Greining á vetnisperoxíði móttækilegum ESTum sem taka þátt í fenýletanóíð glýkósíð lífmyndun í Cistanche Salsa frumurækt

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN o.fl

Ágrip
Vetnisperoxíð er áhrifaríkt lífrænt framkallandi efni sem getur framkallað efri nýmyndun umbrotsefna í plöntum. Við sýnum það í frumusviflausnarræktun saltþolinnar lækningajurtarCistanchesalsa, framleiðsla lífvirkra íhlutafenýletanóíðglýkósíð(PeGs) var aukið eftir H2O2 meðferð. Til að bera kennsl á gen sem tengjast PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun undir áhrifum af H2O2, bjuggum við bælandi frádráttarblendingasafni af H2O2 móttækum genum með því að notaCistanchesalsafrumulínu og auðkenndu 105 tjáða röð merki (EST) og 85 gen. EST bókasafn hagnýtur skýring og gena verufræði greiningar sýndu gen tengd ýmsum streituviðbrögðum, nýmyndun efri umbrotsefna og umritunarstjórnun. Meðal þeirra greindum við tvö gen sem tengjast PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndunarferill (4-kúmarat kóensím A lígasi og cinnamat 4-hýdroxýlasi), og tveir umritunarþættir af gerðinni WRKY. Tjáning valinna gena eftir H2O2 meðferðina var greind með RT-qPCR. Snemma aukin umritun PeG(fenýletanóíðglýkósíð)gen í lífmyndunarferlum eftir meðferð leiddi í ljós að H2O2 framkallaði PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun með uppstjórnun á lykilgenum þess.
Viðbótar leitarorð: cinnamate-4-hýdroxýlasi, 4-kúmaratkóensím A lígasi, bæling frádráttarblendingar.Cistanchesalsa. fenýletanóíðglýkósíð.

Kynning

Cistanchesalsaer fjölært plöntusníkjudýr á rót Haloxylos ammodendrun og vex á eyðimerkursvæðinu í vesturhluta Kína. Í aldir,Cistanchetegundir hafa verið notaðar sem hefðbundin náttúrulyf (Wang o.fl. 2012). Lífvirkir þættir erufenýletanóíðglýkósíð(PeGs) sem hafa ótrúleg áhrif á úthreinsun hvarfefna súrefnistegunda (ROS), geislavarnir, aukið ónæmi og öldrun (Nan o.fl. 2013). PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun íCistancheer hafin frá fenýlalaníni (mynd 1 fylgiskjal) og tilbúin koffínsýra er glýkósýluð frekar til að mynda ýmis PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)(Wang o.fl. 2012). Þrjár helstu PeGs(fenýletanóíðglýkósíð), echinacoside, acteoside og 2'-acetylacteoside, eru talin vera virkastu efnisþættirnir íCistanche(Kobayashi o.fl. 1984). Til þess að auka innihald þeirra íCistanchefrumurækt, hafa ýmsir framkallar verið prófaðir þar á meðal kítósan, putrescin, Ag plus og osmótísk streita (Ouyang o.fl. 2005a,b, Cheng o.fl. 2005, 2006, Liu o.fl. 2007, Liu og Cheng 2008). Hins vegar eru gen sem taka þátt í PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun íCistanche, aðallega gen fyrir fenýlalanín umbrotsferli, hafa sjaldan verið auðkennd. Aðeins gen sem kóðar fenýlalanín ammoníak-lyasa (PAL) var nýlega greint í Cistanche deserticola (Hu o.fl. 2011). Önnur gen sem kóða td cinnamate-4-hýdroxýlasa (C4H), sem gæti hvatt umbreytingu cinnamate í kúmarsýru, og 4-kúmarat kóensím A lígasa (4CL), nauðsynlegt gen fyrir lignín og flavanóíð. lífmyndun, hafa ekki fundist íCistanche.
Við notuðum frumuræktina afCistanchesalsaað læra PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun og tengd genatjáning. Við rannsökuðum einnig áhrif áhrifaríks elicitor H2O2 á PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun. Ennfremur að finna snemma móttækileg gen sem taka þátt í PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun, framkvæmdum við bælingu frádráttarbræðslu (SSH) til að smíða cDNA safn af H2O2-móttækum genum.

