Tengiliður:jerry.he@wecistanche.com

Vinita D. Apraj1, Nancy S. Pandita2

1Líffræðideild, 2Efnafræðideild, Sunandan Divatia School of Science, NMIMS SVKM, Vile-Parle (W), Mumbai, Maharashtra, Indlandi

Cistanche hefur áhrif gegn öldrun

ÁSTANDUR

Bakgrunnur: Hýðurinn af Citrus reticulata Blanco er jafnan notaður sem styrkjandi, maga-, astringent og carminative. Það er einnig gagnlegt í húðumhirðu. Markmið: Að rannsakagegn öldrunmöguleiki á áfengisútdrætti af C. reticulata Blanco hýði með því að nota in vitro andoxunar- og and-ensímpróf.

Efni og aðferðir: Plöntuútdrættir voru fengnir með Soxhlation (CR HAE‑ Hot Alcoholic Extract of Citrus reticulata) og maceration aðferð (CR CAE‑ Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata). Gerð var eigindleg og megindleg plöntuefnafræðileg greining. Ennfremur, in vitroandoxunarefni, and-ensím- og gasgreiningar-massagreiningar (GC-MS) greiningar voru gerðar. Niðurstöður: Heildarfenól og flavonoid innihald CR HAE reyndust vera hærra en CR CAE. EC50 gildi CR HAE og CR CAE fyrir 1,1-dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl, súperoxíð anjón og 2,2'-asínó-bis (3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýru) próf voru 25 {55}},33 ± 40,16 µg/ml og 254,73 ± 15,78 µg/ml, 221,27 ± 11,25 µg/ml og 354,20 ± 23,79 µg/ml, og ±5 µg/ml, og ± 2/17 µg/ml, og ± 2/17 µg/ml. Ísogsgildi súrefnisrótefna fyrir CR HAE og CR CAE reyndust vera 1243 og 1063 µmól 6-hýdroxý-2,5,7,8-tetra metýlkróman-2-karboxýlsýrujafngildi/g af efni, í sömu röð. And-kollagenasa og and-elastasavirkni var metin fyrir bæði CR HAE og CR CAE. EC50 gildi CR HAE og CR CAE fyrir and-kollagenasa og and-elastasa voru 329,33 ± 6,38 µg/ml, 466,93 ± 8,04 µg/ml og 3,22 ± 0,24 mg/ml, 0,30 mg/ml, 0,30 mg/ml, í sömu röð. CR HAE sýndi sterkari and-kollagenasa og and-elastasa virkni en CR CAE. GC-MS greining á CR HAE var framkvæmd vegna þess að CR HAE sýndi hærraandoxunarefniog and-ensímgetu en CR CAE. Ályktun: Hægt er að nota C. reticulata hýði ígegn hrukkumhúðvörur.

Lykilorð: 1,1-dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl, 2, 2'-azínó-bis (3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýra), hrukkuvörn, elastasi, gasskiljun-massagleypni, súrefnisróteindagleypni

SAMANTEKT

• Húð gegn öldrun Citrus reticulata Blanco hýði var metin í gegnum

• In vitroandoxunarefniog and-ensímmælingar

• Tvær gerðir útdráttar voru gerðar og útdrættir voru látnir fara í eigindlega og megindlega plöntuefnafræðilega greiningu. Útdrátturinn sem fékkst með Soxhlation (CR HAE) sýndi hærra heildarfenól- og flavonoid innihald en útdráttur sem fengin er með maceration (CR CAE)

• CR HAE sýndi sterka DPPH og Superoxide sindurefnahreinsandi virkni en ABTS hreinsivirkni beggja útdráttanna reyndist vera svipuð. Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) CR HAE reyndist vera meiri; sem gefur til kynna sterka andoxunargetu þess

• In vitro hömlun á kollagenasa og elastasasímum var metin fyrir bæði útdrættina og CR HAE sýndi sterkan and-kollagenasa og and-elastasa möguleika sem gefur til kynna getu þess gegn öldrun.

• GC-MS greining á CR HAE leiddi í ljós tilvist ýmissa efnasambanda

aðallega þar á meðal Polymethoxyflavones. CR HAE sýndi efnilega andoxunar- og and-ensímvirkni og er hægt að nota sem hugsanlegagegn hrukkumumboðsmaður ígegn öldrunhúðvörur.

