Áhrif angíótensín II tegund I viðtaka ShRNA á blóðþrýsting og endurgerð vinstri slegils hjá rottum með sjálfkrafa háþrýsting
Mar 16, 2023
Ágrip:
Þessi rannsókn var hönnuð til að kanna áhrif angíótensín II gerð I viðtaka (AT1R) shRNA á blóðþrýsting og endurgerð vinstri slegils hjá rottum með sjálfkrafa háþrýsting. Tíu Wistar Kyoto (WKY) rottur voru notaðar sem venjulegur blóðþrýstingseftirlitshópur og 20 rottum með sjálfkrafa háþrýsting (SHR) var skipt af handahófi í tilrauna- og háþrýstingseftirlitshópa. Rotturnar í tilraunahópnum voru sprautaðar með AT1R shRNA raðbrigða kirtilveiru (Ad5-AT1R-shRNA) í gegnum halaæð og rottunum í hinum hópunum tveimur var sprautað með raðbrigða kirtilveiru (Ad5-EGFP ). Slagbilsþrýstingur (SBP) við rottuslagæð var mældur fyrir og eftir inndælinguna og hjarta, nýru, ósæðar og nýrnahettuvefur fengust tveimur dögum eftir endurtekna inndælingu til að fylgjast með dreifingu Ad5-AT1R- shRNA undir flúrljómunarsmásjá. Áður en Ad5-AT1R-shRNA var sprautað var blóðþrýstingur tilraunahópsins og háþrýstingsviðmiðunarhópsins marktækt hærri en venjulegs blóðþrýstingseftirlitshóps (P<0.01). After two injections, the blood pressure in the experimental group decreased significantly, and the duration of blood pressure reduction reached 19 days. In the experimental group, the kidney, heart, aorta, and adrenal gland tissues showed vigorous fluorescence expression under the fluorescence microscope. Repeated administration of Ad5- AT1R-shRNA has a long-lasting hypotensive effect on SHR and can significantly improve ventricular remodeling.
Í tilraunarannsókninni á rottum komumst við einnig að því að Cistanche hefur verndandi áhrif á nýrun, sem getur komið í veg fyrir nýrnaskemmdir og bætt nýrnastarfsemi. Meðal þeirra getur Cistanche dregið úr oxunarálagssvörun gaukla og nýrnapípla og dregið úr magni sindurefna í nýrnavef. Að auki getur Cistanche einnig dregið úr bólgusvörun nýrna og stuðlað að endurnýjun og viðgerð nýrnafrumna.
Kynning
Endurgerð slegla (eða hjartavöðva) er hugtak sem lagt er til í rannsóknum á blóðþurrð hjartavöðvakvilla, háþrýstings hjartasjúkdóma, víkkað hjartavöðvakvilla og annars konar hjartaskemmdir, sem einkennast aðallega af breytingum eftir hjartavöðvaskaða, svo sem ofstækkun hjartavöðva, ekki vöðvafrumna. fjölgun, og hjartavöðvavefsmyndun, og stækkun hjartaholsins og hjartaþyngd eykst á þessum grundvelli [1]. Ofstækkun hjarta er algengasta sjúklega breytingin í háþrýstingi, þar sem röð breytinga á formgerð og uppbyggingu undirfrumu kemur oft fram í ofstækkun hjartavöðva.
Fyrri rannsókn hefur staðfest að ofvirkjun RAS kerfisins (renín-angíótensín kerfisins) gegnir mikilvægu hlutverki í meinafræðilegu ferli endurgerðar háþrýstings slegla, vegna æðaþrýstingsvirkni, frumuvaxtar og fjölgunarhvetjandi áhrifa [2]. Ang II er aðal virka efnið í RAS og getur haft líffræðileg áhrif með því að virkja sérstaklega AT1R, sem hefur mikla sækni á yfirborði hjartatrefjafruma [3]. Að auki hefur Ang II einnig ákveðin vaxtarþáttalík áhrif og getur beint stuðlað að myndun RNA og próteina í hjartavöðvafrumum til að stuðla að útbreiðslu trefjafrumna, sem veldur endurgerð slegla [4].
