Efnapróf og efnaskiptarannsókn á hráum og unnum Cistanche Deserticola í rottum eftir UPLC-Q-TOF-MSE

Hafðu tölvupósttina.xiang@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

Ágrip

Bakgrunnur: Kínversk materia medica vinnsla er þekkt og einstök lyfjatækni í hefðbundinni kínverskri læknisfræði (TCM) sem notuð er til að draga úr aukaverkunum og auka eða jafnvel breyta lækningavirkni hráu jurtanna. Breytingar á nauðsynlegum þáttum sem framkallaðar eru af bjartsýni vinnsluferli eru fyrst og fremst ábyrg fyrir aukinni virkni lyfjaplantnanna. Nýra-yang endurlífgandi áhrif hrísgrjónavínsgufuCistanche deserticola(C.deserticola) var sterkari en hrár C.deserticola (CD).

Aðferðir: Samanburðargreining var framkvæmd með því að nota UPLC-Q-TOF-MS' við UNIFl upplýsingatæknivettvang til að ákvarða áhrif vinnslu. In vitro rannsóknir voru gerðar til að lýsa innihaldsefnum sem ogumbrotsefniin vivo. Efnaþættirnir voru ákvarðaðir í CD og unnum vörum þess. Fjölbreytu tölfræðigreiningarnar voru gerðar til að meta mun á milli þeirra á meðan OPLS-DA var notað til að bera saman pör.

Niðurstöður: Niðurstöður þessarar rannsóknar leiddu í ljós töluverðan mun á fenýletanóíð glýkósíðum (PhG) ogiridoidseftir vinnslu. Alls greindust 97 efnasambönd í útdrætti CD og unnum afurðum þess. PhGs með 4-O-kaffóýl hópnum í 8-O- -D-glúkópyranósýl hlutanum, eins og acteoside, cistanoside C, campneoside Il, osmanthuside minnkuðu eftir vinnslu, en PhGs með 6' -O-kaffóýl hópur í 8-O- -D-glúkópýranósýl hlutanum, eins og ísóasetósíð, ísósístanósíð C, ísókampneósíð l, ísómartýnósíð jókst, sérstaklega í CD-NP hópnum. Styrkur echinacoside og cistanoside B, þar sem uppbygging þeirra er með 6'-O- -D-glúkópyranosýl hluta jókst einnig. Í in vivo rannsókn greindust 10 frumgerðarhlutar og 44 umbrotsefni í rottuplasma, saur og þvagi. Niðurstöðurnar sem fengust leiddu í ljós að vinnsla leiðir til talsverðs breytileika í efnafræðilegum innihaldsefnum CD og hafði áhrif á ráðstöfun efnasambandanna in vivo, og fasa Ⅱ efnaskiptaferli eru lykilfall hvers efnasambands og flest umbrotsefnin tengjast echinacoside eða akteósíð.

Ályktanir: Þetta er fyrsta alþjóðlega samanburðarrannsóknin á hráum og unnum geisladiskum. Þessar niðurstöður auka við skilning okkar á áhrifum geisladiskavinnslu og gefa mikilvæg gögn fyrir framtíðarrannsóknir á virkni.

Leitarorð: Cistanche deserticola, Vinnsla, UPLC-Q-TOF-MS5, Efnasnið, Umbrotsefni in vivo

Kynning

Kínversk materia medica (CMM) vinnsla hefur sýnt marktækt notagildi í klínískri hefðbundinni kínverskri læknisfræði (TCM) og það hefur verið talið raunhæf meðferð í nokkrar aldir. Þetta er einstök lyfjatækni sem hefur verið fengin úr kenningunni um TCM. Eftir vinnslu hefur verið greint frá verulegum mun á útliti, efnafræðilegum innihaldsefnum, eiginleikum og læknisfræðilegum þýðingu allra tegunda TCM sem leiðir til þeirrar forsendu að vinnslan gæti bætt virkni eða dregið úr eituráhrifum TCM.

Í mörg hundruð ár,Cistanche deserticola(Rou Cong Rong á kínversku, geisladisk) er almennt notað í TCM klínískri starfsemi til að bæta við starfsemi nýrna. Það hjálpar einnig við rakagefingu í þörmum sem leiðir til slökunar á þörmum [1].Cistanchevar fyrst tekið upp í ShenNongBencaoJing. Það er almennt að finna í þurrum og hálfþurrkuðum búsvæðum víðs vegar um Evrasíu og Norður-Afríku, þar á meðal Íran, Kína, Indland og Mongólíu [2]. Vinnsla á geisladiski hefur farið fram með því að gufa með hrísgrjónavíni undir venjulegum þrýstingi, sem er undirbúningsaðferð sem skráð er í kínversku lyfjaskránni (Jiucongrong á kínversku, hér eftir kallað "CD-NP"). Og geisladiskagufa með hrísgrjónavíni undir háum þrýstingi er skilvirkari undirbúningsaðferð (hér eftir kölluð "CD-HP") [3, 4]. Nokkrar rannsóknir hafa komið í ljós að lyfjafræðileg áhrif CD eru frábrugðin unnum vörum þess [5]. CD getur styrkt nýrna-yang og slakað á þörmum, á meðan eftir að hafa verið gufusoðið með hrísgrjónavíni, myndu áhrif þess að endurnýja nýra-yang styrkjast. Í fyrri rannsókn okkar hefur komið í ljós að CD-NP gæti aukið nýrnalosun og stutt yang og létt á áhrifum raka þarma og hægðalosunar [6-8]. Í klínískri starfsemi eru unnar vörur algengasta formið.

Hingað til hafa nokkrar rannsóknir greint efnafræðilega þætti CD, fylgt eftir með einangrun og auðkenningu á meira en 100 efnasamböndum [9-11], eins og fenýletanól glýkósíð (PhGs),iridoids, lignans og fásykrur sem helstu efnafræðilegu innihaldsefni þess. Það hefur einnig verið greint frá því að það eru margar lyfjafræðilegar virkni PhGs þar á meðal ónæmisbælandi, taugaverndandi, lifrarverndandi, bólgueyðandi, andoxunarlyf, osfrv.[12-14]. Iridoids hafa bólgueyðandi virkni [15, 16]. Það hefur einnig komið í ljós með fyrri rannsóknum að sumir efnafræðilegir þættir sýndu afbrigði við vinnsluna [17–20]. Miðað við þessar skýrslur má gera ráð fyrir að eftirvinnsla leiði afbrigði í efnasamsetningu til ýmissa lyfjafræðilegra áhrifa sem þarf að kanna frekar.