Mynd 1. Afstæð genatjáning ákvörðuð með RT-qPCR eftir H2O2 meðferð. CsWRKY1 - WRKY umritunarstuðull (Contig07), CsC4H1 - cinnamate 4-hýdroxýlasi (Contig09), Cs4CL1 - 4-kúmarat: lígasa (Contig03), CsHSP1 - hitasjokkprótein 70 kDa (Contig 01), og CsSOD1 - súperoxíð dismutasi (Contig16). Frumur voru meðhöndlaðar með 80 ug dm-3 H2O2 í fljótandi miðli í 2 klst og tjáning borin saman við samanburðarhóp sem var meðhöndluð með vatni. Þýðir plús - SD af þremur líffræðilegum endurtekningum; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

efni og aðferðir

CS2001 frumulínan var stofnuð úr krónublöðum afCistanchesalsa(CA Mey.) Beck safnað í Neimenggu héraði og undirræktað. Ræktunaraðferðin var svipuð bókun sem birt var áður (Liu o.fl. 2007). Almennt var fastur Murashige og Skoog (1962; MS) miðill notaður til undirræktunar og fljótandi miðill fyrir PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun (það var breytti MS miðillinn sem bætt var við 30 g dm-3 glúkósa og 2.0 mg dm-3 indól-3-ediksýru). Fyrir H2O2 meðhöndlun voru 5.0 ± 0,2 g af frumum á hröðum vaxtartíma, venjulega 20 til 30 d. eftir að þær voru undirræktaðar í fasta miðlinum, sáð í 50 cm3 fljótandi miðil í 250 cm3 Erlenmeyer flösku og ræktuð í myrkri með eða án mismunandi H2O2 styrks. PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)innihald eftir 10 d framleiðslu með H2O2 var greint í samræmi við aðferð sem birt var áður (Liu o.fl. 2007) sem byggði á öfugfasa hágæða vökvaskiljun með metanól halla skolun.

Frumunum 2 klst eftir H2O2 meðferðina var safnað úr miðlinum með síupappír með Büchner trekt og síðan voru þær frystar í fljótandi köfnunarefni og malaðar í duft. Hver 2 g af frumudufti voru leyst með blöndu af 1 cm3 af 2-merkaptóetanóli, 1 cm3 af 200 g dm{{10}} sarcosyl, og 8 cm3 af GTC jafnalausn (5 M guanidiníumísóþíósýanat, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM þíóþvagefni og 10 mM díþíóþrítól). Frumurnar voru síðan ræktaðar á ís í 15 mínútur, síðan var 1/3 rúmmáli af 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, bætt við og frumurnar ræktaðar á ís í 15 mínútur og síðan skilið í skilvindu við 15 000 g í 15 mínútur . Fljótandi vökvanum var bætt út í jafnt rúmmál af ísóprópanóli til að fella út heildar-RNA. Heildar-RNA var hreinsað frekar með RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Bandaríkjunum) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Messenger RNA var einangrað úr heildar-RNA með því að nota Oligotex mRNA midi kit (Qiagen).

