Dendrimer-tesaglitazar samtengd veldur svipgerðabreytingu á örveru og eykur -amyloid átfrumubólgu† Part 2

In vitro líffræðilegar prófanir

Frumuræktun. BV2 múslímfrumulína var fengin frá frumuræktunaraðstöðu barnaspítalans í Michigan.

Undanfarin ár hafa vísindamenn komist að því að frumurækt er náskyld minni mannsins. Rannsóknir hafa sýnt að með rannsóknum á frumurækt er hægt að uppgötva sameindakerfi í minni og námsferli og bæta þannig vitræna getu og minni mannsins.

Frumurækt vísar til þess ferlis að setja líffræðilegar frumur í ræktunarmiðil sem inniheldur nauðsynleg næringarefni til að vaxa og fjölga sér við in vitro aðstæður. Frumur eru grunneiningar lífsins og frumuræktin veitir vísindamönnum vettvang til að rannsaka frumuhegðun og lífsvirkni. Með rannsóknum á frumum hafa vísindamenn uppgötvað mikið af upplýsingum um vöxt taugafrumna og taugamótunartengingar. Þessar niðurstöður geta ekki aðeins hjálpað mönnum að skilja betur hvernig heilinn virkar heldur einnig hjálpað til við að þróa nýjar meðferðir og lyf.

Rannsóknir undanfarinna ára hafa sýnt að frumuræktun er einnig náskyld minni manna. Vísindamenn hafa komist að því að myndun og viðhald mannlegs minnis krefst mikillar sameindastjórnunar og sendingar merkja. Þessar merkjasendingar og stjórnunaraðferðir hafa margt líkt með aðferðum í frumurækt. Með því að rannsaka boðsendingar og stjórnun kerfis í frumurækt, geta vísindamenn betur skilið minni manna og námsaðferðir.

Að auki hafa sumar rannsóknir einnig sýnt að frumuræktun getur aukið minni og námsgetu manna á vissan hátt. Til dæmis, með því að nota aðferð sem kallast „rafmagnsörvun“, er hægt að örva virkni frumna og tengsl milli taugafrumna og bæta þannig vitsmunalega getu og námsáhrif mannsins. Þó að þessi aðferð sé enn á rannsóknarstigi rannsóknarstofu, er búist við að hún verði ný vitræn þjálfunaraðferð í framtíðinni.

Í stuttu máli má segja að náin tengsl séu á milli frumuræktar og minnis manna. Með rannsóknum á frumum getum við skilið betur vitsmunalega kerfi mannsins og minniskerfi og einnig hjálpað til við að þróa nýjar meðferðaraðferðir og vitræna þjálfunaraðferðir. Við skulum hlakka til framlags frumuræktunartækni til mannkyns í framtíðinni! Það má sjá að við þurfum að bæta minnið og Cistanche getur bætt minnið verulega vegna þess að Cistanche hefur andoxunar-, bólgueyðandi og öldrunaráhrif, sem geta hjálpað til við að draga úr oxun og bólguviðbrögðum í heilanum og vernda þannig heilsu heilans. taugakerfi. Að auki getur Cistanche einnig stuðlað að vexti og viðgerð taugafrumna og þar með aukið tengsl og virkni tauganeta. Þessi áhrif geta hjálpað til við að bæta minni, námsgetu og hugsunarhraða og geta einnig komið í veg fyrir vitsmunalegan truflun og taugahrörnunarsjúkdóma.

Smelltu á vita bætiefni til að auka minni

BV2 frumur voru ræktaðar í Dulbecco's Modified EaglesMedium (DMEM) miðli með 10% hitaóvirkjuð fósturbóvinsermi (HI FBS) og 1% penicillín/streptomycin (P/S) við 37 gráður og 5% CO2.