Í núverandi rannsókn var næm og áhrifarík aðferð, þ.e. öfgamikil vökvaskiljun ásamt TOF-MSE (UPLC-Q-TOF-MSE) gerð til samanburðargreiningar, og in vitro rannsóknir voru gerðar til að eigindlega greina útdrættina. af CD, CD-NP og CD-HP til að skýra efnafræðilega snið þeirra. Almennt var litið á utanaðkomandi efni með mikla útsetningu í marklíffærum sem áhrifaríka þætti. Þess vegna, hjá rottum, voru CD og unnar afurðir þess gefnar til inntöku í sömu röð og fylgt eftir með lýsingu þeirra. Fyrirliggjandi rannsókn leiðir í ljós samanburðarrannsókn (bæði in vitro og in vivo) á hráum og unnum geisladiskum í fyrsta skipti. Niðurstöðurnar sem fengust myndu auka skilning okkar á áhrifum geisladiskavinnslu, sem gæti verið gagnlegt fyrir frekari rannsóknir.

efni og aðferðir

Efni

Stöðluð efnasambönd ajugol(180120) og 2'-asetýl-asetósíðs (M0601AS) voru veitt af Chendu Pure Chem-Standard Co., Ltd (Chengdu, Kína). Cistanoside F(MUST-17022620), echinacoside (D1105AS), cistano-hlið A(M0906AS) og ísóakteósíð(M0106AS) voru veitt af Must fyrirtækinu (Sichuan Kína); acteoside (O0618AS), salidroside(J0526AS), catalpol (S0728AS), genipósíð(A0407AS) og genipósíðsýra (MB6001-S) voru keypt frá Dalian Meilun Bio.Co., Ltd (Dalian, Kína). fengin frá Shanghai Yuanye Biological Technology Co., Ltd, Kína. Metanól og asetónítríl voru af MS-gráðu og voru fengin frá Merck KGaA, Darmstadt, Þýskalandi. Metansýru (CH, O,) af HPLC-gráðu var veitt af Merck KGaA (Darmstadt, Þýskalandi). Vatnið, sem notað var í núverandi rannsókn, var unnið með Milli-Q kerfinu (18,2 MQ, Millipore, Ma, Bandaríkjunum). Hrísgrjónavín var veitt af Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Zhejiang, Kína).

Cistanch deserticola var safnað frá Neimenggu wangyedi cistanche Co.Ltd. Sýnin voru auðkennd af prófessor Yanjun Zhai (lyfjafræðiskóli, Liaoning University of TCM). Sýnin voru send til Liaoning háskólans í hefðbundinni kínverskri læknisfræði.

Dýr

Sprague–Dawley karlkyns rottur (SPF gæða) með 180–220 g af heildar líkamsþyngd voru veittar af Liaoning Changsheng líftækni Co. Ltd. (Laboratory Animal Resource Center of Liaoning Province, leyfisnúmer: SCXK-2015–0001). Þessar rottur voru geymdar í ræktunarherbergi með vel viðhaldið hitastigi og rakastigi þ.e. 20–26 gráður, 50–70 prósent í eina viku. Rotturnar voru gefnar með venjulegum rannsóknarmat og vatni fyrir tilraunir. Dýrin föstuðu yfir nótt, en vatnið var gefið að vild fyrir tilraunina. Te rotturnar voru teknar af lífi með 10 prósent af klóralhýdrat deyfilyf. Dýrasiðanefndin á Liaoning Provincial Hospital of Chinese Medicine samþykkti allar tilraunasamskiptareglur (2019.3.25, 2019015).

Undirbúningur geisladiska, CD-NP og CD-HP útdráttar

CD-NP, CD-HP voru unnin úr sömu lotu af Cistanch deserticola. Til að undirbúa CD-NP voru þurrir geisladiskar (5 mm þykkir, 100 g) rakaðir með hrísgrjónavíni (30 ml) og gufaðir við 100 gráður í 16 klst., fylgt eftir með þurrkun við 55 gráður í þurrkofni. Á meðan CD-HP var útbúið með íferð í þurra CD-bita (5 mm þykkt, 100 g) með hrísgrjónavíni (30 ml), fylgt eftir með því að gufa við 1,25 loftþrýsting í 4 klst. og síðan þurrkað í þurrkofni við 55 gráður.

Í 100 ml mæliflösku var eitt gramm af duftinu sigtað með sigti #4, fylgt eftir með því að bæta við 50 prósentum af metanóli (50 ml) og síðan þétt hulið og blandað. Þessi blanda var vigtuð og fylgt eftir með hálfum klst. maceration. Eftir blöndun var blandan með hljóðhljóðum (afl 250 W, tíðni 35 kHz) í 40 mínútur, fylgt eftir með kælingu og vigtun aftur. Þyngdartapið var fyllt á með 50% metanóli, rétt blandað, og leyft að standa, fylgt eftir með því að sía ofanvatnið og nota síðan síuvökvann sem fékkst sem próflausn.

MSE greining á virkum íhlutum

Framleiðsla staðlaðra efna: túbúlósíð-A (3.02 mg), echinakósíð (3.00 mg), 2'-asetýlakteósíð (2.34 mg), akteósíð (2.45 mg), ísóakteósíð (0.61) mg), cistanoside-F (2,14 mg), salidroside (3,39 mg), geni pósíð (2,84 mg), ajugol (1,58 mg), catalpol (2,39 mg), geniposidic acid (2,56 mg) og 8-epideoxyloganic sýru (2,34 mg) var bætt í 10 ml rúmmálsfaska, bætt metanóli við stöðugu rúmmáli í mælikvarða, stillt í samsvarandi styrkleikaviðmiðunarlausn. Hver af 100 μL var stilltur í blandaða viðmiðunarlausn.

MS greiningarástand: Massagildið var leiðrétt fyrir tilraunina og neikvæð jónastillingin notuð. Massasviðið var 50–1200 Da, og sýninu var sprautað í gegnum flæðisdælu. Keiluhraðinn var 100 l/klst., flæðishraði leysiefnisins var stilltur á 800 l/klst. Háræðs- og keiluspennan var fest við 2500 og 40 V, í samræmi við það. Hitastig jónagjafans og leysigassins var 100 gráður og 400 gráður í sömu röð og tíðni merkjatöku var 0,5 S−1.