fenýletanóíðglýkósíðinnCistancheSalsa

SSH safn var búið til úr viðmiðunarhópi og 30 prósent H2O2- komu fram frumusýni 2 klst. eftir framköllun með því að nota PCR-valið cDNA frádráttarsett (Clontech, Mountain View, Bandaríkjunum). Til að byggja upp bókasafnið voru vörurnar hreinsaðar sérstaklega með því að nota hlauphreinsibúnað (Qiagen) og klónaðar í pGEM vektor með því að nota TA klónunarsett (Tiangen, Peking, Kína). Plasmíð frá óháðum klónum voru einangruð og raðgreind með T7 grunni. Allar tjáðar raðmerki (EST) raðir úr safninu (með vektorröðunum fjarlægðar) voru notaðar til samsetningar með CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). ESTs voru flokkuð í contigs og singletons; þau voru notuð til samkynhneigðarleitar með því að nota BLASTx forritið á NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Raðir voru síðan merktar, greindar og flokkaðar í samræmi við genaverufræði (GO) hugtök með því að nota Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Rauntíma magn pólýmerasa keðjuverkun (RT-qPCR) var framkvæmd samkvæmt Bustin o.fl. (2009). cDNA sýnin voru mynduð með því að nota PrimeScript RT hvarfefnasett (Takara, Dalian, Kína) úr 0,5 ug af heildar RNA. RT-qPCR var framkvæmt með því að nota SYBR Premix Ex Taq II og ROX plús pökkum (Takara) á ABI 7300 rauntíma PCR kerfi (Applied Biosystems, Foster City, Bandaríkjunum) með þremur tæknilegum endurteknum. Grunnur var hannaður með því að nota Primer3 hugbúnaðinn á netinu í samræmi við leiðbeiningar frá Takara; primers notaðir í þessari rannsókn eru skráðir í töflu 1 Suppl. Genatjáningin var eðlileg í 18S RNA, tjáning þess var stöðug í öllum sýnunum.

Niðurstöðurnar voru greindar með því að nota R útgáfu 3.1.1, mikilvægi mismuna var sannreynt með t-prófi nemandans.

Niðurstöður

Vetnisperoxíð olli lífmyndun allra þriggja helstu PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)innCistanchesalsasviflausnarfrumur (tafla 1) en hafa engin augljós áhrif á frumuvöxt (mynd S2). Innihald echinacosides jókst þegar eftir 10 ug dm-3 H2O2 meðferð (P < 0.05),="" meiri="" aukning="" var="" skráð="" eftir="" 20="" ug="" dm="" -3="" h2o2="" meðferð="" (p="">< 0,01),="" og="" mesta="" aukningin="" var="" eftir="" 40,="" 80="" og="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" meðferðirnar.="" svipaðar="" niðurstöður="" eru="" sýndar="" fyrir="" akteósíð,="" en="" innihald="" þess="" náði="" hámarki="" eftir="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" meðferðina.="" lífmyndun="" 2'-asetýlakteósíðs="" var="" minna="" næm="" fyrir="" h2o2="" meðferð;="" marktæk="" aukning="" á="" innihaldi="" þess="" (p="">< 0,05)="" var="" við="" h2o2="" styrk="" yfir="" 40="" ug="" dm-3.="" eftir="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" meðferð,="" magn="" allra="" þriggja="" helstu="">(fenýletanóíðglýkósíð)jókst verulega (P < 0.01)="" yfir="" stýringu.="" þess="" vegna="" var="" þessi="" styrkur="" notaður="" í="" frekari="">
Til að búa til safn auðgað fyrir snemma móttækileg gen sem eru uppstýrð af H2O2, notuðum við cDNA fráCistanchesalsasviflausnarfrumur meðhöndlaðar með 80 ug dm-3 H2O2 í 2 klst. Einlota raðgreining 129 raðbrigða klóna í SSH safninu gáfu 105 hrein EST eftir útilokun vektorraðar. Þessar skýru EST voru notaðar til samsetningar af CAP3 og 18 contigs og 67 singletons voru mynduð (tafla 2). Þannig voru 85 gen einangruð í þessu safni. Meðallengd hinna hreinu 105 EST var 527 bp, sem er fullnægjandi fyrir virkniflokkun sem byggir á raðlíkindum.