Þegar frumur náðu að renna saman í ræktunarflöskunni voru frumurnar settar í nýja flösku með því að nota 0.05% trypsín-etýlendíamín tetra-ediksýru (EDTA). Fyrir tilraunirnar voru BV2 frumur sáð í DMEM með 5% HIFBS og 1% P/S. 24-48 klukkustundum síðar voru frumurnar örvaðar með 100 ng ml-1 (300 EU ml-1) af LPS í 3 klukkustundir til að leyfa frumunum að komast inn í bólgueyðandi (M1) svipgerð til að líkja eftir taugabólguumhverfi sem er til staðar í mörgum taugasjúkdómum.

Frumurnar voru síðan meðhöndlaðar með LPS og annaðhvort ókeypis Tesa eða D-Tesa í mismunandi styrk fyrir 48 hendur, síðan var flotinu og frumum safnað til vinnslu. Frumur sem aldrei voru meðhöndlaðar með LPS (engin LPS) og frumur sem voru meðhöndlaðar eingöngu með LPS á öllum tímum (aðeins LPS) störfuðu sem viðmiðunarhópar. Ókeypis Tesa og D-Tesa stofnlausnir voru sótthreinsaðar með því að nota pólý(etersúlfón) 0.2 µm síur.

D-Tesa var leysanlegt í frumumiðlinum. Tesa var leyst upp með því að nota dímetýlsúlfoxíð (DMSO) við minna en 0.1% (v/v) lokastyrk. Frumueiturhrif, nituroxíðpróf og TNF-ELISA. Fyrir frumueiturhrifagreiningu voru frumur meðhöndlaðar eins og lýst er hér að ofan í 96-brunnsplötu og síðan voru frumueiturhrif óbundinna Tesa og D-Tesa metin með MTT prófun eftir leiðbeiningum framleiðanda.

Fyrir köfnunarefnisoxíðprófið voru frumur meðhöndlaðar eins og lýst er hér að ofan í 12-brunnsplötum og síðan var floti úr meðhöndluðum frumum safnað og magn nituroxíðs strax mælt með því að fylgja samskiptareglum framleiðanda fyrir Griess hvarfefnið.

Fyrir TNF-ELISA voru frumur meðhöndlaðar eins og lýst er hér að ofan í 12-brunnsplötum og síðan var floti úr meðhöndluðum frumum safnað og geymt við -80 gráður þar til tilbúið var fyrir frekari vinnslu.

Síðan voru sýni þíðað á ís og TNF-ELISA keyrð með því að fylgja samskiptareglum framleiðandans. Fyrir þessar rannsóknir voru bæði D-Tesa og frjáls Tesa hljóðbeitt og hringt í hvirfli þar til þau voru bæði fullleysanleg. Til að leysa upp ókeypis Tesa var það fyrst leyst upp í DMSO áður en það var þynnt, þar sem endanlegur styrkur DMSO var undir 0.1%(v/v) fyrir öll ókeypis Tesa sýni.

Þar sem D-Tesa var leysanlegt í frumuræktunarmiðlum var DMSO ekki bætt við þessi sýni. Fyrir allar in vitro rannsóknir var jafnmikið magn af óbundnu eða samtengdu lyfi borið á frumur í bæði frjálsu Tesa og D-Tesa hópnum.

Magntíma PCR (qRT-PCR). Frumur voru meðhöndlaðar eins og lýst er hér að ofan í 12-brunnsplötum og eftir að flotinu var safnað var frumum safnað í Invitrogen™ TRIzol™ Reagent (frá Fisher Scientific) og RNA var dregið út með því að fylgja samskiptareglum framleiðanda. Styrkur og hreinleiki RNA sem myndast voru greindir með því að nota Nanodrop.

Jafngildum magni RNA úr hverju sýni var breytt í cDNA með því að fylgja samskiptareglum framleiðandans fyrir High CapacitycDNA öfugumritunarsettinu (frá Applied Biosystems eftir Thermo Fisher Scientific).

cDNA sem myndast var notað fyrirqRT-PCR greiningu með því að nota FAST-SYBR græna hvarfefnið og með því að fylgja samskiptareglum framleiðandans. Ct gildi voru reiknuð út af vélinni og gögn voru greind með því að nota 2−ΔΔCt aðferðina.

Fyrir hvert mismunandi merki var ΔΔCt gildið reiknað með því að draga ΔCt fyrir No LPS hópinn frá ΔCt fyrir hvert sýni. ΔCt gildið var Ct gildið fyrir genið af áhuga mínus Ct fyrir GAPDH fyrir hvert gefið sýni.

Þegar 2−ΔΔCt var reiknað út fyrir alla hópa, voru þeir síðan allir staðlaðir í No LPS hópinn, og gaf þar með engin LPS hópinn hlutfallslegt tjáningarstig 1.0 fyrir öll merki. Fram- og afturábak grunnröðin notuð fyrirqRT -PCR eru sýndar í töflunni hér að neðan. Allar raðir eru skrifaðar frá 5′→3′.

Að auki voru primerar sem eru fáanlegir í verslun keyptir frá BIORAD fyrir iNOS/Nos2 (qmmuCID0023087), TLR4 (qmmuCID0023548), CD206/Mrc1 (qmmuCID0012670),TGF- 1 (qmmuCID001},{12CID0017},{2017 1 (qmmucid0024846), CD36 (qmmucid0014852), Ide(qmmuced0049796), MMP9 (qmmucid0021296), CCL1(qmmuced0038249), TLR8 (qmmuced0039837), CDqmmucid ({0mmucid.) 6404) og PPAR (qmmucid0018821). Átfrumugreining.

Áhrif ókeypis Tesa og D-Tesa átfrumna á -amyloid voru ákvörðuð með aðferð sem áður hefur verið tilkynnt.47 Í stuttu máli var HiLyte™ hveiti 488-merkt -amyloid1–42 (frá Anaspec Inc.) leyst upp í DMSO (endanleg DMSO styrkur undir 0,5% (v/v)) og þynnt í 5 µg ml-1 í PBS.

Eftir að hafa meðhöndlað frumurnar með Tesa og D-Tesa með meðferðaráætluninni sem lýst er hér að ofan, var -amyloid lausnin sett á frumurnar í 2 klukkustundir. Síðan voru frumurnar þvegnar þrisvar með Hank's Balanced Salt Solution með tvígildum katjónum (kalsíum og magnesíum), fjarlægðar úr holunum með því að nota trypsín og endursviflausnar í FACS jafnalausn (frá Invitrogen).

Sýni voru geymd á ís og voru keyrð strax á Sony Cell Sorter SH800 flæðifrumumælingarvél og gögn voru greind með tilheyrandi hugbúnaði.

Hliðið var stillt með því að nota frumur sem ekki voru meðhöndlaðar með flúrljómandi amyloid og niðurstöðurnar sem sýndar eru eru prósentu frumna úr hverjum hópi sem sýndu flúrljómun yfir bakgrunnsflúrljómuninni.

Einnig var greint frá meðalflúrljómunarstyrk (MFA) HiLyte™ 488-merktu amyloid fyrir hvern hóp. Þessi prófun var gerð í tvítekningu. Tölfræði. Öll gögn sem sýnd eru eru afrakstur þriggja aðskildra tilrauna, hver um sig framkvæmd í þríriti nema annað sé tekið fram. GraphPad Prism 5 og Microsoft Excel voru notuð til að framkvæma tölfræði.

Tvíhliða, pöruð t-próf ​​nemenda, með BonferroniCorrection, voru framkvæmd. Próf Grubbs var notað til að ákvarða útlínur. GraphPad Prism 5 fyrir Windows var notað til að plotta gögn (San Diego, CA). Gögnin sem sýnd eru eru meðaltal + SEM.

Úrslit og umræður

Samsetning og lýsing á D-Tesa

Til að gera ráð fyrir markvissri, innanfrumu afhendingu til virkjaðra míkróglíafrumna í heilanum, var Tesa samgilt samtengd á yfirborði G4-PAMAM-OH með klofnanlegum estertengjum á milli lyfsins og dendrimer-tengisins (mynd 1).

Í fyrsta skrefinu var Tesa (1) látið hvarfast við tetrametýlen glýkólasíð (TEG-azíð)(2) til að framleiða Tesa-TEG-azíð (3), sem hefur estertengingu á milli lyfsins og tengisins (mynd 1A).

HPLC efnasambandsins (3) sýndi varðveislutímann 13,4 mínútur með meiri hreinleika en 99% (mynd S1B†). Massaróf (3) sýndi hámark 610,13 [M + 1]+ sem samsvarar Tesa-TEG-azíð mólmassanum sem staðfestir enn frekar myndun vörunnar (Mynd S2†). Sérstaklega var G4-PAMAM-OH dendrimer (4) hvarfað við 5-hexínsýru með því að nota esterunarhvarf til að framleiða D-YNE (5) (mynd 1B).

Að lokum var Tesa-TEG-azíð (3) og D-YNE (5) hvarfað með afar skilvirku koparhvataðasíð-alkýðsýklóablöndun (CuAAC) smellahvarfi til að framleiða D-Tesa (6) (mynd 1B).48 1H NMR staðfesti árangursríka myndun allra milliefna og lokaafurðar; D-Tesa (6) innihélt einkennandi toppa dendrimer og druglinker róteinda sem sýnir árangursríka myndun D-Tesa (mynd 2A).

NMR á loka D-Tesa samtengingunni leiddi í ljós að að meðaltali tíu sameindir af Tesa voru tengdar við hvern dendrimer. HPLC staðfesti árangursríka samgilda samtengingu, þar sem D-Tesa sýndi breytingu frá bæði D-YNE og TesaTEG-asíði (mynd 2B og S1†).

Tesa hefur lélega vatnsleysni, áætlað að vera 0.0035 mg mL−1.49 Samtenging Tesa á hýdroxýl dendrimer bætti vatnsleysni þess um nokkrar stærðargráður frá þessu mati. D-Tesa var leysanleiki í vatni við 22 mg ml-1, og þar sem Tesa samanstendur af ~19% af massa D-Tesa, var 4,2 mg ml-1 jafngildi Tesa leyst upp (mynd 3A).

Aukinn leysni sem dendrimerinn veitir eykur auðvelda samsetningu og fjarlægir þörfina fyrir hugsanlega eitruð hjálparefni.50 Þessir kostir eru allir til viðbótar við yfirburða getu dendrimersins til að skila ókeypis lyfjum yfir BBB til microglia in vivo, og hugsanlega draga úr Nauðsynlegur skammtur til að ná lækningaáhrifum.18–28 Að lokum var D-Tesa með meðalstærð 7,75 ± 0,29 nm (mynd S3†), og zeta-getu upp á 2.86 ± 0,38 mV (N=5 og N=3 mæling, í sömu röð).

Losun lyfja

Við hönnuðum D-Tesa til að losa Tesa innanfrumu innan lágs pH og hár esterasa styrkur umhverfi inendosomes/lysosomes virkjaðra örvera. Við höfum áður greint frá því að PAMAM dendrimerar berist aðallega inn í frumur með vökvafasa innfrumumyndun og blöðrurnar sem innihalda samtengd efni umbreytast í lýsósóm.51

Við ræktuðum D-Tesa við 37 gráður í natríumsítratbuffi (pH 5,5) í návist esterasa til að líkja eftir aðstæðum lýsósóma, eins og áður var gert.52–54 Við rannsökuðum einnig losun við aðstæður sem líkja eftir plasmaskilyrðum (fosfat-buffuð saltvatn [PBS] ] buffer, pH 7,4).

Við plasmaaðstæður losnar aðeins um 1,5% af Tesa eftir 48 klukkustundir og minna en 20% af Tesa losnar á 25. degi sem bendir til plasmastöðugleika samtengdarinnar (mynd 3B).

