Kínversk læknisfræði Cistanche Efnasamsetning og greining á íhlutum í líkamanum Ⅲ

Kafli 2 Eigindleg rannsókn á efnasamsetningu Cistanche deserticola

Cistanche er þurr hreistur blaða holdugur stilkur afCistanche deserticola YC.Maog Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Það er eitt af frægu nýra-yang nærandi hefðbundnum kínverskum lyfjum. Það hefur það hlutverk aðnærandi nýra-yang, endurnýjun kjarna og blóðs og raka Það hefur hægðalosandi áhrif og er oft notað til að meðhöndla getuleysi, ófrjósemi, eymsli í mitti og hnjám, máttleysi í vöðvum og beinum, þurrki í þörmum og hægðatregðu o.s.frv. Það hefur lyfjafræðileg áhrif eins og heilabilun, andstæðingur-Parkinson-sjúkdómi, vernd gegn blóðþurrð í heila og bætt náms- og minnisgetu. Til þess að skýra efnislegan grundvöll fyrirvirkni Cistanche deserticola, þessi kafli notar HPLC og LC-IT-TOF-MS til að lýsa ítarlegaefnahlutir Cistanche. Byggt á kerfisbundinni samantekt á sprungureglum ýmissa tegunda efnaþátta eru eiginleikar Cistanche deserticola kerfisbundið greindir. Efnasamsetning, til að veita rík gögn frá áreiðanlegum heimildum fyrirítarlegri skýringuaf lækningaeiginleikumCistanche deserticolain vivo.

HVAÐ TEKIÐ LANGAN tíma fyrir CISTANCHE AÐ VIRKA?

Kafli 1 Tilraunaefni

1.Hljóðfæri

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS vökvamassarófsmælir (útbúinn með 2 LC-20ADXR dælum, SIL-20AC sjálfvirkur sýnatökutæki, CTO-20AC súluofn, SPD-M20A UV skynjari, DGU-20A3R afmengunargasvél, CBM-20Stýribúnaður, ESI jónagjafi, Shimadzu Company, Japan), Milli-Q ofurhreint vatnshreinsikerfi (Milipore Company, Bandaríkjunum): Mettler ME204 rafræn greiningarvog ( Mettler Toledo Company, Sviss).

2. Hvarfefni

Metanól, asetónítríl og maurasýra af massagreiningu og massagreiningu voru keypt frá Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, Bandaríkjunum). Vatnið var Milli-Q ofurhreint vatn sem framleitt var á rannsóknarstofunni (Millipore, Bedford, MA, Bandaríkjunum). Restin hvarfefnin eru öll af greiningarstigi.

Salidroside, 6-deoxýkatalpól, 8-epi-loganic acid, echinacoside, acteoside, isoside Verbascoside (isoacteoside,) og pinoresinol- -D-glucopyranoside (pinoresinol- -D-glucopyranoside) voru báðar veittar af rannsóknarhópi prófessors Tu Pengfei við Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs við Peking háskólann. Sarcoside F ( cistanosideF) var keypt frá Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanoside A (cistanoside A), 2'-asetýlakteósíð (2'-asetýlakteósíð), 2'-asetýlpólíumósíð (2'-asetýlpólíumósíð), cistanosíð pólýglúkósíð (pólíumósíð) ), cistanoside E (cistanosideE), ísocistanoside E (isocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), ísocistanoside C (isocistanosideC) og cistanoside D (cistanosideD) voru öll keypt frá Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A (tubulosideA) tubuloside B (tubulosideB) var keypt frá Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

2. hluti Tilraunaefni

1. Sýnagerð

1.1 Undirbúningur viðmiðunarefnis

Vigtið nákvæmlega viðeigandi magn af ýmsum viðmiðunarefnum í ofangreindum "kafla 1 tilraunaefni" og undirbúið 10 mM stofnlausnir með DMSO. Pípettaðu nákvæmlega 2 ml af hverri stofnlausn og þynntu hana með 25% asetónítríl til að búa til 2 μM blönduða samanburðarlausn. 1.2 Undirbúningur próflausnar

Vatnsútdrátturinn af Cistanche deserticola var framleiddur af rannsóknarstofu okkar og sýnið er geymt í Modernization Research Center of Traditional Chinese Medicine, School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine. Taktu 20 mg af Cistanche deserticola dufti, bættu við 40 ml af vatni til að leysa upp, hringdu og blandaðu, skildu við 10.000 snúninga á mínútu í 10 mínútur og taktu ofanvatnið. Það er, próflausnin fæst.

