Cistanche: Echinacoside-framkölluð nituroxíðframleiðsla í æðaþelsfrumum: Hlutverk andrógenviðtaka og PI3K-Akt leiðar

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

LI GU, dANHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU og XIN LIU

Kynning

CistancheHoffmg. Et Link er ævarandi sníkjujurt af ættkvísl Orobanchaceae fjölskyldunnar. HerbaCistanche, stofninn afCistanche deserticolaY. c. MA ogCistanche tubulosa(Schenk) R. Þyngd, hafa verið notuð sem styrkjandi efni til að meðhöndla nýrnaskort, getuleysi, sjúklega hvítblæði og hægðatregðu á elliárum (1), sem getur stafað af andrógenlíkum eða kynhormónastjórnunaráhrifum (2).Echinacoside(EcH; c35H46O20;

mólþungi, 786,73; mynd 1), er eitt af fenýletanóíð glýkósíðum (PhGs) sem eru einangruð úr stilkum HerbaCistanche, og sýnir marga líffræðilega eiginleika, þar á meðal andoxunarefni, öldrun, bólgueyðandi, lifrarverndandi og taugaverndandi áhrif (3). Nútíma lyfjafræðirannsóknir hafa sýnt fram á að ýmis innihaldsefni HerbaCistanche, þar á meðal EcH, akteósíð, kankanósa, kankanósíð F og cistanosíð F, sýna æðaslakandi virkni (4).

Æðaþekjan er mikilvægur stjórnandi æðakerfisins og nituroxíð (NO) er mikilvægur slakandi þáttur sem losnar af æðaþelsfrumum. Með því að dreifa sér inn í sléttar vöðvafrumur virkjar NO gúanýlatsýklasa, eykur magn hringlaga gúanósínmónófosfats (cGMP) og virkjar síðan cGMP-háða próteinkínasa (PKGs) til að stuðla að slökun í sléttum vöðvum (5). Áður var sýnt fram á að EcH við 350-400 µM virkar beint á slétta vöðva í æðum og hamlar útbreiðslu súrefnisskorts í sléttum vöðvafrumum í lungnaslagæð rotta (6), en 30-300 µM EcH olli bráðri æðaslökun í æðaþels- ósnortnir hringir á styrkleikaháðan hátt og aukin cGMP framleiðslu í sléttum vöðvum corpus cavernosum í ósæðarhringjum sem dragast saman af fenýlefríni (7). Með því að opna NO-cGMP-PKG-BKca göngin í sléttum vöðvafrumum, bældu 100 eða 300 µM EcH samdrætti af völdum noradrenalíns í lungnaslagæðum rotta, sérstaklega í æðaþelsbólga hringjum (8). Innþelsfrumur eru lykilstjórnendur á starfsemi hjarta- og æðakerfisins og í nokkrum tilfellum hefur komið í ljós að slökun sem er háð æðaþels var vegna yfirfæranlegs efnis, eins og NO, sem losnaði úr æðaþeli (9). Hins vegar, andstreymis sameindakerfi EcH-framkallaðrar NO framleiðslu í æðaþelsfrumum krefst frekari rannsóknar.

Í æðaþelinu er NO myndun fyrst og fremst miðlað af NO synthasa (eNOS) í æðaþelsi. Nokkrir hópar hafa sýnt fram á að fosfatidýlinosítól 3-kínasa (PI3K) ferillinn virkjar serínþreónín próteinkínasa B (Akt), sem veldur beinni eNOS fosfórun við serín 1177 (Ser1177) (10). Andrógenviðtakinn (AR) er meðlimur í kjarnaviðtakaundirfjölskyldunni s3, sem breytir genatjáningu á kanónískan hátt. AR staðsetning til caveolae í frumuhimnunni tekur þátt í