UPLC-Q-TOF-MS greining á CD útdrætti (15–16 mín), 65 prósent til 55 prósent A (16–18 mín). Rennslishraði var 0,3 mL mín−1, en hitastig sjálfssýnisstofu og súlu var 30 gráður og 8 gráður hvort fyrir sig. Inndælingarrúmmál var 1,0 μL.

Massagreiningarmatið var framkvæmt með Waters XEVO G{{0}}XS QTOF MS (Waters Corporation, Milford, MA, Bandaríkjunum), sem samanstendur af ESI uppsprettu. Flæðishraði köfnunarefnisgass var fastur við 800 L·klst-1 með hitastiginu 400 gráður, uppsprettahitinn var fastur við 100 gráður og keilugasið var stillt á 50 L klst-1. Spenna keilu og háræða var stillt á 40 og 2000 V, í samræmi við það. Árekstursorka skábrautarinnar var notuð á bilinu 20–30 V. Miðlæg gögn allra sýna voru fengin frá 50 til 1200 Da, með 5-skannatíma upp á 0,5 sekúndur yfir 10 mín. . LockSpray TM var notað til að sannprófa massa nákvæmni. Te [M–H]− jón ​​leucine enkephalin (200 pg·μL−1 innrennslisflæðihraði 10 μL mín−1) við m/z 554,2615 var notuð sem læsimassa. MassLynx V4.1 hugbúnaðurinn (Waters Co., Milford, Bandaríkjunum) var notaður fyrir nákvæman massa, samsetningu forverajónanna og útreikning á brotajónum.

Gagnagreining í Masslynx vettvang

Ennfremur var sett upp innanhússafn sem samanstendur af nafni efnasambandsins, uppbyggingu þess og sameindaformúlu (í mól.) byggt á bókmenntum. Öll efnasamböndin voru skráð í sérstöku sniðmáti, gert í Excel. Að auki voru mol skrárnar (Chemdraw Ultra 8.0, Cam-bridge soft, USA) og Excel skrár allra einstakra samsettra bygginga einnig vistaðar á staðbundinni tölvu. Staðfesta Excel blaðið með mikilvægum gögnum var flutt beint inn í vísindasafnið í UNIFI

UNIFI 1.8.2, Waters, Manchester, Bretlandi var notað til að meta byggingareiginleika, sérstaklega fyrir einkennandi brot og MS sundrun. Lágmarks toppsvæði 500 var stillt fyrir tvívíddar toppskynjun. Þegar þrívíddartoppar voru sýndir var valinn lágorkutoppstyrkur meira en 300 talningar og hækkaður orkutoppstyrkur meira en 80 talningar. Massaskekkjan reyndist vera allt að ±10 ppm fyrir þekkt efnasambönd, og varðveislutímaþolið var stillt á bilinu ±0,1 mín. Við völdum neikvæðu adducts sem innihalda -H, auk HCOOH. Vinnsla á hrágögnum sem fengust frá MS fór fram með straumlínulagðri UNIFI hugbúnaði til að finna fljótt þá efnaíhluti sem uppfylltu staðlana með sjálfsmíðaða gagnagrunninum og hefðbundnu læknabókasafninu.

Næst, til að sannreyna efnafræðilega uppbyggingu hvers markefnasambands, voru myndbrigðin aðgreindar með einkennandi MS sundrunarmynstri sem komu í ljós í greindu rannsóknunum og með því að bera saman varðveislutíma viðmiðunarstaðla.

Efnaskiptagreining byggð á fjölþátta tölfræðilegri greiningu

Áður en hrágögnin voru unnin voru færibreyturnar stilltar, svo sem massi á bilinu 150 til 1200 Da, svið varðveislutíma (0 til 20 mín), þröskuldsstyrkur ( 2000 talningar), massaþol þ.e. 5 MDA, en massi og varðveislutími var 0,20 mín og 0,05 Da, í sömu röð. Í síðari lista yfir gagnagrunninn var auðkenni jóna RT-m/ pörin með tilliti til skolunartíma þeirra. Sömu gildi fyrir RT og m/z í ýmsum lotum sýna voru talin vera sama efnasambandið.

Fjölþátta tölfræðileg greining var gerð til að meta árangursríka lífmerki sem áttu talsvert þátt í breytileika milli mismunandi hópa. Við greininguna var aðalþáttagreining (PCA) notuð til að gefa til kynna hámarksmun og mynsturgreiningu til að fá yfirsýn og flokkun. OPLS-DA er líkanatól sem veitir sjónmynd af OPLS-DA forspárhlutahleðslu til að aðstoða líkanamat. Breytilegt mikilvægi fyrir vörpun (VIP) var notað til að meta mat á ýmsum þáttum ogumbrotsefniwith VIP values>1.0 og P-gildi<0.05 were="" regarded="" as="" effective="" markers.="" furthermore,="" a="" permutation="" test="" was="" conducted="" for="" providing="" reference="" distributions="" for="" the="" r²/o²values="" that="" could="" show="" the="" statistical="">

Dýratilraunir rottur voru flokkaðar af handahófi í fjóra hópa (n=6 fyrir hvern hóp), fylgt eftir með inntöku ýmissa útdrátta: (1) Eyður samanburðarhópur: rotturnar fengu venjulegt saltvatn (2 ml/100 g) ; (2) CD hópur: rotturnar fengu CD útdrátt (2 ml/100 g); (3) CD-NP hópur: rottunum var gefið CD-NP þykkni (2 mL/100 g); (4) CD-HP hópur: rotturnar fengu CD-HP þykkni (2 mL/100 g). Frekari flokkun allra hópa var framkvæmd í þrjá undirhópa fyrir plasma, þvag og saur, í samræmi við það. Tveimur klukkustundum síðar var hver rotta gefin til inntöku með sama og jafnmiklu magni af útdrætti.

Eftir gjöf fór blóðsýnasöfnunin fram eftir 1.0 klst., 2.0 klst. og 4.0 klst. í heparíngerðum 1,5 ml pólýetenrörum (úr svigrúmsæðum) , fylgt eftir með skilvindu (við 4500 rpm) á öllum sýnum í 15 mín.

