Áhrif Runing II á vöxt og meinvörp ígrædds æxlis í brjóstakrabbameinsberandi músum og virkni þess

Hlutlæg:

Til að kanna áhrif Runing II (kínversk jurtablöndu fyrir brjóstakrabbamein) á vöxt og meinvörp ígræddra æxla MA-891-berandi TA2 músa og virkni þess. Aðferðir: Líkan af brjóstakrabbameini MA-891 frumustofnígræddu æxli TA2 músa með meinvörp í lungum var þróað til að fylgjast með áhrifum Runing II á vöxt og meinvörp ígrædds æxlis. Ónæmisvefjaefnafræðilega aðferðin og myndgreining voru notuð til að greina magn æðaþelsvaxtarþáttar (VEGF), viðtaka æðaþelsvaxtarþáttar (VEGFR), fjölda öræða (MVC) og svæði öræða (MVA).

Niðurstöður: Í Running II hópnum var hömlun á æxlisþyngd og hömlun á meinvörpum í lungum 37,3 prósent og 65,4 prósent í sömu röð, æxlisvöxtur og meinvörp í lungum voru augljóslega hindrað; Og styrkur VEGF og VEGFR, MVC og MVA lækkuðu verulega samanborið við þau í æxlisberandi samanburðarhópnum (P<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.

Að auki, á sama tíma við rannsóknir, komumst við að því að echinacea í Cistanche hefur æxlishemjandi áhrif. Til notkunar á echinacoside í æxlislyfjum bætir þessi uppfinning fyrst MTH1, ólífrænum pýrófosfatasa og dGTP við hvarflausnina (100mM pH8.0 Tris-ediksýra, 40mM NaCl, 10mM magnesíumasetat, 0,005 prósent Tween20 og 1mMDTT) Í aðferðinni var ensímið og hvarfefnið ræktað við stofuhita í 1 klukkustund og síðan var 25 ul af malakítgrænu lausninni bætt við til að stöðva hvarfið. Gleypið var greint við 630 nm með BIO-RAD iMark örplötulesara. Niðurstöðurnar sýndu að echinacoside hafði marktæk hamlandi áhrif á ensímvirkni MTH1; Í öðru lagi greindust áhrif echinacosides á æxlisfrumur á frumustigi með MTT prófun og niðurstöðurnar sýndu að echinacoside gæti hamlað verulega vöxt SW480 ristilkrabbameinsfrumna og U2OS beinsarkmeinsfrumna úr mönnum, og þessi uppfinning hindraði vöxt echinacosides. MTH1, sérstakt ensím sem viðheldur lifun í æxlisfrumum, leiðir til innlimunar oxaðra núkleótíða í DNA, sem veldur banvænum DNA tvíþátta brotum í krabbameinsfrumum, sem veldur þar með æxlishemjandi áhrifum. Nýja lækningaforritið mun leggja grunninn að þróun nýrra æxlislyfja í framtíðinni.

Smelltu cistanche effects vöru

Leitarorð:

brjóstakrabbamein; æðamyndun; æðaþelsvaxtarþáttur (VEGF); Running II (kínversk jurtalyf fyrir brjóstakrabbamein)

Brjóstakrabbamein er illkynja æxli sem ógnar heilsu kvenna alvarlega og sjúkdómstíðni er í fyrsta sæti meðal illkynja æxla kvenna, með tilhneigingu til að aukast ár frá ári. Þrátt fyrir að meðferðaraðferðir þess hafi náð nokkrum framförum hefur langtímalifun sjúklings með brjóstakrabbamein ekki verið hækkuð vegna ífarandi vaxtar og meinvarpa æxla. Æxlismyndun æxla er grunnskilyrði fyrir vöxt, innrás og meinvörp æxla.

Þess vegna er hömlun á æðamyndun æxla áhrifarík leið til að koma í veg fyrir myndun og þróun æxla og lengja líf sjúklingsins.1 Í þessari rannsókn er verkunarháttur kínverska lyfsins Running II með það hlutverk að bæta qi og næra yin, stjórnun umferðar og getnaðaræða, losunar massa og afeitrunar við að hindra æxli og meinvörp var rannsakað út frá æðamyndun og stjórnunarþáttum þess í ígræddu æxli brjóstakrabbameins MA-891 TA2 músa með meinvörp í lungum.