ekki erfðafræðileg stjórnun á starfsemi æðaþelsfrumna eða genatjáningu með því að kveikja á c-Src/PI3K/Akt fossinum, sem að lokum leiðir til eNOS fosfórunar og NO framleiðslu (11). Í ósæðaræðaþelsfrumum manna hefur verið greint frá því að testósterón virkjar PI3K/Akt boð og örvar hratt NO framleiðslu vegna beins samspils AR og p85 undireiningarinnar PI3K á hjarta- og æðakerfið (12). Greint var frá því að EcH eykur einkenni sem tengjast hormónaskorti og hafi andrógenlík áhrif vegna samkeppnisbindingar við AR í stað testósteróns (2). Þess vegna gerði þessi rannsókn sú tilgáta að PI3K/Akt leiðin gæti tekið þátt í NO framleiðslu með AR-háðri eNOS fosfórun framkallað af EcH. Markmið þessarar rannsóknar var að meta eftirfarandi áhrif EcH: i) Framleiðslu á NO framleiðslu og eNOS fosfórun; ii) þátttöku AR í eNOS fosfórun; og iii) virkjun PI3K/Akt ferilsins í æðaþelsfrumum úr mönnum (HUVEcs), sem er vel þekkt tilraunalíkan til að rannsaka stjórnun á starfsemi æðaþelsfrumna og æðamyndun (13).

Efni og aðferðir

Efni og hvarfefni.EcH (hreinleiki, 92,5 prósent) var fengin frá National Reference Standards í National Institute for the Food and lyfjaeftirlit. Mótefni gegn p-Akt (Ser473; cat. no. ab8805), Akt (cat. no. ab81283), p-eNOS (Ser1177; cat. no. ab184154) og eNOS (cat. no. ab76198) voru keypt frá Abcam. Hemlar nílútamíðs og Icl 182780 voru fengnir frá Sigma-Aldrich; Merck KGaA. L-NAME var keypt frá Adamas-Beta, Ltd., og wortmannin var keypt frá Pribolab.

Cell menningu andlyf meðferð.HUVEcs voru fengnir frá Sciencell Research Laboratories Inc. og ræktaðir í æðaþelsfrumumiðli (EcM; Sciencell Research Laboratories) með 5 prósent (v/v) fóstursermi (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) og 1 prósent æðaþelsfrumu vaxtaruppbót (ECGS) við 37˚C (5 prósent CO2 og 95 prósent rakastig) (14). Þegar samruna var náð voru frumurnar meltaðar með trypsíni og húðaðar í EcM með 1 prósent FBS og 1 prósent EcGS. Fyrir allar tilraunir voru HUVEcs húðaðar í styrkleikanum 1x104/ml og ræktaðar þar til þeir komu saman. Fyrir meðferð með EcH eða öðrum örvandi efnum voru frumurnar ræktaðar í fenólrautt EcM án FBS og EcGS í 6 klst.

vaxtarstöðvun. Í hindrunartilraunum voru HUVEcs forræktuð með ýmsum mótlyfjum eða hemlum, þar á meðal 10 µM nílútamíði, 10 µM IcI 182780, 0,5 mM L-NAME eða 5 µM wortmannin, fyrir 30 µM wortmannin. með eða án ECH, við 37˚C. Í öllum hópum, þar með talið viðmiðunarhópnum, var dMSO notað sem leysir í jöfnum styrkleika 0,001 prósent.

Mæling á innanfrumu ENGIN framleiðsla.

Fylgst var með hlutfallslegum breytingum á frumusýru NO styrk í HUVEcs með því að nota flúrljómandi NO rannsaka DAF-FM (Cayman Chemical Company), eins og áður hefur verið greint frá (12). Í stuttu máli voru frumurnar hlaðnar með 5 µM DAF-FM díasetati í 20 mínútur við 37˚C í svörtum örtítraplötu og skolaðar nokkrum sinnum með PBS (pH 7,4). Flúrljómunin var ákvörðuð við örvunar- og útblástursbylgjulengdir 495 og 515 nm, í sömu röð, með því að nota flúrljómandi örplötulesara (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) og þéttri öfugum smásjá (Nikon eclipse Ts2R; Nikon corporation).

Vestur blot greiningu.Eins og áður hefur verið greint frá (15), voru samrennandi einlög frumna þvegin tvisvar í ísköldu PBS og leyst með RIPA jafnalausn (P0013d; Beyotime Institute of Biotechnology). Próteinstyrkur í flotinu var mældur með því að nota bicinchoninic acid prófunaraðferðina (16). Í kjölfarið var 30 µg prótein hlaðið á hverja braut, aðskilið með 10 prósenta pólýakrýlamíð hlaupi og flutt á pólývínyliden difluoride himnur. Himnurnar voru stíflaðar með 5 prósenta undanrennu í 1 klst við 25˚C. Eftir ræktun með einstofna mótefnum gegn Akt (1:1,000 þynningu), p-Akt (1:500 þynning), eNOS (1:2,000 þynning) eða p-eNOS (1 :1,000 þynningu) við 4˚C yfir nótt, himnurnar voru þvegnar með TBST (inniheldur 0,1 prósent Tween-20) 4 sinnum í ~15 mínútur í hverjum þvotti við 25˚C. Í kjölfarið voru himnurnar ræktaðar með piparrótarperoxídasa-tengdum aukamótefnum (1:5,000 þynning; mótefni gegn músum, kat.nr. A0216, eða and-kanínumótefni, kat.nr. A0208, Beyotime Institute líftækni) í 1 klst. við 25˚C, og greint með auknu efnaljómunarsetti (cat. nr. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Bandstyrkur var magnmældur með Image J hlaupgreiningarhugbúnaði, útgáfu 1.8.0_112 (National Institute of Health).

