sig smám saman að sama skapi eftir 24 klst. .2A). Frumulífvænleiki jókst þar til 12 klst. og minnkaði síðan jafnt og þétt, sem var 26,9 prósent og 16,7 prósent hærra en viðmiðunarhópurinn eftir 24 klst. og 48 klst., í sömu röð (mynd 2B). Virkni SOD og APOX jókst verulega eftir 6 klst. og SOD virkni minnkaði í svipað stig viðmiðunar eftir 24 klst á meðan APOXvirkni var enn 1.3-föld miðað við samanburðarhópinn (Mynd 2C, D). Putaddition sýndi engin marktæk áhrif á CAT virkni (Mynd 2E). Minnkun á H2O2 innihaldi og vöxtur virkni andoxunarensíma þýddi minni oxunarskemmdir og hélt fleiri frumum lífvænlegum en viðmiðunarhópurinn.

Mynd 2 Breytingarnar á H2O2 innihaldi, lífvænleika frumna, APOX, SOD, CAT og PAL virkni eftir að hafa bætt við á 8. degi sviflausnarræktunar afCistanche deserticola. Lóðréttar strikir tákna staðlaða villu þriggja endurtekningar

Á sama tíma náði PAL virkni hámarki á 12. klukkustund og minnkaði síðan smám saman niður í það sama og viðmiðið eftir 48 klst (mynd 2F).

Frumurnar voru stöðugt ræktaðar eftir Put viðbót og Ag plús var bætt við miðilinn á degi 16 (0 klst. á mynd 3). H2O2 innihald jókst hratt og hélt marktækt hærra stigi en viðmiðunarmagnið þar til 48 klst. (mynd 3A). Hins vegar var frumulífvænleiki hamlað verulega og varð minni (mynd 3B). APOX virkni hélt stöðugu stigi og minnkaði eftir 24 klst (mynd 3C). SOD og CAT-virkni jókst verulega eftir 3 klst. og náðu hámarki eftir 12 klst. og 6 klst., í sömu röð, sem voru 1.6-falt og 1.0-falt hærra en viðmiðunarstýringin, og lækkaði síðan hægt (mynd 3D) , E). PAL virkni jókst í 2.1-föld af samanburði eftir 24 klst, sem var samt 22,5 prósent hærri en viðmiðun eftir 48 klst (mynd 3F).

Mynd 3 Breytingarnar á H2O2 innihaldi, lífvænleika frumna, APOX, SOD, CAT og PAL virkni eftir Ag plús viðbót á degi 16Cistanche deserticolameð Setja viðbót á degi 8. Lóðréttar strikir tákna staðlaða villu þriggja endurtekningar.

Umræða

Pólýamín og málmjónir sýndu mismunandi áhrif á callusvöxt og PeG framleiðsluCistanche deserticola. Í réttum styrk, jók pólýamín aðallega kalsíumvöxt, en Ag plús stuðlaði að framleiðslu áechinacosideogakteósíðverulega. Þegar bæði Putand Ag plús í besta styrk var bætt við á mismunandi tímum, áttu sér stað nokkur samverkandi áhrif.

Fyrir vöxt kallus, reiddust kynningaráhrifin á gerð pólýamína, styrk og fóðrunartíma. 25 lMPut var áhrifaríkast fyrir vöxt kallus þegar bætt var við á 8. degi. Kveikjan sýndi bestu kynningaráhrifin á fyrstu vaxtarstigi. Þótt Ag plús og Co2 plús hafi fundist auka auka umbrotsefni í mismunandi plöntum (Zhao et al. 2005), sýndi aðeins Ag plús jákvæð áhrif á innihaldechinacosideogakteósíð. Vegna þess að Ag plús gat hamlað lífvænleika frumna og frumufjölgun, jók Ag plús viðbót á degi 16 framleiðslu áechinacosideogakteósíðán þess að draga verulega úr lífmassanum.