Notuð skammstöfun: ECM: utanfrumu fylki, UV: útfjólublátt, ROS: hvarfgjörn súrefnistegund, MMP: fylki málmpróteinasi, Chc: Clostridium histolyticum kollagenasi, DPPH: 2, 2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl, GC-krómatógrafía: Litrófsgreining, RT: Herbergishiti, µg GAE/ mg: Míkrógrömm gallsýrujafngildi / milligrömm, W/V: Þyngd miðað við rúmmál, µg QE/

mg: Míkrógrömm Quercetin jafngildi / milligrömm, CR HAE: Heitt áfengisþykkni af Citrus reticulata Blanco, CR CAE: Kalt áfengisþykkni af Citrus reticulata Blanco, EC50: Hámarksáhrifaríkur styrkur, PMS. , DMSO: Dímetýl súlfoxíð, APS: Ammóníum Persúlfat, AAPH: 2,2-azóbis(2-amidínó-própan) tvíhýdróklóríð, TROLOX: (±) 6-hýdroxý-2,5,7,8-tetrametýl króman-karboxýl2 sýra, ORAC: Oxygen Radical Absorbance Capacity, FALGPA: N-[3-(2-Furyl) acryloyl)]-Leu-Gly-Pro-Ala, SANA: Succinyl-Ala-Ala-Ala-Ala-troan-deiliard, Factor, MSD: Mass Selective Detector

KYNNING

Mikilvægasta hlutverk húðar fyrir manneskjur er að skapa hindrun á milli innra og ytra umhverfis líkamans. Að innan skýlir húðin og verndar allt eðlisefnafræðilegt fyrirbæri sem er nauðsynlegt fyrir lífið, að utan er það hindrun gegn vélrænum öflum. Húð er stærsta líffæri líkamans.[1] Það er mjög viðkvæmt líffæri og getur auðveldlega skemmst vegna sýkinga og sjúkdóma.

Þetta er grein með opnum aðgangi sem dreift er samkvæmt skilmálum Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3.0 leyfisins, sem gerir öðrum kleift að endurhljóðblanda, fínstilla og byggja ofan á verkið án viðskipta, svo framarlega sem Höfundur er færður til heiðurs og nýju sköpunarverkin fá leyfi samkvæmt sömu skilmálum.

Húðvandamál geta komið upp vegna ýmissa þátta eins og umhverfismengunar, of mikillar útsetningar fyrir útfjólubláum geislum, aldurs einstaklings, skaðlegra örvera, matarvenja, streitu og efna. Húðmeðferð og umhirða er nauðsynleg, ekki aðeins til að hafa heilbrigða húð, heldur einnig fyrir almenna vellíðan einstaklingsins.[2]

Eitt helsta húðvandamálið í heiminum í dag er ótímabær öldrun húðarinnar. Öldrunarferli húðarinnar hefur verið skipt í tvo flokka: Innri og ytri öldrun. Innri öldrun húðar eða náttúruleg öldrun stafar af breytingum á teygjanleika húðarinnar með tímanum. Ytri öldrun húðarinnar er aðallega afleiðing af útsetningu fyrir sólargeislun (myndöldrun). Sindurefni sem myndast vegna oxunarálags gegna stóru hlutverki bæði við innri og ytri öldrun.[3] Húð er gerð úr þremur meginlögum; epidermis, dermis og subcutis. Helstu þættir leðurhúðarinnar eru kollagen og elastín trefjar. Lækkun á kollageni og elastíni leiðir tilhrukkumyndun.[4] Aðalástæðan fyrir því að húð byrjar að síga og myndasthrukkumer niðurbrot í elastíni og kollageni. Kollagenasa og elastasasím eru ábyrg fyrir niðurbroti ýmissa hluta utanfrumu fylkisins (ECM), þ.e. kollagen og elastín. Elastín er prótein sem hjálpar húðinni að haldast mjúkri og stinnari. Þegar húðin þín er teygð er það elastínið sem skilar henni í eðlilega stöðu. Kollagen er trefjaríkt prótein. Kollagen er sérstakt meðal próteina vegna mikils togstyrks þess sem veitir húðinni stinnleika.Hrukkurstafa af blöndu af innri og ytri öldrun sem og vegna aukins magns kollagenasa og elastasa ensíma.[5]