Lítil trufla (si) RNA undirbúningur og transfektion.Langu tvíþátta RNA-efnin voru mynduð af mark-mRNA AR og estrógenviðtaka (ER) með röðum sem sýndar eru í töflu I. Skilyrðin fyrir niðurfellingu siRNA fólu í sér transsýkingu HUVECs við 70 prósent samflæði sem haldið var í ósýklalyfjum. ræktunarefni í 60 mm kollagenhúðuðum ræktunardiskum. Transfection á 5 nM AR-siRNA eða 10 nM ER -siRNA með Lipofectamine 3000 hvarfefni (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) var framkvæmd sérstaklega, í samræmi við samskiptareglur framleiðanda. Transfection skilvirkni var metin með öfugri umritun magn-PcR greiningu (RT-qPcR), eins og áður hefur verið greint (17). Hitahjólaskilyrðin voru sem hér segir: 10 mín við 95˚C; 40 lotur af 95˚C í 5 sekúndur og 60˚C í 1 mín., og bræðsluferill við 95˚C í 15 sek., 60˚C í 1 mín. og 95˚C í 15 sek.; þrjár óháðar líffræðilegar endurtekningar voru gerðar fyrir hvert sýni. Síðari tilraunir voru gerðar 48 klst. eftir transfection. Grunnpör voru hönnuð með Primer Premier v5.0 hugbúnaði (PREMIER Biosoft) með eftirfarandi röð: AR áfram, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' og afturábak, 5'-GAcTTGTAGAGAGAcAGGGTAGA-3'; ER áfram, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' og afturábak, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; og GAPdH áfram, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' og afturábak, 5'-GGGTGGAATcATATTGGAAcATGT-3'.

Tölfræði greiningu.Öll gögn eru sett fram sem meðaltal ± staðalfrávik. Tölfræðilegur samanburður milli hópa var gerður með því að nota Kruskal-Wallis prófið eða tvíhliða ANOVA með Tukey's post hoc prófi fyrir margfeldis samanburð. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Niðurstöður

ECH framkallar NEI framleiðslu og eNOSfosfórun.Eins og sýnt er á mynd. 2A og B, jók 1 µM ECH marktækt innanfrumu NO framleiðslu í HUVEcs samanborið við neikvæðu viðmiðunarfrumurnar, á meðan örvandi áhrif EcH voru dregin niður í viðmiðunarstigið með formeðferð með L-NAME. Til að ná sem bestum styrk var eNOS fosfórun prófuð 60 mínútum eftir meðferð með EcH í styrk

af {{0}}, 0.01, 0.1, 1 og 10 µM. Niðurstöðurnar leiddu í ljós að EcH í styrkleika 0,01-10 µM gæti framkallað marktækt eNOS fosfórun við Ser 1177 á styrkleikaháðan hátt, þar sem hámarks eNOS fosfórun sést við 10 µM EcH örvun (mynd 2c og d). Ennfremur var eNOS fosfórun við Ser1177 skoðuð með Western blot greiningu 0, 5, 15, 30, 60 og 120 mín eftir ræktun með 1 µM EcH. Það kom í ljós að eNOS fosfórun var hraðvirkt af EcH eftir 5 mínútur og hélt áfram að aukast þar til 30 mínútur voru af ræktun (mynd 2E og F). Í kjölfarið, þrátt fyrir EcH meðferð, hélst hlutfallsleg stærð eNOS fosfórunar stöðug frá 30 mínútum og áfram; því hafði EcH ekki áhrif á heildar eNOS tjáningu (mynd 2c og E).

