Áhrif Cistanche fenýletanóls glýkósíðs þarmaþröskuldar og örveru í þörmum í micealcoholic lifrarsjúkdómum

Ágrip:

Hlutlæg:Músarlíkanið afáfengis lifrarsjúkdómur(ALD) var stofnað af Lieber-Decarli áfengi fljótandi fóðri, og áhrifCistanche phenylethanoid glýkósíð(CPhGs) á þörmum og þarmaörverusamsetningu ALD músa hafði verið rætt.

Aðferð: 36 C57BL/6N kvenkyns mýsnar skiptust af handahófi í venjulegum hópum, CPhGs venjulegum hópi, fyrirmyndarhópum og CPhG hópum með lágum, meðalstórum og háum skömmtum (175 mg·kg-1, 350 mg·kg{{6 }}og 700 mg·kg-1), með 6 músum. Stofnun á ALD músarlíkani með því að nota Lieber-Decarli alkóhól fljótandi fóður. CPhGs skammtahópnum og CPhGs venjulega hópnum var gefið CPhGsby slímgjöf daglega í viðeigandi skömmtum. Sjálfvirk lífefnagreiningartæki greindi ALT, AST, TG og TC gildi í sermi. SerumTNF-, IL-1, LPS, LBP, D-LA, DAO og LBP í lifur greindust með ELISA. Magn TG og TC í einsleitri lifrarsýnum greindist með litamælingu. Lifrarvefur var litaður með olíurauðu O og HE litun. Þarmavefirnir voru litaðir með HE og AB-PAS litun og Muc2 ónæmisvefjafræði. Þarmainnihaldi eðlilega hópsins, CPhGs eðlilega hópsins, módelhópsins og CPhGs háskammtahópsins var safnað og þarmaörveru raðgreind.

Niðurstaða: ALD líkanið var komið á með góðum árangri. Samanborið við venjulega hópinn jókst magn ALT, AST og TG í sermi og magn TG og TC í lifur í líkanahópnum marktækt (P<0.05). Histopathology showed that compared with the normal group, the liver cells in the model group showed obvious steatosis. Compared with the model group, the levels of serum TG liver TG, and TC in the CPhGs dose group decreased significantly (P<0.05). The serum ALT, AST, TNF-α, IL-1β, LPS, and LBP in the CPhGs high dose group were also significantly decreased (P<0.05). Compared with the model group, the number of fatty liver cells in the CPhGs high dose group was significantly reduced, the microvilli structure of jejunum epithelial cells was intact, and the expression of Muc2 was reduced in the colon.Compared with the model group, the flora of the CPhGs high dose group changed significantly (P<0.05). Compared with the normal group, the Allobaculum was significantly up-regulated in the model group (P<0.05). Compared with the model group, the abundance of Akkermansia in the CPhGs high dose group was significantly increased (P<0.01). Akkermansia was negatively correlated with Allobaculum (r = -0.701, P<0.01). 

Niðurstaða: CPhGs geta dregið úr skaða á þörmum af völdum ALD, sem kann að veragegna verndarhlutverki með því að stjórna gnægð og uppbyggingu Akkermansia og Allobaculum, og hafa áhrif á slímlagsjafnvægi slímhúðarþindar í þörmum.

Leitarorð:CPhGs; áfengis lifrarsjúkdómur; þörmum hindrun; örvera í þörmum

NÁTTÚRLEGT LÍFRÆNT CISTANCHE EXTRÍK MEÐ 40% ECHINACOSIDE OG 16% ACTEOSIDE FYRIR

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Stærsti útflytjandi cistanche í Kína:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Sími:+86 15292862950

Verslaðu fyrir frekari upplýsingar:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Áfengi er orðið einn af mikilvægum áhættuþáttum fyrirlangvinna sjúkdóma um allan heim.„Global Report on Alcohol and Health 2018“ sem Alþjóðaheilbrigðismálastofnunin gaf út sýnir að um það bil 3 milljónir manna dóu vegna óhóflegrar áfengisneyslu um allan heim árið 2016, sem er 5,3% af heildinni [1]. Í okkar landi fjölgar lifrarsjúkdómum af völdum áfengis ár frá ári og eru þau næststærsta orsök lifrarskorpulifrar [2], sem er orðið alvarlegt lýðheilsuvandamál. Aðferðir upphafs og framvindu alkóhólísks lifrarsjúkdóms (ALD) eru flóknar og fjölmargar, aðallega lifrarskemmdir etanólumbrotsefnisins asetaldehýðs og hvarfgjarnra súrefnistegunda [3]. Þar á meðal hefur hlutverk "girni-lifrarás" í framvindu ALD verið Það hefur vakið töluverða athygli [4-5]. Lifrin er aðalstaðurinn fyrir oxandi umbrot áfengis. Langtíma mikil drykkja getur beinlínis skaðað lifrina, sem leiðir til ALD [6]. Lifrarhrörnun er snemmbúin viðbrögð eftir áfengisdrykkju. Talið er að örvera manna í þörmum (GM) sé um 10 billjónir [7]. Örvistfræðilegt jafnvægi sem samanstendur af þarmaflóru, veirum, sveppum og umbrotsefnum.

