Auðkenning ACOT13 og PTGER2 sem ný frambjóðandi gena af sjálfstætt ríkjandi fjölblöðrunýrnasjúkdómi í gegnum heila exóm raðgreiningu

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Na Du¹, Dan Dong³, Luyao Sun¹, Lihe Che¹, Xiaohua Li¹, Yong Liu^2*†og Bin Wang^1*†

Ágrip

Bakgrunnur:Autosomal dominant polycysticnýrusjúkdómur (ADPKD) er algengasti einvaldurinnnýruröskun. Helmingur sjúklinganna myndi hægt og rólega þróast yfir í nýrnasjúkdóm á lokastigi. Hins vegar vantar enn hugsanlegt markmið fyrir ADPKD meðferð.

Aðferðir:FjórirADPKDsjúklingar og tveir heilbrigðir fjölskyldumeðlimir voru með í þessari rannsókn. Útlægu blóðsýnin voru fengin og prófuð með heild-exóm raðgreiningu (WES). Autosomal stökkbreytingum í ADPKD sjúklingum var haldið sem frambjóðandi stöðum. The Gene Ontology (GO), Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) auðgun, og prótein-prótein víxlverkunarnet (PPI) greiningar voru gerðar með cluster roller R pakka. Gagnapakki sem innihélt 18 ADPKD sjúklinga og þrjú eðlileg sýni var hlaðið niður úr Gene Expression Omnibus (GEO) gagnagrunninum og greind með limma R pakkanum.

Aðferðir:FjórirADPKDsjúklingar og tveir heilbrigðir fjölskyldumeðlimir voru með í þessari rannsókn. Útlægu blóðsýnin voru fengin og prófuð með heild-exóm raðgreiningu (WES). Autosomal stökkbreytingum í ADPKD sjúklingum var haldið sem frambjóðandi stöðum. The Gene Ontology (GO), Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) auðgun, og prótein-prótein víxlverkunarnet (PPI) greiningar voru gerðar með cluster roller R pakka. Gagnapakki sem innihélt 18 ADPKD sjúklinga og þrjú eðlileg sýni var hlaðið niður úr Gene Expression Omnibus (GEO) gagnagrunninum og greind með limma R pakkanum.

Ályktanir:Með blöndu af WES, genatjáningu og PPI netgreiningum greindum við ACOT13 og PTGER2 sem hugsanlegaADPKD-tengd gen.

Leitarorð:Heild exóm raðgreining, genstökkbreytingar, fjölblöðrunýrusjúkdómur, ACOT13, PTGER2

Cistanche tubulosa kemur í veg fyrir nýrnasjúkdóm, smelltu hér til að fá sýnishornið

Kynning

Fjölblöðrunýrusjúkdómur (PKD) er hópur einhæfra sjúkdóma og er algeng orsök nýrnasjúkdóms á lokastigi. Flestir fullorðnir sjúklingar eru fyrir áhrifum af autosomal dominant form (ADPKD), en autosomal recessive polycysticnýrusjúkdómur (ARPKD) er sjaldgæfari form sem kemur venjulega fram á burðarmáli eða snemma á barnsaldri [1]. Stökkbreytingar í PKD1 og PKD2, sem kóða polycystin 1 og 2 (PC1 og PC2) prótein, eru algengustu orsakir ADPKD. PC2, katjónarás, tilheyrir skammvinnum viðtakamöguleikum (TRP) fjölskyldu jónaganga [2]. Greint var frá því að gallar í PKD2 kveiki á breytingum á orkuefnaskiptum hvatbera [3]. hlutverk PC1 og PC1PC2 flókins eru illa skilin [4]. Þrátt fyrir að PKD sé arfgengt einhæft er það misleitt í svipgerð, genum og samsætu [1], og 7 prósent afADPKDfjölskyldur eru erfðafræðilega óleystar [5]. Þar að auki eru sameindakerfin sem liggja að bakinýruvanstarfsemisem stafar af stökkbreytingum í PKD genum og lífeðlisfræðilegri virkni polycystin próteina eru einnig enn óljós [6].

