Clr-f tjáning stjórnar ónæmis- og efnaskiptajafnvægi nýrna

C-gerð lektín-tengt prótein, Clr-f, kóðað af Clec2h í mús NK genasamstæðunni (NKC), er meðlimur í fjölskyldu ónæmisstýrandi lektína sem leiða ónæmissvörun í mismunandi vefjum líkamans. Clr-f kemur mjög fram í nýrum; þó er virkni þess í þessu líffæri óþekkt. Til að meta kröfuna um Clr-f í heilsu og nýrnastarfsemi, mynduðum við Clr-f-skorta mús (Clr-f-/-) með markvissum úrfellingum í Clec2h geninu. Mýs sem skorti Clr-f sýndu gaukla- og pípuskemmdir, immúnóglóbúlín og C3 viðbót prótein nýrnaútfellingar og verulega uppsöfnun í kviðarholi og utanlegsfitu. Greining á heilnýrum umritunarsniði á Clr-f-/- músum við 7, 13 og 24 vikna aldur leiddi í ljós kraftmikla vanstjórnun á efnaskiptaferlum fitu, streituviðbrögðum og bólgumiðlum. Athugun á framlagi ónæmiskerfisins til meinafræði Clr-f−/− nýrna í músum greindist hækkuð IL-12 og IFN í frumum tubulointerstitium og íferðarstofni daufkyrninga og T og B eitilfrumna. Tilvist þessara móðgana í Rag1−/−Clr-f−/− bakgrunni sýnir að Clr-f−/− mýs eru næmar fyrir T og B eitilfrumnaóháðri nýrnasjúkdómsmynd. Gögnin okkar sýna hlutverk Clr-f við viðhald áónæmis- og efnaskiptajafnvægi í nýrum.

Smelltu til að cistanche herba fyrir nýrnasjúkdóm

Viðhalda umburðarlyndi gegn skaðlaususjálfsmótefnavakagetur verið erfitt verkefni fyrirónæmisfrumur í nýrum, sem eru stöðugt útsett fyrir almennt saklausum próteinum með lágmólmassa sem eru síuð úr blóðrásinni. Þessi ónæmisstjórnun verður að halda nokkrum lögum af nýrnavörnum í skefjum. Pípulaga þekjufrumur, sem stjórna skiptingu jóna, vatns og lítilla sameinda milli gauklasíuvökvans og blóðs í blóðrásinni, búa einnig yfir getu til að þekkja sjúkdómsvaldandi eða sjálfvirka mótefnavaka með því að nota háþróaða efnisskrá mynsturþekkingarviðtaka (PRR)1. Íbúar ónæmisfrumur í nýrum, aðallega dendritic frumur (DCs), og lítill hópur átfrumna og eitilfrumna taka upp pípuhimnurýmið umhverfis nýrnafrumur og tjá einnig margs konar PRRs2–4. Í tengslum við nýrnasjúkdóm byrjar nýrnaskemmdir oft við glomerulus og dreifist til ónæmisfrumna millivefsins. Gauklaáverkar geta valdið miklum fjölda bólgueyðandi frumudrepna og leka gauklasíuvökva og sjálfsmótefnavaka inn í millivegg. Þessi truflun leiðir til virkjunar ásíast inn eitilfrumur með DCs, sem knýr aukna framleiðslu á bólgueyðandi frumukínum sem leiða til frekari vefjaskemmda. Þótt aðferðir til að eyða sjálfvirkum T-frumum í nýrnaeitlum séu lagðar til sem leið til að viðhalda þoli fyrir sjálfsbindlum meðal ónæmisfrumna innan nýrna, er skilningur okkar á hlutverki nýrnaþekju gegnir við að viðhalda samvægi ekki skýr5.