Snyrtivörur eru notaðar reglulega og almennt í mismunandi formum til að auka fegurð. Húðsnyrtivörur meðhöndla yfirborðslagið á húðinni með því að veita betri vörn gegn umhverfinu en húð sem er ómeðhöndluð.[6] Það er aukin eftirspurn eftir snyrtivörum fyrir andlitshúð. Samkvæmt gagnaeftirliti voru útgjöld á heimsvísu fyrir húðvörur árið 2012 82 milljarðar dollara, þar sem tveir þriðju hlutar útgjalda voru andlitshúðvörur. Í skýrslu frá rannsóknum og mörkuðum er gert ráð fyrir að tekjur fyrir húðvöruiðnaðinn á heimsvísu fari yfir 100 milljarða $ árið 2018. Búist er við að andlitsmeðferðarhluti haldi áfram að ráða yfir markaðnum. Aukin eftirspurn eftirgegn öldrunvörur og vaxandi áhyggjur af notkun náttúrulegra og lífrænna húðvörur eru helstu þættirnir sem knýja fram húðvöruiðnaðinn.[7] Snyrtivörur einar og sér duga ekki til að sjá um húð og líkamshluta; það krefst samsetningar virkra efna til að athuga skemmdir og öldrun húðarinnar. Þessi virku jurtaefni sem innihalda virk efni eru mjög nauðsynleg til að viðhalda heilsu húðarinnar. Snyrtivörur með virkum jurtum eru nú að koma fram sem viðeigandi lausn á núverandi vandamáli.[8] Í þessari rannsókn, húðgegn öldrunmöguleiki á áfengisútdrætti af Citrus reticulata Blanco hýði var metinn með in vitro andoxunarefnum, and-kollagenasa og and-elastasa prófum. C. reticulata Blanco (Rutaceae) er almennt þekktur sem Narangi eða Santra (appelsínugult). Ávöxturinn er hægðalosandi, ástardrykkur, astringent, styrkjandi og dregur úr uppköstum.[9] Ávaxtahýðið er venjulega notað sem styrkjandi, maga-, astringent, carminative og and-scorbutic. Sítrusbörkur hefur verið talinn aukaafurð sítrusávaxtaiðnaðarins, en greint hefur verið frá því að hann innihaldi nokkra virka efnisþætti í mun meiri styrk en kvoða.[10] Ávaxtahýðið er einnig gagnlegt í húðumhirðu.

EFNI OG AÐFERÐIR

Efni og hvarfefni

Askorbínsýra, quercetin, járnklóríð, natríumkarbónat (Na2CO3), natríumnítrít (NaNO2), natríumhýdroxíð (NaOH), álklóríð (AlCl3), 1,1-Dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl (DPPH), brisi úr svínum (ECB) .3.4.21.36), Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nítróanílíð (SANA), Clostridium histolyticum kollagenasa (ChC) (EC.3.4.23.3), N-(3-[2-Furyl)]acryioyl Gly-Pro-Ala (FALGPA), fluorescein natríumsalt, 2,2-azóbis (2-metýl própíónamídín) díhýdróklóríð (AAPH) og gallsýra voru keypt frá Sigma Chemical Co. (St. Louis, Bandaríkjunum.) 2, 2 '‑asínó-bis (3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýra) díammoníum

salt (ABTS), (±) 6-hýdroxý-2,5,7,8-tetra metýlkróman-2-karboxýlsýra (TROLOX) keypt frá Fluka, Bandaríkjunum. Nítróblátt tetrasólíum (NBT), fenasínmetósúlfat (PMS) og nikótínamíð adeníndínúkleótíð – minnkað tvínatríumsalt (NADH) voru fengin frá SRL Pvt. Ltd., Mumbai, Indlandi. Ammóníum per súlfat (APS) var keypt frá Rankem, Indlandi.

Söfnun plantnaefnis

Ávextir af C. reticulata Blanco, Rutaceae voru fengnir í janúar 2013 frá Mumbai (Indlandi). Flokkunarfræðileg auðkenning plöntuefnis var staðfest af Dr. CS Latto, háskólanum í Mumbai. Sannvottun fór fram hjá Agharkar Research Institute, Pune.

Útdráttur plöntuefnis

Ávextir voru skolaðir vandlega undir vatni. Hýði var aðskilið frá ávöxtum og þurrkað í skugga. Síðan var þurrkað efni sett í duftformið og geymt í loftþéttu íláti við stofuhita. Um 50 g af þurrkuðu dufti voru dregin út með 300 ml metanóli. Plöntuútdrættir voru fengnir með Soxhlation (CR HAE‑ Hot Alcoholic Extract of Citrus reticulata) og blöndunaraðferð (CR CAE‑ Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata). Soxhlet útdráttur var framkvæmdur við 65 gráður í 10–12 klst. Kald maceration var framkvæmd með stöðugum hristingi; þar sem blandan af plöntudufti og metanóli var geymd á snúningshristara (REMI CIS-24 PLUS) og stillt á 100 snúninga á mínútu við RT í 72 klst. Útdrættirnir voru síaðir með Whatman síupappír nr. 1, og síuvökvanir voru síðan látnir gufa upp við lækkaðan þrýsting og þurrkaðir með snúningsuppgufunarbúnaði (R-205, Buchi Laboratory Equipment, Flawil, Sviss) stilltur á 50 gráður. Þurrkaðir útdrættir voru geymdir við 4 gráður, í merktum, dauðhreinsuðum flöskum með loki þar til frekari notkun.

