Útreikningsrannsókn á benzalasetófenónafleiðum gegn SARS-CoV-2 sem hugsanleg fjölvirk lífvirk efnasambönd Ⅱ

3.7.2. Stöðugleiki 3CLpro-carmofur flókins

Hið flókna 3CLpro-karmófúr sýndi stöðugt gangverki á 15 0 ns eftirlíkingar eftir jafnvægistímabil (60 ns). Meðaltal RMSD gildi fyrir hryggjarlið og flókið var 2,34 Å og 2,81 Å, í sömu röð. N og C-endaleifarnar sýndu hámarks afgangssveiflur (~10 Å). Hins vegar sýndu leifarnar sem tóku þátt í stöðugu og varðveittu ótengdu víxlverkunum tiltölulega miklu minni sveiflur (~2,0 Å). Rg gildið leiddi í ljós brotamynstur á ~30 ns (Mynd 10) og kom í ljós að hún tjáir að hluta til sem gefur til kynna stöðuga bindilbindingu. Að auki kom í ljós að upphafs- og lokameðaltal yfirborðsflatarmáls 3CLpro og carmofur kvíar flókið var 145,97 nm2 og 148,49 nm2 í sömu röð. Meðal vatnsfælin yfirborðsflatarmál sem flókið tók upp var 148,32 nm2 sem táknaði próteinútbrot og sveigjanleika bindivasans. Viðbótarmyndin (S2) sýnir nákvæma bindingarham og stöðuga gangverki carmofur við 3CLpro. Þessi flókin myndaði 6 hesthúsH-tengi þar af voru 4 í samræmi við uppgerðina. Talið var að þessar stöðugarH-tengslatengsl ýttu undir stöðuga flóknamyndun. Áætluð hlutfallsleg bindiorka flókins 3CLpro-carmofur flókins var− 16,67 kcal/mól. Ennfremur voru helstu leifar sem stuðla að bindiorkunni auðkennd með því að reikna út niðurbrotsorku á hverja leifar. LeifarnarÞr25, Met49, Cys142, Met165, Leu167, Arg188,ogGln189studdi stöðuga fléttumyndunina. Hins vegar leifarAsn142ogGlu166var ekki hlynntur samskiptum. Meðal þessara leifa,Met165sýndi marktæk framlag til bindiorkunnar þar sem hún hafði minnstu framlagsorkuna (− 9,12 kJ/mól). Hins vegar var framlagsorka fyrir aðrar víxlverkandi leifar mismunandi á milli− 1.42 til− 5.601 kJ/mól og tók einnig þátt í stöðugri fléttumyndun.

3.7.3. Stöðugleiki PLpro - 4-hýdroxýkordóín (c30) flókins

PLpro–4-hýdroxýkorðóín (c30) flókið sýndi stöðuga gangvirkni og svipaða þróun í 150 ns. RMSD gildið var stöðugt allt að ~80 ns frá ~1,2 til ~1,5 Å og ~1,8 til ~2,2 Å fyrir hryggjarlið og flókið, í sömu röð. Eftir ~80 ns kom í ljós að RMSD var tiltölulega hærra (~1,5–2,3 Å og ~2,2 til 3,5 Å, í sömu röð) vegna aukins yfirborðs próteins. Leifarsveiflurnar sem teiknaðar voru upp fyrir C sýndu myndun stöðugra ótengdra snertinga í leifum með færri sveiflur sem sáust í 4-hýdroxýkórdoíni (c30), þ.e. Val203, Met207, Tyr208, Met209, Ile223, Pro224 og Pro248 samanborið við önnur ósamverkandi leifar. Rg gildið sýndi stöðuga flókna myndun meðan á MD uppgerðinni stóð með því að mynda þétt kúluform eins og kemur í ljós með stöðugri lækkun á Rg gildinu. Viðbótarmyndin (S3) sýnir bindingarham 4-hydroxycordoin (c30) með PLpro. Það kom í ljós að lykkjan sem myndast af leifum á milli tveggja blaða var nálægt bindivasanum og hafði hámarkssnertingu við sameindina. Hins vegar, vegna sveigjanlegs eðlis þessarar lykkju, sýndi hún opnun bindivasans sem leiddi til aukinnar SASA og bindilshreyfingar meðan á MD uppgerðinni stóð eftir ~85 ns. Upphafs- og lokaflatarmálið sem PLpro og 4-hýdroxýkordóín (c30) kveikt flókið tók upp var 169,50 nm2 og 170,29 nm2 í sömu röð. Meðalflatarmál flóksins var 170 nm2. Fléttan myndaði 3 H-tengi þar af 2 í samræmi. Bindingasækni 4- hýdroxýkórdoínsins (c30) við PLpro var metin með því að reikna út hlutfallslega bindiorku. Fléttan sýndi bindingarorku upp á − 16,28 kcal/mól. Til að öðlast meiri innsýn í uppbyggingu á framlagi einstakra leifa í bindiorkuna var niðurbrotsorkan leifa greind. Í ljós kom að 7 leifar áttu marktækt þátt í stöðugri fléttumyndun og studdi núverandi ótengdar milliverkanir þ.e. Val203, Met207, Tyr208, Met209, Ile223, Pro224 og Pro248 (mynd 11). Mikilvægast er að leifar Tyr208, Met209, Ile223 og Pro224 sýndu marktækt framlag til bindishækni með því að skora lægstu framlagsorkuna − 2,97, − 3,89, − 3,82, og − 2,91 kJ/mól, í sömu röð. Viðbótarmyndband sem tengist þessari grein er að finna á https://d oi.org/10.1016/j.compbiomed.2022.105668.