1 og 2 (PC1 og PC2) prótein eru algengustu orsakir ADPKD. PC2, katjónarás, tilheyrir skammvinnum viðtakamöguleikum (TRP) fjölskyldu jónaganga [2]. Greint var frá því að gallar í PKD2 kveiki á breytingum á orkuefnaskiptum hvatbera [3]. hlutverk PC1 og PC1PC2 flókins eru illa skilin [4]. Þrátt fyrir að PKD sé arfgengt á einhæfan hátt er það misleitt í svipgerð, genum og samsætu [1], og 7 prósent ADPKD fjölskyldna eru erfðafræðilega óleyst [5]. Ennfremur eru sameindakerfin sem liggja að baki nýrnabiluninni sem stafar af stökkbreytingum í PKD genum og lífeðlisfræðilegri virkni pólýcystínpróteina enn óljós [6].

Hér gerðum við WES með því að nota blóðsýni fjögurra ADPKD sjúklinga og tveggja heilbrigðra fjölskyldumeðlima til að greina breytileika gena þeirra. Að auki var genatjáningargagnasafn sem innihélt 18 ADPKD sjúklinga og þrjú eðlileg sýni fengin úr Gene Expression Omnibus (GEO) gagnagrunninum. Með samþættum greiningum á stökkbreytingum gena, tjáningu gena, auðgun genavirkni og prótein-prótein víxlverkun (PPI), greindum við tvö gen (ACOT13 og PTGER2) sem hugsanlega tengdust meingerð ADPKD.

efni og aðferðir

Klínískar upplýsingar

Þessi rannsókn var samþykkt af siðanefnd á staðnum (samþykkisnúmer: 2019-307). ADPKD sjúklingur var meðhöndlaður á sjúkrahúsinu okkar og fimm meðlimir þessarar fjölskyldu voru með í þessari rannsókn. Þessi sjúklingur hafði sögu um fjölblöðrunýru sjúkdómur, fjölblöðrusjúkdómur í lifur og nýrnasteinar í 13 ár (Viðbótarskrá 1: Tafla S1). Ættbók þessarar fjölskyldu er sýnd á mynd 1A. Te N_2 var þessi proband. Te N_4, N_5 og N_6 voru allir ADPKD sjúklingar (svartir), en N_3 og N_1 voru heilbrigt fólk (hvítt) . Alls voru fjórir ADPKD sjúklingar og tveir heilbrigðir viðmiðunarhópar í rannsókn okkar. Klínísk einkenni þessa probands voru hiti, bakverkur og blóðmigu. Tölvusneiðmyndaskoðun (CT) á N_2 leiddi í ljós margar blöðrur í lifur og tvíhliða fjölblöðrunýra. Sumar meinsemdirnar voru flóknar blöðrur, með breytingum á hægra útflæði í kviðarholi sem hafði óskýrar útlínur og aukinn þéttleika (mynd 1B).

Heild exome raðgreining

Erfðamengi DNA var dregið úr útlægum blóðsýnum með því að nota DNA útdráttarbúnað (Tiangen Biotech, Peking, Kína) og exómin voru tekin með Agilent SureSelect Human All Exon V6 settinu (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) samkvæmt leiðbeiningunum af settunum. Raðgreining á heilu exómi var framkvæmd með Illumina Novaseq6000 tækjunum með pöruðum enda 150-bp raðgreiningarlestri. Hráar raðlestrar voru forunnar til að fjarlægja lággæða basana og lestur með því að nota hraðvirkt [11], ofurhraðan allt-í-einn FASTQ forgjörva, og sjálfgefna færibreytur voru teknar upp. Röð lesin voru samræmd við erfðamengi mannsins (Build-UCSC hg19) með BWA (Burrow–Wheeler Aligner, http://bio-bwa.sourceforge.net/) hugbúnaðinum. Tíu, einn núkleótíð fjölbreytileiki (SNP) og innsetning/eyðing (Indel) voru auðkennd með SAMtools hugbúnaðinum (http://samtools.sourceforge.net/). Með því að nota ANNOVAR hugbúnaðinn (http://annovar.openbioinformat ics.org/en/latest/user-guide/download/) var virkniskýring gerð fyrir auðkennda SNP og Indel til að rannsaka erfðafræðilegar staðsetningar þeirra og upplýsingar um afbrigði (Viðbótarskrá 2 : Tafla S2).