Við lysosomal skilyrði losnar um 60% af Tesa úr D-Tesa á fyrstu 48 klukkustundunum og innan 19 daga losnar næstum 100% af Tesa. Þessar niðurstöður sýna fram á að D-Tesa veitir viðvarandi, kveikt losun á frjálsa lyfinu fyrstu tvær vikurnar sem ræktað er við lífeðlisfræðilega viðeigandi, lysosomal skilyrði.

Þar að auki er lágmarkslosun Tesa við eftirlíkingar á plasmaskilyrðum (pH 7,4 hópur) á fyrstu 48 klukkustundunum marktæk, þar sem þetta er dæmigerður G4-PAMAM-OH hringrásartími fyrir nýrnaúthreinsun, mun semminimal Tesa líklega losna úr samtengingar áður en þær ná til örglíunnar.24

D-Tesa minnkaði tjáningu M1 merkja og jókst M2 merkjum

Til að meta getu D-Tesa til að framkalla M1 til M2 svipgerðabreytingu, metum við getu D-Tesa til að breyta tjáningu M1 og M2 merkja in vitro með því að nota múslímfrumulínu (BV2).

BV2 frumur voru búnar til með því að gera músamíkróglíafrumur ódauðlega og reyndust vera hentugur valkostur við frummörglufrumur til að rannsaka bólgusvörun míkróglía.55,56 Í tilraunum okkar, til að líkja eftir taugabólguumhverfi sem er til staðar í mörgum taugasjúkdómum, formeðhöndluðum við míkróglíuna með 100 ng ml−1 (300 endotoxinunits (ESB) á ml) LPS í 3 klst.

Síðan meðhöndluðum við frumurnar með LPS og annað hvort ókeypis Tesa eða D-Tesa í 48 klukkustundir og söfnuðum síðan sýnunum. Við meðhöndluðum frumurnar í styrkleikanum 1,5, 15 og 150 µM ókeypis Tesa eða D-Tesa, á jafngildum lyfjagrundvelli.

MTT prófið sýndi fram á að frítt Tesaor D-Tesa við þennan styrk olli ekki frumueiturhrifum (mynd S4†). Fyrsta skammtaleitarrannsókn var gerð með Tesaand D-Tesa til að ákvarða árangursríkasta skammtinn af Tesa og D-Tesa.

Meðferð með 1,5 og 15 µM ókeypis Tesa og D-Tesadid breytir ekki seytingu nituroxíðs eða TNF-, eins og ákvarðað er með Griess hvarfefninu og TNF-ELISA, í sömu röð (mynd S5†). Byggt á þessum niðurstöðum greindum við ekki þessa lægri styrk í qRT-PCR prófunum okkar.

Í mörgum taugahrörnunarsjúkdómum, er ein helsta taugaeiturvirkni bólgueyðandi, M1 örgljáa, seyting þeirra á hvarfgjörnum súrefnistegundum (td nituroxíði) sem drepur taugafrumur beint.57,58 Í kjölfarið hefur verið haldið fram að ein hugsanleg meðferðaraðferð væri að draga úr þessari losun þessara sameinda.

Við metum getu D-Tesa til að ná þessum áhrifum. Eftir LPS örvun minnkaði D-Tesa útskilnað nituroxíð og framkallanlegt nituroxíðsyntasa (iNOS)mRNA gildi 3.7-falt (p < 0.0001) og 2-falt (p {{ 7}}.011), í sömu röð, samanborið við frumur sem eingöngu eru meðhöndlaðar með LPS (aðeins LPS) (mynd 4A og B).

Á hinn bóginn minnkaði free Tesa útskilnað nituroxíð í meðallagi (1.4-falt, p=0.004) og leiddi ekki til marktækrar lækkunar á iNOS mRNA tjáningu (Mynd 4A og B) ).

