Greining á frásoguðum íhlutum í rottuplasma eftir inntöku á hálfgerðu estrógenhlutfalli af Cistanche

Greining á frásoguðum íhlutum í rottuplasma eftir inntöku á hálfgerðu estrógenhlutfalli af Cistanche

Fyrir frekari upplýsingar: Ali.ma@wecistanche.com

Smelltu til að sjá ávinning og aukaverkanir

Ágrip:

Til að greina og bera kennsl á innihaldsefnin í plasma rottu eftir inntöku virka hlutans afcistanche, voru efnisþættirnir í rottuplasma greindir með hágæða vökvaskiljun-rafúðajónun-fjórpóltíma flugmassagreiningar (HPLC-Q-TOF MS)． Uppbygging íhlutanna var útskýrð með því að bera saman varðveislutíma þeirra og MS/MS litróf við viðmiðunarefnasambönd og tilkynnt gögn í bókmenntum. 13 efnasamsetningar eru auðkenndar, þar á meðal 6 frumgerðarhlutar, svo sem Geniposidinsýra, Salidroside,Cistanoside A, Echinacoside, Acteoside, Cistanoside D,7 efnisþættir umbrotsefna, eins og 3,4-díhýdroxýfenýletanólglýkósíð, metýlerandi akteósíð, asetýlering Cistanosíð G,3,4-díhýdroxýfenýletanól, asetýltúbúlósíð B, cistanosíð B glúkúróníðumbrotsefni og metýlering-3,4 Díhýdroxýfenýletanól. Niðurstöðurnar geta veitt nauðsynleg gögn til að lýsa lækningalegan grundvöll hálfgerðrar estrógenstjórnunarvirknicistanche．

Leitarorð:

cistanche; lyf sem inniheldur sermi; hálfgerð estrógen; hágæða vökvaskiljun-rafúðunarjónun-fjórpól-tími flugs-massagreiningar (HPLC-Q-TOFMS)

Cistanche deserticolaer sníkjudýr í rótum eyðimerkurtrjáa (eins og haloxylon ammodendron, tamarix o.s.frv.). Sem eins konar nærandi og sterk dýrmæt kínversk hefðbundin læknisfræði, hefur það margs konar lyfjafræðileg áhrif eins og nærandi nýru Yang, stjórna ónæmi, seinka öldrun, geislun gegn geislun og vernda miðtaugakerfið. Það er þekkt sem "eyðimerkur ginseng". Sem stendur eru flestar rannsóknir á virkni c. deserticola heima og erlendis takmarkast við mat á lyfjafræðilegri virkni, á meðan grundvöllur lyfjafræðilegra efna þess hefur ekki verið skýrður, sem hindrar verulega skynsamlega þróun og notkunCistanche deserticola.

Íhlutir hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði eru flóknir og fjölbreyttir og aðeins eftir rétta gjöf með frásog og efnaskipti í líkamanum geta efnisþættirnir loksins farið í blóðið til að vera undirstaða lyfhrifa í hefðbundinni kínverskri læknisfræði. Þessi virku innihaldsefni geta verið frumgerð eða umbrotsefni hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði, eða þau geta verið nýju innihaldsefnin sem myndast við gagnkvæm viðbrögð ýmissa efnisþátta í hefðbundinni kínverskri læknisfræði, eða þau geta verið innræn lífeðlisfræðileg virk efni framleidd með beinni verkun lyfja á líkamanum. Þess vegna geta þessir blóðhlutar táknað grunn lyfhrifaefna hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði og samsettra lyfja. Greining á innihaldsefnum og umbrotsefnum sem geta borist í blóð eftir inntöku og leit að samspilsreglum efnisþátta getur skapað ákveðinn grunn fyrir grunnrannsóknir á lyfhrifaefnum.