3.7.4. Stöðugleiki PLpro-GRL-0617 flókins

PLpro-GRL-0617 flókið var stöðugt og sýndi svipuð RMSD gildi allt að 120 ns. RMSD gildi fyrir burðarásina var á bilinu ~1,3 Å til ~3.0 Å og ~1,8 Å til ~4,5 Å fyrir flókið. Stöðug lækkun á RMSD gildi hryggjarins kom fram eftir ~120 ns (frá ~3.{{20}} Å í 2.0 Å) og hélst stöðugt allan tímann MD uppgerð tímabil (150 ns). Á sama hátt sýndi flókið RMSD gildi svipaða stöðuga lækkun á RMSD gildinu á bilinu ~4,5 Å til ~3,0 Å. Eftir ~120 ns jókst RMSD gildið frekar upp í 3,8 Å til 150 ns. Leifarsveiflur Gly164, Asp165, Thr211, Leu212, Asn216, Ile223, Ala247, Pro248 og Tyr265 voru hlutfallslega minni samanborið við aðrar leifar sem ekki víxlverkuðu. Þrátt fyrir að Cys225, Val226 og Cys227 sýndu hámarks afgangssveiflu allt að 6 Å vegna aukinnar staðbundinnar sveigjanleika, sást bindilvíxlverkun við uppgerðina. Ennfremur sýndi Rg gildi stöðuga fléttumyndun allt að ~70 ns. Þar að auki, vegna sveigjanleika lykkjusvæðis við hlið bindilbindivasans "Lys158 til Val166", sást hreyfing bindilsins í átt að öðrum bindivasa (viðbótarmynd S4) sem einnig kom fram með aukningu á Rg gildi ~70 ns. Að auki myndaði GRL-0617 stöðugu ótengdu tengiliðina í gegnum 150 ns MD uppgerðina sem studd er af stöðugu Rg mynstrinu. Upphaflega sýndi SASA sveigjanlegan bindivasa og aukið SASA gildi. Þetta gæti hafa hrundið af stað endurstillingu bindilsins GRL- 0617. Upphafs- og síðasta yfirborðsflatarmálið sem PLpro og GRL- 0617 bryggjuflókið tekur upp var skráð sem 164,32 nm2 og 162,263 nm2 í sömu röð. Meðalflatarmál flóksins var 165,02 nm2. Að sama skapi bentu aukin SASA gildi til bindandi vasaopnunar fyrir stöðuga fléttumyndun sem var ívilnuð aðallega vegna sveigjanlegs eðlis bindivasaleifanna. Fléttan myndaði 4 H-tengi, þar af voru 2 H-tengi í samræmi á eftirlíkingartímabilinu. Ennfremur sýndi PLpro-GRL-0617 flókið bindiorku upp á -11,83 kcal/mól. Að auki var burðarvirki innsýn í framlag einstakra leifa í bindiorkunni magngreind með því að reikna út niðurbrotsorku á hverja leifa. Í ljós kom að 9 leifar höfðu marktækt framlag til stöðugrar fléttumyndunar og studdi núverandi ótengdar milliverkanir þ.e. Thr211, Leu212, Asn216, Ile223, Cys225, Val226, Cys227, Ala247 og Pro248 (mynd 12). Mikilvægast er að leifarnar Ile223, Cys225, Val226 og Cys227 sýndu marktækt framlag í bindishækni með því að fá lægstu framlagsorkuna − 0,91, − 0,74, − 1,86 og − 1,08 kJ/mól, í sömu röð. .

Viðbótarmyndband sem tengist þessari grein er að finna á https://d oi.org/10.1016/j.compbiomed.2022.105668.

Mynd 5. GO greiningar á stýrðum próteinum með benzalacetophenone afleiðum sem sýna frumuhluta, sameindavirkni og líffræðilega ferla.

3.7.5. Stöðugleiki topppróteins - mallotophilippen D (c42) Complex

Gaddaprótein-mallotophilippen D (c42) fléttan sýndi stöðuga gangvirkni eftir 100 ns jafnvægistímabil svipað og hinar rannsakaðar flétturnar. RMSD gildið var breytilegt á milli ~1,2 Å til 3 Å og 1,8 Å til ~4 Å fyrir hryggjarlið og flókið, í sömu röð. Hermunin var stækkuð enn frekar í 200 ns þar sem þetta flókið náði jafnvægisástandi eftir 100 ns. Meðalgildi hryggjarliða og flókinna RMSD sem sáust voru ~2,6 Å og ~3,8 Å, í sömu röð. Leifarsveiflurnar sem teiknaðar voru upp fyrir C , sýndu færri sveiflur fyrir leifar sem taka þátt í ótengdum snertingum við mallotophilippen D (c42) samanborið við aðrar ósamverkandi leifar. Hins vegar var sveigjanlega lykkjusvæðið sem myndaðist af leifum Alal344-Trp353 og Glu516-Thr523 mjög kraftmikið og sýndi meiri sveiflur (~3 Å). Leifar sem tóku virkan þátt í bindil-próteinvíxlverkunum þar á meðal Phe342, Leu368 og Ile434 sýndu minnstu sveiflur (viðbótarmynd S5). Ennfremur myndaðist stöðugt flókið við MD uppgerðina og kom á fót þéttri kúluformi eins og kom í ljós með lækkun á Rg gildi eftir 10 ns. Fléttan fylgdi stöðugu Rg-gildi eftir 100 ns sem gaf til kynna rétta fellingu sem þurfti til að mynda stöðugt flókið á milli bindills og próteins. Upphaflegt og síðasta yfirborðsflatarmál sem var upptekið af topppróteini og mallotophilippen D (c42) kveikt flókið var 112,38 nm2 og 112,6 nm2 í sömu röð. Meðalflatarmál flóksins var 111,4 nm2. Viðbótarmyndin (S5) sýnir nákvæma bindiaðferð mallotophilippen D (c42) með topppróteini. Fléttan myndaði 6 H-tengi þar af 3 í samræmi. Bindingsækni mallotophilippen D (c42) við toppprótein var metin með því að reikna út hlutfallslega bindingarorku. Að auki sýndi flókið bindiorku upp á -34,10 kcal/mól. Ennfremur leiddi framlagsorkan á hverja leifa í ljós 12 leifar úr bindivasanum, þ.e. Phe342, Ala363, Asp364, Tyr365, Leu368, Leu371, Ala372, Phe374, Ile434, Trp436, Val511 og Leu513 til að stuðla að marktæku fléttu (Fig. 13). Leifar Phe342, Leu368, Ile434 og Trp436 úr bindisvasanum sýndu marktækt framlag til bindisæknunar með því að fá minnstu niðurbrots-/framlagsorku leifa, − 5,78, − 9,39, − 4,71, og − 4,20 kJ/mól í sömu röð.

Mynd 7. Spáðveirueyðandi litrófaf benzalacetophenone afleiðum gegn mörgum vírusum. Því var spáð að meirihluti benzalacetophenone afleiðanna væri virkur gegn Herpes veirunni (12,57 prósent) og minnst gegn Trachoma (0,57 prósent).