Ennfremur vísar RNA truflunartækni til þess að nota shRNA til að framleiða virkt RNA stutt truflandi RNA (siRNA) í frumum og bindur og brýtur sérstaklega niður mRNA sambótar markgena til að hindra tjáningu markgensins [5]. Raðbrigða kirtilveirufergur (Ad5-AT1R-shRNA), hannaður út frá meginreglunni um RNA-truflun, hindraði sérstaklega tjáningu AT1R og hefur haft marktæk blóðþrýstingslækkandi áhrif í fyrri blóðþrýstingslækkandi rannsóknum sem rannsakendur gerðu [6-8]. Hins vegar, sem tiltölulega ný form genameðferðar við háþrýstingi, er ekki vitað hvort það hafi áhrif á sleglaendurgerð af völdum háþrýstings og ekki hefur verið greint frá áhrifum og aukaverkunum endurtekinnar inndælingar í bláæð.
Í þessari rannsókn voru rottur með sjálfkrafa háþrýstingi (SHR) valdar sem tilraunaefni, blóðþrýstingur og sleglabreyting á SHR sást eftir endurtekna inndælingu á Ad5-AT1R-shRNA til að kanna áhrif genablokkunar á AT1R framkallað af Ad5-AT1R-shRNA á endurgerð í háþrýstingi.
Efni og aðferðir
Lyf, hvarfefni og tæki
Ad5-AT1R-shRNA og samanburðar raðbrigða adenóveiruferjan (Ad5-EGFP) sem bera angíótensín II tegund 1 viðtaka (AT1R) shRNA voru smíðaðir og framleiddir af Benyuan-Zhengyang Gene Technology Co., Ltd. (Peking, Kína). Hýdroxýprólín (HYA) greiningarsettið var keypt frá Nanjing Jiancheng líffræðistofnuninni. Blóðþrýstingstækið sem ekki er ífarandi fyrir slagæð rottuhalans (PowerLab, ADInstruments, Nýja Suður-Wales, Ástralía) var útvegað af Laboratory of Cardiology í háskólanum okkar. 722 rist litrófsmælarnir voru gerðir af Shanghai Third Analytical Instrument Factory (Shanghai, Kína). Sendingarrafeindasmásjáin (Fei Tecnai G2 12 gerð rafeindasmásjár, FEI Company, Hillsboro, OR, Bandaríkjunum) var útveguð af rafeindasmásjárstofu Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology. Núverandi rannsókn hefur verið samþykkt af siðanefnd Tian Jin Chest Hospital.
Dýraflokkun og stjórnun
Fullorðnar karlkyns SHR og Wistar Kyoto (WKY) rottur voru allar 12 vikna gamlar og vógu 280–320 g. Það voru 3-5 rottur í hvert búr, stofuhita var haldið við 24 ± 2 gráður og hlutfallslegum raka var haldið við 60-65 prósent. 12-klst gervi dag- og næturlota var gefin upp þar sem 7:00 AM–7:00 PM gaf til kynna upplýsta hluta lotunnar og 7:00 PM –7:00 AM gaf til kynna dökka hluta lotunnar. Rotturnar gátu borðað og drukkið. Rottahóparnir innihéldu eðlilegan blóðþrýstingseftirlitshóp (WKY hópur, n=10), háþrýstingsviðmiðunarhópur (SHR hópur, n=10) og háþrýstingstilraunahópur (tilraunahópur, n{ {20}}).
Rottunum í tilraunahópnum var sprautað í bláæð með 1 ml af Ad5-AT1R-shRNA með títra TCID50 1.7 × 109 í gegnum halaæð og rotturnar í SHR og WKY hópunum var sprautað í bláæð með 1 ml af Ad5-EGFP með títra TCID50 1.7 × 109 í gegnum halaæð. Inndælingartíminn átti sér stað í upphafi tilraunarinnar og þegar blóðþrýstingurinn var kominn í upphafsstöðu eftir fyrstu inndælingu.
Fyrir allar rottur í hverjum hópi voru tekin um 80–90 g af hjartavöðvavef og aðgerðin var framkvæmd nákvæmlega samkvæmt leiðbeiningum hýdroxýkó3íns greiningarsettsins.