Bráðabirgðaplöntuefnafræðileg greining á útdrætti

Útdrættirnir eins og getið er um hér að ofan voru látnir fara í ýmsar eigindlegar plöntuefnafræðilegar prófanir til að bera kennsl á efnafræðilegar innihaldsefni sem eru til staðar í plöntuefninu samkvæmt lýstum aðferðum.[11]

Ákvörðun á heildarfenólinnihaldi

Heildarfenólinnihald (TPC) var ákvarðað með Folin - Ciocalteu hvarfefninu með því að nota tilgreinda aðferð.[12] Í 0,5 ml af hverju sýni var 2,5 ml 1:10 þynning af Folin - Ciocalteau's hvarfefni og 2 ml af Na2CO3 (7,5 prósent w/v) bætt við og ræktað við 765 nm með útfjólubláum litrófsmæli. Niðurstöður voru gefnar upp sem µg af gallínsýrujafngildi á hvert mg af útdrætti (µg GAE/mg útdráttur).

Ákvörðun á heildarflavonoid innihaldi

Heildarflavonoid innihald (TFC) var mælt með AlCl3 litamælingu.[13]

Deiliskammti (1 ml) af útdrætti eða staðallausnum af quercetin (20, 40, 60, 80 og 100 µg/ml) var bætt í 10 ml mæliflösku sem innihélt 4 ml af eimað vatn. Í flöskuna var 0,30 ml af 5% NaNO2 bætt við og eftir 5 mínútur var 0,3 ml af 10% AlCl3 bætt við. Eftir 5 mínútur var 2 ml af 1M NaOH bætt við og rúmmálið var gert upp í 10 ml með eimuðu vatni. Lausninni var blandað saman og gleypni mæld á móti núllinu við 510 nm. TFC var gefið upp sem µg af quercetin jafngildi á hvert mg af útdrætti (µg QE/mg útdráttur).

Andoxunarprófanir

1, 1-Dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl hreinsiefni fyrir sindurefna

Virkni til að hreinsa sindurefna var metin með ákveðinni aðferð með nokkrum breytingum.[14] Virkni til að hreinsa sindurefna var metin með tiltekinni aðferð með nokkrum breytingum. Rúmmáli 1 ml af mismunandi styrkleika (100–800 µg/ml) af prófsýnum var blandað saman við 200 µl af (0,36 mg/ml) DPPH metanóllausn. Eftir hristingu var blandan ræktuð í myrkri við stofuhita í 30 mínútur og síðan var gleypni mæld við 517 nm. Askorbínsýra var notuð sem jákvæð viðmiðun.

Phenazine methosulfate-NADHsystem superoxíð anjón hreinsunarpróf

Virkni súperoxíðhreinsunar var metin með tiltekinni aðferð.[15] Tris HCl jafnalausn (3 ml, 16 mM, pH 8.0) sem inniheldur 0,75 ml NBT (50 µM) lausn, 0,75 ml NADH ( 78 µM) lausn og 0,3 ml sýnislausn af útdrætti (50–350 µg/ml) í metanóli var blandað saman. Hvarfið var hafið þegar 0,75 ml af PMS lausn (10 µM) var bætt við blönduna. Hvarfblandan var ræktuð við 25 gráður í 5 mínútur og gleypni var lesin við 560 nm á móti samsvarandi núllsýnum. Askorbínsýra var notuð sem staðall.

2,2'-asínó-bis (3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýra) róttæka hreinsunarpróf

Greiningin er framkvæmd samkvæmt tiltekinni aðferð.[16] ABTS róttækar katjónir voru framleiddar með því að hvarfa ABTS og APS og rækta blönduna við stofuhita í myrkri í 16 klst. Í stuttu máli innihélt heildarhvarfsrúmmálið 10 mM PBS pH 7,4 (jákvæðar samanburðar- eða próflausnir) af ýmsum styrkleika. ABTS róttæka lausn var bætt við í lokastyrk 0,219 mM. Hvarfblöndunni var blandað og lesið strax við 734 nm með því að nota örplötulesara (VERSA max, Molecular devices, USA). Viðmiðunarhvarf var framkvæmt án prófunarsýnisins. Gallsýra var notuð sem jákvæður samanburður.

Hæfni útdrættanna til að hreinsa DPPH, PMS-NADH stakeindir og ABTS sindurefna var reiknuð út með eftirfarandi formúlu:

Róttæk hreinsunarvirkni ( prósent )=([Abs of control − Abs of sample]/Abs of control) ×100, þar sem Abs er gleypni við nefnda bylgjulengd í viðurvist eða fjarveru prófunarútdráttanna.