fenýletanóíðglýkósíðinnCistancheSalsa

Öll 85 genin sem fengust í safninu voru sótt með BLASTx gegn GenBank óþarfa próteingagnagrunni fyrir raðlíkingu (E-gildi minna en eða jafnt og 0.001). Tuttugu og eitt gen sýndu engin hits í gagnagrunninum, þau gætu verið sérstök fyrirCistanchesalsa. Niðurstöður með BLASThits voru fluttar inn í Blast2GO hugbúnaðinn fyrir frekari GO og KEGG ferli auðgunargreininga. Af 64 genum með BLAST hits voru 50 merkt samkvæmt lýsingu á samhæfum genum frá öðrum tegundum. Skýrt gen voru nefnd samkvæmt lýsingu á BLAST hits. GO greiningin (Mynd 3 Suppl.) sýnir að meðal þessara 50 gena voru 14 gen sem tóku þátt í svörun við áreiti og yfir 30 gen tengd efnaskiptaferlum (Tafla 1 og 2). Meðal þessara gena voru tvær PeG lífmyndunarferlar genasamstæður einangraðar eins og búist var við: 4-kúmaratkóensím A lígasi (nefndur Cs4CL1: Contig03) og cinnamat 4-hýdroxýlasi (nefndur CsC4H1: Contig14). Ennfremur var RT-qPCR framkvæmt til að staðfesta framkallaða tjáningu gena úr safninu eftir H2O2 meðferðina.

Til að staðfesta að nauðsynleg gen sem auðkennd voru úr SSH safninu svöruðu H2O2 meðferð, tjáning tveggja PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)gen tengd lífmyndunarferlum (Cs4CL1, CsC4H1), tvö ROS framkölluð gen (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), og eitt WRKY fjölskyldu umritunarþáttalíkt gen (CsWRKY1: Contig 07) voru mæld með RT-qPCR með H2O2 (mynd 1). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 og CsWRKY1 tjáningar voru uppstýrðar meira en 15-falt, 3-falt, 45-falt og 4-falt, í sömu röð, 2 klst. eftir H2O2 meðferð. Tjáning CsHSP1 breyttist aðeins 1,8 falt eftir H2O2 meðferðina.
Tímaferli tjáninga CsWRKY1, CsC4H1 og Cs4CL1 eftir H2O2 meðferðina var greint frekar með RT-qPCR (mynd 2). CsC4H1 og Cs4CL1 tjáningin var mjög aukin (meira en 80-falt og 50-falt, í sömu röð) eftir 16- klst. meðferðina og síðan lækkuð eftir 32 klst. Tjáning CsWRKY1 var uppstillt meira en 20-falt eftir 4 klst. og síðan minnkað úr 8 klst. síðar (mynd 2).

Mynd 2. Hlutfallsleg tjáning CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) og Cs4CL1 (C) á mismunandi tímum eftir meðferð með 80 ug dm-3 H2O2. Tjáningin voru eðlileg í stjórn; (meðhöndluð með vatni). Þýðir plús - SD af þremur líffræðilegum endurtekningum; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Umræða

Vetnisperoxíð er vel þekkt plöntuframleiðandi sem sýnir ýmis áhrif á plöntur. Eins og ROS getur það framkallað ROS hreinsunarkerfið sem samanstendur af súperoxíð dismutasa, katalasa, peroxidasum osfrv., og það þjónar sem niðurstreymismerki um salt, osmósu og ofþornun

leggur áherslu á (Wi o.fl. 2006, Kar 2011, Furlan o.fl. 2013, Sathiyaraj o.fl. 2014). Lagt var til að H2O2 myndun í plöntum fylgdi framkölluð efri efnaskiptalífmyndun íCistanchesalsafrumurækt. Eins og búist var við sýna niðurstöður okkar að PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun íCistanche salsafrumurækt var framkölluð eftir H2O2 meðferðina (tafla 1). Innihald þriggja helstu PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)aukist eftir H2O2 meðferðina sem gefur til kynna lykilhlutverk þess í PeGs lífmyndun. Gen auðguð í SSH bókasafninu bentu enn frekar til áhrifa þess á PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)örvun lífmyndunar íCistanche salsa.