Jafnvægi, það er örvistfræði í þörmum, er nátengt framvindu ALD í gegnum „girni-lifrarásinn“, en viðeigandi aðferðir eru enn óljósar [8-9]. Þarmaþröskuldurinn og flóran ráða yfir „girni-lifrarásinn“ og erfðabreytt vanstjórnun og oftjáning bólguþátta gegna mikilvægu hlutverki í tilkomu og þróun ALD [10-11].

Rannsóknir hafa komist að því að alvarlegt erfðabreytt vanstjórnun og oftjáning bólguþátta á sér stað við tilkomu og þróun ALD [12]. Langvarandi inntaka eða skammtímaneysla á miklu magni af áfengi mun breyta gegndræpi í þörmum, sem veldur því að LPS í þörmum fer inn í gáttrásina, framkallar bólgusvörun og versnar lifrarskemmdir [12-13].

Cistanche, sem einkennandi kínverskt lækningaefni í Xinjiang, hefur verið skráð í Wu Pu's Materia Medica frá Wei og Jin Dynasties, "Compendium of Materia Medica" frá Song Dynasty, og "Compendium of Materia Medica" frá Ming Dynasty [14. ]. Nútíma lyfjafræðilegar rannsóknir hafa leitt í ljós að Cistanche phenylethanoid glycosides (CPhGs) gegna mikilvægu hlutverki í bólgueyðandi og lifrartrefjun [15-16]. Hins vegar skortir nú rannsóknir á því hvort CPhGs geti stjórnað þarmahindranir eða þarmaflóru í ALD og haft lifrarverndandi áhrif.

Þessi rannsókn notaði Lieber-Decarli alkóhól fljótandi fóður til að koma á fót National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA) [17] skammtímaáfengis lifrarskaða mús líkan til að kanna áhrif CPhGs á örvistfræði í þörmum ALD. Áhrif. Sérstaklega var hugað að áhrifum CPhGs á starfsemi þarmahindrana og smávægi örveru í þarma í ALD músum. Þetta hjálpar til við að sýna fram á lifrarvarnarkerfi CPhGs frá sjónarhóli örvistfræði þarma og veitir tilraunaviðmiðun fyrir lyfjaþróun.

1. Efni

1.1 Dýr

SPF bekk C57BL/6N kvenkyns mýs, 17~20 g, voru keyptar frá Beijing Vitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., vottorðsnúmer SCXK (Beijing) 2021-0006. Dýr voru alin upp og tilraunir gerðar í SPF umhverfi dýratilraunamiðstöðvar Xinjiang Medical University (SYXK (nýtt) 2022-0003). strangur

Fylgjast með dýravelferð og siðferðilegum kröfum siðanefndar tilraunadýra við læknaháskólann í Xinjiang (IACUC-20220127-4).

1.2 Hvarfefni

Alger etanól, ísóprópýlalkóhól (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory, lotunúmer 20230201 og 20190103 í sömu röð); Lieber-Decarli stjórna fljótandi fóður, Lieber-Decarli áfengi fljótandi fóður (Daitz Biotechnology (Wuxi) Co., Ltd., lotunúmer í sömu röð fyrir 710027 og 710260);

Paraformaldehýð festiefni, festiefni Carnoy og rafeindasmásjá (Wuhan Sevier Biotechnology Co., Ltd., lotunúmer CR2208028, CR2305094 og CR2210001 í sömu röð); LBP ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA) sett, TNF-ELISA sett, IL-1

ELISA sett, D-LA ELISA sett, DAO ELISA sett, TG litamælingarprófunarsett og TC litamælingarprófunarsett (Wuhan Yilerite Biotechnology Co., Ltd., lotunúmer eru CV072V649815, CV112VX05028, CV106T8F3303, GY4, 3L4, 3L4, 3L4