Mýs legi þyngdaraukningu aðferð og MTT litamælingar voru notuð til að skima estrógen-líka virku hluta og skammta af cistanche deserticola. Bráðabirgðaniðurstöður tilrauna sýndu að legstuðull óþroskaðra músa jókst marktækt með gjöf etanóls (95 prósent) útdráttar af cistanche deserticola í maga við 30 g/kg á dag og sermi sem innihélt lyf stuðlaði að fjölgun af McF-7 frumum marktækt (P < 0,="" 01),="" sem="" var="" virki="" hluti="" estrógenlíkra="" áhrifa="" cistanche="">

Í þessari rannsókn var afkastamikil vökvaskiljun-fjórpól tíma-flug massagreining (HPLC-Q-TOF MS) notuð til að greina og bera kennsl á blóðhluta, frumgerðarhluta og umbrotsefni virkra hluta cistanche eftir gjöf cistanche með estrógeni, og til að geta sér til um efnaskiptaferilinn, til að leggja grunn að grunnrannsóknum á lyfhrifum cistanche með estrógeni.

1 Tilraunahluti

1.1 Hljóðfæri og hvarfefni

Waters-600 vökvaskiljun: Waters Co., LTD., búin fjögurra þátta halladælu, sjálfvirkri sýnatökutæki, lofttæmandi afgasunarvél, súluhitaboxi, DAD skynjara, Empower efnavinnustöð;

Agilent-1290 6530 röð Q-TOF LC-MS massarófsmælir: American Agilent fyrirtækisvörur;

Xw-80a hvirfilblöndunartæki: Shanghai Yugong Machinery Co., LTD.

Dk-80 Rafmagns hitastillt vatnsbað: Shanghai Yiheng Technology Co., LTD.

Alc-110. 4 Greiningarjafnvægi: Shanghai Renhe Scientific Instrument Co., LTD.

H66MC ultrasonic oscillator: Ohaus Technology Co., LTD.

Cistanche deserticola: keypt af San Ke Shu lækningajurtamarkaði, auðkennd sem Cistanche deserticola af prófessor Zhang Delian frá Harbin Commercial University.;

Mullein (lotu nr. 111530-200505), echinoside (lotu nr. 111670-200503), salidroside (lotu nr. 110736-200628): allt útvegað af China National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products ;

Etýlen stilbestrol: Guangzhou Hampden Pharmaceutical Co., LTD. Metanól og asetónítríl: HPLC bekk, vörur frá Shandong Yuwang Reagent Co., LTD. Hin hvarfefnin voru greiningarhrein.

Tilraunavatn: hreint vatn.

Wistar kvenkyns rottur: Lotunúmer SCXK-(JI) 2003 -- 2004, þyngd (220 ± 20) g, veitt af tilraunadýramiðstöð Changchun National Biological Industry Base.

1.2 Tilreiðsla lyfjalausnar í maga

Hráa duftið af cistanche deserticola var dregið út með bakflæðisútdrætti með 95% etanóli og síðan dregið út með 8 sinnum leysi í 150 mínútur, 6 sinnum leysi í 75 mínútur og 6 sinnum leysi í 75 mínútur í röð. Síðan voru útdrættirnir þrír sameinaðir og þéttir undir þrýstingi til að fá útdrættinn, sem var geymdur í kæli til síðari notkunar. Fyrir notkun var eimað vatn notað til að útbúa magalausn með styrkleika 1,5 g/ml.

1.3 Undirbúningur viðmiðunarlausnar

Nákvæmt magn af mullein, salidroside og echinacoside var tekið og leyst upp að fullu í metanóli til að búa til 1 ml blandaða skuggaefnislausn, sem hver innihélt 0,2 mg af viðmiðunarefnunum þremur. Settu viðmiðunarefnislausnina í gegnum 0.45 μm síuhimnu og settu til hliðar.