Örveru- og ónæmisfræðideild Dalhousie háskólans, Halifax, NS, Kanada. 2 King Abdullah International Medical Research Centre, Ónæmisfræðirannsóknaráætlun, Riyadh, Sádi-Arabía. 3 Deild lífefnafræði, örverufræði og ónæmisfræði, University of Ottawa, Ottawa, ON, Kanada. 4 deild nýrnalækninga, læknadeild, nýrnarannsóknarmiðstöð, Ottawa Hospital Research Institute, University of Ottawa, Ottawa, ON, Kanada. 5 Deild meinafræði og sameindalæknisfræði, deild lækna örverufræði, McMaster University, Hamilton, ON, Kanada. 6 Sameindaerfðafræði og hjartaendurnýjun rannsóknarstofa, lífefnafræði-, örveru- og ónæmisfræðideild, háskólann í Ottawa, Ottawa, ON, Kanada. 7 deild hjartaskurðlækninga, University of Ottawa Heart Institute, Ottawa, ON, Kanada. 8 bólusetningar- og ónæmismeðferðardeild, King Fahd Medical Research Center, King Abdulaziz háskólinn, Jeddah, Sádi-Arabíu. 9 Department of Medical Laboratory Technology, Deild of Applied Medical Sciences, King Abdulaziz University, Jeddah, Saudi Arabia. 10Beatrice Hunter Cancer Research Institute, Halifax, NS, Kanada. 11Department of Biomedical Sciences, University of Windsor, Windsor, ON, Kanada. 12 Institute for Molecular Medicine, Goethe University Frankfurt, Frankfurt am Main, Þýskalandi. 13 Frankfurt Cancer Institute, Goethe University Frankfurt, Frankfurt am Main, Þýskalandi. 14Department of Microbiology and Immunology, Dalhousie University, Sir Charles Tupper Medical Building, Rm. 7-F2, 5850 College Street, Halifax, NS B3H 4R2, Kanada. 15Department of Microbiology and Immunology, Dalhousie University, Sir Charles Tupper Medical Building, Rm. 7-B2, 5850 College Street, Halifax, NS B3H 4R2, Kanada. 16Þessir höfundar lögðu jafnt sitt af mörkum: Haggag S. Zein og Elias Abou-Samra. *Tölvupóstur: brendonp@dal.ca; andrew.makrigiannis@dal.ca

Einn meðlimur íC-gerð lektín-tengd (Clr) fjölskyldu yfirborðspróteina, Clr-f (kóðuð af Clec2h), er sterkt tjáð í músa proximal tubular þekjuvef og þörmum6,7. Clr-f er einn af sjö meðlimum Clr próteinfjölskyldunnar í músum (Clr-a/Clec2e, Clr-b/Clec2d, Clr-c/Clec2f, Clr-d/Clec2g, Clr-f/Clec2h, Clr-g/ Clec2i og Clr-h/Clec2j), sem hafa mismunandi og skarast vefsértæk tjáningarmynstur6. Clr próteinin sýna einkennandi eiginleika ónæmisstýrandi sameinda6, þannig að Clr próteinum er almennt lýst í starfrænu hugmyndafræðinni sem vefsértækum bindlum fimm C-gerð lektínviðtaka sem tilheyra NKR-P1 fjölskyldunni [NKR-P1A (kóðuð með Klrb1a). ), NKR-P1C/Klrb1c, NKR-P1F/Klrb1f, NKR-P1D/Klrb1d og NKR-P1G/Klrb1g] sem miðla sjálf- á móti ósjálfsþekkingu og stjórna meðfædd ónæmissvörun6,8–13. Í þessari hugmyndafræði viðtakakerfis er Clr-f sjálfsbindill hins hindrandi NKR-P1G viðtaka7. Hjá mönnum er lectin-like transcript 1 (LLT1), sem er kóðað af CLEC2D, virkni og burðarvirki réttvísun Clr próteina músa. LLT1 er tjáð í fjölmörgum frumum og vefjum, þar á meðal eitilfrumum, DCs, osteoblasts14-16 og gallblöðru, meltingarvegi, lungnalungnafrumum og nýrnapípluþekju17. Svipað og viðtaka-bindilkerfið í músum, er LLT1 viðurkennt af NKR-P1A lektínlíkum viðtakanum, réttvísun músa NKR-P1 próteina18.