Fyrir þvag- og saursýni var rottunum haldið í efnaskiptabúrum og síðan var safnað þvag- og saursýnum í 24 klst. eftir gjöf. Skiljun þvagsýna var framkvæmd við 4500 snúninga á mínútu í 15 mínútur, á meðan saursýni voru þurrkuð í skugga, möluð í duft, síðan voru 0,2 g tekin og bætt út í 0,5 ml saltvatn. lausn, ómskoðun í 5 mín og skilið við 12,000 snúninga á mínútu í 15 mín. Öll lífsýnin voru geymd við -80 gráður þar til greiningar.

Undirbúningur lífsýna. Bætt var við plasma-, þvag- og saursýnum með 3 rúmmáli af metanóli, fylgt eftir með hringiðu í 3 mínútur. Næst var skiljun (við 12,000 snúninga á mínútu) á blöndunum framkvæmd í 10 mínútur, fylgt eftir með því að flytja flot yfir í EP rörið og síðan þurrkað með köfnunarefni við 37 gráður. Ennfremur var bætt við 200 μL af HCN–H2O (50 prósent) lausn. Tíu, hvirfilinn var notaður til að blanda (1 mín), fylgt eftir með skilvindu (við 12, 000 rpm) í 5 mín. Flotinu (5 μL) af meðhöndluðu sýnunum var sprautað í UPLC-Q-TOF-MSE kerfið.

Vökvaskiljun og massagreiningarástand Greiningin fyrirumbrotsefnivar einnig framkvæmt af Waters UPLC tækinu í gegnum ESI tengi. Aðskilnaður var gerður með því að nota Acquity UPLC HSS T3 súlu (100 mm×2,1 mm, 1,8 µm), hreyfanlegur fasi var 0,1 prósent maurasýru (A): asetónítríl (B), hallalosunarskilyrði var 0-3 mín (99,8 prósent →98 prósent A).3-5 mín(98 prósent →95 prósent A),5-8 mín(95 prósent →90 prósent A), { {18}} mín (90 prósent →85 prósent A),12-17 mín(85 prósent →70 prósent A), 17-22 mín. (70 prósent →60 prósent A), 22-23 mín. (60 prósent →58 prósent A), 23-25 mín (58 prósent A),25-32 mín(58 prósent →45 prósent A), og 32-37 mín (45 prósent →35 prósent A) ),0,4 ml mín-1 var flæðishraðinn. Hitastigið fyrir súluna og sýnaherbergi var stillt á 40 gráður og 8 gráður í sömu röð. Massagreiningarskilyrðin sem nefnd eru hér að ofan voru notuð.

Stefna fyrir kerfisbundna greiningu á umbrotsefnum í lífsýnumUNIFI (1.8.2) hugbúnaði var notuð við gagnavinnslu. Tvöfaldur samanburðaraðgerðin var notuð til að bera kennsl á virk umbrotsefni. Metin umbrotsefni voru ekki til í jafngildu viðmiðunarsýninu eða eru til við lágan jónstyrk. Hlutfallslegur styrkleikaþröskuldur var stilltur á 3 eða 5 og hægt var að meta umbrotsefni sem uppfylltu undirstrikuðu skilyrðin. Algeng og fyrirsjáanleg umbrotsefni voru síðan ákvörðuð með EIC. Til að leita að tveggja fasa umbrotsefnum var NLF aðgerðinni beitt. Til dæmis, í UNIFI hugbúnaðinum, væri hægt að stilla færibreyturnar á 176.0321 til að leita að mögulegum glúkúrónsýrusamböndum. Eftirvinnslu er hægt að setja hlutlaust tap í aðferðinni eða bera kennsl á það. MassFragment var notað til að ákvarða eða lýsa uppbyggingu greindra umbrotsefna, litrófstúlkunaraðgerð UNIFI er aðalaðgerðin sem notuð er til að greina auka sundrun móðurhluta. Þessa aðgerð er hægt að nota til að sannreyna hraða sundurliðunarleiðina hvort sem það er sanngjarnt.

Niðurstöður

Massa sundrunarregla fenýletanóíð glýkósíða og iridoids

Fenýletanóíð glýkósíð eru helstu efnafræðilegu innihaldsefni CD. Staðlaðar lausnir ísóakteósíðs,

cistanoside F, tubuloside A, echinacoside, acteoside og 2'-acetyl-acteoside voru tekin, fylgt eftir með því að veita mismunandi stig af árekstraorku (tafla 1), og þá voru samsvarandi MS2 kort fengin (Mynd 1).

Massalrófsgreiningin leiddi í ljós að fenýletanóíð glýkósíð eru með svipað massarófsbrotamynstur, klofningsleiðirnar í neikvæða jónahamnum innihalda aðallega (1) Klofnun estertengja: tap á hlutlausum kaffóýlhópi (C, H, O162.03) og hlutlausum asetýli. hópur (C, H, O,42.00);(2) Glýkósíðklofnun: tap á hlutlausum rhamnósaleifum (C.HIO, 146.05) og hlutlausum glúkósaleifum (CgHO,162.05). Frá háupplausnarmassagreiningu var hægt að greina kaffóýl(162.03) og glúkósaleifar (162.05).

Iridoids ajugol, catalpol, geniposidinsýra, geniposide og 8-epide oxyloganic acid staðallausnir voru teknar, fylgt eftir með því að veita mismunandi árekstraorku, og samsvarandi MS-kort voru fengin (mynd 2).

Iridoid glýkósíð hafa svipað massarófsbrotamynstur, klofningsleiðirnar í neikvæða jónahamnum eru aðallega (1) Glýkósíð klofning: Tap á hlutlausum glúkósaleifum(CHoO,162,05);(2)Tap hlutlauss CO,(43,99) og H , O(18.01).

Auðkenning efnasambanda í CD, CD-NP og CD-HP útdrætti

UPLC-QTOF-MSE greining

Hagræðing á litskiljunarskilyrðum var framkvæmd. Næst voru efnasambönd CistancheHerba metin bæði í neikvæðum og jákvæðum jónaham með háum sem lágum CE. Niðurstöðurnar sem fengust leiddu í ljós að samhæfni neikvæða hamsins var meiri miðað við jákvæða háttinn fyrir þessi efnasambönd. Mynd 3 sýndi MS grunntoppjón (BPI) litninga-grömm með tölusettum toppum. Styrkur hverrar greindrar jónar í greiningu UPLC-Q-TOF-MS var staðlaður með tilliti til heildarjónafjöldans til að mynda gagnafylki sem samanstóð af m/z gildi, staðlaða toppflatarmáli og varðveislutíma.

Mat á íhlutum frá CD og unnum vörum þess á UNIFl vettvangi

Alls voru 97 efnasambönd auðkennd með -SEM (n=6) ham frá CD og unnum afurðum þess (tafla 2), þar á meðal fenýletanóíð glýkósíð (PhGs), iridoids, lignans og oligosaccharides. Hlutirnir 95,91 og 94 greindust í CD, CD-NP og CD-HP í samræmi við það. Meðal þeirra voru 64 fenýletanóíð, 13 voru iridoids og 20 aðrar tegundir efnasambanda voru ákvarðaðar. Það var líkt með efnasamsetningu geisladisks og unninnar vöru hans, en magn íhlutanna reyndist vera mismunandi milli geisladisks og unnar vöru þess.

Breytingar á efnaþáttum unninna vara. Simca-P 13.0 hugbúnaðurinn var notaður til að greina fjölþátta gagnafylki. Fyrir PCA voru allar breytur meðalmiðaðar og Pareto-kvarða, fylgt eftir með auðkenningu á hugsanlegum mismunabreytum. Í PCA stigalotu sýndi hver punktur einstaklingsúrtak. Sýnum sem sýndu líkindi í efnisþáttum þeirra dreifðust nær hvert öðru, en þeim sem sýndu afbrigði í efnisþáttum þeirra var skipt. Eins og sést í PCA (Mynd 4), var CD-HP hópurinn aðskilinn frá CD og CD-NP hópunum.

To distinguish CD from CD-HP and CD-NP, OPLS-DA, permutation test, S-plot, and VIP value were developed. (Figs.5, 6,7)The obtained results revealed that many components were key characteristic components of each product. The screening condition was the VIP>1 og P<0.05. from="" the="" date="" of="" the="" s-plot,="" the="" characteristic="" components="" were="" evaluated,="" which="" were="" commonly="" existing="" in="" the="" three="">

Í mynd 8 fundum við styrkleika acteoside(54), cistanoside C(74), campneoside I(43), osmanthuside (75) og 2'-actylacteoside(80) sem hafa 4'-O-caffeoyl hópinn í 8-O- -D-glúkópýranósýl hlutinn (sjá mynd 9) minnkaði eftir vinnslu með hrísgrjónavíni, en styrkur ísóasetósíðs(60), er kastanósíð (71), ísókampneósíð I (69),ísómartýnósíð (86) með 6'-O-kaffóýl hópnum (sjá mynd 9) hækkað, sérstaklega fyrir CD-NP hópinn. Þó að túbúlósíð B (72) hafi 6'-O-kaffóýlhóp, sama og ísóakteósíð, minnkaði styrkurinn vegna 2'-asetýlhópsins. Styrkur echinacoside(38) og cistanoside B sem hafa 6'-O- -D-glúkópyranosýl hópa jókst, en styrkleiki tubuloside A (55) minnkaði einnig vegna 2'-asetýl hóps þess.

Rannsóknarteymið okkar rannsakaði einnig hitastöðugleika akteósíðs og ísóakteósíðs og komst að því að akteósíðan var óstöðug í vatni, metanóli og gulri hrísgrjónavínslausn og gæti breyst í ísóakteósíð að hluta við hitunarskilyrði. En hitastöðugleiki ísóakteósíðs var betri, sérstaklega í gulri hrísgrjónavínslausn. Mynd 10 sýndi mögulegar breytingar á PhGs í CD við vinnslu:

Greining á umbrotsefnum í rottum Út frá gögnum úr háupplausnarmassagreiningu var nákvæm mólþungi og frumefnasamsetning fyrir umbrotsefni og frumsameindarsambönd greind og borin saman. Þar sem sams konar efnasambönd í TCM sýndu líkindi í efnaskiptabreytingum, geta fylgni plöntuefnafræðilegra innihaldsefna in vitro náð til umbrotsefna þeirra in vivo. Á sama tíma, byggt á hefðbundnum umbreytingarferlum, var ályktað um hæfilega breytingu á mólþunga. Að lokum voru umbrotsefnin auðkennd með því að greina MSE massaróf umbrotsefna og frumefnasamskipta sundrungarferilsins í massarófinu [21, 22]. Í samanburði við núllsýnið voru efnisþættir þess auðkenndir in vivo á grundvelli upplýsinganna frá litskiljun-massarófi, möguleikanum á efnaskiptahvarfi, eiginleikum efnasambandsbyggingarinnar og sundrunarreglu massarófsins. Sjá töflu 3.

Greining á umbrotsefnum tengdum fenýletanólglýkósíðum

UNIFI vettvangur var notaður til vinnslu. Mynd 11 sýndi TIC litskiljun þvags, saurs og plasma fyrir CD og unnar afurðir þess. Samanborið við núllsýni fundust alls 54 umbrotsefni í rottum, þar á meðal 10 frumgerðarhlutar og 44 umbrotsefni, þar sem 24, 49 og 6 voru í saur, þvagi og plasma, í samræmi við það.

Byggt á nákvæmum massa, sundrungufalli og fyrirsjáanlegu hlutlausu tapi vegna lífumbreytinga, voru alls 35 fenýletanóíð glýkósíð tengd umbrotsefni metin með semingi. Tengd umbrotsefni fenýletanóíð glýkósíða hafa svipað massarófsbrotamynstur, eins og dæmigerða decaffeoyl brot m/z 461.1605, síðan vatnsrofið frekar með glýkósíð- og estertengjum in vivo og umbrotið í hýdroxýtýrósól (HT)(m/) z153.0504, C.HO.4.73 mín.) og koffínsýra(CA)(m/z179.0389, CH, 0.77 mín.), sjá mynd 12A.

M11 gaf til kynna [MH]~við m/ 153,0504 með formúlu þ.e. C.HO, og auðkennt sem HT. M16 sýndi [MH]- við m/z 329,0851, sem var 176 Da hækkað en HT, sem leiddi í ljós að það gæti verið glúkúróníðað umbrotsefni HT. [MH]-af M26 var við m/z 343.1037,14 Da hærra en HT-glúkúróníð. Þess vegna var M26 auðkennt sem HT-metýlerað glúkúróníð. M17 var auðkennt sem HT-súlfat byggt á [MH]-við m/z 233.0112,80 Da yfir HT, sem gæti verið metýlerað frekar, framleitt síðan M22, sem sýndi m/z 247.0278, sem gefur til kynna að það væri HT- metýlerað súlferað umbrotsefni. M7 (m/167.0335) og M5(m/z 167.0762) voru talin oxunarafurðir og metýleruð HT, í sömu röð (Mynd 12B).

