Stutt innöndun Sevoflurans getur dregið úr myndun gliumöra eftir blóðþurrðarskemmdir heilaskaða hjá nýburarottum. Part 2

Rauntíma PCR

Heildar-RNA var dregið úr hippocampal vefjum hvolpa 12, 24 og 48 klukkustundum eftir aðgerð með því að nota TRIzolreagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, Bandaríkjunum). Viðbótar-DNA var búið til með því að nota háþróað Superscript II RT-PCR sett (Invitrogen).

Blóðþurrðar- og blóðþurrðaráverkar vísar til meinafræðilegs ástands af völdum blóðþurrðar í heila, súrefnisskorts, efnaskiptatruflana og taugafrumuskemmda vegna sjúkdóma í hjarta- og æðakerfi og heila- og æðakerfi. Með félagslegum framförum og lífsstílsbreytingum verða súrefnisskortur-blóðþurrðarskaðar sífellt algengari. Þetta ástand getur valdið mörgum skaða á heilsu manna, þar á meðal haft áhrif á greind og minni.

Þó súrefnisskortur og blóðþurrð geti valdið skertri heilastarfsemi, þýðir það ekki að minnið verði fyrir neikvæðum áhrifum. Þvert á móti getum við bætt minni og aukið skilvirkni heilans með réttum aðferðum. Hér eru nokkrar leiðir til að bæta minni þitt:

1. Heilbrigt mataræði: Áhrif mataræðis á minni eru mjög mikilvæg. Matvæli sem eru rík af próteini, vítamínum og steinefnum geta hjálpað til við að viðhalda heilbrigðu taugakerfi og hugsunarstarfsemi.

2. Æfðu meira: Líkamsrækt getur stuðlað að blóðrásinni, aukið súrefnisflæði, aukið ónæmi líkamans og dregið úr hættu á sjúkdómum. Með hreyfingu geturðu bætt minnisgetu þína.

3. Styrkja sjálfstraust: Sjálfstraust er mikilvægur þáttur í minni einstaklings. Ef þú trúir því að þú getir klárað ákveðið verkefni muntu auðveldlega ná þeim árangri sem þú vilt og þú getur líka bætt minni þitt á áhrifaríkan hátt.

Það má sjá að súrefnisskemmdir og blóðþurrðaráverkar eru ekki ástand sem mun óhjákvæmilega skaða minni mannsins. Svo lengi sem við náum tökum á réttum aðferðum og hugsum vel um heilann getum við tekið heilbrigða framtíð með jákvæðu hugarfari. Það má sjá að við þurfum að bæta minnið og Cistanche deserticola getur bætt minnið verulega, vegna þess að Cistanche deserticola hefur andoxunar-, bólgueyðandi og öldrunaráhrif, sem geta hjálpað til við að draga úr oxun og bólguviðbrögðum í heilanum og vernda þar með heilsu taugakerfisins. Að auki getur Cistanche deserticola einnig stuðlað að vexti og viðgerð taugafrumna og þannig aukið tengsl og virkni tauganeta. Þessi áhrif geta hjálpað til við að bæta minni, nám og hugsunarhraða og geta einnig komið í veg fyrir þróun vitsmunalegrar truflunar og taugahrörnunarsjúkdóma.

Smelltu vita leiðir til að bæta heilastarfsemi

Flúrljómandi SYBR Green I litarefni (SYBR Green PCRMaster Mix, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) og 1μL af öfugu umrituðu viðbótar-DNA var notað til að greina DNA nýmyndun með rauntíma PCR með HIF-1 -sértækum frumurum.

Í rauntíma DNA mögnunarkerfinu í snúningsgeninu (Corbett Research, Sydney, Ástralíu), var PCR framkvæmt með eftirfarandi lotum: eðlisbreytingu við 95 gráður í 15 mínútur; 40 lotur af 95 gráður (20 sekúndur), glæðing við 58 gráður í 25 sekúndur , og draga niður við 72 gráður í 35 sekúndur. Vöktun á flúrljómandi vöru var framkvæmt í langan tíma við 72 gráður.

Hugbúnaður fyrir rótargenagreiningu (Corbett Research) var notaður til að staðla heimilisgenið GAPDH og mæla hlutfallslega genatjáningu. Allar grunnraðir eru sýndar í töflu 1.

Nissl litun
Rottuheila var útbúin í sneiðar 28 dögum eftir aðgerð eins og lýst er hér að ofan fyrir ónæmisvefjafræði. Hver heili var skorinn í röð og þrír svipaðir hlutar heilans voru valdir fyrir Nissl-litun.

Með því að nota Nikon C1 stafræna smásjá myndavél (Nikon Corporation, Tókýó, Japan) voru teknar dæmigerðar örmyndir af hippocampal CA1, CA3 og DGareas. Nokkrar frumur taldar í hverjum hluta þriggja hluta voru gerðar á blindan hátt með því að notaImageJ hugbúnað.

