Fosfórríkt mataræði veldur uppstýringu á Bmp2 og Spp1 MRNA tjáningu í rottum nýrum

Til að skýra fyrirkomulag þróunarnýrnabólgaframkallað af amataræði sem inniheldur mikið fosfór (P)., lögðum við áherslu á beinatengd prótein eins og beinformandi prótein 2 og osteopontin. Þessi rannsókn rannsakaði áhrif há-P mataræðis á mRNA tjáningu Bmp2 og Spp1 í rottum nýrum. Wistar rottum var skipt í tvo hópa og fengu viðmiðunarfæði (viðmiðunarhópur) eða há-P fæði (há-P hópur).Kalsíum í nýrumog P styrkur jókst marktækt í hópnum með hátt P miðað við samanburðarhópinn. MRNA tjáning bæði Bmp2 og Spp1 jókst marktækt í hópnum með hátt P miðað við samanburðarhópinn. Þessar niðurstöður benda til þess að mataræði með háu P veldur uppstjórnun á Bmp2 og Spp1mRNA í nýrum.

Leitarorð:fosfórríkt mataræði, nýrnabólga, Bmp2, Spp1,nýru, rotta

SMELLTU HÉR TIL AÐ FÁ NÁTTÚRULEGA LÍFFRÆNT CISTANCHE ÚTDRÆT MEÐ 25% ECHINACOSIDE OG 9% ACTEOSIDE FYRIR NÝRAVERKUN

Kynning

Nýrnakölkun (nephrocalcinosis)einkennist af kalsíum (Ca) útfellingum ínýrnabólga. Fosfór í fæðu(P), sérstaklega, er lykilþáttur í þróun þessarar röskunar. Sýnt hefur verið fram á að gjöf há-P mataræðis leiðir til aukinnar Ca styrks ínýruog Ca útfellingar í nýrnahlífinni1-6). Þrátt fyrir að áhrif há-P mataræðis á þróun nýrnakalsínósu hafi verið í brennidepli í áframhaldandi rannsóknum, er lítið vitað um gangverkið sem ber ábyrgð á þróun þessa röskunar. Þess vegna er nauðsynlegt að leysa þetta mál tímanlega.

Við greindum frá því að við vefjarannsókn með rafeindasmásjá, sáust hýdroxýapatit-líkir nálarlaga kristallar í nýrnapíplum hjá rottum sem fengu há-P fæði6, 7). Röntgengeisla örgreining benti til þess að Ca útfellingar af völdum há-P mataræðis samanstanda aðallega af Ca og P7). Þessar niðurstöður leiddu í ljós að Ca útfellingar af völdum há-P mataræðis eru mynd hýdroxýapatíts. Á grundvelli þessarar niðurstöðu gerum við ráð fyrir því að þróun nýrnakalsínósu sé stjórnað með kerfi svipað og við myndun beina. Þess vegna beindi þessi rannsókn að beinatengdum próteinum eins og beinformandi prótein 2 (BMP2). BMP2 er beinmyndandi þáttur sem sýnir beinmyndunarvirkni, 9). Það er athyglisvert að BMP2 var skilgreindur sem þáttur sem veldur utanlegs beinmyndun10, 11). Þannig gerðum við tilgátu um að ef BMP2 gegnir mikilvægu hlutverki í þróun nýrnabólsínsóttar, myndi tjáning þessa próteins í nýrum aukast með há-P mataræði. Þessi rannsókn miðar að því að ákvarða hvort mataræði með háu P hafi áhrif á mRNA tjáninguBmp2 í nýrum.

Á sama tíma greindi fyrri rannsókn okkar frá því að mataræði með hátt P eykur tjáningu á osteopontin (OPN) í nýrnapíplum með því að nota ónæmisvefjaefnafræðilega greiningu, sem bendir til þess að OPN gæti átt þátt í þróun Ca útfellinga af völdum há-P mataræðis12). Þess vegna rannsökuðum við breytingar á Spp1 mRNA tjáningu í nýrum líka.

Niðurstöður þessarar rannsóknar geta veitt dýrmæta innsýn í aðferðina sem er ábyrgur fyrir þróun nýrnakalsínósu af völdum há-P mataræðis.

efni og aðferðir

Dýr og mataræði. Þessi rannsókn var samþykkt af dýranotkunarnefnd Landbúnaðarháskólans í Tókýó og öllum dýrum var viðhaldið samkvæmt leiðbeiningum háskólans um umönnun og notkun tilraunadýra (samþykki nr. 300049).

Það er mikilvægt að hafa í huga að kvenkyns rottur þróa með sér nýrnakalsínósu frekar en karlkyns rottur13, 14). Að auki greindum við frá því að mataræði með háu P eykur tjáningu OPN í nýrnapíplum kvenkyns rotta12). Þessi rannsókn notaði síðan kvenkyns rottur sem tilraunadýr. Fjögurra vikna gamlar Wistar kvenkyns rottur (Clea Japan, Tókýó, Japan) voru geymdar í einstökum búrum úr ryðfríu stáli vírneti. Á tilraunatímabilinu voru búr staðsett í herbergi með stýrðri lýsingu undir 12-klst birtu: myrkri hringrás (ljós, 0800-2000 klst), hitastig 22 ± 1 gráðu og rakastig 60% til 65%.