Mæling á blóðþrýstingi og hjartslætti og athugun á tilraunadýrum
Slagbilsþrýstingur (SBP) í halaslagæð og hjartsláttur var mældur með tail-cuff aðferðinni í rólegu umhverfi við 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 og 21 dags inndælingu. Hali rottunnar var forhitaður í um 40 gráður og festur í þægilegri stöðu. Þjöppunarbekkurinn var settur við rót rófu rottunnar, blásinn upp og settur undir þrýsting. Þegar þrýstingurinn náði 270 mm Hg (1 mm Hg=0.133 kPa), lækkaði þrýstingurinn sjálfkrafa og hægt og blóðþrýstingur og hjartsláttur voru skráðir með Medlab líffræðilegri virkni tilraunakerfinu sem var tengt við þrýstingsmæli. og magnara. Allar rottur voru mældar fimm sinnum samfellt og meðaltalið var reiknað út og notað sem SBP og hjartsláttartíðni. Fylgst var með matarlyst, virkni, líkamshita, líkamsþyngd (BW) og öðrum viðbrögðum dýranna daglega þar til tilrauninni lauk.
Greining á dreifingu raðbrigða adenóveiruferjunnar í aðalvefjum
Dýrum í tilraunahópnum var sprautað með Ad{{0}}AT1R-shRNA merkt með flúrljómandi próteini. Tveimur dögum eftir endurtekna inndælingu á Ad5-AT1R-shRNA var hjarta-, nýrna-, ósæðar- og nýrnahettuvefur úr tilraunahópnum fengnir og þeir síðan útbúnir strax í frosna hluta. Flúrljómunartjáningin sást undir flúrljómunarsmásjá. Þegar blóðþrýstingur var lækkaður var nokkrum dýrum fórnað og þau vegin. Dýrunum var sprautað í kviðarhol með 0,4 ml/100 g af pentobarbital til svæfingar og hjarta, nýru, ósæðar og nýrnahettuvefur voru fjarlægðir hratt. Með beittu blaði voru þessi líffæri skorin í 1 × 1 × 1 cm litla vefjabita og send til meinafræðideildar þar sem þau voru útbúin í frosna hluta. Þykkt þeirra var mæld á bilinu 5–8 µm og tjáning flúrljómunarpróteins sást undir flúrljómunarsmásjá til að meta frásog Ad5-AT1R-shRNA frá helstu líffærum.
Undirbúningur hjartasýna
Í lok tilraunarinnar var BW rotta mældur. Rottunum var sprautað í kviðarhol með {{0}},4 ml/100 g af pentobarbital til svæfingar. Eftir að brjóstkassinn var opnaður var hjartað fjarlægt fljótt, æðar í kring skornar af, hjartablóðið þurrkað með síupappír, allt hjartaþyngd (HW) var vegin og hlutfall hjartaþyngdar og BW (HW/ BW) var reiknað [9, 10]. Nokkrir 1-mm3 stykki af hjartavöðvavef voru teknir úr apical svæðinu, skolaðir með 0,1 mól/l fosfat-bufferuðu saltvatni (PBS), síðan fyrst festir með 2,5 prósent glútaraldehýði (pH 7,2). Þeir voru síðan festir með 1 prósent osmíum tetroxíðlausn (pH 7,2), þurrkaðir með hækkandi halla alkóhóli og asetónum, bleytir og innfelldir með epoxýplastefni og útbúnir í ofurþunna hluta. Önnur 60–100 g af hjartavöðva í vinstri slegli voru tekin til að mæla HYA.
Athugunarvísitölur
SBP í halaslagæð í rólegu vökuástandi var skráð fyrir inndælingu og á öllum tímapunktum eftir inndælingu. Tekin voru um 80–90 g af hjartavef og innihald HYA í hjartavefnum greint með líffræðilegri aðferð, samkvæmt leiðbeiningum HYA greiningarsettsins, og síðan breytt í kollageninnihald, samkvæmt formúlunni: kollagen innihald=HYA innihald × 7,46 [11]. BW og HW rottanna voru skráð og HW/BW hlutfallið var reiknað út. Ofurþunnu hlutarnir voru litaðir með bæði úranýlasetati og blýsítrati og skoðaðir og myndaðir í rafeindasmásjá.
Greining á tjáningu AT1R mRNA með rauntíma flúrljómandi magni fjölliða keðjuverkunar (RT-qPCR)
Í lok tilraunarinnar voru {{0}},5 g af vef vinstri slegils tekin úr öllum hópum til að greina tjáningu AT1R mRNA. AT1R genaröðin hjá rottum var valin á GenBank (raðnúmer NM_030685), og frumur og rannsakar voru hannaðir með því að nota Primer Premier 5.0 og smíðaðir af Sangon Biotech (Shanghai, Kína). AT1R andstreymis grunnurinn var 5'-ACG ATG CTG GTG GCC AAA GT -3', og downstream grunnurinn var 5'-ATG ATA AGG AAA GGG AAC AAG AAG C -3'. Rannsakaröðin var 5'-ATT ATG AGT CTC GGAATT CGA CGC TCC CCA-3', og breytingin á rannsakandanum var 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4. -actin upstream primerinn var 5'-AGG GAA ATC GTG CGT GAC AT -3', og downstream primerinn var 5'- CCA TAC CCA GGA AGG AAG GCT-3'. Rannsóknaröðin var 5'-CAC TGC CGC ATC CTC TTC CTC CCT GG-3' og breytingin á rannsakandanum var 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4.
Heildar-RNA var dregið úr vefjum með Trizol eins skrefs aðferð og öfugt umritað í cDNA með Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV) bakritakerfi. Undirbúningur staðlaðra ferilsýna samanstóð af markgeninu og húshaldsgeninu ( -aktín) sýnisins sem þurfti að magna upp með PCR (fjölliðakeðjuverkun). Varan var þynnt með halla til að búa til staðlaðan feril. PCR hvarfkerfið var 2 µl af 10 × buffer, 2 µl af MgCl2 og 0,5 µl af dNTP. Það var {{10}},5 µl af grunni andstreymis, 0,5 µl af grunni fyrir neðan, 1 µl af rannsakanda, 0,4 µl af Taq ensíminu og 2 µl af hvarfsniðmáti og dauðhreinsað afjónað vatni var bætt við þar til rúmmálið náði 20 µl. PCR kerfið var sett í flúrljómandi PCR rör, mögnun var framkvæmd og flúrljómunarmerkjum var safnað á Rotor-gena flúrljómunar magn PCR skynjaranum. Hvarfskilyrðin voru sem hér segir: 95 gráður, 5 mín; 94 gráður, 5 s; 60 gráður, 30 s í samtals 45 gerðar lotur. Flúrljómunarmerkjunum var síðan safnað og niðurstöðurnar greindar.
Til að útrýma enn frekar áhrifum mRNA magngreiningar og hvarfvirkni PCR á niðurstöður tilraunarinnar, var magngreining á heildarfjölda innri eftirlits-aktíns framkvæmd samtímis, hlutfall alger eintaksfjölda AT1R og -aktíns. var notað sem hlutfallsleg tjáning AT1R gensins.
tölfræðigreining
Tölfræðigreining gagna var framkvæmd með því að nota tölfræðihugbúnaðinn SPSS 12.0. Endurtekin mælingargögn meðal hópanna þriggja voru greind með því að nota sambreytileikagreiningu. Öll gagnasöfn uppfylltu forsendur fyrir framkvæmd ANCOVA. Student-Newman-Keuls (SNK)-q prófið var notað fyrir margvíslegan samanburð á meðal meðal margra hópa. Gögn í öllum hópum voru gefin upp sem meðaltal ± SD. P<0.05 was considered statistically significant.
Niðurstöður
Ad5-AT1R-shRNA dró verulega úr SBP í SHR
Fyrir inndælingu var SBP marktækt hærra í tilraunahópnum og í SHR hópnum var hærra en í WKY hópnum (P<0.05). Twenty-four hours after the first injection, SBP was significantly lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.01), and="sbp=" did=" not=" decrease=" significantly=" in=" the=" shr=" group=" wky=" p=">0.05). Eftir fyrstu inndælingu Ad5-AT1R-shRNA varði blóðþrýstingslækkandi áhrifin í fimm daga í tilraunahópnum og blóðþrýstingurinn jafnaði sig á 7. degi. Eftir seinni sprautuna lækkaði blóðþrýstingurinn marktækt aftur og var lengdin lengri en eftir fyrstu sprautuna og stóð í 14 daga (mynd 1). Staðbundin og almenn viðbrögð dýra komu fram á hverjum degi og engin frávik, svo sem lystarleysi, þyngdartap og hækkaður hiti, fundust. Engar marktækar breytingar voru á hjartslætti í hópunum þremur og munurinn á hópunum þremur var ekki tölfræðilega marktækur.
Ad5-AT1R-shRNA dregur verulega úr AT1R mRNA tjáningu í hjartavef
Til að sannreyna hvort Ad5-AT1R-shRNA hafi áhrif RNA-truflana á tjáningu AT1R mRNA í vefjum, á 21. degi eftir Ad5-AT1RshRNA inndælingu, var heildar-RNA hjartavefsins dregin út í öllum hópum. Eftir öfuga umritun yfir í cDNA var afritafjöldi gena greindur með rauntíma flúrljómun magni PCR. Niðurstöður PCR mögnunarferilsins leiddu í ljós að tjáning AT1R mRNA í tilraunahópnum var marktækt minni en í samanburðarhópi um háþrýsting. Þar að auki var munurinn tölfræðilega marktækur (P<0.05, Fig. 2).
Dreifing Ad5-AT1R-shRNA í vefjum
Flúrljómunarmerktu raðbrigða kirtilveirunni var dreift í hjarta-, nýrna-, ósæðar- og nýrnahettuvef eftir 2 daga endurtekna inndælingu á Ad5-AT1RshRNA (mynd 3). Þar sem AT1R dreifðist víða í vefnum voru niðurstöður þessarar rannsóknar í samræmi við in vivo dreifingu AT1R.
Ad5-AT1R-shRNA dregur verulega úr ofstækkun hjartavöðva í SHR
Ástand hjartavöðvastækkunar hjá rottum má endurspegla með því að mæla HW og HW/BW hlutfallið. Með því að mæla hjartaþyngd og líkamsþyngd rotta leiddi þessi rannsókn í ljós að HW og HW/BW voru marktækt hærri í SHR hópnum en í WKY hópnum (P<0.01). The result suggests that there was obvious myocardial hypertrophy in untreated SHR. On the 21st day after Ad5-AT1R-shRNA injection, HW and HW/ BW were lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.05) (Fig. 4).
Ad5-AT1R-shRNA getur dregið úr stigi hjartavöðvavefs í SHR
Innihald HYA og kollagens var marktækt hærra í SHR hópnum en í WKY hópnum (P<0.01). These results suggest that obvious myocardial fibrosis has been found in the cardiac ventricle in the SHR group. The contents of HYA and collagen were significantly lower in the SHR group than in the SHR group (P<0.01) (Fig. 5).
Ad5-AT1R-shRNA bætir verulega uppbyggingu hjartavöðva SHR
Útbyggingarathugun á hjartavöðvanum með rafeindasmásjá sýndi að í WKY hópnum var kjarnahimna hjartafrumna ósnortinn, vöðvavefhimnurnar voru skýrar, fyrirkomulagið snyrtilegt, þverlínurnar skýrar, hvatberarnir skýrir og engin fjölgun kollagen trefja í millivef í hjartavöðva (myndir 6A og B). Í SHR hópnum var kjarnahimna hjartafrumna ekki ósnortinn, vöðvaþræðir voru óskýrir og fyrirkomulagið óreglulegt, sum vöðvaþræðanna hurfu. Það sást að þverlínurnar voru ekki skýrar og hvatberar bólgnir og söfnuðust upp. Þar að auki mynduðust lofttæmingar í því og mikill fjöldi netfrumnastækkunar og fjölgun kollagentrefja sást í millivef hjartavöðva (myndir 6C og D). Í samanburði við WKY og SHR hópana, í tilraunahópnum, var kjarnahimna hjartafrumna tiltölulega ósnortinn, vöðvahimnur voru skýrar, uppröðun tiltölulega snyrtileg, þverlínur voru skýrar og hvatberar voru ekki bólgnir. Hins vegar jókst fjöldi hvatbera í staðbundnum svæðum og engin augljós fjölgun kollagentrefja var í millivef hjartavöðva (myndir 6E og F).
Umræða
Í þessari rannsókn komumst við að því að Ad5-AT1R-shRNA gæti dregið verulega úr blóðþrýstingi SHR og dregið úr tjáningu AT1R mRNA í hjartavef. Raðbrigða kirtilveiruferjan hefur ákveðin markáhrif, sem geta frásogast af vefnum sem inniheldur AT1R eftir inndælingu í rósbláæð. Ennfremur gæti Ad5-AT1R-shRNA dregið úr ofstækkun hjartavöðva í SHR, bætt bandvefsmyndun í hjartavöðva í SHR með því að hindra tjáningu AT1R og bætt útbyggingarbreytingar á hjartavöðvanum í SHR.
Hjá venjulegum rottum er SBP 110–120 mmHg og í SHR getur SBP verið allt að 200 mmHg. Tíðni háþrýstings var 100 prósent og þessar rottur bentu einnig til háþrýstings hjarta- og æðasjúkdóma. Þess vegna hentar þessi tegund af rottum til rannsókna á háþrýstingi í mönnum. Rottur með sjálfkrafa háþrýsting byrja venjulega að sýna ofvöxt í vinstri slegli við 10 vikna aldur, sem versnar smám saman með aldrinum, kollageninnihald í hjartavöðvanum eykst verulega og bandvefsmyndun í hjartavöðva og millivefsbreyting á hjartavöðva á sér stað [12, 13]. Þessi rannsókn leiddi í ljós að samanborið við 16-vikugamlar WKY rottur, HW, HW/BW, jókst innihald HPA og kollagen í hjartavöðva marktækt í 16-vikugamalt SHR. Aukningin á HW og HW/BW endurspeglar fjölgun og stækkun hjartavöðvafrumna og aukningu á hjartaþyngd.
Ennfremur er HYA einstakt fyrir kollagen trefjar og innihald þess getur endurspeglað kollageninnihald og bandvefsgráðu. Jafnframt leiddu niðurstöður rafeindasmásjárrannsóknar í ljós að í SHR hópnum var kjarnahimna hjartafrumna ekki heil, vöðvahimnur voru óskýrar, uppröðun var óregluleg, sum vöðvaþráða hurfu, þverlínur voru óljósar, hvatberar bólgnir. og safnaðist fyrir og í því mynduðust lofttæmar. Mikill fjöldi offjölgunar í netfrumum og fjölgun kollagentrefja sást í millivef í hjartavöðva. Niðurstöðurnar leiddu í ljós að sleglabreytingin var augljós hjá 16-vikukömlum SHR.
Rannsóknir á genameðferð við háþrýstingi leiddu í ljós að andskynjunarhömlun á tjáningu AT1R og annarra meðlima RAS kerfisins hafði lækkað blóðþrýsting og bætt meinafræðilegar breytingar í hjartanu í SHR [14, 15]. Niðurstöður fyrri rannsókna leiddu í ljós að shRNA var mjög tjáð í nýrum, hjarta, lifur, ósæð og nýrnahettum. Þetta er svipað og niðurstöður þessarar rannsóknar. Að auki getur Ad5-ACE-AT1R-shRNA bætt útbyggingu hjartavöðvafrumna og lækkað blóðþrýsting með því að minnka tjáningu ACE og AT1R.
Að sama skapi var RNA-truflunartækni notuð í fyrri tilraunum sem gerðar voru af öðrum vísindamönnum [16], þar sem genatjáning AT1R var hindrað með innrennsli Ad5-AT1RshRNA í halaæð, sem hefur lækkað blóðþrýsting. Við reyndum að snúa við stækkun vinstri slegils og bandvefsmyndun í hjartavöðva með genameðferð. Þessi rannsókn leiddi í ljós að eftir endurtekna inndælingu á Ad5-AT1RshRNA sýndi blóðþrýstingurinn í SHR ekki aðeins augljós blóðþrýstingslækkandi áhrif heldur hafði einnig áhrif á ofanásetningu, það er amplitude og lengd lágþrýstingsáhrifa eftir seinni inndæling var marktækt hærri en eftir fyrstu inndælingu. Niðurstöðurnar benda til þess að áhrif endurtekinnar inndælingar á Ad5-AT1R-shRNA séu betri. HW, HW/BW og innihald HYA og kollagens í hjarta var marktækt lægra í tilraunahópnum en í SHR hópnum. Niðurstöður rafeindasmásjárskoðunar leiddu einnig í ljós að hjartavöðvaskemmdir voru marktækt léttari í tilraunahópnum en í SHR hópnum og tjáning AT1R mRNA var marktækt minni í tilraunahópnum en í SHR hópnum.