EFNI

Sextíu SPF kvenkyns TA2 mýs, sem vógu (20±2) g, 6-8 vikna aldri, voru keyptar frá rannsóknardýradeild Tianjin háskólans í læknavísindum. MA-891 frumustofn músarinnar í brjóstakrabbameini var útvegaður af prófessor Luo Liqin, meinafræðirannsóknarstofu, æxlisstofnunar, kínverska læknaakademíunnar.

Runing II samanstendur af Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Semen Coicis), Yin Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis) o.s.frv., með skammtahlutfallið 1,67: 1,67: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1, sem voru útbúin sem afsoð af Section of Pharmaceutics, Longhua Hospital, samkvæmt hefðbundinni tækni, og haldið við 4ć til notkunar; Cyclophosphamide (CTX, 200mg/ampule, útibúsnúmer: 981104) og tamoxifen (TAM) voru framleidd af Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd.; Venjulegt saltvatn var framleitt af Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.

Æðaþekjuvaxtarþáttur (VEGF) fjölstofna mótefni (vinnuþynningar 1:25–1:50), viðtaka æðaþelsvaxtarþáttar (VEGFR, vinnuþynningar 1:30–1:50) og FVIIIAg fjölstofna mótefni (vinnuþynning 1:50 ) voru keyptir frá Santa Cruz Biotechnology Inc; EnVision annað mótefni, VEGF mótefni gegn kanínum, FVIII Ag mótefni gegn kanínu og VEGFR mótefni gegn kanínu, og EnVision Kit voru keypt frá Dako Co., Danmörku; 3,3- Diaminobenzidine (DAB) var keypt frá Shanghai Huamei Bioengineering Factory.

AÐFERÐIR

Þróun dýralíköns

Dýralíkanið var þróað með ályktun af aðferðum Luo og Gao, et al.2,3. In vitro ræktuð brjóstakrabbamein MA-891 frumur músarinnar í logaritmískum lifunarfasa voru valdar og styrkur frumna var stilltur sem 1x107/ml. Við smitgát voru krabbameinsfrumurnar í spendýrum sáð inn í TA2 músina undir húð á hægri öxl (0,2 ml/mús, þ.e. 2X106 frumur/mús).

Flokkun dýra og lyfjagjöf

Tveimur dögum eftir sáningu var músunum skipt af handahófi í 4 hópa, 15 mýs í hverjum hópi. 1) Æxlisberandi samanburðarhópur: 0,4 ml af venjulegu saltvatni var gefið í maga, einu sinni á dag, fimm sinnum í viku. 2) Runing II hópur: Runing II var þynnt með venjulegu saltvatni og 0,4 ml af þessari þynningu sem samsvarar 48 g·kg{{10}}·d-1 sem var reiknað samkvæmt meðfylgjandi töflu „Umreikningstöflu milli líkamsyfirborðs manna og dýra“ í „Aðferðafræði rannsókna á lyfjafræði kínverskra lyfja“4 var gefin í maga, einu sinni á dag, fimm sinnum í viku. 3) CTX samanburðarhópur: Um skammtinn sem Jiang Bo notaði, 5 CTX var þynnt með venjulegu saltvatni og 0,4 ml sem samsvarar 50 mg·kg-1·d-1 var gefið í maga, annan hvern dag, þrisvar í viku. 4) TAM samanburðarhópur: TAM var þynnt með venjulegu saltvatni og 0,4 ml sem samsvarar 2,7 mg·kg-1·d-1 var gefið í maga, einu sinni á dag, fimm sinnum í viku. Lyfin voru gefin í 3 vikur í öllum fjórum hópunum.