Samsetning tilraunafæðis er sýnd í töflu 1. Tilraunafæði var útbúið með hliðsjón af AIN-93G mataræði15). Tilraunafæðið innihélt tvo mismunandi P styrkleika (viðmiðunarfæði, 0,3%; mataræði með háu P, 1,5%). P styrkur í há-P mataræði var stilltur á 1,5%, þar sem fyrri rannsóknir okkar sáu að astyrkur P í mataræðiaf 1,5% veldur alvarlegri nýrnabólsínósu6, 7, 12, 14) og hárri OPN tjáningu12). Allt tilraunafæði var með sama styrk af Ca (0,5%). Styrkur P og Ca, eins og hann er ákvarðaður með greiningu á tilraunafóðrinu, er sýndur í töflu 1. Áður en rannsóknin hófst voru allar rottur aðlagaðar í 7 daga, á þeim tíma fengu þær frjálsan aðgang að viðmiðunarfóðrinu og afjónuðu vatni . Eftir aðlögunartímabilið var rottunum skipt af handahófi í tvo hópa með svipaða meðallíkamsþyngd og fengu annað hvort viðmiðunarfæði (viðmiðunarhópur) eða há-P fæði (há-P hópur) í 14 daga. Rottur fengu ókeypis aðgang að úthlutað tilraunafæði og afjónuðu vatni allan tilraunatímann. Í lok tilraunatímabilsins voru rottur aflífaðar með inndælingu í kviðarhol með svæfingablöndunni (medetomidín, mídazólam og bútorfanól) og blóð- og nýrnasýnum var safnað til greiningar. Blóðsýni voru skilin í skilvindu og yfirborðsvatn notað sem sermisýni. Nýru voru fjarlægð og nýrnahylkinu var hent. Thesermi og nýrnasýnivoru geymdar við -80 gráður þar til þörf er á til greiningar. Hægra nýrað var notað til magngreiningar á Bmp2 og Spp1 mRNA og vinstra nýra var notað til að greina Ca og P styrk.

Steinefnagreining.

Sýni af tilraunafæði og nýrum voru ösku við 550 gráður í 48 klst í múffuofni og steinefni voru dregin út í 1 mól/L af HCl til greiningar. Ca styrkur í tilraunafæði og nýrum var ákvarðaður með atómgleypni litrófsmælingu16). P styrkur í tilraunafæði og nýrum var greind með aðferð Gomori17).

Magngreining á Bmp2 og Spp1 mRNA.

Heildar-RNA var einangrað úr einsleita nýranu með því að nota TRIzol hvarfefni (Life Technologies, CA, USA) í samræmi við forskrift framleiðanda. Magn og hreinleiki RNA var metið með NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, Bandaríkjunum). cDNA var búið til með því að nota SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix fyrir qRT-PCR (Life Technologies) og síðan sett í magnbundna rauntíma RT PCR með því að nota SYBR Select Master Mix (Life Technologies). Sérstakir grunnar18-20) voru notaðir við greiningu á Bmp2 (áfram, 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; afturábak, 5'-TTCCTGCATTTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (áfram, 5'- TGAGACTGGCAGTGGTTTGC-3'; afturábak, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3'), og Gapdh (áfram, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3'; afturábak, 5'-GCAT CACCCCATTTGATGTT}{{244 '). Rauntíma PCR hvarfið var framkvæmt með því að nota StepOne rauntíma PCR kerfi (Applied Biosystems, CA, USA) og mRNA tjáningarmagn var staðlað í Gapdh mRNA gildi. Gildi samanburðarhópsins var talið vera 1,00.

Tölfræðigreining.

Niðurstöður eru settar fram sem meðaltal ± SEM fyrir hvern hóp af 6 rottum. Eftir að hafa gert F-próf ​​til að ákvarða einsleitni frávika var t-próf ​​nemenda notað til að ákvarða marktækan mun á hópunum tveimur. Ef einsleitni dreifni var ekki jöfn var t-próf ​​Welch notað í stað t-prófs nemenda. Mismunur var talinn marktækur á p ＜ 0.05

Niðurstöður

Líkamsþyngd, fæðuinntaka og sermisgreining.

Endanleg líkamsþyngd og fæðuinntaka minnkaði marktækt í hópnum með háa P í samanburði við samanburðarhópinn (tafla 2).

Þyngd nýrna og styrkur steinefna.

Nýra blaut og þurr þyngd jókst marktækt í hópnum með háa P samanborið við samanburðarhópinn (tafla 3). Styrkur Ca og P í nýrum jókst einnig marktækt í hópnum með háa P miðað við samanburðarhópinn.

Nýra Bmp2 og Spp1 mRNA tjáning. Bmp2 mRNA gildi í há-P hópnum voru marktækt aukin samanborið við samanburðarhópinn (mynd 1A). mRNA tjáning Spp1 var einnig marktækt aukin í há-P hópnum samanborið við samanburðarhópinn (mynd 1B).

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Stærsti útflytjandi cistanche í Kína:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Sími:+86 15292862950

Verslaðu fyrir frekari upplýsingar:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop