Ákvörðun á Echinacoside í vatni útdrætti af Cistanche Herba með HPLC

Ágrip:

Markmið HPLC aðferð var stofnuð fyrirákvörðun á echinacosideívatnsþykkni úr Cistancheherba.

Aðferðir Echinacoside var ákvarðað með HPLC. Aðskilnaðurinn var gerður á Inertsil ODS-SP C18 súlunni með hreyfanlegum fasa sem samanstóð af asetónítríl(A) og 0.4% fosfórsýrulausn(B), með hallaskolun. Uppgötvunarbylgjulengdin var stillt á 333 nm og súluhitastigið var 30 gráður. Rennslishraði var 1,0 mL·mín-1 og inndælingarrúmmál var 10 μL. Niðurstöður Línulegt samband echinacosides innan styrkleikabilsins 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 var gott(r=0.999 8). Endurheimtirnar voru 94,59%-105,31% (RSD= 2,93%,n=9). Innihald echinacosides í vatnsútdrætti af Cistanche herba var 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. Ályktun Hin þekkta HPLC aðferð með góða endurtekningarnákvæmni er nákvæm, einföld og framkvæmanleg. Það er hentugur til að ákvarða echinacoside í vatnsþykkni Cistanche herba.

Leitarorð:HPLC;vatnsþykkni úr Cistanche herba; echinacoside; ákvörðun efnis

Cistanche deserticola er hefðbundið kínverskt tonic lyf sem almennt er notað í klínískri starfsemi og er þekkt sem „eyðimerkurginseng“ [1]. Cistanche deserticola skráð í 2015 útgáfu kínversku lyfjaskrárinnar er þurrkaður holdugur stilkur með hreisturblöðum af Cistanche deserticola YC Ma eða Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Það er hlýtt, sætt og salt og fer aftur til nýrna- og stórþarmalengdar. Það hefur þau áhrif að næra nýra yang, endurnýja kjarna og blóð og raka þarma og hægðalyf [2]. „Materia Medica frá Shen Nong,“ segir að hún geti „styrkt miðjuna, nært innri líffærin fimm, styrkt yin og nært kjarnann“. Cistanche deserticola inniheldur aðallega fenýletanóíð glýkósíð, iridoids og glýkósíð þeirra, lignans og glýkósíð þeirra, fjölsykrur, estersambönd og alkalóíða [3]. Fenýletanól glýkósíð eru helstu virku innihaldsefnin í Cistanche deserticola. Meðal þeirra eru echinacoside og verbascoside skráð í Cistanche deserticola í kínversku lyfjaskránni.

Leiðbeinandi þættir fyrir auðkenningu og innihaldsákvörðun. Lyfjafræðilegar rannsóknir [4] sýna að Cistanche deserticola hefur ýmis lyfjafræðileg áhrif eins og hægðalyf, lifrarvörn, gegn beinþynningu, andoxunarefni, öldrun og þreytu. Cistanche deserticola vatnsþykkni getur stuðlað að tjáningu á beinformandi próteini 2 geni í rottum beinþynningar, tartrat ónæmum sýrufosfatasa, osteókalsíni í sermi eggjastokka sem hafa verið eytt músum og Smad1, mad5 genum, umbreytandi vaxtarþætti, o.fl. í beinmerg. , hefur áhrif gegn beinþynningu [5-6].

Echinacea getur stuðlað að fjölgun beinþynninga og stuðlað að aðgreiningu beinmergs mesenchymal stofnfrumna sem ræktaðar eru in vitro í beinfrumur [7-9]. Undanfarin ár hafa verið margar rannsóknarskýrslur um innihaldsákvörðun echinacosides og verbascosides í Cistanche deserticola etanólseyði og efnablöndur þess [10-12], en fáar skýrslur eru til um innihaldsákvörðun vísitöluþátta í Cistanche deserticola vatnskenndur útdráttur. Í þessari rannsókn var hágæða vökvaskiljun (HPLC) notuð til að ákvarða innihald echinaceaside í vatnskennda útdrættinum af Cistanche deserticola.