M1 gaf til kynna [MH]- við m/z 179,0389, skýrð sameindaformúla var CH-O og auðkennd sem koffínsýra(CA). M25 sýndi [MH]- við m/ 355,0704, sem voru 176 Da hækkuð en CA, sýnir að það gæti verið glúkúróníðað umbrotsefni CA. M27 hafði m/z 258.994, sem var 80 Da hærra en CA, þannig að við skýrðum það sem CA súlfat, og það gæti framleitt M35(m/z 273.0064). Þar sem M4 gefur [MH]7 við m/z 193.0524,14 Da hærra en CA, var það auðkennt sem CA metýlerað umbrotsefni. M39 var CA afhýdroxýlerandi umbrotsefni, með m/z 163,04, og það var hægt að súlfera í M32 (m/z 242,9951).

M33(m/z 181.0491, C.HO,9,06 mín.) var afoxunarafurð CA, það er 3,4-díhýdroxý-bensenprópíónsýru, sem hægt var að metýlera í M19 (m) /z 195,0623, C10H12O4, 0,93 mín.). M33 gæti verið þurrkað í M43, þ.e. 3-HPP (m/z 165,0558, C9H10O3, 11,29 mín), og M31 (m/z 341,0942, C15H17O9, 8,90 mín) og M29 (m/z, 0125, C, 0125, S, 8,52 mín.) voru glúkúróníðuðu og súlferuðu afurðirnar (mynd 12C).

Fyrir umbrotsefni tengd fenýletanóíð glýkósíð, voru helstu efnaskiptafallin í II fasa efnaskiptaviðbrögð, þ.e. glúkúróníðtenging, metýlering og súlfun. Fyrirhuguð efnaskiptafall fenýletanóíða er sýnd á mynd 13.

Greining á umbrotsefnum sem tengjast iridoids

Með því að greina frumefnasamsetningu umbrotsefnanna, sundurliðun MSE og tilheyrandi fræðiritum voru alls 19 umbrotsefni tengd iridoid með semingi metin. Iridoid glýkósíð voru vatnsrofin með glýkósíðtengjum til að mynda samsvarandi aglýkóna þeirra. M/z 185,117 var fyrir M8, 162 Da minna en ajugol, sem var gefið af tapi á glúkósaleifum.

M40 (m/z 199,0641, Rt 10,91 mín) var afglýkósýlerað afurð katalpóls. M45 m/z 169,0487, Rt 12,15 mín.) var minna en 30 Da af catalpol afglýkósýleruðu umbrotsefni, og var auðkennt sem fjarlæging á sameind CH, O umbrotsefnis. M34 (m/z 151,0352, Rt 9,08 mín), var frekara tap á H, O umbrotsefni.

M44 (m/z 211,0665, Rt 11,31 mín) var afglýkósýlerað umbrotsefni geniposíðs og M37(m/z 197,0833, Rt 15,03 mín) var afglýkósýlerun á 8-farsoxýlógansýru. Efnaskiptahvörf fyrir iridoids gætu komið í ljós sem fas I umbrot af glýkósýleringu (mynd 12D).

Samanburður á efnaskiptasniði í plasma, þvagi og saur milli CD og unnum afurðum þess

Bornar voru saman 2 frumgerðir í plasma, 7 í þvagi og 3 í saur. Það voru 7 frumgerðir frásogaðar í CD, 7 frumgerðir frásogaðar í CD-NP og 8 frumgerðir í CD-HP. M21 greindist aðeins í saurhópnum CD-NP og M38 og M51 greindust bara í þvaghópum CD-HP. Samanborið við umbrotsefni voru eins umbrotsefni í plasma, þvagi og saur 4, 42 og 21, í sömu röð. Það voru 34 umbrotsefni frásogast í CD-hópnum, 39 í CD-NP og 40 í CD-HP hópnum. M5, M7, M40 og M52 greindust aðeins í CD-NP hópum en M24, M4l og M48 greindust bara í CD-HP hópum.

Breytingar komu fram í frásogi sem og umbrotum virkra efnasambanda í fjölbreyttum unnum afurðum CD. Frá mynd 14 komumst við að því að styrkleiki HT-súlfatsamtengingar (M17) var mestur í þvagi, fylgt eftir af 3-HPP súlfatsamtengingu (M29), metýleruð HT súlfattenging (M22), afhýdroxýleruð CA súlfat samtenging (M32) og 3,4-díhýdroxýbensen própíónsýru súlfat samtenging (M19). Innihald efnaskiptaafurða í unnum hópnum var hærra en í CD hópnum, sérstaklega fyrir M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2. Forveri 6'-O-kaffóýlhóps þeirra í 8-O- -D-glúkópyranósýl hlutanum, efnasambönd eins og hýdroxýtýrósól hafa æxlishemjandi, bólgueyðandi, bakteríudrepandi, veirueyðandi og sveppaeyðandi eiginleika [ 23]. Koffínsýra hefur bólgueyðandi, krabbameins- og veirueyðandi virkni [24]. Það var í samræmi við klíníska notkun á CD og unnum vörum þess.

Umræða

CD er TCM og helstu lífvirku þættir þess, þar á meðal PhGs, iridoids, fjölsykrur hafa verið skráðar með ýmsum rannsóknum. Í TCM klínískri starfsemi hafa unnar vörur af CD verið mikið notaðar miðað við hráar. Efnasamsetningin mun breytast við vinnsluna, sem getur leitt til breytinga á lækningaáhrifum (Mynd 14).