GY010XN08244, GY03P04Z5104 og GY02DHB82603); LPS ELISA sett (Wuhan Fein Biotechnology Co., Ltd., lotunúmer U3126I069T); ALT greiningarsett, AST greiningarsett, TG greiningarsett og TC greiningarsett (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd. Co., Ltd., lotunúmer eru 140122014, 140223002, 141722001 og 141622017); HE litunarlausn, mettuð Oil Red O litunarlausn, AB-PAS litunarlausn; Muc2 aðal mótefni, geit and-mús auka mótefni (Wuhan Sevier Biotechnology Co., Ltd., lotunúmerin eru G1005, G1015, G1049, GB11344 og GB23301 í sömu röð).

1.3 Fíkniefni

Cistanche þykkni var keypt fráXinjiang Hotan Dichen Pharmaceutical and Biological Co., Ltd. (echinaceaside Stærra en eða jafnt og 40%, verbascoside Stærra en eða jafnt og 16%, fenýlethanoid glýkósíð Stærra en eða jafnt og 85%, lotunúmer 20230103).

1.4 Hljóðfæri

BS-240VET sjálfvirkur lífefnagreiningartæki (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.); HT7800 rafeindasmásjá (Hitachi Manufacturing Co., Ltd., Japan).

2. Aðferð

2.1 Flokkun og stofnun dýralíkana

36 músum var skipt af handahófi í venjulegan hóp, venjulega lyfjagjöf, módelhópa og CPhG lága, meðalstóra og háa skammta (175 mg·kg-1, 350mg·kg-1 og 700 mg·kg{{ 6}}), hver hópur 6. Öllum músum var fyrst gefið Lieber-Decarli stjórnvökvafóður og aðlagað að fóðri í 3 daga. eðlilegt

Samanburðarhópurinn og venjulegur skammtahópurinn fengu Lieber-Decarli samanburðarfóður í fljótandi formi; módelhópurinn og CPhGs lág-, meðal- og háskammtahóparnir fengu LieberDecarli alkóhól fljótandi fóður. Frá og með 4. degi tilraunarinnar hækkuðu líkanhópurinn og CPhG lág-, miðlungs- og stórskammtahóparnir smám saman alkóhólstyrk áfengisfóðursins úr 0% í 5% og héldu 5% áfengisfóðri til kl. lok tilraunarinnar og pressuð 9 klukkustundum áður en efni er safnað. 0.2 mL·10 g-1 var gefið í magann með 30% etanóli.

Allt fóður er útbúið og notað núna og ferskt fóður er skipt út á hverjum degi frá 17:00 til 19:00. Fylgstu með áti, virkni og andlegu ástandi músanna á hverjum degi. Þegar mýsnar í líkanahópnum birtast í drukknum ástandi eins og listleysi, skert virkni og minni fæðuneysla, bendir það til þess að líkanið hafi heppnast [17]. Þegar CPhGs lág-, miðlungs- og stórskammtahóparnir og venjulegur lyfjagjafahópur byrjuðu að gefa áfengt fóður, var CPhGs lausn með samsvarandi styrk tekin í maga á hverjum degi í samtals 14 daga og venjulegt saltvatn var gefið það sem eftir var.

2.2 Almenn athugun

Át, virkni, andlegt ástand og útskilnaður músanna var fylgst með á hverjum degi; við líkangerð og lyfjagjöf voru dánarástand og þyngd músanna skráð. Líffærastuðull=líffæramassi/(líkamsmassi/100)×100%.

2.3 Val á tilraunadýrum

Eftir að hafa verið svipt mat og vatni í 12 klst, voru mýsnar svæfðar, augasteinar þeirra fjarlægðar og blóði safnað áður en þeim var fórnað. Lifrarvefurinn úr stærsta blaðinu var festur í paraformaldehýðlausn. Jejunalvefurinn var fljótur aðskilinn á ís og festur í rafeindasmásjá festa; 3 cm af jejunal og ristilvef (án þess að skola innihaldið) var aðskilið og fest í Carnoy's fixative. Aðrir 3 cm af jejunum og ristilvef (innihald skolað með lífeðlisfræðilegu saltvatni) voru festir í paraformaldehýðlausn. Innihaldi allra þarmahluta var safnað saman í dauðhreinsuð ensímlaus kryoglas, fljótfryst í fljótandi köfnunarefni og síðan flutt í -80 gráðu kæli til geymslu.