3.7.6. Stöðugleiki topppróteins - DRI-C23041 flókið

Gaddaprótein-DRI-C23041 flókið sýndi einnig stöðugt gangverk eftir 100 ns jafnvægistímabil svipað og toppprótein mallotophilippen D (c42) flókið. Upphaflega jukust hryggjarlið og flókið RMSD gildi smám saman úr ~1,8 Å í 5 Å og ~2 Å í ~5,1 Å fyrir hryggjarlið og flókið í sömu röð. Leifar Val367, Leu368, Asp339, Asp364, Asp389 og Leu441 sýndu hlutfallslega færri sveiflur (~4,0 Å) þar sem þær taka þátt í stöðugum ótengdum samskiptum við DRI-C23041. Sveigjanlega lykkjan sem myndast af leifum Ala475 til Asn487 sýndi hámarks afgangssveiflur (~11,0 Å). Að auki myndaðist stöðugt flókið með stöðugu Rg gildi ~18 Å. Að auki sást rangsælis snúningur bindilsins við um það bil ~63 ns þegar flétturnar þróast að hluta til, sem einnig kom fram af auknu Rg gildi í 19,5 Å (viðbótarmynd S6). Hins vegar náði bindillinn sinni upprunalegu stöðu og tók stöðuga sköpulag, og flókið myndaði þétt kúluform sem studd var af lækkun á Rg gildi í 18,3 Å. Þessi burðarbreyting bindilsins studdi stöðuga fléttumyndun meðan á 150 ns MD uppgerðinni stóð. Upphaflega og síðasta yfirborðið sem var upptekið af topppróteini og DRI-C23041 kveikt flókið var 109.379 nm2 og 107.334 nm2. Meðalflatarmál flóksins var 110,57 nm2. Fléttan myndaði 4 H-tengi þar af 2 í samræmi. Hlutfallsleg bindiorka milli DRI-C23041 við toppprótein reyndist vera - 3,10 kcal/mól. Framlagsorkan á hverja leifa leiddi í ljós 11 leifar úr bindivasanum, nefnilega Asp339, Glu340, Asp364, Asp389, Asp398, Asp405, Glu406, Asp427, Asp428, Asp442 og Glu516 sem stuðla verulega að myndun þessara stöðugu flókna (Fig. leifar skoruðu minnst fyrir hverja niðurbrots/framlagsorku leifar sem var frá - 11,90 kJ/mól til - 27,17 kJ/mól í sömu röð.

3.7.7. Aðalþáttur og kraftmikið krossfylgnifylki

Við framkvæmdum aðalþáttagreiningu til að kanna sveigjanleika og fjölbreytileika sköpulags sem koma fram úr stöðugu ferlinum sem fæst úr 150 ns MD hermum þ.e. 100–150 ns fyrir fimm fléttur og 150–200 ns fyrir toppprótein-mallotophilippen D flókið. Hámarks sameiginleg hreyfing er tekin af fyrstu 10 eiginvektorunum/aðalhlutunum. Þess vegna rannsökuðum við fyrstu tvo eiginvektorana/tölvur (Principal hluti) nákvæmlega. Mynd 15 sýnir tvívíddarvörpun fyrstu tveggja eiginvigranna. Það kom fram að staðlaðar sameindir sem notaðar voru í þessari rannsókn, Carmofur, GRL-0617 og DRI-C23041, sem miða á 3CLpro, PLpro og spike prótein, sýndu í sömu röð meiri fjölbreytni í sköpum við uppgerðina (sýnt sem rauð lína á mynd 15A–C) Hins vegar valdir bindlar, nefnilega 3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4′ -O- -D-glúkópýranósýl{{22} },2'-díhýdroxýchalcone, 4-hydroxycordoin og mallotophilippen D sem miða á 3CLpro, PLpro og spike prótein, í sömu röð, sýndu minni fjölbreytni í sköpum við uppgerð. Þetta leiðir í ljós að fléttur 3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4′ -O- -D-glúkópyranósýl-4,2'-díhýdroxýkalkóni með 3CLpro, 4-hýdroxýkordóín með PLpro og mallotophilippen D með topppróteini eru vel í jafnvægi og stöðugleika meðan á uppgerðinni stendur. Að auki sýndi stærra sköpulagsrýmið sem flétturnar (staðlaðar sameindir) taka upp meiri sveigjanleika í sköpulaginu með hámarksfjölda fjölbreyttra samsetninga. Athyglisvert er að efnasamböndin 3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4′ -O- -D-glúkópýranósýl-4,2'-díhýdroxýkalkon, {{ 51}}hýdroxýkórdóín og mallótophilippen D með 3CLpro, PLpro og spike próteini tóku tiltölulega miklu minna sköpulagsrými samanborið við viðkomandi viðmiðunar/staðal. Þannig leggjum við til að skimaðar sameindir gætu verið árangursríkari en venjuleg lyf (mynd 15D-F).

Kraftmikil krossfylgni C atóma sem sést í fléttum öðlast meiri innsýn í uppbyggingu inn í sameiginlega hreyfingu bindilbindandi lénanna. Mynd 16 sýnir samstillta afgangshreyfingu C atóma í öllum hermdu fléttunum. Skágula gula línan sýnir sterka sjálfsfylgni hvers leifa við sjálfa sig. Magn fylgni við andfylgni er kvarðað frá gulbrúnum til bláum lit í sömu röð. Í flóknu 3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4′ -O- -D glúkópýranósýl-4,2'-díhýdroxýkalkóni-3 CLpro, bindistaðaleifarnar sýna and-fylgni við N-enda lénið á 3CLpro. Hins vegar er amplitude andfylgni í meðallagi á meðan flókið 3CLpro-carmofur (staðall) sýndi svipaða andtengingu með mun minni amplitude. Þannig leggjum við til bindingu 3'-(3-metýl-2-bútenýl)- 4′ -O- -D-glúkópýranósýl-4,2'-díhýdroxýchalcons sem myndi stuðla að sköpulagsbreytingu og stuðla að stöðugri fléttumyndun með auknum ótengdum víxlverkunum samanborið við staðlaða sameind þess þ.e. carmofur. Sömuleiðis sýndi annað flókið 4-hýdroxýkórdoín PLpro sterka fylgni milli efnaleifanna 50–175, hins vegar sýndu sömu leifar í flóknum með venjulegu lyfi GRL-0617 bundið PLpro tiltölulega veikari samvinnuhreyfingu. Samvinnuhreyfingin sem gefin var upp með bindandi vasaleifunum á bilinu 175 til 240 með N-enda svæðinu sýndi mikilvægi virku staðaleifanna við að koma á stöðugleika GRL-0617-PLpro flóksins. Bindingvasafylgnin tapaðist í flóknu GRL-0617-PLpro. Staðlaða sameindin DRI-C23041-gaddapróteinflétta sýndi sterka samvinnuhreyfingu fyrir leifar 390 til 470 við sjálfa sig, en þessar leifar í flóknu spike-mallotophilippen D sýndu andvirknihreyfing. Þar að auki sýndi spike-mallotophilippen D flókið andstæðingursamvinnuhreyfing að undanskildum sterkri sjálfsfylgni sem lýst er af öllum leifum.