1 efni

1.1 Hljóðfæri

LC-20AT hágæða vökvaskiljun, SPD-20skynjari, SIL-20sjálfvirkur sýnatakari, CTO-10ASvp súluofn, LC lausn vökvaskiljunarvinnustöð, Shimadzu Corporation of Japan; MES125P-OCE-DU rafræn greiningarvog, Sartorius Company, Þýskalandi; SHZ-D (Ⅲ) fjölnota lofttæmisdæla með hringrásarvatni, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 kælihringrásarkerfi fyrir snúningsuppgufunartæki, RV 10 D S96 snúningsuppgufunartæki, IKA Company, Þýskalandi; DK-S26

Rafmagns vatnsbað með stöðugum hita, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR röð ultrapure vatnsvél, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Lyfjaefni og hvarfefni

Cistanche deserticola lyfjaefni var keypt frá Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., lotunúmer: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, yfirmaður hefðbundinna kínverska lyfjafræðingsins við Third Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, sem þurrkaður holdugur stilkur með hreisturblöðum af Cistanche deserticola YCMa. Sýnið er geymt í lyfjaprófunarherbergi þriðja tengda sjúkrahússins í Guangzhou University of Chinese Medicine; Echinacea Glycoside viðmiðunarefni, innihald 89,7%, China Institute of Food and Drug Control, lotunúmer: 111670-

201706; asetónítríl er litskiljanlega hreint (Merck, Þýskalandi); metanól og fosfórsýra eru greiningarhreint (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); vatn er ofurhreint vatn.

2 Aðferðir og niðurstöður

2.1 Undirbúningur vatnsþykkni úr Cistanche deserticola

Taktu grófa duftið af Cistanche deserticola lyfjaefninu, bættu 10 sinnum magni af eimuðu vatni út í, hitaðu og bakflæði til útdráttar tvisvar, 1 klukkustund í hvert sinn, síaðu, blandaðu síuvökvanum saman og þéttaðu síuvökvann með hringuppgufunartæki að hráefnisinnihaldi 0,100 g·mL-1 og geymdu það við 4 gráður til notkunar síðar.

2.2 Litskiljunarskilyrði og kerfishæfi

Litskiljunarsúla: Inertsil ODS SP C18 súla (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); hreyfanlegur fasi: asetónítríl (A)-0,4% fosfórsýrulausn (B), skolun á stigli: 0 ~ 5 mín., 17%

A; 5 ~ 25 mín., 20% A; 25 ~ 30 mín., 17% A; uppgötvun bylgjulengd: 333 nm; súluhitastig: 30 gráður; rennsli: 1,0 ml·mín-1;

Inndælingarrúmmál: 10 μL. Við þessar litskiljunaraðstæður er aðskilnaður á milli echinacoside og aðliggjandi efnistoppa meiri en 1,5 og fjöldi fræðilegra platna miðað við echinaceaside toppinn ætti að vera ekki færri en 4,000. Litskiljunin er sýnd á mynd 1.

2.3 Undirbúningur lausnar

2.3.1 Viðmiðunarefnislausn Vigtið hæfilegt magn af echinacoside viðmiðunarefni, vegið það nákvæmlega, setjið það í 10 ml mæliflösku, bætið við metanóli til að leysa það upp og útbúið viðmiðunarefnislausn sem inniheldur 898.794 ug af echinaceaside á ml, 4 gráður Geymdu til síðari nota.

2.3.2 Próflausn

Mældu nákvæmlega 2.0 ml af Cistanche deserticola vatnsþykkni, gufaðu upp þar til það þornar í vatnsbaði, bættu við metanóli til að leysa upp, þynntu að rúmmáli í 10 ml mæliflösku, hristu vel og síaðu með 0,22 míkróporous himna til að fá.