Hegðunarpróf

Rottur voru vannar af eftir 3 vikur, skipt í þrjá til fimm hópa og haldið í búrum í samræmi við hópúthlutun. Hegðunarpróf voru gerð á P28–P33 (þ.e. 21–26 dögum eftir aðgerð) rottum, eins og áður hefur verið lýst (Wang o.fl., 2019a) )en með smá breytingum. Til að útiloka áhrif varphringsins á hegðun nagdýra voru aðeins karlkyns rottur prófaðar.

Morris vatnsvölundarhús

Morris vatns völundarhúspróf voru notuð til að meta staðbundna náms- og minnishæfileika P28–P33 rotta (Wang o.fl., 2019a).

Prófun samanstóð af tveimur áföngum þar á meðal þjálfunarhlutanum og rýmisleitarprófi. Í 5 daga í röð voru fjórir þjálfunarhlutar innleiddir daglega sem hófust klukkan 8:00am morgun. Til prófunar á vettvangsgreiningu voru 10 rottur úr hverjum hópi settar í vatnið á mismunandi stöðum, stungið, snúið að laugarveggnum.

Ef rotta fann pallinn innan 90 sekúndna neyddist hún til að vera á pallinum í 20 sekúndur og tíminn sem það tók að greina pallinn var skráður sem flóttatíminn. Hver prófunarlota var 90 sekúndur og flóttatíminn var mældur sem tíminn frá því að rottan var sett í vatnið þar til hún fór um borð á pallinn.

Ef rottunni tókst ekki að finna pallinn innan 90 sekúndna var upptakan stöðvuð og nám og minnisleiðsögn framkvæmd (tilraunamaður notaði langa stöng til að leiða rottuna að pallinum og leyfði henni að vera á pallinum í 20 sekúndur til að læra). Meðan á prófinu stóð var flóttatími rotta sem ekki komust inn á sviðið skráð sem 90 sekúndur.

Í staðbundnu prófuninni sem framkvæmd var á sjötta degi prófunar var pallurinn fjarlægður og rottan sett í gagnstæðan fjórðung og henni leyft að synda í 90 sekúndur. Hraði sundsins, töf á flótta og fjöldi skipta sem þeir fóru yfir staðinn þar sem pallurinn var áður staðsettur voru teknar upp af myndbandsrakningarkerfinu (Shanghai MobileDatum Ltd., Shanghai, Kína).

Fjöðrunarpróf

Fjöðrunarprófið var gert á P28–P32 rottum til að meta hreyfivirkni þeirra og byrjaði klukkan 15:00 á hverjum degi. Lárétt plastreipi með 0,5 cm í þvermál var komið fyrir í 45 cm fjarlægð frá jörðu og rottum var stýrt til að halda plastreipi með báðum efri útlimum, en þá var tíminn þar til rottan féll sem stöðvunarleynd. Prófinu lauk ef: (i) rottan féll; (ii) biðtíminn var meira en 60 sekúndur; eða (iii) reipið var gripið af aftari útlimum.

Opið vettvangspróf

Prófanir á opnum vettvangi voru gerðar á P28 rottum með útibúnaði sem samanstendur af plexiglerkassa (100 cm × 100 cm; Borj Sanat, Teheran, Íran) umkringdur 45- cm háum vegg, með gólfi skipt í 16 ferninga. Miðsvæðið var 50 cm × 50 cm svæði í miðju vallarins. Hver rotta var sett fyrir sig í miðju leikvangsins og leyft að skoða án takmarkana í 10 mínútur.

Myndbandsmælingarkerfi (Borj Sanat) var notað til að skrá og greina heildarferðaáætlunina (sem vísbending um æfingarvirkni) og tíma sem varið er á miðsvæðinu (sem vísbending um kvíðahegðun) (Zhai o.fl., 2019).

Golgi litun

Eftir að hegðunarprófunum lauk (þ.e. 26 dögum eftir aðgerð) voru fimm rottur valdar af handahófi úr hverjum hópi. Golgi litun var gerð á 150-μm þykkum frosnum heilahlutum með því að nota FD Rapid Golgi Stain Kit (FDNeuroTechnologies, Columbia, MD, USA) samkvæmt samskiptareglum framleiðanda.

ImageJ hugbúnaður var notaður til að greina hryggþéttleika (hryggfjölda á 10 μm) hverrar tauga. Hryggir voru taldir á tveimur eða þremur sekúndum dendrithlutum.

tölfræðigreining

SPSS 17.0 fyrir Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) var notað til að greina gögnin, sem eru sýnd sem meðaltal ± staðalvilla meðaltals (SEM). Shapiro-Wilk prófið var notað til að prófa eðlilega forsendur allra samfelldra breyta. Auk þess var farið í einstefnu dreifnigreiningu fylgt eftir með Tukey's post hoc margfeldissamanburðarprófum í sameiningu tilrauna.

Ef gögnin stóðust ekki eðlilegar forsendur var Kruskal-Wallis H prófið eða Mann-Whitney Utest lokið sérstaklega. Töf við flótta var greind út frá tvíhliða dreifnigreiningu fyrir ítrekaðar mælingar. P gildi < 0.05 voru talin tölfræðilega marktæk.