D-Tesa var mun áhrifaríkara en ókeypis Tesain sem bælir nituroxíðseytingu. Næst, allt eftir því hvort örverur eru í M1 eða M2 svipgerð, stýra microglia annaðhvort iNOS eða Arginase 1 (Arg1) til að umbrotna L-arginín til að framleiða nituroxíð fyrir M1 sjúkdómsdrepandi svörun þeirra, orornithine og urea fyrir M2 sárgræðslusvörun, í sömu röð. 59

Í samræmi við lækkun þess á iNOS, jók D-Tesa Arg1 mRNA stig 2-falt (p=0.011) samanborið við LPS-eingöngu viðmiðunina, á meðan frjáls Tesa jókst tjáning ekki marktækt (p=0 .40) (Mynd 4C).

D-Tesa, og í minna mæli ókeypis Tesa, breyttu microglia frá því að losa frumudrepandi nítróxíð yfir í umbrot L-arginíns til að gróa sár, sem hefur áhrif á að draga úr og hugsanlega snúa við taugaeiturhrifum af völdum microglia í taugahrörnun.5–7,10

Lækkun á styrk iNOS og seytt nituroxíðs með D-Tesa meðferð er af fyrri vinnu sem sýndi fram á að náttúrulegur bindill PPAR (15-deoxý-Δ12,14-prostaglandín J2) minnkaði iNOS og nituroxíð tjáningu og seytingu í LPS meðhöndluðum frum örglía.60

IL-10, IL-4 og TGF- 1 eru öll frumuefni sem eru seytt af öðrum virkum M2 örverum sem geta framkallað taugaverndandi, bólgueyðandi umhverfi í heilanum.58,61,62Í átt til í þessu skyni jók D-Tesa tjáningu IL-105.5-falt (p=0.011) og IL-4 8.2-falt (p { {15}}.013) samanborið við LPS-eingöngu stjórnina (mynd 4D og E).

Free Tesa jók ekki marktækt hvorki IL-10 eða IL-4 stig, þó meðaltölin hafi verið 1.7-falt (p=0.066) og 2.{{7} }falt (p=0.11) hærra, í sömu röð, fyrir Tesa-meðhöndlaða örveru samanborið við LPS-eingöngu-viðmið (mynd 4D og E). Að auki jók D-Tesa tjáningu TGF- 1 2.3-falt (p=0.015) og ókeypis Tesa breytti tjáningu ekki marktækt (mynd 4F).

Þannig framkallar D-Tesa seytingu bólgueyðandi cýtókína eftir LPS-meðferð á örveru, sem getur dregið úr taugaeitrandi, bólgueyðandi umhverfi sem er til staðar í taugahrörnunarsjúkdómum.5–7,10

D-Tesa-framkölluð tjáning M2-undirgerðarmerkja

CD206, Ccl1 og TLR8 eru sértæk merki fyrir M2a, M2b og M2c microglia undirgerðirnar, í sömu röð.58 D-Tesa upregulatedCD206 tjáning 4.{{10 }}falt (p < 0,001), Ccl1 3.5-falt (p < 0,005) og TLR8 5-falt (p < 0,01), en frjáls Tesa jók ekki marktækt tjáningu á eitthvað af þessum þremur merkjum (mynd 5A–C).

Þessi gögn sýna að D-Tesa-meðhöndluð örverur sýna marktæka uppstýringu á merkjum allra þriggja M2 undirtegundanna, sem er í samræmi við þann skilning að svipgerð microglia er plast og ekki tvískipt.63–65

M1/M2 flokkunarkerfið ofeinfaldar hversu flókið það er að örverur geta verið til í litrófi virkjunarástanda; eftir þessari samfellu hafa þrjár aðskildar M2 svipgerðir (M2a, M2b og M2c) verið einkenndar og D-Tesa framkallar tjáningu merkja sem eru í samræmi við hvert þessara ríkja. prótein með því að stjórna hræviðtaka, viðgerð vefja og bólgueyðandi verkun.