Þegar plöntufrumur eru útsettar fyrir elicitor meðferð, elicitor byrjar merkjaflutning frá yfirborði plasmahimnunnar og ROS framleiðslu, örvar plöntuvarnarsvörun og eykur efri umbrot plantna með því að stjórna lykilensímum sem hvetja lífmyndun efri umbrotsefna markefna (Zhao o.fl. 2005). Oxi dative streita vegna elicitor meðferð leiðir til ROS uppsöfnun og hægt er að draga úr henni með andoxunarefnissímum, þar á meðal SOD, APX, CAT og POD. Þegar oxunarskemmdir eru umfram virkni andoxunarefnasíma geta plöntufrumur dáið þar sem lífvænleiki frumna minnkar.

Talið er að H2O2, tegund af ROS, miðli við forritaðan frumudauða og stýri nýmyndun efri umbrotsefna með því að framkalla tjáningu margra varnargena og lífsyntískra gena úr efri umbrotsefni, svo sem PAL. Talið er að H2O2, tegund af ROS, miðli við forritaðan frumudauða og stýri nýmyndun efri umbrotsefna með því að framkalla tjáningu margra varnargena og lífsyntískra gena úr efri umbrotsefni, svo sem PAL.

Pólýamín bættu lífræna streituþol með því að hreinsa ROS á skilvirkan hátt, vernda kjarnsýru og himnu (Alca´zar o.fl. 2006) og auka andoxunarefnisvirkni (Tang og Newton 2005). Samkvæmt skýrslu Papadakis og Roubelakis-Angelakis (2005), sýndi Put betri hindrandi áhrif á ROS uppsöfnun en Spd og Spm. Eins og fram kemur í niðurstöðum okkar var endanleg lífmassa inPut meðferð meira en í Spd og Spm meðferðum. Utanaðkomandi sett minnkað H2O2 innihald, aukið andoxunarensímvirkni og lífvænleika frumna á skilvirkan hátt. Sennilega hefur meiri lífvænleiki frumna stuðlað að meiri fjölgun og meiri lífmassa. Þá væri hægt að útskýra hvers vegna Ag plús viðbót á fyrri tíma leiddi til minni lífmassa fyrir Ag plús aukið H2O2 uppsöfnun og minnkaði frumulífhæfi verulega. Virkni andoxunarensíma var aukin til að draga úr oxunarálagi án þess að hafa áhrif á lífvænleika frumna. Ag plús viðbót stuðlaði einnig að PALvirkni sem og framleiðslu áechinacosideogakteósíðtöluvert. Fyrirkomulagið gæti verið í samræmi við niðurstöður Desiken o.fl. (1998) og Yuan o.fl. (2001). H2O2 gæti gegnt lykilhlutverki í frumufjölgun og PeG framleiðslu. Settu aukna PAL virkni ogechinacosideinnihald í vissu marki, hugsanlega á einhvern annan hátt til að setja minnkað H2O2 innihald.

Undanfarin ár hafa flestar skýrslur beinst að áhrifum eins elicitor á callusvöxt og PeGs innihaldCistanche deserticola. Hins vegar jók margir framkallar ekki kallusvöxtinn við ákjósanlegan styrk, svo sem aschitosan, funal elicitor (Fusarium solani), metýljasmonat og salisýlsýra (Cheng o.fl. 2006; Lu og Mei2003; Xu o.fl. 2005). Blanda sjaldgæfra jarðefnaþátta bætti frumuvöxt og PeG framleiðslu, 26 prósent og 167 prósent hærri en viðmiðunarhópurinn, í sömu röð (Ouyanget al. 2003b). Endurtekin elicitation með einum elicitor jók einnig PeG framleiðslu verulega (Cheng o.fl. 2005, 2006). Það er góður valkostur til að fá hámarks lífmassa og PeG framleiðslu með því að bæta við mismunandi elicitorum á mismunandi stigum. Þegar 25 lM Put og 10 lM Ag plús var bætt við á 8. degi og 16. degi, í sömu röð,echinacosideframleiðsla (1,7 gl–1) og akteósíðframleiðsla (0.4 gl–1) náði hámarki, sem var hærra en frá stakri Put eða Ag plús útköllun sem og fyrri skýrslur.