Skimun á frambjóðanda SNP/Indel fyrir ADPKD

Við fjarlægðum fyrst stökkbreytingar með hærri tíðni en 1 prósent í að minnsta kosti einum af gagnagrunnunum fjórum (1000g_all, esp6500si_all, gnomAD_ALL og gnomAD_ EAS). Tíu, stökkbreytingum í exonic eða splicing (10 bp andstreymis og downstream exon) stöðum var haldið. Lítil brot (<10 bp)="" non-frameshifting="" indel="" mutations="" in="" the="" repeat="" region="" were="" also="" removed.="" in="" addition,="" mutations="" that="" met="" one="" of="" the="" following="" conditions="" were="" retained:="" (a)="" te="" sites="" that="" were="" considered="" as="" harmful="" by="" at="" least="" half="" of="" the="" four="" software="" sift="" [12],="" polyphen="" [13],="" mutationtaster="" [14],="" and="" cadd="" [15]="" basing="" on="" the="" scores;="" (b)="" mutations="" that="" were="" predicted="" to="" affect="" the="" splicing="" by="" dbscsnv="" [16].="" ten,="" the="" genetic="" mutations="" that="" were="" classified="" into="" pathogenic="" and="" likely="" pathogenic="" ones="" according="" to="" the="" criteria="" and="" guidelines="" for="" grading="" clinical="" significance="" of="" single-gene="" mutations="" of="" american="" college="" of="" medical="" genetics="" and="" genomics="" (acmg,="" https://www.acmg.net/)="" were="" selected="" as="" candidate="" sites.="" for="" the="" screening="" of="" dominant="" genetic="" pattern,="" on="" the="" basis="" of="" mutation="" site="" filtering,="" the="" sites="" showing="" autosomal="" mutations="" in="" adpkd="" patients,="" which,="" however,="" could="" not="" be="" detected="" in="" normal="" controls="" were="" retained="" as="" candidate="">

Virka auðgun og PPI greiningar

MRNA tjáningarsniðsgögnum GSE7869 [18] var hlaðið niður úr GEO gagnagrunninum (https://ncbi.nlm. nih.gov/geo), sem greindist á grundvelli Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 Array . GSE7869 gagnasafnið innihélt 18 ADPKD sýni og þrjú venjuleg sýni. MRNA tjáningarsniðsgögnin voru greind með limma virkni pakkanum í R [19]. Mismunandi tjáð gen (DEGs) voru valin með því að nota þröskulda algildis mismunatjáningar (|Log2FC|) > 0.5 og P-gildi <>

tölfræðigreining

Tölfræðilegar greiningar voru gerðar með því að nota R hugbúnað v3.5.2. P-gildi < 0.05="" var="" talið="" tölfræðilega="" marktækt="" í="" öllum="" tölfræðilegum="">

Results

Mutatiáal landscape

Heildarfjöldi SNPs í sýnunum sex var einbeitt á milli 100,000 og 150,000 og þeir voru aðallega staðsettir á innrauða svæðinu, exon svæðinu og intergenic svæðinu (Mynd 2A). Heildarfjöldi Indels í sýnunum sex var samþjappaður á milli 15,000 og 20,000, og þessar Indels voru aðallega dreifðar á innra og innbyrðis svæði (mynd 2B). Næst könnuðum við landslag stökkbreytinga sem voru staðsettar á kóðunarsvæðinu. Þar af leiðandi innihéldu SNPs sex sýna á kóðunarsvæðinu aðallega nafnlausar, missense og stop-loss stökkbreytingar, þar sem uppsafnaður fjöldi þeirra var næstum 21,000 (Mynd 2C). Indels af sex sýnum á kóðunarsvæðinu samanstóð aðallega af nonframeshift_eyðingu og nonframeshift_innsetningu (mynd 2D)

Hugsanlegar stökkbreytingar og gen fyrir ADPKD

Sex stökkbreytt gen, þar á meðal AGRN, ACOT13, ADCY4, HEATR5A, PTGER2 og ADAM21, voru skimuð með ríkjandi erfðamynstri. Þær voru arfblendnar stökkbreyttar í ADPKD sýnum en ekki stökkbreyttar í venjulegum sýnum. Ekki hefur verið greint frá því að flest þessara gena tengist tilviki ADPKD. Á sama tíma voru 19 gen einnig valin í samræmi við skaðsemi stökkbreytinga, þar á meðal MUTYH, USH2A, HBS1L, GLI3, SBDS, SND1, ABCA2, RPS6KA4, FLVCR1, ATIC, SCN11A, ATP6V1A, GLRA1, PRMT5, PKD1CF, INSL5PT, INSL , og GPR143. Til að rannsaka sambandið milli þessara genastökkbreytinga og ADPKD, greindum við fyrst áhrif genastökkbreytinga á prótein. Þar af leiðandi höfðu öll þessi gen að minnsta kosti eina stökkbreytingu sem gæti haft áhrif á kóðun próteina, sem gefur til kynna hugsanlegt hlutverk þessara stökkbreytinga (tafla 1).