Þrátt fyrir umtalsverð magn Clr-f tjáningar í nýrum og þekjuþekju í þörmum er virkni þess í þessum vefjum óljós. Í þörmum sýndu Leibelt og félagar að Clr-f er uppstýrt í þekjufrumum í þörmum eftir fjöl(I:C)-framkallaða bólgu7, hugsanlega til að takmarka ónæmisskemmdir á þekju þarma með eitilfrumum innan þekju sem tjá hamlandi NKR-P1G viðtaka. Vefsértæk tjáning Clr-f bendir til þess að NKR-P1G:Clr-f viðurkenning virðist stjórna meðfæddum ónæmisfrumum á vefsértækan hátt. Hins vegar hlutverk Clr-f í nýrnaþekjufrumum og hlutverk þess í stjórnun meðfæddraónæmissvöruner algjörlega óþekkt í nýrum.

Hér könnum við hlutverk Clr-f í nýrum með því að nota Clr-f-skorta mýs. Við sýnum að mýs sem skortir Clr-f þróa meinafræðilegar skemmdir sem taka þátt í gaukla og píplum. Að auki afhjúpum við aldurstengda útfellingu ónæmisfléttna í glomeruli músa sem skortir Clr-f og tilvist daufkyrninga sem síast inn í nýru og T og B frumur. Alþjóðleg útskriftargreining á nýrum með skort á Clr-f leiddi í ljós vanstjórnun á efnaskiptaferlum fitu og bólguferlum, sem endurspeglaðist í meinafræðilegri framvindu Clr-f-skorts músa á gamals aldri, þar sem mýs sýndu verulega uppsöfnun á fituvef og fituvef í kviðarholi. í millivef í nýrnaberki. Niðurstöður okkar veita nýrnaverndandi hlutverki fyrir Clr-f, sem sýnir ónæmisstýrandi virkni yfir ónæmisþáttum og getur gegnt hlutverki í efnaskiptajafnvægi í nýrum.

Niðurstöður

Kynslóð Clr-f-sfna músa.

Fyrri skýrslur um vefsértæka dreifingu Clr fjölskyldumeðlima músa fundu lítið magn af Clr-f tjáningu í lifur og mjög mikla tjáningu í nýrum og þarmavef6,7,19. Til að leysa frumusértækt tjáningarmynstur Clr-f í WT músarnýrum, könnuðum við nýrnavef með DIG-merktum Clr-f-sértækum RNA-könnunum með in situ blendingu. Við fundum Clr-f umritssértæka litun í þekjufrumum í nálægum krókapíplum og minna áberandi litun á fjarlægum nýrnapíplum (mynd 1A). Merki greindust einnig í kjarnafrumum, en ekki í glomerular mesangial og endothelium frumum, né í millivef eða eitilfrumu- og æðabyggingu nýrna, í takt við Clr-f tjáningu sem greint er frá í heilra einfrumu RNA raðgreiningu20.

Til að kanna hlutverk Clr-f í heilbrigði og nýrnastarfsemi, mynduðum við Clr-f-skorta mýs (Clr-f−/−) með samhljóða endurröðunarmiðluðu eyðingu á Clr-f exon 3, 4 og hluta af exon 5 (Mynd 1B og mynd S1). RTPCR á Clr-f genatjáningu í nýrum, þörmum og lifrarfrumum Clr-f-/- músa staðfesti algjört tap á greinanlegu Clr-f afriti. Við staðfestum líka að náskyldustu Clr-afritin, Clr-b og Clr-a afritin, væru enn greinanleg (mynd 1C). Ónæmisflúrljómandi (IF) merking á nýrum og smáþörmum Clr-f-/- músa staðfesti fjarveru Clr-f próteintjáningar (mynd 1D og mynd S2A).