Þannig sýndi kraftmikla krossfylgnifylkin samvinnuhreyfinguna og and-samvinnuhreyfinguna í próteininu sem undirstrikaði sveigjanleika sköpulags fléttanna sem rannsakaðir voru og stöðugar ótengdar víxlverkanir sem voru lækkaðar með ósamvinnuhreyfingu á gagnstæða hlið kveiktu á opnun og lokun bindivasans. leifar sem auðvelda stöðuga fléttumyndun meðan á MD uppgerð stendur.

Mynd 9. Færibreytur sem lýsa 3CLpro-3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4′-O- -D-glúkópyranósýl-4, 2'-díhýdroxýchalcone flókið byggingarstöðugleiki. (a) RMSD af burðarás og flóknum, (b) RMSF, (c) Rg, (d) SASA, (e) fjölda H-tengja víxlverkana, og (f) framlagsorkurit sem undirstrikar mikilvægi bindandi vasaleifanna í stöðug flókin myndun.

Tafla 6

MM-PBSA útreikningar á bindandi frjálsri orku og víxlverkunarorku efstu höggfléttna.

4. Umræður

Það hefur verið gefið til kynna að ónæmisörvandir gætu gegnt aðalhlutverki í fyrirbyggjandi meðferð gegn mörgum smitandi heimsfaraldri þar á meðal COVID-19 þar sem þeir eru algengari í skert ónæmi. Áður hefur hlutverk ónæmishvataranna við að takast á við COVID-19 verið útskýrt með efna- og lífupplýsingaaðferðum [34]. Á sama hátt var reynt að rannsaka benzalacetophenones (forvera flavonoids) [35] sem ónæmisörvandi og veirueyðandi lyf gegn nýjum kransæðaveiru.

Upphaflega voru efnasamböndin sótt og látin spá fyrir um lyfjalíkt efni út frá mólþunga, H-tengigjöfum, viðtakendum og fitusækni eins og útskýrt er með fimm reglum Lipinskis. Hér var meirihluti benzalasetófenónanna auðkenndur með jákvæðum lyfjalíkumskorum sem gefa til kynna aðgengi þeirra til inntöku [16]. Að auki er hægt að gera nokkrar breytingar á byggingu benzalaceto fenóna með neikvæðum lyfjalíkumskorum til að auka aðgengi þeirra til inntöku. Hins vegar skal tekið fram að líffræðileg virkni þeirra ætti ekki að hafa áhrif. Ennfremur var spáð fyrir efstu 5 bindlana með jákvætt lyfjalíkingarstig, þ.e. abyssinone VI (c1), ísóvavachalcone (c11), 4-hýdroxýkordóín (c30), mallotophilippen E (c31), og súrefnisríkt xanthohumol (c39) fyrir þeirra fitusækni, vatnsleysni, lyfjahvörfum og lyfjalíki þar sem þetta eru meginþvinganir sem þarf að hafa í huga fyrir verkun lyfsins. Athyglisvert er að ekkert af þessum 5 höggum braut gegn Lipkinski (mólþyngd<500, number of H-bond acceptors <10, number of H-bond donors <5, and XLogP<5) [36] and Veber (number of rotatable bonds ≤10, and the total polar surface area ≤140, also questions 500 molecular weight cutoff in Lipinski rule of 5) [37] rules. 

Að auki var alls 55 mismunandi ferlum stjórnað af benzalacetophenones sem voru til rannsóknar þar sem súrefnisskortur (HIF) -1, p53, kjarnaþáttur kappa B (NF-kB), toll-like viðtaka, æxlisdrep þáttur (TNF), gaffalkassi, undirhópur O (FoxO), estrógen, Wnt, NOD-líkur viðtaki og interleukin-17 (IL-17) boðleið og víxlverkun cýtókín-sýtókínviðtaka að hafa áhyggjur afstjórnar ónæminu. Það hefur verið greint frá því að HIF tjáning og stöðugleiki sé kveikt af súrefnisskorti og örverutengdri meingerð. Ennfremur stjórnar HIFónæmisvirkni hýsilsins, eykur örverueyðandi getu átfrumna og sérhæfingu T-frumna fylgt eftir með frumudrepandi virkni. Að auki gegnir HIF-boðaleiðin aðalhlutverki í bólgu, umbrotum og skautun átfrumna, örverusýkingu (bæði veiru og bakteríu), kynningu mótefnavaka ogmeðfædd ónæmi[38]. Á sama hátt var greint frá því að HIF-1 boðleiðin (hsa04066) væri stjórnað með mótun FLT1, GAPDH, HMOX1, NOS2, TFRC og TIMP1 gena sem myndu gegna mikilvægu hlutverki við að stjórnaónæmiskerfií kórónavírussýkingum og takast á við bólguna í sýktum vef. Einnig, p53 merkjaleiðin vinnur meðónæmissvöruní gegnum virkjun helstu eftirlitsaðila áónæmisboðaleiðir.  

Mynd 10. Færibreytur sem lýsa 3CLpro-Carmofur flóknum byggingarstöðugleika. (a) RMSD hryggjarliðs og fléttu, (b) RMSF, (c) Rg, (d) SASA, (e) fjölda Hbond víxlverkana, og (f) framlagsorkurit sem undirstrikar mikilvægi bindandi vasaleifanna í stöðugum flóknum myndun.

Mynd 11. Færibreytur sem lýsa PLpro-4-hýdroxýkordóín flóknu byggingarstöðugleika. (a) RMSD af burðarás og flóknum, (b) RMSF, (c) Rg, (d) SASA, (e) fjölda H-tengja víxlverkana, og (f) framlagsorkurit sem undirstrikar mikilvægi bindandi vasaleifanna í stöðug flókin myndun.