Verulega auðgað KEGG ferlar og GO skilmálar hugsanlegra ADPKD tengdra gena

Niðurstöður GO og KEGG auðgunargreininga á 25 mögulegum genum sem tengjast ADPKD eru sýndar á mynd 3A (líffræðilegt ferli), mynd 3B (frumuþáttur), mynd 3C (sameindavirkni) og mynd 3D (KEGG). . GO greining sýndi að þessi 25 gen auðguðust verulega í líffræðilegum ferlum (BP) frumuferlis eins lífveru og svörun við áreiti, frumuþáttum (CC) í plasmahimnu og frumujaðri og sameindavirkni (MF) anjónabindingar. Að auki leiddi KEGG ferlagreiningin í ljós að þessi 25 gen voru aðallega auðguð á hringlaga adenósínmónófosfat (cAMP) boðleiðum og ferlum í krabbameini.

ACOT13 og PTGER2 gætu verið frambjóðandi gen tengd ADPKD

PPI netgreiningin var gerð til að kanna tengslin á milli 25 hugsanlegra ADPKD-tengdra gena. Eins og sýnt er á mynd 3E, voru flest þessara gena óháð í netinu. ACOT13 hafði bein samskipti við bæði SBDS og ATIC; PTGER2, ADCY4 og INSL3 var spáð að hafa samskipti sín á milli (mynd 3E). Það sem meira er, ACOT13, PTGER2 og ADCY4 voru gen sem aðeins stökkbreyttu í ADPKD sjúklingum. , byggt á tjáningargögnum sem hlaðið var niður úr GEO gagnagrunninum, bárum við saman tjáningarstig ACOT13, PTGER2 og ADCY4 milli ADPKD sjúklinganna og eðlilegra viðmiðunarhópa. Í samanburði við venjuleg viðmið var tjáningarstig ACOT13 marktækt lægra hjá ADPKD sjúklingum (Mynd 4A), en PTGER2 sýndi hærra tjáningarstig hjá ADPKD sjúklingum (Mynd 4B). ADCY4 sýndi ekki marktækan tjáningarmun milli ADPKD sjúklinga og eðlilegra sýna (mynd 4C). Með því að sameina upplýsingarnar veltum við því fyrir okkur að ACOT13 og PTGER2 gætu verið frambjóðandi gen tengd ADPKD.

Umræða

ADPKD stafar af stökkbreytingu í öðru af tveimur genum -78 prósent tilvika stafar af stökkbreytingu í PKD1 á litningi 16 og 15 prósent tilvika eru af völdum stökkbreytingar í PKD2 á litningi 4 [20]. Blöðrumýrasjúkdómar hafa einnig verið kallaðir ciliopathies. Te PC1 og PC2 prótein, kóðuð af PKD1 og PKD2, eru bæði staðsett á aðal cilia og virka sem flæðiskynjarar í nýrum [21]. Í þessari rannsókn greindust skaðleg stökkbreyting í PKD1, auk annarra 18 þekktra skaðlegra gena, í sýnum ADPKD sjúklinga. Þar að auki voru sex stökkbrigði, þar á meðal AGRN, ACOT13, ADCY4, HEATR5A, PTGER2 og ADAM21, skimuð með því að nota ríkjandi erfðamynstur og flestir þeirra höfðu ekki áður verið viðurkenndir sem ADPKD-tengd sjúkdómsvaldandi gen.