Súrefnisróteindagleypniprófun

Þessi prófun var framkvæmd samkvæmt aðferðinni sem lýst er.[17] Forræktunarblanda af 140 µl innihélt − 20 µl af prófunarlausn eða TROLOX af mismunandi styrkleika. 75 mM natríumfosfatjafnalausn, pH 7,4; 120 µl af natríumflúrljómun (117 nM) blandað og ræktað við 37 gráður í 10 mín. Eftir forræktun var 60 µl af AAPH (40 mM) bætt við og blandað í 15 s. Hvarfið var framkvæmt í 90 mínútur við 37 gráður. Flúrljómunarmælingarnar voru teknar við 485 nm örvun og 520 nm útblásturssíur.

Ensímpróf

And-kollagenasa próf

Kollagenasahömlunargreining var framkvæmd með aðferðinni sem lýst var áður, [18] sem byggir á vatnsrofi FALGPA með kollagenasa til að framleiða FA-Leu og Gly-Pro-Ala. Greiningin var framkvæmd í 50 mM Tricine jafnalausn (400 mM NaCl og 10 mM CaCl2, pH 7,5). ChC var leyst upp í jafnalausn til notkunar við upphafsstyrk 0,8 einingar/ml. Tilbúna hvarfefnið, FALGPA, var leyst upp í Tricine jafnalausn í 2 mM. Sýnisútdrættir voru ræktaðir með ensíminu í jafnalausn í 15 mínútur áður en hvarfefni var bætt við til að hefja hvarf. Loka hvarfblandan (75 µl heildarrúmmál) innihélt 25 µl af 50 mM Tricine jafnalausn, 25 µl af prufuþykkni (250–4000 µg/ml) og 25 µl af 0,1 einingar af ensími ChC. Viðmið sem gerð var með 50 mM Tricine jafnalausn sem prófseyði voru leyst upp í Tricine jafnalausn (50 mM), en katekin var notað sem jákvæð viðmiðun. Eftir að 50 µl af 2 mM FALGPA hvarfefni var bætt við var kollagenasavirkni mæld strax við 340 nm í 20 mínútur með því að nota 96 brunna örplötulesara (Bio-Tek M Quant, FLX 800).

And-elastasa próf

Greiningin sem notuð var byggði á aðferðum úr bókmenntum.[19] Þessi prófun var framkvæmd í 0,2 mM Tris-HCL jafnalausn (pH 8.0). Elastasi úr brisi úr svínum (PE – EC 3.4.21.36) var leystur upp til að búa til 1 mg/ml stofnlausn í {{10}},2 mM Tris-HCL jafnalausn. Hvarfefnið N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nítróanílíð (SANA) var leyst upp í jafnalausn við 0,8 mM. Prófseyðin (0,156–10 mg/ml) voru ræktuð með ensíminu í 20 mínútur áður en hvarfefni var bætt við til að hefja hvarfið. Loka hvarfblandan (Alls 250 µl) innihélt 50 µl plöntuþykkni, 160 µl jafnalausn, 20 µl ensím og 20 µl hvarfefni. Catechin var notað sem jákvæður samanburður. Neikvæð viðmið voru framkvæmd með Tris-HCL biðminni. Frásog var mæld strax við 410 nm og síðan samfellt í 20 mínútur með því að nota 96 brunna örplötulesara (Bio-Tek M Quant, FLX 800). Prósenta hömlunar fyrir báðar þessar prófanir er reiknuð út með: Ensímhömlunarvirkni ( prósent )=(1− [B/A]) ×100

Hvar, A=Ensímvirkni án sýnis, B=Virkni í viðurvist sýnis.

Gasskiljun-massagreiningargreining

Eftirfarandi skilyrði voru tekin upp fyrir gasskiljun-massagreiningu (GC-MS) greiningu.[20]Auðkenning íhluta var gerð með því að nota Agilent 7890 A gasskiljun ásamt 5975 C óvirkum massasértækum skynjara (MSD) með TrijectAxis Agilent detector. 7693 sjálfvirkt sýnatökutæki í Agilent 19091S-433: HP-5MS súlu (30 m × 250 µm × 0,25 µm). Helíum var notað sem burðargas (1 ml/mín). Hitastig inndælingartækis og skynjara var haldið við 250 gráður. Dálkhitastig var stillt á 60 gráður í 3 mínútur og síðan hækkaður upp í 160 gráður í 2 mínútur við 10 gráður / mín. Frekari hitastig var hækkað upp í 300 gráður (við 15 gráður / mín). Massaróf fengust yfir 40–500 amu svið í EI ham. Efnasamböndin sem skoluðust voru auðkennd með því að bera saman massarófsgögn við staðlaða gögnin sem til eru á bókasafni National Institute of Standards and Technology. Helstu innihaldsefni úr Soxhlet metanólútdrætti úr C. reticulata Blanco hýði (CR HAE) voru auðkennd með GC-MS greiningu.