Sýnataka

Á 22. degi eftir gjöf voru músunum aflífaðar með liðfærslu á hálshryggjarliðum og þær vigtaðar. Síðan var æxlismassi og lunga tekin og vegin hvort um sig. Raunveruleg líkamsþyngd músarinnar=líkamsþyngdin vegin – æxlisþyngdin. Gráir hnúðar á lungnayfirborði, þ.e. meinvörpum, voru taldir með berum augum. Æxlismassi var settur í 10 prósent hlutlausa formaldehýðlausn til festingar, fylgt eftir með paraffínísetningu, ofurþunnum sneiðingum, ónæmisvefjaefnafræðilegri Envision tveggja þrepa þvingun og ákvörðun á VEGF, VEGFR, öræðafjölda (MVC) og öræðaflatarmáli (MVA).

Hömlunarhraði æxlisþyngdar

Æxlishömlunartíðni=(meðalæxlisþyngd samanburðarhóps eftir meðferð – meðalæxlisþyngd lyfjahóps eftir meðferð)/meðalæxlisþyngd samanburðarhóps eftir meðferð × 100 prósent.

Hömlun á meinvörpum í lungum

Hömlun á lungnameinvörpum=(meðaltal lungnameinvörpunarhnúts samanburðarhóps – meðaltal lungnameinvörpunarhnúts lyfjahópsins)/meðaltal lungnameinvörpunarhnúts samanburðarhóps x 100 prósent .

Ónæmisvefjaefnafræðileg sjá fyrir tveggja þrepa litun

Paraffínhlutinn sem var 4 μm var tekinn, fylgt eftir með venjubundnum deparaffíni með xýleni, hallaþurrkun og þvott með PBS, 5 mín x 3 sinnum; hlutanum var sökkt í 0.01 mól/L, pH6.0 sítratbuffi, settur í örbylgjuofn 98ć í 10 mínútur til mótefnavakaviðgerðar og náttúrulega kældur við stofuhita eftir að hafa verið tekinn úr örbylgjuofn; dreypa fyrsta mótefnið (ofangreint mótefni og þynning samsvarandi mótefna í sömu röð), 37ć, 90 mín, þvo með PBS, 5 mín x 3 sinnum; dreypa Envasion öðru mótefni, við stofuhita í 60 mín, þvo með PBS, 5 mín x 3 sinnum; dreypa nýgerðri DAB-litaframleiðandi lausn, stjórna framkallandi lit í 3–10 mínútur undir smásjá, mótlitun í 45 sekúndur með campeachy, skola með kranavatni, þurrka með blásara, festa með hlutlausu tyggjói. Fruman með umfrymi brúnguls eða svartbrúnar kyrna var talin jákvæð. Hinn þekkti jákvæði hluti brjóstakrabbameins var notaður sem jákvæður samanburður og sá þar sem PBS biðminni kom í stað fyrsta mótefnisins var notaður sem neikvæður samanburður.

Myndgreining

Notuð voru ACE myndbandsmyndavél (upplausnarafl 930 línur) og LEICAQ500W myndgreiningartæki og LEICA fullsjálfvirkt myndgreiningarkerfi. Í smásjá x 200 voru 2 sjónsvið í hverjum hluta valin af handahófi til að ákvarða VEGF eða 3 sjónsvið til að ákvarða VEGFR og MVA, og hlutfall jákvætt flatarmáls af öllu sjónsviðsflatarmáli var reiknað út í öllum hópunum . Til að ákvarða MVC voru 5 svæði með ríkustu æðarnar valin í hverjum hluta undir smásjá x 100 og síðan undir x 400 voru öræðar í hverju sjónsviði 5 svæði sem ekki skarast taldar og meðaltalið notað. sem meðaltalsmíkróæðateljari (MVC) æxlisins.

Tölfræðileg aðferð

Notaður var hugbúnaður SPSS8.0 og kí-kvaðratprófið var notað til að bera saman gengi og t-próf ​​eða einstefnu ANOVA var notað til að bera saman meðaltöl.

NIÐURSTÖÐUR

Æxlishamlandi og meinvörp gegn meinvörpum af Running II á ígræddu æxli brjóstakrabbameins MA-891-sem ber TA2 mýs með meinvörpum í lungum

It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 prósent, með verulegum mun (bæði P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.