PhGs eru tegund fenólefnasambanda sem einkennist af -glúkópýranósíð uppbyggingu sem ber hýdroxý-fenýletýl hluta sem aglýkón. Þessi efnasambönd innihalda oft koffínsýru og rhamnósa sem eru tengd við glúkósaleifarnar með ester- eða glýkósíðtengingum í sömu röð. Í núverandi rannsókn, eigindlegar greiningar á CD, CD-NP. og CD-HP voru gerðar, og alls 97 efnasambönd, þar á meðal fenýletanóíð glýkósíð (PhGs), iridoids, o.fl. voru auðkennd. Niðurstöðurnar sem fengust sýndu mismunandi efnasamsetningu fyrir og eftir vinnslu. Styrkur PhGs með 4'-O-kaffóýl hópnum í 8-O- -D-glúkópýranósýl hlutanum, eins og acteoside, cistanoside C, campneoside II, osmanthus-side minnkaði eftir vinnslu, en PhGs með

eins og ísóasetósíð, ísósístanósíð, ísókampneósíð I, ísómartýnósíð jókst, sérstaklega í CD-NP hópnum. Styrkur echinacoside og cistanoside B, þar sem uppbygging þeirra býr yfir 6'-O- -D-glúkópyranósýl hluta jókst einnig. PhG sem eru með 2'-asetýlhóp minnkuðu oft vegna vatnsrofsviðbragða meðan á ferlinu stóð, eins og túbúlósíð B, 2-asetýlakteósíð.

Rannsókn á umbrotsefnum sem frásogast in vivo fór fram eftir inntöku CD og unnum afurðum þess. Efnaskiptaferlar II. stigs voru lykilfallin og flest umbrotsefnin voru súlfat, glúkúróníð og metýleruð samtengd efni. Fenýletanól glýkósíð hafa lítið frásog og nýtingu til inntöku. Erfitt er að frásogast þau í blóðið og virka sem forverar til að gegna hlutverkum sínum eftir efnaskiptavirkjun in vivo. Fenýletanóíð sem myndast í fenýletanólaglýkóni, eins og hýdroxýtýrósól (HT) og koffínsýra (CA) og afleiða þess 3-hýdroxýfenýlprópíónsýra (3-HPP), geta þessi umbrotsefni frásogast auðveldara í plasma og hafa betri lækningaáhrif.

CD og unnar vörur hans. HT-súlfat samtenging (M17) hefur mestan styrkleika í þvagi, fylgt eftir með 3-HPP súlfat samtengingu (M29), metýleruð HT súlfat samtenging (M22), afhýdroxýleruð CA súlfat samtenging (M32), og 3,{{ 7}}díhýdroxý bensenprópíónsýru súlfat samtenging (M19). Innihald efnaskiptaafurða í unnum hópnum var hærra en í CD hópnum, sérstaklega fyrir M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2.

Almennt gætu þættirnir sem hafa mikla útsetningu í marklíffærum verið áhrifaríkar. Nægilegt magn af fenýletanóíðum og afleiðum þeirra hefur verið metið og ákvarðað in vitro. Acteoside er einkennandi efnasambandið, þar sem innihaldið minnkaði eftir að það var unnið með hrísgrjónavíni og innihald ísóakteósíðs, ísósístanósíðs C, ísókampneósíðs I jókst að sama skapi. Niðurbrotsefni PhGs, eins og CA og HT afleiður, væri hægt að meta í lífsýnunum og hrísgrjónavínsvinnsla getur aukið frásog umbrotsefna in vivo.

Niðurstaða

Í þessari rannsókn greindust 97 efnasambönd í útdrætti CD og unnum afurðum þess. Niðurbrot nokkurra glýkósíða átti sér stað við hærra hitastig og þar af leiðandi mynduðust nokkrar nýjar hverfur og fléttur. Í in vivo rannsókn voru frumgerðarhlutar (10) og umbrotsefni (44) ákvörðuð eða metin með semingi í rottuplasma, saur og þvagi. Fasa II efnaskiptaferlar voru lykilfallin, flest umbrotsefnin voru tengd echinacoside eða acteoside, eins og HT, CA og afleiður þeirra 3-hýdroxýfenýlprópíónsýra 3-HPP. Þessi umbrotsefni geta frásogast auðveldara í plasma og haft betri lækningaáhrif. Niðurstöðurnar sem fengust sýndu að efnasamsetning CD var mismunandi og hafði áhrif á ráðstöfun efnasambandsins in vitro og in vivo.

Skammstafanir

PhGs: fenýletanóíð glýkósíð; Geisladiskur: Cistanche deserticola; CMM: Chinese Materia Medica; TCM: Hefðbundin kínversk læknisfræði; CD-NP: Gistanche deserticola Unnið með því að gufa með hrísgrjónavíni undir venjulegum þrýstingi; CD-HP: Cistanche deserticola Unnið með því að gufa með hrísgrjónavíni undir háþrýstingi; UPLC-Q-TOF-MS: Ofurafkastamikil vökvaskiljun ásamt TOF-MS; PCA: Aðalþáttagreining; VIP: Breytilegt mikilvægi fyrir vörpun; CA: Koffínsýra; HA: Hýdroxýtýrósól.

Viðurkenningar

Á ekki við.

Framlag höfunda

LZ, LBN, SJ tóku þátt í að semja, skrifa handritið. RJ, LPP aðstoðuðu við dýratilraunirnar og samdi og endaði allar myndir og töflur. ZC, HY. ITZ aðstoðaði við hönnun og frammistöðu þessarar rannsóknar og fór yfir handritið. Allir höfundar lásu og samþykktu lokahandritið.

Fjármögnun

Þetta starf var stutt af National Natural Science Foundation of China (Grant No:81874345) og Natural Science Foundation of Liaoning Province (Grant No: 2020-MS-223).

Aðgengi gagna og efnis

Gagnasöfnin sem notuð eru og/eða greind í yfirstandandi rannsókn eru fáanleg hjá samsvarandi höfundi ef sanngjarnt er óskað.

Yfirlýsingar

Siðfræðisamþykki og samþykki til þátttöku

Siðferðilegt samþykki fyrir notkun tilraunadýra fyrir þessa rannsókn hafði verið fengið frá læknasiðanefnd Liaoning háskólans í hefðbundinni kínverskri læknisfræði (Samþykkisnúmer: 2018YS(DW)-044-01), Allar tilraunaaðferðir í þessari rannsókn voru samkvæmt siðferðilegum stöðlum skv. læknasiðanefnd Liaoning háskólans í hefðbundinni kínverskri læknisfræði.

Samþykki fyrir birtingu

Á ekki við.

Samkeppnishagsmunir

Höfundar lýsa því yfir að þeir hafi enga hagsmunaárekstra að upplýsa.

Upplýsingar um höfund

'Lyfjadeild, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian, Liaoning, Kína.'Drug Research Institute of Monos Group, Ulaanbaatar 14250, Mongólíu.