Ennfremur er einnig greint frá mörgum genum frá p53 boðleiðum í frumumyndun, skynjun sýkla, bólgu og úthreinsun dauðra frumna [39]. Þess vegna gætu benzalacetophenones tekið þátt í að stjórna CASP8, CCND2, CHEK1 og MDM2 genum frá p53 boðleiðinni (hsa04115), og geta kallað fram frumuvakana til að auka ónæmið fylgt eftir með úthreinsun dauða vefja úr líkamanum. Bólgusýtókín eins og TNF eða IL hafa áhrif á meðfædd og aðlögunarhæf ónæmissvörun. Að auki hefur mikilvægi þeirra verið sýnt með því að samþykkja meingerðina sem myndast með blokkun stakra frumuefna eins og IL-6 eða TNF [40]. Hér var benzalacetophenones einnig ætlað að móta margar leiðir eins og NF-kB (hsa04064), TNF (hsa04668) og IL-17 (hsa04657) boðferil og cýtókín-sýtókínviðtakasamskipti (hsa04060) sem tengjast bólgu beint. cýtókín. Tolllíkir viðtakar eru venjulega tjáðir í eftirlitsfrumum (dendritic frumum og átfrumum) til að þekkja sameindir sem eru fengnar úr örverum og gegna lykilhlutverki ímeðfædd ónæmiskerfi. Að auki ráða þeir sértækar aðlögunarsameindir, virkja umritunarþætti eins og NF-kB, tilgreina niðurstöðu meðfæddra ónæmissvara og gegna mikilvægu hlutverki í mörgum þáttum meðfædds ónæmissvörunar við sýkla [41]. Hérna voru bensalasetófenónin auðkennd til að stjórna próteinunum þremur þ.e. CASP8, CD14 og CD86 í toll-like viðtaka boðleiðinni. Ennfremur gegna FoxO undirfjölskyldunni af enni (Fox) umritunarþætti mikilvægu hlutverki í frumunni og hómóstatískri starfsemifrumur sem skipta máli fyrir ónæmiskerfiðþar á meðal T frumur, B frumur, daufkyrninga og aðrar eitilfrumur [42]. Ennfremur stjórnuðu benzalacetophenone FoxO boðleiðinni (hsa04068) með því að stilla þrjú prótein (CAT, CCND2 og MDM2) gegn 130 bakgrunnspróteinum með rangri uppgötvunartíðni upp á 0,0137. Að sama skapi hafa estrógenviðtakar verið viðurkenndir fyrir að þróa ónæmisfrumurnar og fylgt eftir með þátttöku þeirra í steraboðum af frumuhimnu. Að auki framleiða þeir interferón af tegund I og einnig meðfædda frumumyndun og þróa eða virka svörun meðfæddra ónæmisfrumna [43]. Sömuleiðis sýndi núverandi vinna benzalacetophenones til að stjórna estrógenboðaleiðinni (hsa04915) með mótun þriggja próteina þ.e. MMP2, PGR og RARA sem geta komið af stað interferónum og cýtókínframleiðslu og hjálpað til við hraða svörun ónæmisfrumna. Á sama hátt gegnir Wnt merki mikilvægu hlutverki í mörgum líffræðilegum ferlum, þar með talið ónæmisfrumustjórnun sem er mjög fjölbreytt í þróun náttúrulegra drápsfrumna, upphaf T-frumna, virkni átfrumna við viðgerð vefja og skjaldvakamyndun T-frumna [44]. Hér stýrðu benzalaceto fenónum Wnt-boðaleiðinni (hsa04310) með mótun þriggja próteina þ.e. CCND2, CTNNB1 og MMP7, og geta stuðlað að þróun og stjórnun náttúrulegra drápsfrumna, T-frumna og átfruma. Á sama hátt virka NOD-líkir viðtakar við örveruþekkingu og greint er frá varnaraðferðum hýsils og kveikja einnig meðfæddu ónæmissvörun hýsilsins. Að auki hefur NOD-eins og viðtakafjölskyldan áhyggjur af milliverkunum hýsilsýkla og bólgusvörun [45] sem hefur verið stjórnað með mótun 3 próteina þ.e. CASP8, CCL2 og CYBA.

Í samskiptum benzalacetophenones-markmiða-ferla voru margar breytur alls netkerfisins metnar. Meðaltenging allra hnúta við nágranna sína er skilgreind af "hverfistengingu" [46]. Þessi breyta var skilgreind í ofangreindu neti af nágrönnum með 63,8 prósent . Að auki mælir "millimiðja" hnúttíðnina til að vera til staðar á stystu leiðinni milli annarra hnúta. Þetta bendir á að hnúturinn virki sem brú á milli hnútanna í netinu. Þetta hjálpar til við að bera kennsl á stystu leiðina og tíðni óháðra hnúta til að falla á einn [47] sem sást vera í fylgni við nágrannafjölda um 1. Á sama hátt, "nálæg miðlægni" samsvarar hverjum hnút miðað við 'nálægð' þeirra við aðra hnúta. og reiknar út stystu leiðina á milli hnútanna. Þetta hjálpar til við að skilja áhrif einstakra hnúta á tiltekið net fljótast [47]. Í þessari vinnu kom fram að nálægð miðlægni var háð nágrönnum um 2 prósent.

Við auðkenningu á nýjum veirueyðandi efnum fyrir nýju veirunni gæti það verið auðveldur leikur að rekja veirueyðandi eiginleikann í átt að vel þekktri veiru. Að því gefnu að þetta, rannsökuðum við áhugaverð benzalaceto fenón í líffræðilegu litrófinu gegn veirum. Í þessu kom fram að valin benzalasetófenón höfðu veirueyðandi eiginleika gegn adeno, cytomegalo, lifrarbólgu, herpes, trachoma, inflúensu, parainflúensu, picorna, pox, nashyrningi og ónæmisbrestsveiru manna. Ennfremur benti GO greining einnig á stjórnun á smitsjúkdómsferlum, þ.e. papillomaveirusýkingu úr mönnum (hsa05165), Kaposi sarkmein-tengda herpesveirusýkingu (hsa05167), krabbameinsvaldandi veiru (hsa05203), HTLV-I sýkingu (hsa05166 (8), herpes simplex sýkingu (hsa05166) ), og veiru hjartavöðvabólgu (hsa05416) sem varða veirusýkingu varðandi KEGG gagnagrunn. Þessar niðurstöður kveiktu enn frekar í okkur til að rannsaka líklega veirueyðandi eiginleika benzalacetophenones gegn nýju kransæðaveirunni.