Niðurstöður

SPC bætir tap af taugafrumum í hippocampal taugafrumum

Hippocampus, þar á meðal þrjú svæði sem skoðuð voru, tengist námi og minni (Jung o.fl., 2020). Eftir atferlisprófun var Nissl litun gerð til að skoða hippocampal arkitektúr.

Í HI hópnum minnkaði lífvænlegur taugafrumuþéttleiki samanborið við sýndarhópinn. Hins vegar fjölgaði taugafrumum hjá dýrum sem voru útsett fyrir SPC; þessum áhrifum var snúið við með YC-1, sem dró úr taugafrumum (Mynd 1A). Þetta fyrirbæri varð vart á CA1, CA3 og DG svæðum hippocampus (P< 0.05; Figure 1B–D).

SPC bætir og dregur úr dendritic hrygg þéttleika á the hippocampal CA1 svæði

Golgi litun var notuð til að greina CA1 pýramída taugafrumur hryggþéttleika (Mynd 2A). Vegna þess að stærðir hryggja eru mjög mismunandi (td greinóttar hnúkar, þunnar eða sveppir), komumst við aðeins að þeirri niðurstöðu að þéttleiki hnúðahryggja væri verulega aukinn í HIS hópnum samanborið við HI hópinn (P < 0).{{6 }}5), en þéttleiki dendritic hryggja var minnkaður í HIS + YC-1 hópnum samanborið við HIS hópinn (P < 0,01; mynd 2B).
SPC bætir PSD95 og GAP43 tjáningu í hippocampus

Við metum tjáningu taugamótatengdra próteina GAP43 og PSD95 til að ákvarða hvort þau væru hindruð af glial örum. HI dró verulega úr PSD95 (P < 0.01) og GAP43 (P < 0,05) próteintjáningu samanborið við sýndarhópinn (Mynd 2C–E). Í samanburði við HIS hópinn lækkuðu tjáningarstig PSD95 og GAP43 sérstaklega eftir YC-1inndælingu.

Myndun astrogliosis og glial ör skaða hippocampal arkitektúr eftir HI

Næst reyndum við að sannreyna hvort sevóflúran bætir nám og minnisvirkni með því að vernda hippocampalarkitektúrinn og draga úr astrogliosis. HIE í nýburum olli taugafrumum apoptosis í hippocampus, sem og viðbragða astrogliosis á infarct svæðinu sem þróast síðan í glial ör (Rolls o.fl., 2009).

Í HI hópnum sýndu CA1 og CA3 pýramídalögin og DG svæði augljósa fækkun taugafrumna (P < 0.01, P < 0.001; myndir 3E og 4C), auk aukins fjölda stjarnfrumna með mismunandi formfræðilegum breytingum (P < 0,001; myndir 3C og 4B). Við metum tjáningu GFAP og NeuN á þremur svæðum í vinstri hippocampus með því að nota ónæmisvefjaefnafræði og western blotting greiningu.

Niðurstöður okkar sýndu að samanborið við sýndarhópinn voru stjarnfrumur virkjaðar í HIhópnum, settar inn í CA1 (Mynd 4A) og CA3 (Mynd 3A) pýramídalagið og umkringdu taugafrumur í DG (Mynd 3B). Óhófleg astrogliosis leiddi til frekari útvíkkunar á gljáferlum í átt að eðlilegum taugafrumum, sem myndaði afbrigðilegt vegglíkt stjarnfrumunet (myndir 3A, B og 4A).

Þar að auki jókst GFAP ónæmissvörun (myndir 3C, D og 4B, E) og próteinmagn (P < 0.01; mynd 4E), á meðan NeuN ónæmissvörun minnkaði (P < {{7} }.01 orP < 0.001; myndir 3E, F og 4C). Til að sannreyna frekar myndun glial ör, metum við tjáningarstig taugakanpróteins og ónæmissvörun í hippocampus (myndir 5A, B og 6A).

Niðurstöður tvímerkingar ónæmisflúrljómunar leiddu í ljós athyglisverðan mun á flúrljómun styrkleika neurocan+/GFAP+ ónæmislitunar á milli HI og sýndarhópa (P < 0.001, P < 0,05, P < 0,01; Myndir 5G, H og 6D), í samræmi við Western blot niðurstöður (P< 0.01; Figure 6F).

SPC dregur úr astrogliosis og glial örmyndun í hippocampus

Næst kannaði rannsókn okkar hvort SPC dregur úr glial örmyndun. Samanborið við HI hópinn var ónæmissvörun GFAP (mynd 5C, D og 6C) og taugafruma (myndir 5E,F og 6B) í HIS hópnum verulega minnkað í hippocampus (P < 0).{{6} }1 eða P < 0,001).

Aftur á móti jókst tjáning GFAP og taugafruma í HIS + YC-1 hópnum sérstaklega samanborið við HIS hópinn og var ekki frábrugðin HIS + YC-1 og HI hópunum (P > 0.05; mynd 6E og F).

Að auki var NeuN ónæmisjákvæðni hækkað og uppbygging virtist skipulegri í HIS hópnum samanborið við HI hópinn, sem var snúið við með YC-1 (myndir 3E, F og 4C).

For more information:1950477648nn@gmail.com