Sjúkdómsvaldandi prótein í ADPKD eru aðallega ábyrg fyrir því að senda upplýsingar frá ytra umhverfi til frumanna [22]. Við greindum hugsanlega virkni 25 auðkenndra gena með GO og KEGG auðgunargreiningum. Niðurstöðurnar sýndu að BP í frumuferli eins lífveru, svörun við áreiti, sem og CCs í plasmahimnu og frumujaðri voru verulega auðguð. Að auki geta ADPKD frumur fært orkuframleiðslu sína frá oxandi fosfórýleringu yfir á aðrar leiðir og þessar breytingar á efnaskiptum frumna hafa komið fram sem einkenni ADPKD [6]. Breytingarnar á mótun orkuframleiðslu og nýtingar í ADPKD eru háðar nokkrum innri frumuboðaleiðum, svo sem AMP-virkjaðan próteinkínasa (AMPK), kalsíumboð í hvatberatengdum himnum, spendýramarkmið rapamýsínfléttu 1 (mTORC1), cAMP og cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-miðlaður jónaflutningur [23, 24]. Hér var cAMP merkjaleiðin auðkennd sem marktækt auðgað í þessum ADPKD sýnum. Þessar niðurstöður styðja áreiðanleika stökkbreytinganna sem við skimuðum. Á sama tíma, þrátt fyrir að hagnýtar upplýsingar hafi að hluta til komið í ljós með auðgunargreiningu, verðskulduðu frekari upplýsingar um 25 auðkenndu genin frekari könnun í ADPKD í framtíðinni.

Te PPI og mismunandi tjáningargreiningar bentu til þess að miðað við eðlilegt fólk, ACOT13 og PTGER2 voru stökkbreytt og mismunandi tjáð hjá ADPKD sjúklingum og gætu verið hugsanleg gen tengd ADPKD. ACOT13 prótein er meðlimur acyl-CoA þíóesterasa (Acts) ensíma, sem hvata hvarf vatnsrofs á fitusýrum acyl-CoA sameindum í frjálsar fitusýrur auk CoASH. ACOT13 er auðgað í oxandi vefjum og tengist hvatberum [25]. Lin o.fl. greint frá því að PC1 hafði áhrif á formgerð og virkni hvatbera, sem gæti gegnt lykilhlutverki við að stjórna starfsemi hvatbera og umbrotum frumna [26]. Að því er við vitum hafa ekki verið skýrslur um tengsl ACOT13 og ADPKD. Tjáning PTGER2 hefur áhrif á líffræðilega hegðun ýmissa tegunda illkynja æxla [27-29], sem ætti að tengjast auðgun ferla í krabbameini í KEGG greiningu. Að öðru leyti hefur hlutverk prostaglandíns E (2) (PGE2) í blöðrumyndun í erfðafræðilega óstaðbundnum líkönum af ADPKD þegar verið rannsakað. Liu o.fl. komst að því að PGE2 gæti virkjað afbrigðilegar boðleiðir í PC-1-skorti þekjuvef og miðlað fjölgun og klóríðseytingu í ADPKD blöðru nýrnaþekju [30]. Elberg o.fl. hafa gefið til kynna hlutverk PTGER2 í miðlun PGE2 áhrifa á að örva myndun blöðrunnar með samsettum lífefnafræðilegum, lyfjafræðilegum og virknigreiningum í ADPKD [31]. Þetta staðfestir enn frekar áreiðanleika nálgunar okkar á skimun á sjúkdómsvaldandi genum í ADPKD, sem gæti átt við í öðrum sjúkdómum. Það styður einnig óbeint áreiðanleika ACOT13 sem hugsanlegs ADPKD-tengts gens. Hins vegar gefur undirliggjandi líffræðileg virkni ACOT13 í ADPKD enn tilefni til frekari rannsókna.

Ályktanir

Í þessari rannsókn greindum við tvö möguleg ADPKD-tengd gen, þar á meðal ACOT13 og PTGER2, með því að greina WES niðurstöður fjögurra ADPKD sjúklinga og tveggja heilbrigðra fjölskyldumeðlima ásamt genatjáningargögnum úr GEO gagnagrunninum. Niðurstöður okkar gætu verið gagnlegar fyrir frekari rannsóknir á undirliggjandi meinafræðilegum orsökum ADPKD. Hins vegar, vegna fárra sjúklinga í rannsókninni okkar, er enn nokkur óvissa um hugsanlegt hlutverk ACOT13 og PTGER2, sem enn gefur tilefni til frekari rannsókna.

Heimildir

1. Bergmann C, Guay-Woodford LM, Harris PC, Horie S, Peters DJM, Torres VE. Fjölblöðru nýrnasjúkdómur. Nat Rev Dis Primers. 2018;4(1):50. https://doi. org/10.1038/s41572-018-0047-y.

2. Grieben M, Pike AC, Shintre CA, Venturi E, El-Ajouz S, Tessitore A, Shrestha L, Mukhopadhyay S, Mahajan P, Chalk R, o.fl. Uppbygging fjölblöðrunýrnasjúkdómsins TRP rás Polycystin-2 (PC2). Nat Struct Mol Biol. 2017;24(2):114–22.