1.4 Undirbúningur lyfjasermis og óútbúið sermi

Undirbúningur sermi sem inniheldur lyf: Vigtaðu Wistar kvenkyns rottur, gefðu þeim 1 ml /100 g á dag, í sömu röð, gefðu þeim eimað vatn og slímgjöf tvisvar að morgni og kvöldi, í 3 daga í röð, 60 mínútum eftir síðasta skammt, svæfa með 2 ml/kg 10 prósenta klóralhýdrati með inndælingu í kviðarhol. Blóð var tekið úr lifrargátt og skilið í skilvindu við 3 000 r/mín í 10 mínútur eftir fulla storknun. Yfirvatnið var þá sermi sem innihélt lyf.

Undirbúningur auðsermis: rottur voru í maga með jafnt magn af eimuðu vatni á hverjum degi og aðrar undirbúningsaðferðir voru þær sömu og sermi sem innihélt lyf.

mL sermi sem inniheldur lyf var tekið, 5 sinnum magni metanóls var bætt við og hringið í skilvindurörinu í 10 mín. Miðflóttun var framkvæmd við 14 000 r/mín. í 10 mín., og flotið var frásogast og leysirinn þurrkaður. 0,5 ml metanóli var bætt við með örpípettu til að leysa upp leifarnar. Leifin var síuð með 0,22 μm míkrópora himnu og greind með litskiljun.

1.5 Tilraunaskilyrði

Litskiljunarskilyrði: A Waters Symmetry ShieldTM RP18 súla (4,6 mm × 250 mm × 5 μm); Pre dálkur: Nova - PakC18 Vörður - PakTM; Rennslishraði: 0,5 ml/mín; Inndælingarrúmmál: 10 μL; Hreyfanlegur fasi: asetónítríl-0.2 prósent maurasýruvatnslausn; Halliskilyrði: 0-35 mín., 5 prósent -34 prósent asetónítríl, 35-65 mín., 24 prósent -26 prósent asetónítríl; Dálkhitastig: 30 gráður; Uppgötvun bylgjulengd: 254 nm.

Skilyrt jónagjafi massarófsmælinga: Uppspretta rafúðunarjónunar (ESI) í andrúmsloftsþrýstingi; Rennslishraði: {{0}},5 ml/mín; Atómgasþrýstingur: 0.2 MPa; Þurrgasstreymishraði:8. 0 L/mín; Þurrt hitastig: 30 gráður; Háræðaspenna: 3,5 kV; Gasflæðishraði slíður: 12,0 L/mín; Hitastig: 400 gráður. Jákvæð og neikvæð jónaskönnunarstilling er valin og massaskönnunarsviðið er m/z 100 ~ 3 000.

2 Niðurstöður og umræður

2.1 HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS greining á efnafræðilegum innihaldsefnum í sermi estrógenvirkra hluta Cistanche deserticola

Eigindleg greining var gerð á sermisýnum sem innihéldu lyf úr rottum í estrógenvirka hluta Cistanche deserticola með ESI-MS skynjara. Jákvæð jónahamur og neikvæður jónhamur voru notaðir til skönnunar, hvort um sig, og niðurstöðurnar eru sýndar á mynd 1. Með því að bera saman heildarjónaflæðisskýringarmyndir á fyrsta stigs massalitrófsmælingum af skönnunaraðferðunum tveimur á mynd 1, kom í ljós að heildarjónin flæði sem fékkst í neikvæðu jónaham hafði sterka eiginleika og mikið næmi, þannig að neikvæð jónastilling var valin í þessari tilraun.

Í neikvæðri jónaham var esI-MS skynjari notaður til að framkvæma eigindlega greiningu á rottusermi eftir gjöf estrógenvirks hluta Cistanche deserticola. Með samanburðargreiningu á fyrsta stigs skönnun heildarjónaflæðismynd af auðsermi og inngjafarsermi voru alls 13 sameindajónatoppar merktir, eins og sýnt er á mynd 2. Gert var ráð fyrir að toppar 2, 3, 5, 7, 9 og 10 vera frumgerðarhlutir og var gert ráð fyrir að toppar 1, 4, 6, 8, 11, 12 og 13 væru efnaskiptaþættir.