Áhrif Running II á VEGF og VEGFR tjáningu í ígræddu æxli MA-891- sem bera TA2 músa

Eins og sýnt er í töflu 2 var tjáning VEGF og VEGFR í bæði Running II hópnum og CTX samanburðarhópnum marktækt lægri en í æxlisberandi samanburðarhópnum (P<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), var VEGF tjáning marktækt lægri en í TAM samanburðarhópnum (P<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), og VEGFR tjáning var lægri en í samanburðarhópi sem ber æxli (P<0.05).

Áhrif Running II á MVA og MVC ígrædds æxlis í MA-891-berandi TA2 músum

Eins og sést í töflu 3 var magn MVA og MVC í ígræddu krabbameini í lyfjahópunum marktækt lægra en í samanburðarhópi sem ber æxli (P<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).

UMRÆÐA

Hefðbundin kínversk læknisfræði heldur því fram að tilurð og þróun æxlis sé tilkomin vegna yfirgripsmikilla áhrifa sjálfvakinna og samúðarþátta en með álaginu á þá fyrrnefndu. Í fyrri klínískri rannsókn töldu prófessor Lu og Tang að skortur á lífsnauðsynlegum qi í innra hluta og ósamræmi í gegnumganga og getnaðaræðar væru helstu orsakir æxlismyndunar og innri innrás, flutningur og útbreiðsla krabbameinssýkla séu helstu skilyrði vöxtur og meinvörp brjóstakrabbameins.6 Þess vegna, í meðferð, hvetja þeir til þess að næra lífsnauðsynlegt qi og fjarlægja massa. Running II er kínversk jurtaformúla sem er dregin saman í gegnum klíníska iðkun margra ára í samræmi við meðferðarregluna um að styrkja líkamann viðnám fyrst og útrýma sjúkdómsvaldandi þáttum í öðru lagi. Í formúlunni eru Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Tai Zi Shen ( Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Yin Yang Huo (Herba Epimedii) fullvalda innihaldsefni, með áhrifum að bæta qi og næra yin, stjórna gegnumganga og getnaðaræðar, sem er í samræmi við almennt séð einkenni brjóstakrabbameins eins og bæði qi og yin skort og ósamræmi í gegnumganga og getnaðaræðar. Klínískt nær þessi formúla augljós áhrif að lengja lifunartíma, auka lífsgæði, koma á stöðugleika í æxlisfókus og koma í veg fyrir meinvörp krabbameins.

Þessi rannsókn kom á líkaninu af brjóstakrabbameini MA-891 frumustofni ígræddu æxli TA2 músa með meinvörp í lungum og sá áhrif Running II á fast æxlisvöxt og meinvörp í lungum og komst að því að marktækur munur var á æxlinu. hömlunartíðni og hömlunartíðni lungnameinvörpanna milli Running II hópsins og æxlisberandi hópsins, og milli Running II hópsins og CTX samanburðarhópsins, sem sýnir að Running II hefur augljós virkni til að hindra æxlisvöxt og gegn meinvörpum. Þar að auki hefur tamoxifen (TAM) ekki þá augljósu virkni að hindra æxlisvöxt og andvörp gegn meinvörpum í múslíkönunum, sem er svipað niðurstaðan að brjóstakrabbamein MA-891 er ER-frumustofn og skýrslan um beina verkun af lágum styrk TAM erlendis.7