tölfræðigreining

EC50 gildin voru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik, tölfræðileg greining var framkvæmd með einhliða dreifnigreiningu fylgt eftir með margfeldis samanburðarprófi Tukey (P < 0.05)="" þar="" sem="" öll="" sýni,="" þ.e.="" og="" jákvæður="" staðall="" var="" borinn="" saman.="" allir="" útreikningar="" voru="" gerðir="" með="" graphpad="" prism="" (útgáfa="" 5.0,="" graphpad="" software,="">

NIÐURSTÖÐUR OG UMRÆÐUR

Bráðabirgðaplöntuefnafræðileg greining á útdrætti

Bráðabirgða plöntuefnafræðileg greining á metanólútdrætti af C. reticulata Blanco gefur til kynna nærveru kolvetna, amínósýra, flavonoids, tannína og fenólafleiða, stera osfrv., [Tafla 1].

Tafla 1: Bráðabirgðaplöntuefnafræðileg greining á metanólútdrætti úr Citrus reticulata Blanco hýði

FeCl3: Járnklóríð; CR HAE: Heitt áfengisþykkni úr Citrus reticulata Blanco; CR CAE: Kalt áfengisþykkni úr Citrus reticulata Blanco

Ákvörðun á heildarfenólinnihaldi

Fenólin, sérstaklega fjölfenólin, sýna margs konar gagnlega líffræðilega virkni í spendýrum, þar á meðal veirueyðandi, bakteríudrepandi, ónæmisörvandi, ofnæmislyf, blóðþrýstingslækkandi, blóðþurrðarlækkandi, hjartsláttartruflanandi, segalyf, kólesteróleyðandi. , lifrarverndandi, bólgueyðandi og krabbameinsvaldandi verkun.[21,22] Nokkrar rannsóknir hafa sýnt að flavonoids virka sem hreinsiefni fyrir ofuroxíð anjónir, stakt súrefni, hýdroxýl stakeindir og lípíð peroxýl radicals.[23,24] TPC og TFC voru ákvörðuð fyrir bæði útdrættina með því að nota staðlaða ferla [Mynd 1]. CR HAE sýndi hærra fenólinnihald, þ.e. 187,93 ± 4,69 µg GAE/mg þykkni en CR CAE, þ.e. 58,66 ± 2,40 µg GAE/mg þykkni. TFC fyrir CR HAE og CR CAE reyndust vera næstum svipuð, þ.e. 171,72 ± 4,13 µg QE/mg þykkni og 169,88 ± 9,79 µg QE/mg þykkni, í sömu röð.

Ákvörðun á heildarflavonoid innihaldi

Andoxunarvirkni ætti ekki að vera byggð á einumandoxunarefniprófunarlíkan. Í reynd eru nokkrar in vitro prófunaraðferðir gerðar til að metaandoxunarefnistarfsemi með sýnishorn af áhuga.[25] Í þessari rannsókn höfum við metiðandoxunarefnimöguleika CR HAE og CR CAE af ýmsumandoxunarefnimælingar þar á meðal DPPH hreinsiefnishreinsunarpróf, súperoxíð anjónhreinsunarpróf, ABTS radical scavenging próf og súrefnisróteindagleypni (ORAC) próf.

Andoxunarprófanir

1, 1-Dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl hreinsiefni fyrir sindurefna

DPPH hreinsiefnishreinsipróf er ein algengasta greiningin til að prófa bráðabirgðaeyðandi virkni plöntuþykkni. Theandoxunarefnivirkni plöntuþykkna sem innihalda pólýfenólhluti er vegna getu þeirra til að gefa vetnisatóm eða rafeindir og hreinsa sindurefna.[26] Þannig mun fjólublái liturinn á DPPH minnka í , -dífenýl-píkrýlhýdrasín (gult). Niðurstöður benda til þess að CR HAE og CR CAE hafi sýnt allt að 85 prósent af hreinsun DPPH sindurefna [Mynd 2]. Askorbínsýra var notuð sem jákvæð viðmiðun og sýndi hreinsunarvirkni allt að 92 prósent. CR HAE sýndi aðeins hærraandoxunarefnivirkni en CR CAE. EC50 gildi (µg/ml) voru gefin upp í töflu 2.