M2b microglia eru eins og M1 microglia að því leyti að þeir tjá IL-1, TNF- og IL-6; Hins vegar eru M2b aðgreindir frá M1 míkróglum að því leyti að þeir tjá IL-10 á háu stigi og lækka iNOS tjáningu. M2b átfrumur og örverur örva Th2 T-frumur, sem er vísbending um eitt af hlutverkum M2b við að framkalla bólgueyðandi svörun.

M2cmicroglia taka þátt í sársheilun, endurgerð vefja, bindingu járns og STAT3 virkjun sem dregur úr bólgueyðandi boðefnum.58,61,63,66PPAR virkni Tesa örvar straumlykkju sem leiðir til aukinnar tjáningar PPAR og andstreymismerkjapróteins þess (STAT6), sem eru bæði M2a merki.58D-Tesa jók tjáningu PPAR 2.3-falt (p=0.0036)og STAT6 3.4- falt (p < 0,001), en ókeypis Tesa hækkaðiSTAT6 1.8-falt (p=0.011) án marktækrar aukningar á PPAR tjáningu (1.58-föld aukning, p=0.17) (Mynd 5D og E).

Aukin tjáning STAT6 og PPAR leiðir til bólgueyðandi genaframleiðslu og hömlunar á bólgueyðandi merkjum með því að hindra NF-KB virkni. Þar sem hægt er að framkalla M2a microglia með því að meðhöndla microglia með IL-4, sem gefur til kynna í gegnum STAT6 og PPAR , getur uppstýring þessara tveggja niðurstraums merkjapróteina leitt til M2a skautunar.68

Í greiningum okkar jók LPS virkjun IL-6, TNF- og IL-1 gildi og meðferð með D-Tesa hækkaði enn frekar tjáningu þessara frumuefna (mynd S6A–D†), sem er líklegt vegna D-Tesa sem framkallar M2b svipgerðina (mynd 5B).

Frjáls Tesa jók tjáningu IL-6 og breytti ekki TNF- og IL-1 tjáningu marktækt (Mynd S6A–D†). Þó þessi frumufrumur séu seytt af M1 míkróglum, tjá M2b míkróglía einnig þessi frumukín.58,61 CD86 er merki fyrir bæði M1 og M2b míkróglum og eykst með D-Tesa meðferð (mynd S6E†).

Að auki er bæla frumuboðaboða (SOCS) fjölskylda innanfrumu próteina sem stjórna svipgerða skautun míkrógljáa með því að bæla margar merkjaleiðir sem virkjaðar eru af frumuefnum.69 SOCS1 er einn meðlimur þessarar fjölskyldu og sýnt hefur verið fram á að það hamlar LPS/TLR4 miðlaði NF-KB og JAK2 merkjasendingum, og minnkaði þar með magn TNF-, IL-1 og IL-6 sem losað er af M1 microglith gegnum LPS/TLR4 leiðina.

D-Tesa hækkar tjáningu SOCS1 samanborið við LPS-eingöngu stjórn (mynd S6F†), sem bendir til þess að aukningin á IL-6, TNF- og IL-1 sem D-Tesa sýnir gæti stafað af örvun á M2b svipgerð en ekki með aukningu á LPS/TLR4, M1-örvandi svipgerð.

Þar að auki, LPS merki í gegnum TLR4 og til að koma í veg fyrir of mikla frumuvirkjun, hafa microglia neikvætt endurgjöfarkerfi þar sem TLR4 virkjun leiðir til minni tjáningar á TLR4.70

Meðferð með ókeypis Tesa og D-Tesa jókaði TLR4stig 3.6-falt (p < 0.001) og 3.7-falt (p < 0,001), í sömu röð (Mynd 5F), sem bendir til þess að Tesa og D-Tesa hafi breytt hinni dæmigerðu LPS/TRL4 neikvæða endurgjöf.

For more information:1950477648nn@gmail.com