Til að meta líklega veirueyðandi verkun benzalacetophenones gegn SARS-CoV-2, notuðum við kísil sameindatengingu og skýra MD-hermun til að kanna bindandi sækni bindla gegn 3 skotmörkum nýrrar kransæðaveiru, þ.e. 3CLpro, PLpro, og topppróteinviðtakabindandi lén. Hér fengu öll benzalasetófenónin bindingarorku minni en − 5.0 kcal/mól. Frekari efnasambönd virkuðu við öll markmiðin þrjú með að minnsta kosti einni H-tengi víxlverkun nema fáum þ.e. 4-klórkólkón (c4), obókalkólakton (c17), 4'-O-metýlbavakalkóni (c22) og mallótófílippen E ( c31) með 3CLpro,2' -hýdroxýkalkóni (c2), 4-klórókalkóni (c4), 4- hýdroxýkalkóni (c5), okaníni (c7), 2' ,3,4,4' ,6 ′ -pentahýdroxýchalcone (c8), chalcone (c10), (plús )-tephrosone (c12), pinocembrinchalcone (c13), 4' -O-methylbavachalcone (c22), og 2' ,4' -díhýdroxý-6' - metoxý-3',5'-dímetýlkalkon (c43) með PLpro og 2'-hýdrox ychalcone (c2), 4-klórókalkóni (c4), kalkóni (c10), desmetýlxan þóhúmól (c21), 4 ′ -O-methylbavachalcone (c22), 7- methoxypraecansone B (c29), mallotophilippen C (c41), og 2' ,4' - díhýdroxý-6' -metoxý-3' ,5 ′ -dímetýlkalkon (c43) með topppróteini. Að auki er 3CLpro til staðar í nsp5 sem gengst undir sjálfvirka klofnun og losar allar eftirlíkingar undireiningar niðurstreymis til að breyta ubiquitin kerfinu sem hefur áhrif á starfræn prótein [48] sem voru aðallega miðuð af obochalcolactone (c17) með - 8,5 kcal/mól bindiorku hvernig sem það er. hafði engin H-tengi samskipti. Veiruhring kórónavírus er stjórnað af afritunarpróteinum sem koma af stað með pp1a og pp1ab og er unnið af PLpro [49] sem var aðallega mótað af 4-hýdroxýkórdóíni (c30) og xantóhúmóli (c38) með bindandi sækni upp á - 8,2 kcal/mól af báðum bindlum. Sömuleiðis notar kransæðavírusinn ACE2 sem gátt til að komast inn í hýsilfrumuna [50,51] og var aðallega skotmarkið af abyssinone VI (c1). Þessar niðurstöður endurspegla margar sameindir (af svipuðum flokki) sem hægt er að nota til að miða á hina ýmsu staði veirulíffærafræðinnar vegna skyldleika þeirra við mörg prótein í gegnum "multi-compound (s)-multi protein(s)" víxlverkunarkenninguna. Einn af mikilvægum þáttum rannsóknarinnar sem kynnt er er auðkenning á veiruinngangshemlum sem náðu yfir 7,71 prósent af heildar benzalacetophenones sem eru til rannsóknar (Mynd 7). Þess vegna var binding benzalacetophenones við topppróteinviðtakabindandi svæði bætt við sem toppprótein og er bein lykill að því að nudda eðlilega frumujafnvægi. Þar að auki er einn af mikilvægustu þáttunum sem þarf að hafa í huga að „rétt sameind-hægri miða-hægri tímalengd“, sem óskynsamlegt mat, getur valdið hraðavirkni í átt að meingerðinni sem vekur áhuga, þar á meðal COVID{101}} sem gæti verið leyst með „fjölþáttum -fjölprótein" víxlverkun yfir "einstakt efnasamband-eitt mark" víxlverkunarkenningu. Auk þess benti þessi rannsókn á stjórnun sumra sérstakra ferla, þ.e. TNF, NF-kB og IL-17 merkjaferla og milliverkun cýtókín-sýtókínviðtaka (mynd 17) sem tengjast beintónæmisstjórnunog stjórna einnig frumustormnum.

Mynd 16. Kvikfylgni fylki C atóma sem sést í fléttum fyrir benzalasetófenón (A, C, E) og staðlað lyf (B, D, F) með 3CLpro, PLpro ogspike prótein, í sömu röð. Jákvæðu svæðin, sem eru lituð gulbrún, tákna sterka fylgni hreyfinga C atóma (Cij=1), en neikvæðasvæði, sem eru lituð blá, tákna andtengt hreyfingar (Cij=-1).

Áður hafa margar rannsóknir verið gerðar til að innleiða samheitalíkanagerð, sameindatengingu, MD-hermun og MM-PBSA mat til að skrá lyfjaflutningsbreytileika, auðkenningu á próteinsósterískri hömlun, áhrif chirality í sértækri ensímhömlun, kanna óafturkallanlegan hátt. af viðtökum, og bindill-prótein milliverkanir mat [52-56]. Á sama hátt, í þessari vinnu, var stöðugleiki milli sameinda víxlverkana auðkenndra mögulegra blýefnasambanda og staðlaðra sameinda með viðkomandi markmiði greindur með klassískri MD-hermi í 150 ns (prótein - mallotophilippen D (c42) flókið í 200 ns). Niðurstöður leiddu í ljós að 3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4′ -O- -D-glúkópyranósýl-4, 2'-díhýdroxýkalkon (c35) sýndi stöðugt gangverki með 3CLpro miðað við staðlaða sameind carmofur. Áður var greint frá því að carmofur hindrar afritun kransæðaveiru í Vero E6 frumum (EC50=24.30 μM) með því að hafa samskipti við Cys145 leifin af 3CLpro [57]. Á sama hátt, í þessari rannsókn, var spáð að karmófúr myndi hafa víxlverkun við Cys145 leifar með því að fá framlagsorku upp á -1,42 kJ/mól, en 3'-(3-metýl-2-bútenýl)-4 ′ -O- -D-glúkópýranosýl-4,2'-díhýdroxýchalcon efnasambönd fengu −4,24 kJ/mól fyrir Cys145. Að auki eru Cys145–His41 tvær hvatandi dyad leifar 3CLpro sem gegna mikilvægu hlutverki í klofningu SARS-CoV-2 fjölpróteina [58]. Að auki greindu aðrir rannsóknarhópar einnig frá hugsanlegu hlutverki þess að miða á Cys145 til að hanna ný veirulyf gegn 3CLpro [59,60]. Athyglisvert var að við horfðum á varðveitt bindistaðavíxlverkun (Thr25, Met49 og Met165) í báðum þessum efnasamböndum meðan á 150 ns MD uppgerðinni stóð. Á sama hátt var 4-hýdroxýkordóín (c30) skimað sem hemill á PLpro og myndaði stöðugt flókið samanborið við staðlaða sameind GRL-0617. Áður hefur verið greint frá GRL-0617 sem öflugum PLpro hemli í SARS-CoV-2 sýktum Vero E6 frumum með IC50 upp á 2,1 μM [61, 62]. Í þessari rannsókn mynduðu bæði GRL-0617 og 4-hýdroxýkorðóín (c30) stöðugt RMSD og deildu sameiginlegum samskiptum við Ile223 og Pro248 í 150 ns og 200 ns MD framleiðslu, í sömu röð, og sýndu hvort tveggja hentugur hits sem PLpro hemlar.