Fenazín metósúlfat-NADHkerfi súperoxíð anjón hreinsunarpróf Þó að súperoxíð anjón sé veikt oxunarefni, framleiðir það að lokum

Tafla 2: EB gildi metanólútdrátta úr Citrus reticulata Blanco Peel fyrir DPPH, súperoxíð, ABTS, and-kollagenasa og and-elastasa mælingar

öflugar og hættulegar hýdroxýlrótarefni sem og stakt súrefni, sem bæði stuðla að oxunarálagi.[27] Ofuroxíðróteiningarnar sem myndast úr uppleystu súrefni með PMS-NADH tengingu og hægt er að mæla með getu þeirra til að draga úr NBT. Minnkun á gleypni við 560 nm með plöntuþykkni gefur til kynna getu þeirra til að slökkva á súperoxíðrótefnum í hvarfblöndunni. CR HAE sýndi sterka súperoxíðhreinsandi virkni en CR CAE [Mynd 3]. Askorbínsýra var notuð sem jákvæð viðmiðun og hreinsar súperoxíð anjón allt að 52 prósent. EC50 gildi (µg/ml) voru reiknuð út og gefin upp í töflu 2. CR HAE reyndist vera áhrifaríkara (P < 0,05)="" en="" cr="" cae="" þar="" sem="" það="" sýndi="" minna="" ec50="" gildi="" (µg/ml)="" og="">andoxunarefnistarfsemi.

2,2'-asínó-bis (3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýra) róttæka hreinsunarpróf

ABTS prófun byggir á því að hreinsa ljós með ABTS róttækum. Anandoxunarefnimeð getu til að gefa vetnisatóm mun slökkva á stöðugum sindurefnum, ferli sem tengist breytingu á frásogi, sem hægt er að fylgjast með litrófsmælingum.[28] ABTS virkni var magngreind með tilliti til prósentuhömlunar á ABTS sindurefna katjóninni meðandoxunarefnií hverju sýni. ABTS gildi CR HAE, CR CAE og gallsýru voru sýnd í töflu 2. CR HAE og CR CAE sýndu ABTS radical scavenging virkni á styrkleikaháðan hátt og sáust allt að 59 prósent. Gallsýra sýndi allt að 79 prósent af ABTS hreinsunargetu [Mynd 4]. EC50 gildi (µg/ml) sem fengust fyrir CR HAE og CR CAE gáfu ekki til kynna neinn marktækan mun (P < 0,05)="" og="" bentu="" til="" þess="" að="" báðir="" útdrættirnir="" hefðu="" næstum="" svipaða="" abts="">

Súrefnisróteindagleypniprófun

ORAC próf er talið vera líffræðilega viðeigandi próf en aðrar mælingaraðferðirandoxunarefnivirkni vegna þess að það mælir vetnis-atóm flutningsviðbrögð og líkir eftir in vivoandoxunarefniaðgerð.[29] Það mælir einnig hversu vel vatnsleysanlegar og fituleysanlegar efnisþættir náttúrulegs efnis vernda staðlað mark fyrir oxun af völdum peroxýlnítríts, hýdroxýlróteinda, súperoxíðanjóns og

singlet súrefni, og myndar stig byggt á samanburði við anandoxunarefnistjórn.[30]Í þessari rannsókn höfum við mælt ORAC gildi fyrir CR HAE og CR CAE og gefið upp sem TROLOX (mmól TROLOX jafngildi/g af efni) [Mynd 5]. CR HAE sýndi hærra ORAC gildi (1243 mmól TROLOX jafngildi/g af efni) en CR CAE (1063 µmól TROLOX jafngildi/g af efni) [Tafla 2].

Ensímpróf

And-kollagenasa próf

Matrix metalloproteinasar (MMPs) eru fjölskylda próteinleysandi ensíma sem brjóta niður ýmsa þætti ECM. Kollagenasi er einn af meðlimum MMP fjölskyldunnar og það er ábyrgur fyrir niðurbroti kollagens. Kollagenasi frá bakteríunni C. histolyticum (ChC) (C 3.4.24.3) er einn fárra próteinasa sem getur brotið niður þrefalda helix svæði innfædds kollagens við lífeðlisfræðilegar aðstæður og in vitro aðstæður með því að nota tilbúið peptíð sem hvarfefni. Hægt er að rannsaka verndandi áhrif plöntuútdráttar gegn kollagenasasímum með því að nota ChC og tilbúið hvarfefni FALGPA.[31] Í þessari rannsókn var kollagenasahömlunarvirkni metin fyrir CR HAE og CR CAE. Catechin var notað sem jákvæður samanburður. Niðurstöður sýndu að CR HAE þykkni var áhrifaríkara við að hindra kollagenasa ensím en CR CAE og sýndi hömlun allt að 76 prósent [Mynd 6]. Verkun var mæld með tilliti til EC50 gildis (µg/ml) og gefið upp í töflu 2.