2.4 ELISA og litamæling vísbendinga um einsleita sermis- og lifrarvef

Sjálfvirka lífefnafræðilega tækið var notað til að greina ALT, AST, TG og TC gildi í sermi; ELISA aðferðin var notuð til að greina TNF- , IL-1 , LPS, LBP, DAO og D-LA gildi í sermi og LBP gildi í lifur. Vinnið samkvæmt leiðbeiningunum. Til að gera lifrarvef einsleitan skaltu taka 0.05~1.00 g af ferskum lifrarvef, bæta við ísóprópýlalkóhóli við 2~8 gráður í samræmi við þyngdarhlutfallið (g): rúmmál (mL) { {9}}:9, malið til að verða einsleitt og skilið í skilvindu við 20.000g·mín.-1 15 mín., takið flotið og setjið það á ís til prófunar og vinnið samkvæmt leiðbeiningunum. Litmælingagreining á TG- og TC-gildum í einsleitum sýnum í lifrarvef.

2.5 HE og Oil Red O litun til að greina meinafræði lifrarvefs

Fyrir hematoxylin-eosin litun (HE) var fastur lifrarvefur fjarlægður, paraffín sneiddur, HE litaður og þurrkaður og settur upp. Fastur lifrarvefur var tekinn út, frystur í sneiðar, þveginn með ísóprópýlalkóhóli, litaður með Oil Red O, lokað og skoðað í ljóssmásjá.

2.6 HE og AB-PSA litun til að greina meinafræðilega athugun í þörmum

Jejunalvefur var fjarlægður og festur í paraformaldehýðlausn fyrir HE-litun; ristilvefur var fjarlægður og festur í Carnoy's fixative fyrir AB-PAS litun. Ónæmisvefjaefnafræðiþrep: Þurrkaðu paraffínhluta, endurheimt mótefnavaka, blokkaðu innrænan peroxidasa, sermiblokkun, bættu við frummótefni, bættu við aukamótefni, mótlitaðu frumukjarna eftir litaþróun, þurrkaðu og festu og athugaðu undir ljóssmásjá. Jejunalvefurinn var fjarlægður, skorinn í 1 mm × 1 mm × 1 mm litla bita, festur fyrir tíðablæðingar, eftirfixaður, þurrkaður, innfelldur, fjölliðaður og sneiddur í ofurþunnt sneið. Örvillibreytingar á þekjufrumum jejunal í hverjum hópi komu fram undir rafeindasmásjá.

2.7 Raðgreining og greining á þarmaflóru með 16S aðferð

Þarmainnihald venjulegs hóps, venjulegs skammtahóps, líkanahóps og CPhGs háskammtahóps, byggt á V3-V4 svæði 341F (5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3') og 806R (5'-GGACTACNNNGGGTATCTAAT -3'), með því að nota 16S rDNA raðgreiningartækni með mikilli afköst fyrir raðgreiningu bakteríasamfélagsins. Raðunartilrauninni í þessari rannsókn var lokið af Shenzhen Microtech Technology Group Co., Ltd. Raðunargögnum um örverur í þörmum í þessari rannsókn hefur verið hlaðið upp á National Center for Biotechnology Information undir verkefnisnúmer PRJNA1006676.

Byggt á greiningarniðurstöðum amplicon sequence variants (ASV), eru gerðar Alfa fjölbreytni, Beta fjölbreytni greining, tegundaflokkunarskýring og mismunagreining. Meðal þeirra inniheldur Alpha fjölbreytileikavísitalan aðallega Shannon vísitöluna og Chao1 vísitöluna og tölfræðilega prófið notar Wilcoxon prófið; PCoA

Aðalhnitagreining (PCoA) var framkvæmd með því að nota Anosim til að greina mun á milli hópa; LEfSe var notað til að greina LEfSe) til að fá tegundir með marktækum mun á milli hópa. Lífupplýsingagreining var framkvæmd með því að nota Bioincloud Platform (https://www.bioincloud.tech) verkfæri Microtech Alliance.

2.8 Tölfræðigreining

Öllum mæligögnum er lýst sem igh̅± 𝑠. Fyrir gögn sem hlýða normaldreifingu og fullnægja einsleitni dreifniprófi er einþátta dreifnigreining notuð. Annars er prófið sem er ekki færibreytt notað. Gögnin eru tölfræðilega greind með SPSS 24.0. P<0.05 means the difference is statistically significant.