Mynd 2. Clr-f-skorts mýs sýna nýrnasjúkdóm og breyttnýrnastarfsemi. (A) Sneiðar um nýrnavef úr 12-vikukömlum WT og Clr-f−/− músum (n=4) litaðar með PAS. Efri spjöld sýna útlit sára í nær- og fjarpíplum Clr-f−/− músa með alvarleika allt frá lágmarksþekjutruflunum (ekki sýnt), (I) fituðu pípulaga þekjuvef með fjölmörgum umfrymistæmum (örvum), tilfærslu á kjarna apical, og (II) í meðallagi og versnandi sár meðhvarf pípulaga þekju. Græni örhausinn lengst til hægri (II) gefur til kynna svæði þar sem frumutap er þar sem pípulaga grunnhimnan er hulin þunnu lagi af umfrymi. Örvar gefa til kynna aðskildar frumur í pípulaga lumina og stjörnumerkið merkir svæði með uppsöfnuðum drepi og tapi á þekjufrumuburstamörkum. Neðri spjöld sýna glomerular hluta úr {{0}}} vikugömlum WT og Clr-f−/− músum (n=4) litaðar með PAS. Clr-f-/- mýs sýna mismikið umfang glomerular mesangiolysis með (I) frumfasa og (II) sundrun og áberandi truflun á gaukla. Örvar gefa til kynna háræðabólga (ör). Stjarna gefur til kynna drepandi frumurusl og blóðvökva í rýmum Bowmans. (B) Meinafræðiskorun á gauklaskemmdum sem komu fram. Stigatölur eru byggðar á stigi hvarfs glomerulus: 0:<10%, 1: 10–30%, 2: 30–60%, 3:>60%. Bólusvæðið táknar hlutfall heildartalninga (****P Minna en eða jafnt og 0.0001). (C) Sendingarrafeindasmámyndir sýna alvarlega eyðingu fræfrumna og eyðingu á fótfrumum í Clr-f-/- músum (rauðar örvar). Innfellingarkassarnir á efri spjaldunum eru sýndir á neðri spjaldunum. Gulir örvar gefa til kynna GBM þykknun, grænir örvar benda til rafeindaþéttra útfellinga undir endothelial, og blár örvaoddur gefur til kynna kristolysu í hvatbera. Kvarðastikur fyrir efri spjaldið tákna 2 μm. Kvarðastikurnar á neðri vinstra og miðju spjaldinu tákna 800 nm og neðri hægri mælistikuna táknar 500 nm. (D) Mælingar á þykkt GBM úr rafeindasmásjármyndum af WT (n=2) ​​músum og Clr-f−/− (n=3) músum. Hver punktur táknar sérstaka GBM mælingu. (****P Minna en eða jafnt og 0,0001). (E) IF litun á WT og Clr-f−/− gauklahlutum fyrir IgA, IgM, IgG útfellingu og (F) C3 komplementprótein í 12-vikukömlum músarnýrum. Kvarðastikur tákna 40 μm. (G) Prótein- og kreatínínmælingar í þvagi og sermisýnum og útskilnaður natríums (FENa) í þvagi frá 12-vikukömlum karlkyns Clr-f-/- og WT músum. (H) Blóðþrýstingsmæling í Clr-f-/- músum samanborið við WT gotfélaga þeirra á tilgreindum aldri. Meðaltal og staðalfrávik eru sýnd.

Clr-f genið liggur í samræmi við Klrb1g genið, sem kóðar NKR-P1G, viðtakann sem greint er frá fyrir Clr-f. Til að meta hvort brottfallið í Clr-f breyti tjáningu Nkrp1g, mynduðum við NKR-P1G-merktan þarma- og milta vefi WT og Clr-f-/− músa með IF (mynd S2B, C) og mældum NKR-P1G á CD3+ og NKp46+ miltisfrumum frá WT og Clr-f−/− músum (Mynd S2D, E). NKR-P1G-litun á vefjum í þörmum og milta og einangruð miltisfrumur Clr-f-/- músa voru óaðgreinanlegar frá WT-músum, sem staðfestir að Clr-f genaeyðingin breytir ekki NKR-P1G próteintjáningu.

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Stærsti útflytjandi cistanche í Kína:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Sími:+86 15292862950

Verslaðu fyrir frekari upplýsingar:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

FÁÐU NÁTTÚRLEGT LÍFFRÆNT CISTANCHE ÚTDRÆT MEÐ 25% ECHINACOSIDE OG 9% ACTEOSIDE VEGNA NÝRASÝKINGAR