Að auki, áður, Bojadzic o.fl. greint frá því að DRI-C23041 hindrar toppprótein RBD lén með IC50 upp á 0,52 μM [63]. Í þessari rannsókn var mallotophilippen D (c42) auðkennt sem broddpróteinstillir og sýndi betri bindishækni í RBD lén spike próteins samanborið við staðlaða sameind DRI-C23041. Niðurstaða MM-PBSA leiddi í ljós að mallotophilippen D (c42) býr yfir bindandi frjálsri orku upp á - 34,10 kcal/mól, en - 3,10 kcal/mól með DRI-C23041 sem benti til meiri sækni mallotophilippen D (c42) til að auka prótein. . Ennfremur reyndust bæði DRI-C23041 og mallotophilippenD (c42) hafa samskipti við sameiginlega leifar Leu368 af toppprótein RBD léni við 150 ns MD uppgerð. Rannsókn á fléttum fyrir PCA og DCCM sýndi einnig fram á að chalcones með 3CLpro, PLpro og spike próteini eru vel í jafnvægi og stöðugleika meðan á uppgerðinni stendur með því að taka tiltölulega miklu minna sköpulagsrými og sköpulagssveigjanleika með lágmarksfjölda fjölbreyttri sköpulags miðað við staðlaðar sameindir. Nútímalegt, 4-hýdroxýkórdóín (c30), efnasamband með hæsta stig lyfjalíkingar stjórnaði 9 próteinum, þ.e. FLT1, CD86, CASP8, RARA, KLK3, PLAT, CTNNB1, HMOX1 og TOP2A þar sem 6 prótein þ.e. CASP8, CTNNB1, TOP2A, CD86, PLAT og HMOX1 voru rakin til að hafa áhyggjur af veirusýkingu. CASP8 umritar caspase 8; veirusýkingur sem miðar á CASP8-háða apoptotic frumu og drepfrumudauðaferil sem er háð viðtakavíxlverkandi próteini (RIP) 1 og 3. Þess vegna bælir það að fá CASP8 virkni RIP1 og 3 til að styrkja hlutverk í vörn hýsils gegn innanfrumu veirusýkingum [64]. Að sama skapi kóðar CTNNB1 catenin -1 og er ábyrgt fyrir nýmyndun interferónpróteina [65] og er aðal mótandi ónæmissvörunar. Að auki getur það truflað veirusýkingar [66]. Sömuleiðis kóðar TOP2A tópóísómerasa 2 og hömlun þess veldur skaða á telómerískum deoxýríbónsýru og truflun á T-frumum við langvarandi veirusýkingu [67]. Ennfremur kóðar CD86 T-eitilfrumuvirkjun mótefnavaka CD86 og stjórnar veirueyðandi CD8 auk T-frumuvirkni og ónæmiseftirliti [68]. PLAT kóðar plasmínógenvirkja og stuðlar að skaðlegri bólgu í lungum og staðbundinni myndun fíbríntappa; getur tengst vörn hýsils gegn inflúensuveirusýkingum [69]. Sömuleiðis kóðar HMOX1 hem súrefnisasa 1. Áður var greint frá því að SARS-CoV-2 opinn lestrarrammi 3a prótein binst HMOX1 próteini manna með miklu öryggi. HMOX1 ferillinn getur hamlað blóðflögusamloðun og getur meðal annars haft segaeyðandi og bólgueyðandi eiginleika, sem allir eru mikilvægir sjúkdómar sem sjást hjá COVID-19 sjúklingum [70].

Áður hefur verið gefið til kynna að erfðafræðilegt RNA SARS-CoV-2 geti stjórnað ónæmisgenum og svipt starfsemi þeirra. Að auki hefur verið bent á að erfðafræðilegt RNA gæti komið af stað interleukin-víxlverkunum og gæti einnig komið af stað frumustormnum [71]. Einnig kannar rannsókn bitahluta míkróRNA (miRNA) í COVID sýkingu til að forðast viðurkenningu og árás frá ónæmissvöruninni. Á augabragði getur SARS-CoV-2 virkað sem bómull eða svampur til að gleypa miRNA og knýja fram truflun á ónæmiskerfinu. Að auki umritar það miRNA sitt, fer inn í hýsilfrumu og er viðurkennt af ónæmiskerfi hýsilsins [72].

Þar sem greint er frá benzalacetophenones (chalcones) við að meðhöndla ónæmissvörun [11], og RNA hefur áhyggjur af nýmyndun ónæmisgena, þarf að rannsaka líklegt hlutverk þeirra við að meðhöndla erfðafræðilega RNA-víxlverkunarhýsilinn frekar.