AR miðlar ECH-framkallað NEI framleiðslu og eNOStruflandi áhrif AR-siRNA-1 og ER -siRNA-2 voru farsælust við að hindra tjáningu AR og ER í HUVEcs í þessari rannsókn (mynd 3). Í kjölfarið var mótlyfi fyrir AR hömlun-á-virkni greiningu og siRNA fyrir AR tap-á-virkni greiningu notað til að meta þátttöku AR í EcH-völdum eNOS virkjun og NO framleiðslu. Eins og sýnt er á mynd 4A, jók 1 µM ECH marktækt NO framleiðslu í HUVEcs (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH virkjar the PI3K/Akt braut.Í þessari rannsókn var Akt fosfórun við Ser473 prófuð 60 mínútum eftir EcH ræktun við styrkleika 0, 0.01, 0.1 1 og 10 µM. Niðurstöðurnar gáfu til kynna að EcH (0.01-10 µM) gæti framkallað Akt fosfórun verulega. Hlutfallslegt tjáningarstig p-Akt náði hámarki við 1 og 10 µM af EcH meðferð (mynd 5A og B). Ennfremur var Akt fosfórun skoðuð með Western blot greiningu 0, 5, 15, 30, 60 og 120 mín eftir að 1 µM EcH var bætt við HUVEc ræktun. Eins og sýnt er á mynd. 5c og d, jók EcH hratt Akt fosfórun eftir 5 mín ræktun og hámarks próteinmagn p-Akt sást eftir 60 mín. Aftur á móti hafði EcH ekki áhrif á heildar Akt tjáningu (mynd 5A og c). Þar að auki, til að kanna hugsanleg áhrif PI3K ferils á eNOS fosfórun, voru HUVEcs formeðhöndluð með PI3K hemlinum wortmannin áður en EcH var notað. Wortmannin reyndist minnka EcH-framkallaða NO framleiðslu niður í grunngildi (mynd 5E). Svipað fyrirbæri kom fram með því að nota flúrljómunarsmásjárskoðun þegar EcH-framkallað DAF-FM flúrljómun var skoðuð (mynd 5F). Ennfremur gæti wortmannin haft getu til að afnema hraða eNOS fosfórun í HUVEcs (mynd 5G og H). Fyrrnefndar niðurstöður benda til þess að EcH geti virkjað eNOS fosfórun og NO framleiðslu í gegnum PI3K/Akt leiðina.

Umræða

EcH er náttúrulegt efnasamband einangrað úr HerbaCistanche, með ýmsa lyfjafræðilega eiginleika. Áður var sýnt fram á að EcH hafði æðaþelsháð slökunaráhrif með því að opna NO-cGMP-PKG-BKca rásir í sléttum vöðvafrumum í æðum (7,8). Núverandi niðurstöður gefa vísbendingar um að ECH hafi beitt AR-háðri virkjun eNOS til að örva NO framleiðslu með þátttöku PI3K/Akt boðleiðarinnar í æðaþelsfrumum.

Sem innsta lag æðaveggsins getur æðaþelið fljótt skynjað og brugðist við breytingum á blóðflæði, sem aftur leiðir til boðsendingar til undirliggjandi sléttra vöðvafrumna til að stjórna æðaspennu (18). Víða hefur verið greint frá því að til séu mörg æðavíkkandi efnasambönd sem eru afleidd af æðaþels, með frumgerð efnisinsvera NO, myndað úr endothelial ísóformi eNOS, sem leiðir til fosfórunar (19). Við venjulegar aðstæður helst eNOS óvirkt þegar það er bundið við caveolin og er virkjað með eftirfarandi röð atburða í æðaþelsifrumur: i) eNOS losar sig við caveolin-1 og tengist ca2 plús /caM; ii) hitasjokkprótein (HSP)90 stuðlar að eNOSdimerization og stuðlar að sterískri myndun til að ráða Akt; og iii) calcineurin affosfórýlerar Thr495 til að styrkja virkjunarástandið (20). Í þessari rannsókn jókst NO framleiðsla marktækt í HUVEC sem voru meðhöndluð með 1 µM ECH. Þetta fyrirbæri var svipað og fyrri niðurstöður, þar sem EcH jók NO losun og örvaði myndun cGMP í brjósthols ósæðarhringjum hjá rottum (7). Ennfremur virðast tveir fosfórunarstaðir, Ser1177 og Thr495, vera sérstaklega mikilvægir til að stjórna eNOS virkni (20), og þessi rannsókn leiddi í ljós að EcH framkallaði bráða eNOS fosfórun við Ser1177 á styrkleikaháðan hátt. Þar að auki ákvarða áreiti sem tengjast áhrifum á eNOS próteinmagn aðallega stöðugleika eNOS mRNA og ef áreitinu er viðhaldið í lengri tíma á sér stað umritun eNOS mRNA í gegnum mítógenvirkjaðan próteinkínasa og kjarnaþátt κB (20). Samanlagt benda þessar athuganir til þess að virkjun eNOS við Ser1177 sé ábyrg fyrir NO nýmyndun framkallað af EcH.