2.4 Rannsókn á línulegu sambandi

Mældu nákvæmlega {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 ml af viðmiðunarlausninni undir lið 2.3.1, settu hana í 5 ml mæliflösku, bættu við metanóli til að fylla upp í rúmmálið og hristu vel til að fá styrkleikastig upp á 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 viðmiðunarlausn, síuð í gegnum 0,22 μm örgljúpa himnu. Mælið í samræmi við skiljunarskilyrði í 2.2 og skráið toppflatarmálið. Framkvæmdu línulega aðhvarf með massastyrk viðmiðunarefnisins sem abscissa (X, ug·mL-1) og toppsvæðið sem ordinötu (Y), og aðhvarfsjöfnan fæst: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Niðurstöðurnar sýna að echinacea hefur gott línulegt samband innan styrkleikabilsins 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Nákvæmni próf

Taktu 539.276 4 ug ·mL- 1 viðmiðunarlausn, sprautaðu og mældu 6 sinnum samfellt í samræmi við skiljunaraðstæður undir 2.2, og skráðu toppflatarmálið. Niðurstöðurnar sýndu að RSD á echinacoside toppsvæðinu var 1,81%, sem gefur til kynna góða nákvæmni hljóðfæra.

2.6 Stöðugleikapróf

Mældu nákvæmlega 2.0 ml af Cistanche deserticola vatnsþykkni, gufaðu upp þar til það þornar í vatnsbaði, bættu við metanóli til að leysa upp, þynntu í 10 ml mæliflösku, hristu vel, síaðu með {{ 7}}.22 míkróporous himna, fylgdu skiljunarskilyrðum undir lið 2.2 og settu í 0 og 2 í sömu röð. , 4, 8, 12, 24 klst inndælingarmæling, skráðu toppsvæðið. Niðurstöðurnar sýndu að RSD á echinacoside toppsvæðinu var 1,16%, sem gefur til kynna að próflausnin hafi haft góðan stöðugleika innan 24 klst.

2.7 Endurtekningarpróf

Mældu nákvæmlega 2,0 ml af Cistanche deserticola vatnsþykkni og undirbúið 6 próflausnir samhliða samkvæmt aðferðinni í 2.3.2. Sprautaðu sýnum til mælinga í samræmi við skiljunaraðstæður í 2.2 og skráðu toppflatarmálið. Niðurstöðurnar sýndu að RSD áechinacosidemassastyrkur var 1,28%, sem gefur til kynna góða endurtekningarhæfni aðferðarinnar.

2.8 Dæmi um batapróf

Mældu nákvæmlega 9 skammta af 1,0 ml af Cistanche deserticola vatnsþykkni, bættu við 0.8, 1.0 og 1,2 ml af viðmiðunarlausn (1,552 mg·mL{{11 }}) hver um sig, gufað upp þar til það þornar í vatnsbaði, bætt við metanóli til að leysa upp og stillið í 10 ml mæliflösku; Hristið vel og síið í gegnum 0,22 μm örgjúpa himnu til að undirbúa prófunarlausnir með háum, meðalstórum og lágum styrk. Gerðu 3 eintök af hverri styrk samhliða. Mælt er í samræmi við skiljunarskilyrði í 2.2. Skráðu toppsvæðið og reiknaðu endurheimt sýnisins. Gefa. Niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 1.

2.9 Ákvörðun sýnisinnihalds

Mældu nákvæmlega 3 skammta af 2,0 ml af Cistanche deserticola vatnsþykkni, gufaðu upp þar til það þornar í vatnsbaði, bættu við metanóli til að leysa upp, þynntu í 10 ml mæliflösku, hristu vel, síaðu með 0,22 μm míkróporous himna, og mælt í samræmi við skiljunaraðstæður í 2.2. Skráðu toppsvæðið og reiknaðu innihald echinaceaside. Niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 2.

Tafla 1 Niðurstöður bataprófa á echinacoside

Tafla 2 Niðurstöður innihaldsákvörðunar á echinacoside í vatnsþykkni af Cistanche herba