Samkvæmt sameindajónatoppum sem greindust af hverjum litskiljunartopp í neikvæðri jónaham og hlutfallslegan mólþunga sem samsvarandi einkennandi brot gaf upp, voru samtals 13 ms toppar merktir. Efnafræðilegir þættir 13 toppa voru auðkenndir með því að bera saman UV-MS upplýsingar hvers staðlaðs efnis og vísa til innihaldsefnanna sem greint er frá í bókmenntum, sem voru skráðir í töflu 1.

Sex frumgerðarhlutar voru geniposide, salidroside, Cistanche glycoside a, Echinacea glycoside, Mullein glycoside og Cistanche glycoside D;

Sjö efnaskiptaþættir voru 3,4-díhýdroxýfenýletanól glýkósíð, metýlerað Mullein glýkósíð, asetýlerað Cistanche glýkósíð g, 3,4-díhýdroxý fenýl etanól, asetýltúbúlósíð B, Cistanche glýkósíð B glúkúrónsýru umbrotsefni og metýlerað{{ 4}},4-díhýdroxýfenýletanól. Meðal umbrotsefnanna sjö er talið að toppur 1 (3,4-díhýdroxýfenýletanól), toppur 8 (3,4-díhýdroxýfenýletanól) og toppur 13 (metýlerað 3,4-díhýdroxýfenýletanól glýkósíð) séu vatnsrofsbrot fenýletanólglýkósíða í Cistanche deserticola; Peak 4 (metýlerað Mullein glýkósíð) er umbrotsefni Mullein glýkósíðs; Peak 6 (asetýlerað Cistanche glýkósíð g) er umbrotsefni Cistanche glýkósíðs G; Peak 11 (asetýlgúanósín b) er umbrotsefni gúanósíns B; Peak 12 (glúkonsýruumbrotsefni Cistanche glýkósíðs b) er umbrotsefni Cistanche glýkósíðs B.

Útskýring kínverskra stafa:

质谱信息 táknar upplýsingar um massaróf.

相对分子质量 táknar hlutfallslegan mólmassa

化合物推测结果 táknar niðurstöður samsettra vangaveltna

代谢 táknar efnaskiptaþætti

原型 táknar frumgerð íhluta

2.2 Umræða

Í þessari tilraun var hplc-q-tof MS notað til að bera kennsl á 13 helstu litskiljunartoppa í sermi eftir gjöf á estrógenlíkum virka hluta Cistanche deserticola. Þetta geta verið beinvirk efni í Cistanche deserticola in vivo. Á sama tíma endurspeglar það einnig að virkni hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði er afleiðing af samhæfingu, fyllingu eða takmörkunum fjölþátta. Með því að greina 13 bráðabirgðaþætti í blóði var sannað að fenýletanól glýkósíð voru helstu virku þættir Cistanche deserticola. Í eftirfylgnirannsókninni verður samsvarandi litrófsáhrifasamband komið á til að rannsaka fylgni lyfjaáhrifa, til að skýra frekar efnislegan grundvöll lyfjaáhrifa og koma á skammta-, tíma- og áhrifasambandi fjölþátta á mismunandi tíma. punkta í líkamanum, til að sýna efnaskiptaferil og efnaskiptaham Cistanche deserticola.

3 Niðurstöður

Í þessari tilraun var hplc-esi-q-tof MS / MS tækni notuð til að greina blóðhluta estrógensins eins og virkir hlutar Cistanche deserticola, og 13 efnafræðilegir þættir voru auðkenndir, sem hefur mikla þýðingu til að skýra grunn lyfjafræðilegs efnis. af estrógenlíkum virkum þáttum Cistanche deserticola og geta einnig veitt áreiðanlegan grundvöll fyrir frekari rannsóknir og klíníska lyfjagjöf á Cistanche deserticola.