3. Massagreiningarskilyrði

Rafúðunarjónagjafi (ESI), skönnunarstillingin er að skanna jákvæðar og neikvæðar jónir samtímis og kveikja sjálfkrafa á fjölþrepa massagreiningu. Massaskönnunarsvið MS'~MS' fyrir jákvæðar jónir er m/z50~800 og fyrir neikvæðar jónir er m/z100~1000. Spenna úðahólfsins er 4,5kV og -3,5kV í sömu röð: flæðihraði úðunargassins (Nz) er 1,5Lmín; þurrkunargasþrýstingurinn er 110MPa; uppgötvunarspennan er 1,55 kV; hitastigið á bogadregnu leysiefnisrörinu (CDL) og hitaeiningunni er bæði 200 gráður. Áreksturshólfsþrýstingurinn er 1,5e-Pa; jónagildraþrýstingurinn er 2,8e-Pa; fjöldi endurtekningar á jákvæðu og neikvæðu fyrsta stiginu er 1 og jónasöfnunartími er 30 ms; fjöldi endurtekningar á jákvæðu og neikvæðu öðru þrepi er 2 og jónasöfnunartími er 20ms. ; Orka af völdum árekstrar (CID) er 50%.

3. kafli Niðurstöður og umræður

Val á dálkum

Til að fá betri skiljunaraðskilnað skimuðum við ítarlega litskiljunarsúlur frá mismunandi framleiðendum og forskriftum, svo sem ACEUltraCore 2.5 SuperC8 litskiljunarsúlu (3.0x150 mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Skotlandi), Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), Waters Acquity UPLC HSS T3 dálkur (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) og Capcell Core ADME dálkur (2,1x150 mm, Shiseido Corporation, 2,7μm, Japan). Með kerfisbundnum samanburði kom í ljós að þegar Capcell Core ADME litskiljunarsúlan (2,1x150mm, 2,7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan) er notuð, er hægt að aðskilja hvert litskiljunarmerki betur (Mynd 3-1).

2. Val á vökvafasaskilyrðum

Þar sem helstu efnafræðilegir þættirCistanche deserticolaeru fenýletanól glýkósíð, lignans, iridoids og önnur efnasambönd, bregst það almennt betur við neikvæðar jónaaðstæður. Til þess að bera kennsl á efnafræðilega efnisþætti á lágu stigi í vatnsþykkni Cistanche deserticola er getgátur um að hugsanlega þurfi að bæta sýrum við farsímafasann til að auka kraftinn. Þess vegna notaði þessi tilraun vatn-metanól, vatn-asetónítríl, 0,1% maurasýru vatn-metanól og 0,1% maurasýru vatn-asetónítríl sem farfasakerfi til rannsóknar. Í ljós kom að 0.1% maurasýruvatn-acetonitríl hafði bestu aðskilnaðaráhrifin, með góða topplögun og mikla toppgetu, þannig að 0,1% maurasýruvatn og asetónítríl voru valin sem farsímafasa. 3. Eigindleg greining á efnaþáttum. Notaðu 19 núverandi viðmiðunarefni til að kanna sundurliðunarreglur massarófsmælinga ýmissa tegunda efnasambanda í Cistanche deserticola. Blanduðu viðmiðunarefnin eru PDA litskiljun við 340 nm á ADME dálknum og BPC töflum í jákvæðum og neikvæðum jónum. Sjá mynd 3-1. Við skoðuðum viðeigandi bókmenntir í gegnum PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP og Wanfang, o.s.frv., og bjuggum til sjálfgerðan gagnagrunn með efnaþáttum Cistanche deserticola. Byggt á samanburði á sundurliðunarreglum massarófsmælinga og varðveislutíma þekktra efnasambanda, greindum við 45 efnasambönd í Cistanche deserticola. efnasambönd, þar á meðal 31 fenýletanól glýkósíð, 9 iridoids, 3 bensýl glýkósíð og 2 lignans, eins og sýnt er í töflu 3-1.

Með því að bera saman trúnaðartíma, litróf MS og litróf MS á viðmiðunarefninu, efnasambönd 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 voru í röð Nákvæmlega auðkennd sem genipín, cistanchein F, cistancheoside E, echinaceaside, chrysantoside, cistanchein A, tuberosin A, lerarchresinol 4-0- -D glúkósíð, mullein glýkósíð, ísókannabínóíð glýkósíð, pínoresin mónómetýl glýkósíð, baskósíð glýkósíð glýkósíða C, isosistancoside C, tuberosin B og cistanche glycoside D.

Þessi tilraun notar HPLC-IT-TOF-MS tækni til að greina flókna efnahluti í vatnsþykkni Cistanche deserticola fljótt og nákvæmlega á skipulegan hátt, sem gefur grunn fyrir alhliða gæðagreiningu á Cistanche deserticola og rannsóknum á lyfjafræðilegum efnum in vivo.

Mynd 3-1 Blandað viðmiðunarefnisskiljun Efst: BPC-töflu í jákvæðri jónaham: Neðst: BPC-töflu í neikvæðri jónastillingu

Mynd 3-1 Blandað viðmiðunarefnisskiljun Efst: BPC-töflu í jákvæðri jónaham: Neðst: BPC-töflu í neikvæðri jónastillingu