3. Chumley P, Zhou J, Mrug S, Chacko B, Foreldri JM, Challa AK, Wilson LS, Berryhill TF, Barnes S, Kesterson RA, o.fl. Stytting PKHD1 og

PKD2 stökkbreytingar breyta orkuefnaskiptum. Am J Physiol Renal Physiol. 2019;316(3): F414–25.

4. Kim DY, Park JH. Erfðafræðilegir aðferðir ADPKD. Adv Exp Med Biol. 2016;933:13–22.

5. Cornec-Le GE, Olson RJ, Besse W, Heyer CM, Gainullin VG, Smith JM, Audrezet MP, Hopp K, Porath B, Shi B, o.fl. Einsameigin stökkbreyting á DNAJB11 veldur óhefðbundnum fjölblöðrunýrnasjúkdómi sem er ríkjandi í sjálfsfrumum. Am J Hum Genet. 2018;102(5):832–44.

6. Padovano V, Podrini C, Boletta A, Caplan MJ. Efnaskipti og hvatberar í rannsóknum og meðferð á fjölblöðru nýrnasjúkdómum. Nat Rev Nephrol. 2018;14(11):678–87. https://doi.org/10.1038/s41581-018-0051-1.

7. Bergmann C. Nýlegar framfarir í sameindagreiningu fjölblöðrunýrnasjúkdóms. Sérfræðingur séra Mol Diagn. 2017;17(12):1037–54. https://doi. org/10.1080/14737159.2017.1386099.

8. Yang Y, Muzny DM, Xia F, Niu Z, Persóna R, Ding Y, Ward P, Braxton A, Wang M, Buhay C, o.fl. Sameindaniðurstöður meðal sjúklinga sem vísað er til klínískrar raðgreiningar á heilum exómum. JAMA. 2014;312(18):1870–9.

9. Mallawaarachchi AC, Hort Y, Cowley MJ, McCabe MJ, Minoche A, Dinger ME, Shine J, Furlong TJ. Raðgreining heils erfðaefnis sigrar gervisamkvæmni til að greina sjálfsfrumna ríkjandi fjölblöðru nýrnasjúkdóm. Eur J Hum Genet. 2016;24(11):1584–90. https://doi.org/10.1038/ ejhg.2016.48.

10. Braun DA, Schueler M, Halbritter J, Gee HY, Porath JD, Lawson JA, Airik R, Shril S, Allen SJ, Stein D, o.fl. Heil-exóm raðgreining greinir orsakastökkbreytingar í meirihluta samkynhneigðra eða ættgengra tilvika með aukinni nýrnaómun í æsku. Nýra Int. 2016;89(2):468–75.

11. Chen S, Zhou Y, Chen Y, Gu J. hratt: ofurhraður allt-í-einn FASTQ forgjörvi. Lífupplýsingafræði. 2018;34(17):i884–90.

12. Kumar P, Henikof S, Ng PC. Að spá fyrir um áhrif kóðun ósamheita afbrigða á próteinvirkni með því að nota SIFT reiknirit. Nat Protoc. 2009;4(7):1073–81.

13. Flanagan SE, Patch AM, Ellard S. Notkun SIFT og PolyPhen til að spá fyrir um tap á virkni og ávinningi af virkni stökkbreytingum. Genet Test Mol Biomarkers. 2010;14(4):533–7.

14. Schwarz JM, Rodelsperger C, Schuelke M, Seelow D. MutationTaster metur möguleika á sjúkdómsvaldandi breytingum á röð. Nat aðferðir. 2010;7(8):575–6.

15. Itan Y, Shang L, Boisson B, Ciancanelli MJ, Markle JG, Martinez-Barricarte R, Scott E, Shah I, Stenson PD, Gleeson J, o.fl. Stökkbreytingarmikilvægisskerðing: viðmiðunarmörk genastigs fyrir afbrigðisspár. Nat aðferðir. 2016;13(2):109–10.

16. Liu X, Wu C, Li C, Boerwinkle E. dbNSFP v3.0: einn stöðva gagnagrunnur með hagnýtum spám og athugasemdum fyrir mannleg ósamheiti og splice-site SNVs. Hum Mutat. 2016;37(3):235–41.