Mörg þekkt H2O2-móttækileg gen, svo sem askorbatperoxíðasa (CISTH069, Karyotou og Donaldson 2005), h-kínón oxidoreductasi (CISTH125, Bello, o.fl. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah o.fl. 2014), og sjúkdómsþolssvörunargen (Contig10, Nanda, o.fl. 2010), voru auðguð í SSH safninu (Tafla 3, Tafla 2 Suppl.). Sum þessara dæmigerðu ROS móttækilegra gena með framkallaða tjáningu eftir H2O2 meðferðina voru staðfest frekar með RT-qPCR (Mynd. 1 og 2) sem gefur til kynna að hæft SSH bókasafn hafi verið smíðað hér. Tvö PeG lífmyndunarferli gen, CsC4H1 og Cs4CL1, fundust einnig í þessu safni og þessar tvær genatjáningar voru framkallaðar af H2O2 meðferðinni á tímaháðan hátt (mynd 2). Það bendir til þess að H2O2 meðferðin hafi valdið PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun á erfðafræðilegu stigi með stjórnun PAL-ferils gena. Hins vegar voru PAL og önnur niðurstreymis PeGs lífmyndunargen (Wang o.fl. 2012) ekki auðkennd í SSH bókasafninu; það gæti verið vegna þess að bókasafnið hefur ekki verið raðað nægilega vel. Tengsl milli CsC4H1 og Cs4CL1 framkallaðrar tjáningar og aukinnar PeGs lífmyndunar eftir H2O2 meðferð ætti að skýra með frekari greiningu.

Auk PAL-ferilgenanna sem framkölluð voru af H2O2 meðferðinni fundust tveir WRKY fjölskyldu umritunarþættir (CsWRKY1, CsWRKY2) í SSH safninu (Tafla 3 og Tafla 2 Suppl.), og CsWRKY1 framkölluð tjáning var staðfest með RT-qPCR . Tjáning þess var móttækilegur fyrir H2O2 meðferð fyrr en tjáning tveggja PAL ferli gena, Cs4CL1 og CsC4H1 (mynd 2). Frá fyrri rannsóknum hefur verið vart við samtjáningu sumra WRKY umritunarþátta og PAL ferils gena í hrísgrjónum (Gupta o.fl. 2012). Ennfremur er tjáning PAL gena uppstýrð í OsWRKY03 oftjáningarstökkbrigði (Liu o.fl. 2005). Ofangreindir tveir WRKY fjölskyldu umritunarþættir gætu einnig tekið þátt í PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun íCistanchesalsa. Athyglisvert er að ofþornunartengd EST (CISTH067, CISTH064) fundust í SSH bókasafninu, sem gæti bent til þess að H2O2 meðferðin hafi verið tengd við ofþornunarsvörun genatjáningu íCistanchesalsaeins og sést í öðrum plöntum (Schmidt o.fl. 2013, Zhou o.fl. 2013). Eitt gibberellín (GA) boðtengt gen, gibberellin viðtaka gid1b-líkt (CISTH092), var auðkennt í SSH safninu sem gefur til kynna tengingu GA boðunar og H2O2 meðferðar íCistanchesalsa, sem einnig var greint frá í byggi (Bahin o.fl. 2011). Hins vegar er þörf á fleiri rannsóknum til að staðfesta hvort þessi gen séu tengd PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun. Annað en genin sem nefnd eru hér að ofan sýnir SSH bókasafnið sem er smíðað hér einnig gen með eða án BLAST hits. Það bætir skilning okkar á H2O2 áhrifum á C. salsa og gefur í fyrsta lagi upplýsingar um gena þess sem taka þátt í PeGs lífmyndun.

Að lokum mátum við áhrif H2O2 á PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)innleiðing íCistanchesalsafrumurækt. SSH safnið var smíðað eftir H2O2 meðferðina og tjáning valinna gena var staðfest með RT-qPCR. Tvö PeG lífmyndunarferil tengd gen og önnur H2O2-viðbrögð gen voru auðkennd. Þessar niðurstöður munu auka skilning okkar á H2O2-framkölluðum PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)lífmyndun íCistanchesalsatil sameindastigs, veita upplýsingar fyrir genameðferð áCistanchesalsafrumuræktun til að bæta PeGs(fenýletanóíðglýkósíð)framleiðslu.