And-elastasa próf

Elastasi er eina ensímið sem getur brotið niður elastín. Hömlun á elastasa ensími getur haldið mýkt og mýkt húðarinnar.[32] Hvað varðargegn öldrun, að finna hemla á elastasasímum getur verið gagnlegt

til að koma í veg fyrir tap á teygjanleika húðarinnar og þar með lafandi húð. Í and-elastasa prófinu var bris-elastasi í svínum greindur með litrófsmælingu með því að nota [N-Succ-(Ala) 3-p-nítróanílíð] sem hvarfefni og magn p-nítróanilíns var ákvarðað með því að mæla gleypni við 41{{ 6}} nm. Hamlandi áhrif CR HAE og CR CAE á elastasavirkni voru rannsökuð. Catechin var notað sem jákvæður samanburður. CR HAE sýndi sterka prósenta elastasahömlunarvirkni samanborið við CR CAE og allt að 80 prósenta hömlun sást [Mynd 7]. EC50 gildi (mg/ml) voru gefin upp í töflu 2 og sást að CR HAE var öflugra en CR CAE (P < 0,05).="" ec50="" gildi="" sem="" fæst="" fyrir="" katekin="" reyndist="" vera="" mjög="" minna="" sem="" gefur="" til="" kynna="" sterka="" and-elastasa="" virkni="" þess="" og="" hlutverk="" þess="" sem="">gegn öldrunhluti. Kim o.fl., 2004 sýndu að katekin og epigallocatechin gallat einangrað úr grænu tei (Camellia sinensis) voru öflugir and-elastasa hemlar.

Gasskiljun-massagreiningargreining

CR HAE sýndi hærraandoxunarefniog öldrunareiginleika samanborið við CR CAE; þess vegna var GC-MS greining á CR HAE framkvæmd til að skilja innihaldsefnin sem eru til staðar í því. Alls voru 20 mismunandi efnasambönd auðkennd og kynnt í töflu 3. Litskiljunin sýndi 20 toppa í varðveislutímanum á bilinu 2,95 mín til 44,45 mín [Mynd 8]. Stærsti toppurinn eftir 44,11 mínútur með 44,37 prósent flatarmáls var auðkenndur sem bútýlfosfónsýra, pentýl 4-(2-fenýlpróp-2-ýl) fenýl ester. Zab o.fl., 2012[33] greindu fráandoxunarefniog æxlishemjandi virkni bútýlfosfónsýru, pentýl 4-(2-fenýlpróp-2-ýl) fenýlesters sem er til staðar í etanólútdrætti C.reticulata. Annað aðalefnasamband sem fannst var 4H-1-benzópýran-4-4, 3, 4-4, 3 díhýdró) eða 4-Krómanón (21,43 prósent svæði) sem er tegund af

flavanón. Di Majo o.fl., 2005[34] einangruðu flavanónin úr sítrusávöxtum og sýndu uppbyggingu háðandoxunarefnistarfsemi. Önnur efnasambönd 3', 4', 5, 7, 8-Pentamethoxyflavone og 4', 5, 7, 8-Tetramethoxyflavone eru tegundir pólýmetoxýflavons (PMF). PMF sýnir breitt svið líffræðilegrar starfsemi. Nýlega einangruðu Ho et al., 2012[35] og auðkenndu hýdroxýleruð PMF úr sítrushýði og rannsökuðu líffræðilega virkni þeirra, þar á meðal bólgueyðandi og krabbameinslyfjavörn. Önnur efnasambönd sem hafa verið auðkennd eru D-Limonene (1,46 prósent flatarmáls), 4H-Pyran-4-ón, 2, 3-díhýdró-3, 5-díhýdroxý-6-metýl (1,46 prósent svæði), 2-metoxý-4-vínýlfenól (vínýlfenól) 1,67 prósent flatarmáls), og n-hexadekansýra (2,51 prósent svæði) og gæti tengstgegn öldrunmöguleiki á C. reticulata Blanco hýði. Uppbygging allra auðkenndra efnasambanda var sýnd á mynd 9.

NIÐURSTAÐA

C. reticulata Blanco útdrættir voru metnir gegn öldrun húðar í gegnum in vitroandoxunarefni, and-kollagenasa og and-elastasa próf. Rannsóknin sýndi að metanólútdráttur (Soxhlation) lofaði góðuandoxunarefniog and-ensímvirkni og er hægt að nota sem öflugt lyfgegn hrukkumumboðsmaður ígegn öldrunhúðvörur.

Viðurkenning

Höfundar eru þakklátir Underwriters Lab (UL), Bangalore, Indlandi, fyrir GC-MS greiningu og náttúruleg úrræði, Bangalore, Indlandi, fyrir ORAC greiningu.

Fjárhagsaðstoð og kostun

Ekkert.

Hagsmunaárekstrar

Það eru engir hagsmunaárekstrar.