Ennfremur hefur vaxandi fjöldi rannsókna sýnt fram á að AR er tjáð í æðaþelsfrumum í fjölda mannavefja, sem bendir til hugsanlegs hlutverks andrógena og hliðstæðna þeirra, sem starfa með AR-miðluðum ferlum, í mótun æðaþels manna. frumujafnvægi (21). Í óhefðbundinni PI3K/Akt ferli getur AR virkjað PI3K með því að hafa bein samskipti við PI3K reglubundið undireiningu p85 (22). Þessi rannsókn sýndi fram á að AR mótlyf eða AR siRNA dró úr NO framleiðslu og eNOS fosfórun framkallað af EcH í HUVEcs. Áður hefur verið greint frá því að estrógen örva eNOS fosfórun og örva NO framleiðslu með klassískri ER virkjun í æðaþelsfrumum (23), og gjöf ECH eykur marktækt tjáningu ER í legi (24). Hins vegar, í þessari rannsókn, voru áhrif AR meira áberandi samanborið við áhrif ER á EcH-framkallaða eNOS virkjun og NO framleiðslu. Að auki kom fram að EcH olli bráðri NO framleiðslu innan nokkurra mínútna með AR-tengt eNOS virkjun í HUVEcs, sem er í samræmi við ekki erfðafræðilegt eðli svarsins í æðaþelsfrumum. AR tengist vinnupallapróteinum, þar á meðal HSP90, HSP70 og kínasa Src, í umfrymi, og það er hægt að flytja það í himnuna frá AR flókinu innan 5 mínútna frá testósterónmeðferð (23). Byggt á „markveiði“ stefnunni var HSP90 auðkennt sem PhGs-tengd markmið, sem benti til þess að EcH gæti auðveldað aðskilnað AR frá vinnupallapróteinum (25). Önnur rannsókn benti til þess að í undirstúku gæti EcH sameinast AR vasanum við amínósýrurnar Met-894 og Val-713 og hindrað flutning AR umfrymis til kjarnans (26). Hins vegar, undirliggjandi vélbúnaður þar sem EcH miðlar umfrymi AR flutning til himnunnar krefst frekari rannsókna. Þess vegna er þörf á frekari rannsóknum til að skýra hvernig EcH nær AR-háðri eNOS virkjun og hvernig það gæti tengst bindingu við HSP90 í æðaþelsfrumum.

PI3K/Akt ferillinn er einn mikilvægasti boðunarferillinn, virkjun þeirra er framkölluð með því að framleiða fosfatidýlínósítól-3,4,5-trísfosfat til að binda N-enda pleckstrin homology lénið í Ser/ Thr kínasi Akt. Þetta auðveldar Akt nýliðun í plasmahimnuna (27). PI3K/Akt ferillinn getur gegnt mikilvægu hlutverki við að stjórna NO-háðri slökun sem EcH framkallar.

Þessi rannsókn leiddi í ljós að EcH-framkallað NO framleiðsla minnkaði verulega þegar frumurnar voru ræktaðar með PI3K hemlinum wortmannin. Fyrri skýrsla sýndi fram á að 15 mg/kg EcH virkjaði PI3K/Akt boðleiðina í 5-flúorúrasíl-bældum beinmergsfrumum (28). Í þessari rannsókn lækkuðu PI3K hemlar marktækt EcH-framkallaða eNOS fosfórun við Ser1177. Þar að auki var Akt virkni aðallega stjórnað af andstreymis reglu- reglulegum brautum, sérstaklega PI3K háð fosfórun á Ser473 (20). Í þessari rannsókn framkallaði EcH Akt fosfórun við Ser473 á skammtaháðan hátt; að sama skapi sýndi fyrri rannsókn að 5, 10 eða 20 µM EcH hafði hjartaverndandi áhrif gegn anoxíu/endurflæðismeðferð á skammtaháðan hátt með því að mögulega hækka p-Akt og SLc8A3 (29). Umritunarstjórnun Akt gensins er enn að mestu óþekkt (30); Þess vegna beindi þessi rannsókn að stjórnunaráhrifum EcH eftir umritun á Akt. Að teknu tilliti til fyrrgreindra niðurstaðna var ályktað að notkun EcH á HUVEcs gæti leitt til virkjunar á PI3K/Akt ferlinu, sem fosfórar eNOS og eykur í kjölfarið NO framleiðslu.