5. Niðurstaða

Þessi rannsókn rannsakaði mörg benzalacetophenones sem ónæmisörvun og veirulyf þeirra gegn SARS-CoV-2. Þessi rannsókn greindi frá líkleg leiðandi veirueyðandi lyf, nefnilega abyssinone VI (c1), ísóbútrín (c16), obochalcolacton (c17), 4-hýdroxýkordóín (c30),3'-(3-metýl-2-bútenýl )-4′-O- -D-glúkópýranósýl-4,2'-díhýdróx ychalcone (c35), xanthohumol (c38) og 4-mallotophilippen D (c42) gegn COVID -19 með því að miða á 3CLpro, PLpro og toppprótein. Auk þess benti auðgunargreining á reglusetningu ýmissa

ferlar eins og HIF-1, p53, NF-kB, Toll-like receptor, TNF, FoxO, estrógen, Wnt og IL-17. Einnig voru ræstir NOD-líkir viðtakar og cýtókín-cýtókínviðtakar sem hafa bein áhrif á að stjórna ónæmiskerfinu og stjórna cýtókínstormnum. Á sama hátt var kveikja á mörgum leiðum gegn veiru- og bakteríusýkingu og innkirtlaafnám þar sem ónæmiskerfið er aðallega í hættu. Þessar niðurstöður gefa til kynna meðferðarmöguleika benzalasetófenónafleiðu/afleiðu gegn COVID-19. Takmarkanir við núverandi niðurstöður, bendum við á að niðurstöðurnar sem kynntar eru í þessari vinnu eru byggðar á örgjörvahermi sem þarf að staðfesta frekar með blautum tilraunaaðferðum.

Heimildir

[1] AR Fehr, S. Perlman, Coronaviruses: yfirlit yfir afritun þeirra og meingerð, Methods Mol. Biol. 1282 (2015) 1–23, https://doi.org/10.1007/978- 1-4939-2438-7_1.

[2] Y. Dong, X. Mo, Y. Hu, X. Qi, F. Jiang, Z. Jiang, S. Tong, Epidemiology of COVID-19 among children in China, Pediatrics 145 (2020), e20200702, https://doi.org/ 10.1542/peds.2020-0702.

[3] CJ Andersen, KE Murphy, ML Fernandez, Áhrif offitu og efnaskiptaheilkennis á ónæmi, Adv. Nutr. 7 (2016) 66–75, https://doi.org/10.3945/ an.115.010207.

[4] SG Deeks, BD Walker, Ónæmissvörun við AIDS veirusýkingu: gott, slæmt eða bæði, J. Clin. Fjárfestu. 113 (2004) 808–810, https://doi.org/10.1172/JCI21318.

[5] M. Gendrot, E. Javelle, A. Clerc, H. Savini, B. Pradines, Chloroquine sem fyrirbyggjandi lyf gegn COVID-19, Int. J. Örverueyðandi. Umboðsmenn 55 (2020), 105980, https://doi.org/10.1016/j.ijantimicag.2020.105980.

[6] V. Mody, J. Ho, S. Wills, A. Mawri, L. Lawson, MCCJC Ebert, GM Fortin, S. Rayalam, S. Taval, Identification of 3-chymotrypsin like protease (3CLPro) hemlar sem hugsanlega and-SARS-CoV-2 lyf, Commun Biol 4 (2021) 93, https:// doi.org/10.1038/s42003-020-01577-x.

[7] D. Shin, R. Mukherjee, D. Grewe, D. Bojkova, K. Baek, A. Bhattacharya, L. Schulz, M. Widera, AR Mehdipour, G. Tascher, PP Geurink, A. Wilhelm, GJ van der Heden van Noort, H. Ovaa, S. Müller, KP Knobeloch, K. Rajalingam, BA Schulman, J. Cinatl, G. Hummer, S. Ciesek, I. Dikic, Papain-eins próteasi stjórnar SARS-CoV{{ 3}} veiruútbreiðslu og meðfædd ónæmi, Nature 587 (2020) 657–662, https://doi.org/10.1038/s41586-020-2601-5.

[8] Y. Huang, C. Yang, XF Xu, W. Xu, SW Liu, Byggingar- og hagnýtir eiginleikar SARS-CoV-2 topppróteins: hugsanleg þróun vírusvarnarlyfja við COVID-19, Acta Pharmacol. Synd. 41 (2020) 1141–1149, https://doi.org/10.1038/s41401-020- 0485-4.

[9] F. Yazdanpanah, MR Hamblin, N. Rezaei, Theónæmiskerfiog COVID-19: vinur eða óvinur, Life Sci. 256 (2020), 117900, https://doi.org/10.1016/j. lfs.2020.117900.

[10] Z. Rozmer, P. Perj´esi, Kalkónur og líffræðileg virkni þeirra, Phytochemistry Rev. 15 (2016) 87–120, https://doi.org/10.1007/s11101-014- 9387-8.

[11] JS Lee, SN Bukhari, NM Fauzi, Áhrif chalcone afleiða á leikmenn ónæmiskerfisins, Drug Des DevelTher 9 (2015) 4761–4778, https://doi.org/ 10.2147/DDDT.S{{7 }}.

[12] D. Zhou, D. Xie, F. He, B. Song, D. Hu, Veirueyðandi eiginleikar og samspil nýrra kalkónafleiðna sem innihalda púrín- og bensensúlfónamíðhluta, Bioorg. Med. Chem. Lett 28 (2018) 2091–2097, https://doi.org/10.1016/j. bmcl.2018.04.042.

[13] X. Tang, S. Su, M. Chen, J. He, R. Xia, T. Guo, Y. Chen, C. Zhang, J. Wang, W. Xue, Nýjar kalkónafleiður sem innihalda 1, 2,4-tríazínhluti: hönnun, myndun, bakteríudrepandi og veirueyðandi virkni, RSC Adv. 9 (2019) 6011–6020, https://doi. org/10.1039/C9RA00618D.

[14] Y. Fu, D. Liu, H. Zeng, X. Ren, B. Song, D. Hu, X. Gan, Nýjar kalkónafleiður: nýmyndun, veirueyðandi virkni og verkunarmáti, RSC Adv. 10 (2020) 24483–24490, https://doi.org/10.1039/D0RA03684F.

[15] A. Lagunin, S. Ivanov, A. Rudik, D. Filimonov, V. Poroikov, DIGEP-Pred: vefþjónusta fyrir í sílikó spá um lyfjaframkallaða genatjáningarprófíla byggt á byggingarformúlu, Lífupplýsingafræði 29 (2013) 2062–2063, https://doi.org/ 10.1093/bioinformatics/btt322.

[16] CA Lipinski, Blý- og lyfjalík efnasambönd: regla-af-fimm byltingin, Drug Discov. Í dag Technol. 1 (2004) 337–341, https://doi.org/10.1016/j. ddtec.2004.11.007.