Allar þessar niðurstöður leiddu í ljós að Ad5-AT1RshRNA framkallaði áhrif RNA-truflana, sem hindraði röð líffræðilegra áhrifa samsetningar Ang II og AT1R af völdum háþrýstings og sleglabreytinga, sem bendir til þess að þessi genameðferð geti dregið úr aðeins blóðþrýsting en einnig bæta sleglaendurgerð í SHR. Magn angíótensíns II í plasma myndi aukast með því að hindra genið angíótensín II tegund 1 viðtaka. Klassísk áhrif angíótensíns II á marklíffæri þess eru að mestu miðluð af tveimur himnuviðtökum, tegund 1 viðtökum (AT1Rs) og gerð 2 viðtaka (AT2Rs), sem miðla mismunandi virkni. Sýnt hefur verið fram á að AT1R stuðlar að vexti og útbreiðslu, svo sem æðasamdrætti, auknum þrýstingi og samdrætti hjartans, og miðlar skaðlegum áhrifum, þar með talið vanstarfsemi æðaþels, hjarta- og æðasjúkdóma og bólgu.
Aftur á móti er AT2R talið framkalla andstæð áhrif, hamla vexti, stuðla að frumudauða, æðavíkkun og lágþrýstingi og koma í veg fyrir endurgerð hjarta- og æðakerfis [17]. Eftir endurtekna inndælingu framkallaði adenóveiruferjan ekki augljósar aukaverkanir og lágþrýstingsáhrifin voru langvarandi. Í lok tilraunarinnar, í tilraunahópnum, fór blóðþrýstingurinn í raun aftur í upphafsástand. Hins vegar var tjáning AT1R í hjartavöðva lægri en í SHR hópnum. Þetta bendir ekki til þess að breytingin á blóðþrýstingi sé beintengd tjáningu AT1R í hjartavöðvanum. Getgátur eru um að RAS kerfi staðbundinna vefja eigi aðallega þátt í hlutverki vefjavefja.
Ein takmörkun þessarar rannsóknar var að blóðþrýstingur ætti að vera ífarandi með útvarpsfjarmælingum, eða að minnsta kosti með tjóðruðu kerfi, en vegna tæknilegra vandamála gátum við aðeins notað Tail-cuff mælingar á blóðþrýstingi, sem var ekki mjög áreiðanlegt.
Niðurstaða
Genameðferð sem notar RNAi tækni til að hindra tjáningu AT1R er ekki aðeins hægt að nota sem nýja aðferð til að lækka blóðþrýsting heldur er einnig búist við að hún verði ný aðferð til að bæta endurgerð hjartavöðva og hjartabilun. Engu að síður, eins og er, er þessi nýja tækni takmörkuð við dýrarannsóknir. Rannsaka verður frekar öryggi og skilvirkni notkunar þess í meðferð á mönnum. Til dæmis þarf frekari rannsókn á öryggi og skilvirkni flutningsferjunnar og hvort hægt sé að beita þessari genameðferðaraðferð við aðrar tegundir hjartavöðvabreytinga.