Að lokum er EcH náttúruleg vara sem er aðallega einangruð frá HerbaCistanche.Hugsanleg vélbúnaður sem liggur að baki EcH-framkallaðri NO framleiðslu í æðaþelsfrumum getur falið í sér eftirfarandi (mynd 6): i) EcH virkar sem starfhæfur bindill AR sem er staðbundinn við caveolae í frumuhimnunni; ii) PI3K binst vatnsfælna svæði Akt við Ser473 og auðveldar nýliðun Akt í frumuhimnuna; iii) nýliðun PI3K/Akt fallanna kallar á AR-háða eNOS fosfórun; og iv) myndun NO er ​​miðlað af eNOS í æðaþelsfrumum. Athugunin um að EcH framkalli NO framleiðslu með AR-háðri fosfórýleringu eNOS með þátttöku PI3K/Akt ferlisins getur stuðlað að frekari skilningi á æðaslakandi áhrifum EcH. Ennfremur getur EcH sem miðar að NO-ferlum sem eru unnin af æðaþels verið vegna áhrifa sem ekki eru erfðafræðilegar. Þess vegna gæti þessi rannsókn hjálpað til við að skýra aðferðir sem EcH beitir lyfjafræðilegum áhrifum sínum til að koma í veg fyrir hjarta- og æðasjúkdóma.

Viðurkenningar

Á ekki við.

Fjármögnun

Þessi rannsókn var studd af National Natural Science Foundation í Kína (styrkur nr. 81503333).

Framboð af gögn og efni

Gagnasettin sem myndast og greind í þessari rannsókn eru fáanleg hjá samsvarandi höfundi ef sanngjarnt er óskað.

Höfundar Framlög

LG og XL hugsuðu og hönnuðu tilraunirnar. dL og YZ gerðu tilraunirnar. WZ og JG greindu gögnin. LG samdi handritið. XL fór yfir og ritstýrði handritinu. Allir höfundar lásu og samþykktu lokahandritið.

1202 GUet al: EKHINACOSÍD VEITIR NITRIC OXIÐ FRAMLEIÐSLU MEÐ AR-DEPENDENT PI3K/AKT PATHWAY

Siðfræði samþykki og samþykki til taka þátt

Á ekki við.

Sjúklingur samþykki fyrir útgáfu

Á ekki við.

Keppt áhugamál

Höfundar lýsa því yfir að þeir hafi engra hagsmuna að gæta.

Heimildir

1. Kínversk lyfjaskrá þóknun:CistancheHerba. Í: Lyfjaskrá alþýðulýðveldisins Kína 1. haka. Med. Sci. Press, Peking, bls 135, 2015.

2. Jiang Z, Wang J, Li X og Zhang X: Echinacoside ogCistanche tubulosa(Schenk)R. wight bætir bisfenól A af völdum eistum og sæðisskemmdum hjá rottum í gegnum kynkirtlaás stjórnað stera-ensím. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, dong Y, Zhang B og Ma X: Echinacoside, ómetanleg náttúruvara við meðferð á taugasjúkdómum og öðrum kvillum. Sameindir 23: piiE1213, 2018.

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S og Muraoka O: Phenylethanoid oligoglycosides and acylated oligosugars með æðaslakandi virkni fráCistanche tubulosa. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S og Murad F: Nituroxíð virkjar gúanýlatsýklasa og eykur gúanósín 3':5'-hringlaga mónófosfatmagn í ýmsum vefjum. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y og Ge RL: Fæðingareyðandi áhrif echinaco-síðs á sléttar vöðvafrumur í lungnaslagæð rotta undir súrefnisskorti. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ og Tu PF: Echinacoside kallar fram æðaþelsháða slökun í ósæðarhringjum rotta með NO-cGMP ferli. Planta Med 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y og Ge RL: Echinacoside framkallar æðaslökun í lungnaslagæð hjá rottum með því að opna NO-cGMP-PKG- BKca rásir og minnka innanfrumu ca2 plús magn. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015.