Frá: ' Umbætur áechinacosideogakteósíðframleiðsla með tveggja þrepa framköllun í frumusviflausnarrækt afCistanche deserticola' eftirWen-Hao Chen o.fl

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Heimildir

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Þátttaka pólýamíns í viðbrögðum plantna við abiotic streitu. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Aukin framleiðni ginsenosíðs með blöndu af etefóni og metýljasmonati í ginseng (Panax ginseng CA Meyer) tilviljunarrótarrækt. Líftækni Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Hlutverk pólýamíns í frumumyndun plantna og líftæknilegra nota þeirra. Plant Cell Tissue Organ Cult 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Endurtekin framköllun eykur uppsöfnun fenýletanóíð glýkósíða í frumusvöðvaræktunCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Endurbót á nýmyndun fenýletanóíð glýkósíða íCistanche deserticolafrumusviflausnarræktun með kítósan elicitor. J Biotechnol 121:253-260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Virkni amínoxíðasa í þróun og vörn plantna. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin og vetnisperoxíð hefja bæði forritaðan frumudauða en hafa mismunandi áhrif á tjáningu varnargena í Arabidopsis sviflausnarræktun. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Næringarefnaþörf sviflausnarækta sojabaunarótarfrumna. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Breytingar á
virkni askorbatperoxidasa, katalasa, guaiacol peroxidasa og superoxíð dismutasa í algengum baunahnúðum (Phaseolus vulgaris) undir saltstreitu. J Plant Physiol 162:929–936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Bætt taxólframleiðsla með samsetningu örvandi þátta í sviflausnarfrumuræktun Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262–269
Koukol J, Conn EE (1961) Umbrot arómatískra og eiginleika phenylalanine deaminasa Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003) Endurbætur á phenylethanoid glýkósíðframleiðslu með sveppavaldi í frumusviflausnarræktunCistanche deserticola. Líftækni Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Myndun fenýletanóíð glýkósíða meðCistanche deserticolakall sem vaxið er á traustum miðlum. Líftækni Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Áhrif sjaldgæfra jarðefnaþátta á vöxtCistanche deserticolafrumur og myndun fenýletanóíð glýkósíða. J Líftækni 102:129-134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Pólýamín hindra NADPH oxidasa-miðlaða súperoxíðmyndun og putrescin kemur í veg fyrir forritaðan frumudauða af völdum pólýamínoxíðasa myndaðs vetnisperoxíðs. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Framfarir í rannsóknum á lyfjafræðilegri virkni í plöntumCistancheHoffing og Link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Pólýamín draga úr oxunarskemmdum af völdum salts með því að auka virkni andoxunarensíma og draga úr lípíðperoxun í Virginia furu. Plöntuvaxtarreglur 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oxunarálag og sum andoxunarefnakerfi í súru regni meðhöndluð hafa verið plöntuverndarhlutverk utanaðkomandi pólýamína. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Mat á greiningaraðferðum til að spá fyrir um hagkvæmni eftir frystingu. Plant Cell Tissue Organ Cult 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2– frá oxunarbyssunni af völdum elicitor er nauðsynlegt til að koma af stað fenýlalanín ammóníak-lyasa virkjun og catharanthine myndun í Catharanthus roseus frumuræktun. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Áhrif metýljasmónats og salisýlsýru á nýmyndun fenýletanóíð glýkósíða í sviflausnarræktum afCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Merkjaflutningsleið fyrir oxandi springa og taxólframleiðslu í sviflausnarræktun Taxus Chinensis var. mairei framkallað af fásykru frá Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Leiklistarleiðir elicitors á Taxol lífmyndunarferli og samlegðaráhrif þeirra. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Elicitor merkjaflutningur sem leiðir til framleiðslu á efri umbrotsefnum plantna. Líftækni Adv 23:283–333