Heimildir
1. Suthahar N, Meijers WC, Silljé HHW, de Boer RA. Frá bólgu til bandvefs-sameinda- og frumukerfis við endurgerð hjartavefs og sjónarhorn á mismunandi meðferðartækifæri. Curr hjartabilunarfulltrúa 2017; 14: 235–250. [Medline] [CrossRef]
2. Hasan HF, Radwan RR, Galal SM. Bradykinin-styrkjandi þáttur einangraður úr Leiurus quinquestriatus sporðdrekaeitri dregur úr hjartavöðvakvilla í geisluðum rottum með endurgerð RAAS ferilsins. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2020; 47: 263–273. [Medline] [CrossRef]
3. Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. Æðatrefjun í öldrun og háþrýstingi: sameindakerfi og klínískar afleiðingar. Can J Cardiol. 2016; 32: 659–668. [Medline] [CrossRef]
4. Wu J, Montaniel KR, Saleh MA, Xiao L, Chen W, Owens GK, o.fl. Uppruni fylkisframleiðandi frumna sem stuðla að ósæðartrefjum í háþrýstingi. Háþrýstingur. 2016; 67: 461–468. [Medline] [CrossRef]
5. Lu M, Xing H, Xun Z, Yang T, Ding P, Cai C, o.fl. Lítil RNA sending sem byggir á exósómum: Framfarir og horfur. Asian J Pharm Sci. 2018; 13:1–11. [Medline] [CrossRef]
6. Xiao C, Qiu L, Zen Q. Bygging shRNA sem miðar að rottum angíótensín II tegund 1 viðtökum og RNAi þess í umfrymi. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2006; 26:4–8. [Medline] [CrossRef]
7. Xiao CS, Zhang JL, Qiu L. [Áhrif shRNA sem miðar að angíótensín II tegund 1 viðtaka á blóðþrýsting og AT1R mRNA tjáningu í rottum með sjálfkrafa háþrýsting]. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2007; 35: 354–358 kínverska. [Medline]
8. Zhang JQ, Sun HL, Ma YX, Wang DW. [Áhrif RNA-truflunar sem miða að angíótensín 1a viðtaka á blóðþrýsting og hjartastækkun rotta með 2K1C háþrýsting]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2006; 86: 1138–1143. [Medline]
9. Reaves PY, Wang HW, Katovich MJ, Gelband CH, Raizada MK. Minnkun háþrýstings með kerfisbundinni afhendingu retróveiruferju sem inniheldur angíótensín II viðtaka andsens cDNA af gerð I. Aðferðir. 2000; 22: 211–218. [Medline] [CrossRef]
10. Guo K, Lan CZ, Yu TT, Huang LL, Wang XH, Pan C, o.fl. Áhrif Xin-Ji-Er-Kang formúlu á 2K1C framkallaðan háþrýsting og endurgerð hjarta- og æðakerfis hjá rottum. J Etnopharmacol. 2014; 155: 1227–1235. [Medline] [CrossRef]
11. Paulis L, Matuskova J, Adamcova M, Pelouch V, Simko J, Krajcirovicova K, et al. Afturköllun á stækkun vinstri slegils og endurgerð ósæðar í NO-skorti háþrýstingsrottum: áhrif L-arginíns og spírónólaktóns. Acta Physiol (Oxf). 2008; 194: 45–55. [Medline] [CrossRef]
12. Kang L, Ge CJ, Hu SJ. Gagnleg áhrif atorvastatíns á endurgerð vinstri slegils hjá rottum með sjálfkrafa háþrýsting. Lyfjafræði. 2007; 80: 120–126. [Medline] [CrossRef]
13. Bessa ASM, Jesus ÉF, Nunes ADC, Pontes CNR, Lacerda IS, Costa JM, o.fl. Örvun á ACE2/Ang-(1-7)/Mas ásnum hjá þunguðum rottum með háþrýsting dregur úr hjarta- og æðasjúkdómum hjá fullorðnum karlkyns afkvæmum. Háþrýstingur Res. 2019; 42:1883–1893. [Medline] [CrossRef]
14. Kimura B, Mohuczy D, Tang X, Phillips MI. Minnkun á háþrýstingi og ofstækkun hjarta af völdum adenó-tengdrar veiru sem gefur angíótensínógen andnæmi. Háþrýstingur. 2001; 37: 376–380. [Medline] [CrossRef]
15. Zhou H, Bian YF, Li ML, Gao F, Xiao CS. [Áhrif RNA-truflunar sem miða að angíótensín 1 viðtaka og angíótensínbreytandi ensími á blóðþrýsting og endurgerð hjartavöðva hjá rottum með sjálfkrafa háþrýsting]. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2010; 38: 60–66 (á kínversku). [Medline]
16. Raja MAG, Katas H, Amjad MW. Hönnun, vélbúnaður, afhending og meðferð kanónísks og Dicer-hvarfefnis siRNA. Asian J Pharm Sci. 2019; 14: 497–510. [Medline] [CrossRef]
17. Dasgupta C, Zhang L. Angiotensin II viðtaka og lyfjauppgötvun við hjarta- og æðasjúkdóma. Drug Discovery Today. 2011; 16:22–34. [Medline] [CrossRef]
For more information:1950477648nn@gmail.com