9. Maruhashi T, Kihara Y og Higashi Y: Mat á æðavíkkun án æðaþels: Frá aðferðafræði til klínískra sjónarhorna. J Hypertens 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, chen J, Khan FU, chen X, Xu J og afleiða á æðaþelsfrumum í naflastreng manna gegn oxunarálagi af völdum meiðslum: Þátttaka andoxunar og PI3k/Akt/eNOS/NO merkjaleiða. Biomed Pharmacother 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y og Okabe T: Src kínasi miðlar andrógenviðtakaháðri óerfðafræðilegri virkjun merkjafalls sem leiðir til æðaþels köfnunarefnisoxíðsyntasa . Biochem Bioph Res commun 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y og Okabe T: Andrógenviðtakaháð virkjun æðaþels köfnunarefnisoxíðsyntasa í æðaþelsfrumum: Hlutverk fosfatidýlínósítóls {{3} }kinase/Akt pathway.Endocrinology 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F og Reno F: NO-háð fjölgun og flæði af völdum d-vítamíns í HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. He Y, Luan Z, Fu X og Xu X: Oftjáning á aftengingarpróteini 2 hindrar háa glúkósa-framkallaða frumudauða æðaþelsfrumna í naflastreng manna. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z og Bing S: Icariin seinkar öldrun æðaþelsfrumu af völdum homocysteins sem felur í sér virkjun á PI3K/AKT-eNOS merkjaleiðinni. Pharm Biol 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ og Klenk dc: Mæling á próteini með því að nota bicinchoninic sýru. Anal Biochem 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H og Liu X: Tríterpenoid lífmyndun og umritunarviðbrögð sem köfnunarefnisoxíð framkallar í gerjun í kafiGanoderma lucidum. Process Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellinsworth dc, Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY og Gutterman dd: Ofskautun æðaþels og kransæðavíkkun: fjölbreytt og samþætt hlutverk epoxý-ískósatríenósýra, vetnisperoxíðs og bilamóta. Örhringrás 23: 15-32, 2016.

19. Freed JK og Gutterman dd: samskipti eru lykilatriði: Mechanisms of intercellular signaling in vasodilation. J cardiovasc Pharm 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Fromy B og debret R: Endothelium microenvironment sensing sem leiðir til nituroxíðmiðlaðrar æðavíkkunar: Endurskoðun á tauga- og lífmekanískum merkjum. Nituroxíð 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS og Smith GJ: Andrógenviðtakar í æðaþelsfrumum manna. J Endocrinol 224: 131-137, 2015.

22. deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H og Gui YT: Verkun andrógena sem ekki er erfðaefni er miðlað af hraðri fosfórun og stjórnun andrógenviðtaka mansals. Cell Physiol Biochem 43: 223-236,2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP og Ghedini Pc: Virkjun PI3K/Akt ferils sem miðlað er af estrógenviðtökum skýrir estrón-framkallaða æðavirkjun cGMP merkja. Vascul Pharmacol 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guo c, Zhang c, Yang Z og Li P: Þynningareyðandi virkni echinacoside í rottum sem hafa verið teknar úr eggjastokkum. Phytomedicine 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y og Tu PF: Lyfjafræðileg markmiðsgreining og verkunargreining á fenýletanóíð glýkósíðum fráCistanchesHerba byggt á „target fishing“ stefnu. chin Tradit náttúrulyf 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM og Zhang X: Echinacoside eykur sæðismagn í rottum með því að miða á andrógenviðtaka undirstúku. Sci Rep 8: 3839-3850, 2018.

27. coffer PJ, Jin J og Woodgett JR: Prótein kínasi B (c-Akt): Fjölvirkur miðlari fosfatidýlinosítóls 3-kínasavirkjunar. Biochem J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y og Qian J: Echinacoside bætir blóðmyndandi virkni í 5-FU-framkölluðum mergbælingarmúsum. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W og Zhou H: Verndaráhrif echinacoside gegn anoxíu/endurflæðisskaða í H9c2 frumum með uppstýrandi p-AKT og SLc8A3. Biomed Pharmacother 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P og Su Y: Mikilvægt hlutverk Akt í hjarta- og æðastarfsemi. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.