Móttekið: 31. maí 2021 Samþykkt: 17. september 2021 Birt á netinu: 28. september 2021

Zhe Li1, Lkhaasuren Ryenchindorj2, Bonan Liu1, Ji Shi1* , Chao Zhang1, Yue Hua1, Pengpeng Liu1, Guoshun Shan1 og Tianzhu Jia1

Heimildir

1. Kínverska lyfjaskrárnefndin. Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína, bindi. I. Peking: China Medical Science Press; 2020. bls. 140.
2. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng CM. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): ein af bestu lyfjagjöfum hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði. Front Pharmacol. 2016;7:41.
3. Liu BN, Shi J, Zhang C, Li Z, Hua Y, Liu PP, Jia TZ. Áhrif mismunandi þurrkunarvinnsluaðferða fyrir Fresh Cistanche deserticola á innihald innihaldsefna þess. J Chin Med Mater. 2020;10:2414–8.
4. Liu BN, Shi J, Jia TZ, Lv TT, Li Z. Hagræðing á háþrýstingsgufuferlinu fyrir Cistanches Herba. Chin Trad Patent Med. 2019;11:2576–80.
5. Fan YN, Huang YQ, Jia TZ, Wang J, La-Sika, Shi J. Áhrif Cistanches herba fyrir og eftir vinnslu á öldrunarvirkni og ónæmisvirkni öldrunarrotta af völdum D-galaktósa. Chin Arch Trad Chin Med, 2017; 11:2882–2885.
6. Gao YJ, Jiang Y, Dai F, Han ZL, Liu HY, Bao Z, Zhang TM, Tu PF. Rannsókn á hægðalosandi innihaldsefnum í Cistanche deserticola KFUM. Nútíma Chin Med. 2015;17(4):307–10.
7. Liu BN, Shi J, Li Z, Zhang C, Liu P, Yao W, Jia T. Rannsókn á taugainnkirtla-ónæmisvirkni Cistanche deserticola og hrísgrjónavínsgufuafurðir þess í rottalíkani af völdum sykurstera. Evid Based Supplement Alternat Med. 2020;22:5321976.
8. Guo Y, Wang L, Li Q, Zhao C, He P, Ma X. Aukning á nýrnastyrkjandi virkni í músamódelinu með Cistanches herba sem þurrkaðist hratt við miðlungs hátt hitastig. J Med Food. 2019;22(12):1246–53.
9. Wang T, Zhang X, Xie W. Cistanche deserticola YC Ma, "Desert ginseng": endurskoðun. Am J Chin Med. 2012;40(6):1123–41.
10. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X. Cistanches Herba: Yfirlit yfir efnafræði, lyfjafræði og lyfjahvörf. J Ethnopharmacol col. 2018;219:233–47.
11. Lei H, Wang X, Zhang Y, Cheng T, Mi R, Xu X, Zu X, Zhang W. Herba Cistanche (Rou Cong Rong): endurskoðun á jurtaefnafræði þess og lyfjafræði. Chem Pharm Bull. 2020;68(8):694–712.
12. Geng X, Tian X, Tu P, Pu X. Taugaverndandi áhrif echinacoside í mús MPTP líkaninu af Parkinsonsveiki. Eur J Pharmacol. 2007;564:66–74.

13. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB. Verndaráhrif tubuloside B á TNF alfa-framkallaða frumudauða í taugafrumum. Acta Pharmacol Sin. 2004;25(10):1276–84.
14. Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y, Tu PF. Bólgueyðandi iridoids úr stönglum Cistanche deserticola sem ræktað er í Tarim eyðimörkinni. Chin J Nat Med. 2016;14(1):61–5.
15. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF. Fenýletanóíð glýkósíð með bólgueyðandi virkni úr stönglum Cistanche deserticola ræktað í Tarim eyðimörk. Fitoterapia. 2013;89:167–74.
16. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Yuan D, Yoshikawa M, Hayakawa T, Muraoka O. Iridoid og acyclic monoterpene glycosides, kankanosides L, M, N, O, and P from Cistanche tubulosa. Chem Pharm Bull. 2010;58(10):1403–7.
17. Li SL, Song JZ, Qiao CF, o.fl. Ný stefna til að kanna hratt möguleg efnamerki fyrir mismunun milli hráefnis og unnar Radix Rehmanniae með UHPLC-TOF-MS með fjölþátta tölfræðilegri greiningu. J Pharm Biomed Anal. 2010;51(4):812–23.
18. Peng F, Chen J, Wang X, Xu CQ, Liu TN, Xu R. Breytingar á magni fenýletanóíð glýkósíða, andoxunarvirkni og önnur gæðaeiginleika í Cistanche deserticola sneiðum með gufuvinnslu. Chem Pharm Bull. 2016;64:1024–30.
19. Ma ZG, Tan YX. Innihaldsbreytingar á sex fenýletanóíð glýkósíðum undir gufutíma með víni í Desertliving Cistanche. Chin Trad Pat ent Med. 2011;33(11):1951–4.
20. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. Áhrif gufuferlisins á gæði cistanche deserticola eftir uppskeru til lyfjanotkunar við sólþurrkun. Biol Pharm Bull. 2016;39(12):2066–70.
21. Cui Q, Pan Y, Zhang W, Zhang Y, Ren S, Wang D, Wang Z, Liu X, Xiao W. Umbrotsefni akteósíðs í mataræði: snið, einangrun, auðkenning og lifrarverndandi getu. J Agric Food Chem. 2018;66(11):2660–8.
22. Cui Q, Pan Y, Bai X, Zhang W, Chen L, Liu X. Kerfisbundin lýsing á umbrotsefnum echinacoside og acteoside frá Cistanche tubulosa í rottuplasma, galli, þvagi og saur byggt á UPLC-ESI-Q-TOF -FRÖKEN. Biomed Chromatogr. 2016;30(9):1406–15.
23. Bertelli M, Kiani AK, Paolacci S, Manara E, Kurti D, Dhuli K, Bushati V, Miertus J, Pangallo D, Baglivo M, Beccari T, Michelini S. Hydroxytyrosol: náttúrulegt efnasamband með efnilega lyfjafræðilega virkni. J líftækni. 2020;309:29–33.
24. Touaibia M, Jean-François J, Doiron J. Cafeic Acid, fjölhæfur lyfjafræði: yfirlit. Mini Rev Med Chem. 2011;11(8):695–713.

Athugasemd útgefanda

Springer Nature er hlutlaus með tilliti til lögsögukrafna í birtum kortum og stofnanatengslum.