Úr: „Auðkenning á vetnisperoxíðsvörun EST sem taka þátt í nýmyndun fenýletanóíð glýkósíðs í Cistanche salsa frumurækt“ afJ. CHEN o.fl.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN o.fl. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-ár

Heimildir

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Víxlun á milli hvarfgjarnra súrefnistegunda og hormónaboðaleiða stjórnar korndvala í byggi. - Plöntufrumuumhverfi. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Hvarfgjarnar súrefnistegundir sem myndast af vöru sem framkallar hitalost (Hsp) stuðlar að Hsp70 framleiðslu og Hsp{{1} }miðlað verndandi ónæmi í Artemia franciscana gegn sjúkdómsvaldandi vibrios. - Dev. Samgr. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Tjáning NAD(P)H: kínónoxídóreduktasa 1 í HeLa frumum - hlutverk vetnisperoxíðs og vaxtarfasa. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Stöðlun qPCR og RT-qPCR. - Genet. Eng. Líftækni. Fréttir 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola frumu sviflausnir:fenýletanóíðglýkósíðlífmyndun og andoxunarvirkni. - Process Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Umbætur áfenýletanóíðglýkósíðlífmyndun íCistanchedeserticola frumufjöðrunarræktun með kítósan elicitor. - J. Líftækni. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abssisínsýra miðlar vetnisperoxíðframleiðslu í hnetum af völdum vatnsstreitu. - Biol. Planta. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Eina virka sprengiþolsgenið Pi54 virkjar flókið varnarkerfi í hrísgrjónum. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Sameindalýsing á fenýlalanín ammoníak-lyasa gen fráCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Plöntuviðbrögð við vatnsstreitu: hlutverk hvarfgjarnra súrefnistegunda. - Plant Signal Behavior 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Ascorbate peroxidase, hreinsiefni vetnisperoxíðs í glýoxýsómahimnum. - Bogi h. Biochem. Lífeðlisfræði. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Rannsóknir á innihaldsefnumcistancheer herba. 4. Einangrun og uppbygging 2 nýrra fenýlprópanóíð glýkósíða, cistanoside-C og cistanoside-D. - Chem. Pharm. Naut. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Aukning áfenýletanóíðglýkósíðlífmyndun í frumuræktun afCistanchedeserticola af osmósuálagi. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Bætt uppsöfnunfenýletanóíðglýkósíðmeð undanfara fóðrun til sviflausnarræktunar afCistanchesalsa. - Lífefnafræði. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, hrísgrjónumritunarvirkjari sem virkar í varnarboðaleið framan við OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Endurskoðaður miðill fyrir hraðan vöxt og lífgreiningar með tóbaksvefjaræktun. - Lífeðlisfræði. Planta. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenýletanóíðglýkósíðmeð bólgueyðandi virkni frá stönglum afCistanchedeserticola ræktuð í Tarim eyðimörkinni. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Hvarfgjarnar súrefnistegundir við fyrstu samskipti plantna og örvera. - J. Samþ. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Aukin framleiðsla áfenýletanóíð glýkósíðmeð forvera fóðrun í frumuræktun áCistanchedeserticola. - Process Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Bætt framleiðsla áfenýletanóíðglýkósíðafCistanchedeserticola frumur ræktaðar í innri lykkju loftlyftu lífreactor með sigti riser. - Ensím Microbiol. Tækni. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Líffærafræðileg og vefjafræðileg lýsing á haustorium in vitro frá rótum Castilleja tenuiflora. - Biol. Planta. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Aðlögun vetnisperoxíðs eykur saltþol með því að virkja varnartengd prótein í Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 stjórnar hvarfgjörnum súrefnistegundaháðum merkjum við upphafssvörun við saltstreitu
í hrísgrjónum. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": umsögn. - Amer. J. höku. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Útfellingarmynstur vetnisperoxíðs í laufslíðum hrísgrjóna undir saltálagi. - Biol. Planta. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 stjórnar þurrkastreituviðbrögðum og munnopnun af bláu ljósi með hindra uppsöfnun hvarfgjarnra súrefnistegunda í Arabidopsis. - Plant Physiol. 162: 1030-1041, 2013.