Æxlið er dæmigerður æðaháður sjúkdómur og vöxtur þess, íferð og meinvörp eru háð æðamyndun. Á sama tíma gefur nýæðavæðingin aftur meinvörpunarrás fyrir æxlisfrumur, sem skapar hagstæð skilyrði fyrir vöxt, meinvörp og dreifingu æxlis. 8, 9 VEGF er æðasjúkdómavaldandi þáttur með sterkustu, einstöku og sértækustu verkunina á æðaþelsfrumur og margar æxlisfrumur geta seytt VEGF, sem eykur gegndræpi æða og verkar beint á æðaþelsfrumur með því að bindast VEGF viðtakanum, örva skiptingu þess og fjölgun, örva æðamyndun æxlis og hafa áhrif á fjölda öræða, til að stuðla að vexti og meinvörpum æxlis.10,11 Flestar æxlisfrumur hafa mikla VEGF tjáningu en í venjulegum vefjum er aðeins lítill fjöldi líffæra ss. nýrun, eggjastokkar osfrv., hafa meiri VEGF tjáningu. Þess vegna halda sumir fræðimenn að hægt sé að nota VEGF sem merki um umbrot æxla og meinvörp12 og ákjósanlegri miðhluta til að hindra nýæðamyndun í æxlum,13 og trufla æðastýringarþætti æxla og verkunartengsl þeirra, stjórna tjáningu æðamyndunarþátta, og hindra æðamyndun stjórnar hugsanlega vexti og meinvörpum æxlis.

Niðurstöðurnar í þessari rannsókn benda til þess að Runing II geti dregið úr tjáningu VEGF og VEGFR til að hugsanlega hindra merkjaleiðni VEGF-framkallaðrar flæðis og fjölgunar æðaþelsfrumna og hamla frekar æðamyndun í æxlum og hefur þar af leiðandi æxlishemjandi áhrif og áhrif gegn meinvörpum. .

Fyrri rannsóknir sýndu að í vaxtarferli illkynja æxla olli of hraður vöxtur vefjar óhjákvæmilega alvarlegri anoxíu í staðbundnum vefjum og súrefnisleysi gæti örvað myndun VEGF mRNA og hægt á niðurbroti VEGF mRNA til að framkalla tilurð a mikill fjöldi staðbundinna nýrra háræðaæða.14,15 Við athugun á ónæmisvefjaefnafræðilegum jákvæðum litunarfrumum fundu höfundar augljósa VEGF tjáningu í umfrymi deyjandi drepæxlisfrumna, þvert á móti minni eða enga tjáningu á VEGF í æxlisfrumum með virkri fjölgun. , sem gæti tengst hærra stigi anoxíuvaldandi þáttar í æxlisfrumum, í samræmi við skýrslu Talks KL, et al.16 Running II inniheldur Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (sæðisbólga), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), o.s.frv., sem virka að virkja blóðrásina, leysa slím og fjarlægja gruggugt. Þeir hamla nýmyndun og seytingu VEGF hugsanlega með því að bæta staðbundna örhringrás æxlisins, auka súrefnisframboð til æxlisfrumna og hindra þar af leiðandi vöxt æxlisins til að framkvæma meinvörp gegn meinvörpum.

HEIMILDIR

1.Folkman J. Æðamyndun og brjóstakrabbamein. J Clin Oncol 1994; 12: 441-443.

2. Folkman J. Æðasjúkdómarannsóknir: frá rannsóknarstofu til heilsugæslustöðvar. Forum (Genova) 1999; 9: 59-62.

3. Potgens AJ. Tjáning æða gegndræpis þáttar hefur áhrif á æðamyndun æxla í sortuæxlalínum úr mönnum sem eru ígræddar á naktar mýs. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.

4.Sauter ER, Nesbit M, Watson JC, o.fl. Vaxtarþáttur æðaþels er markaður fyrir æxlisinnrás og meinvörp í flöguþekjukrabbameini í höfði og hálsi. Clin Cancer Res 1999; 5: 775-782.

5.Warren RS, Yuan H, Matli MR, o.fl. Stjórnun með æðaþelsvaxtarþætti með súrefnisskorti. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

6. Levy AP, Levy NS, Goldberg MA. Eftir umritun stjórnun æðaþelsvaxtarþáttar með súrefnisskorti. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

7.Talks KL, Turley H, Gatter KC, o.fl. Tjáning og dreifing súrefnisvaldandi þátta HIF-1 alfa og HIF-2 alfa í eðlilegum vefjum manna, krabbameinum og æxlistengdum átfrumum. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.

For more information:1950477648nn@gmail.com