Að efla krabbameinsvirkni Aspergillus Favus „endophyte Of Jojoba“ Taxol með samtengingu með gullnanóögnum sem miðlað er af ‑geislun Ⅱ
May 30, 2023
Efnafræðileg auðkenni og krabbameinsvirkni A. favus Taxol
Hugsanlegir TLC blettir áA. favusTaxól var skreytt af og leyst upp í metanóli,og efnafræðilegir eiginleikar efnasambandsins voru leystir úr mismunandi HPLC,HNMR, og FT-IR litskiljunar- og litrófsgreiningar. Róteind kjarnasegulmagnaðirómun merki (1 H NMR) afA. favusútdregin Taxol var dreift á milli 1.0og 8.0 ppm, með þremur uppleystum róteindamerkjum við 1.0–3.0 ppm sem samsvarar metýl,asetat og asetýlenhópa, en róteindamerki við 6,5–9.0 ppm sem samsvarararómatísku einingarnar (mynd.3). Mynstur og dreifing róteinda merki umA. favusTaxol staðfestir byggingareinkenni og líkt sýnisins við staðlinumTaxol (mynd.3). Þar að auki, Taxol ofA. favushefur sömu FTIR litróf og ekta Taxol.Toppurinn 3393,3 cm−1var úthlutað fyrir hýdroxýl (OH), en toppurinn 2923,5 varúthlutað alifatísku CH teygjunni, topparnir við 1661.0 cm−1samsvara C=Oteygjutíðni. Tindarnir sem mælst hafa í 1452.0 cm−1og 1404.0 var vísað tilNH teygjutíðnin, en toppurinn við 1109,0 cm−1vísar til karbónýlhópsinssúrefnis teygjutíðni. Topparnir á bilinu 1020,0 til 979,77 cm−1voruvísað til tilvistar arómatískra C og H beygja. Að lokum, litróf mynsturFTIR varðandi starfhæfa hópaA. favusTaxol var eins og ektaTaxol (mynd.3). Að lokum, frá litskiljunar- og litrófsgreiningum, er hugsanlegtsýni hefur verið leyst og staðfest sem Taxol efnasambönd samanborið við ektaefnasamband.
Smelltu hér til að kynnast kínverskum jurtum CistancheVirkni gegn fjölgun
Áhrif mismunandi tegunda miðils á Taxol framleiðslu eftir A. favus
Áhrif miðlungs samsetningar á Taxol framleiðslu afA. favushefur verið metiðmeð því að rækta á PDB, M1D, Czapek's-Dox og maltþykkni. Eftir menningarkúbuTaxol var dregið út og magnmælt eins og lýst er í Efni og aðferðum. Frániðurstöður á mynd.4, hæsta Taxol ávöxtun umA. favusvar fengin með því að rækta á maltiútdráttur (170 µg/l) og Czapek's-Dox (166 µg/l), samanborið við PDB vaxtarmiðil sem viðmiðunarefni(89 µg/l). Þannig er afrakstur Taxol umA. favusjókst um það bil 2 sinnummeð því að vaxa á Czapek's-Dox og maltþykkni miðli, samanborið við samanburðarmiðil.Svo, frekari hagræðingarrannsóknir til að hámarka Taxol ávöxtunina meðA. favusmeð svarinuyfirborðsaðferðafræði tölfræðileg nálgun hefur verið innleidd.
Hagræðing á lífferlisbreytum með svörun yfirborðsaðferðafræðiPlackett–Burman hönnunarskimun fyrir mikilvæga þætti
Afrakstur Taxol umA. favushefur verið fínstillt með tölfræðilegri tilraunahönnun áPlackett-Burman [18, 28]. Lágmarks- og hámarkssvið valinna færibreytnavaldir af Plackett-Burman hönnuninni voru teknar saman í töflu2. Taxól styrkur varákvarðað af TLC og HPLC. Allar tilraunirnar voru
var tekið tillit til meðalstyrks Taxols. Tölfræðileg greining á þessari hönnun sýnirthat the model F-value of 5.98 implies the model is significant and values of "Prob>F" minnafram í þríriti ogen 0.0500 eins og greint er frá í töflu3. Raunveruleg og spáð ávöxtun Taxol sem svar viðtilraunabreytur eins og þær komu í ljós frá Plackett-Burman hönnuninni voru sýndar fráfylki í töflu4. „Pred R-Squared“ á 0.3061 er ekki eins nálægt „Adj R-Squared“af 0.5760 eins og venjulega má búast við. Hámarks raun (255,35 µg/l) og spáð(280,4 µg/l) afrakstur Taxol umA. favusá verkefnahönnun eftir Plackett-Burman hönnunvar fengin við keyrslu # 8. Frá fengnum gögnum (mynd.4), hæsta Taxol ávöxtun umA. favus(225 µg/l) fékkst með því að nota maltþykkni (20 g/l), pepton (2 g/l), súkrósa (20 g/l), soyton(2 g/l), cystein (0,5 g/l), glútamín (0,5 g/l), nautakjötseyði (1 g/l), við ræktunarhitastig30 gráður, upphaflegt pH 6,0, og eftir 12 daga ræktun á hristingarhraða (150 rpm). Á þessu menningarlegakeyra (12), ávöxtun Taxol afA. favusjókst verulega um 1,4 falt,miðað við samanburðarmiðilinn (170 µg/l). Líkan minnkun, viðbragðsbreyting,og Adeq Precision mæla merki-til-suð hlutfallið, og hlutfall sem er hærra en 4 er æskilegt[46]. Byggt á færibreytunni áætlaðri og með því að beita margfaldri aðhvarfsgreiningu átilraunagögn, prófunarbreyturnar og svörunarbreytan tengdust eftirfarandilíkanjafna: fyrsta stigs jöfnu hvað varðar kóðaða þætti — Taxol Con.= plús 11,51 plús 1,91E plús 2,92 J plús 0,81 K. Raunverulegt og spáð magn Taxol meðA. favusá Plackett-Burmann hagræðingu lífferli eru teknar saman í töflu4og mynd.4. Raunverulegt hámark(255,35 µg/l) og spáð (280,4 µg/l) uppskeru af Taxol umA. favusá verksmiðjuhönnun eftirPlackett-Burman hönnun var fengin í keyrslu #8 við miðlungs íhlut. Áhrif indisýnilegar breytur eins og þær komu í ljós frá Plackett-Burman hönnuninni voru fulltrúar í ParetoMynd sem sýnir mikilvægisröð breyta sem taka þátt í Taxol framleiðslu Mynd.4. Þannig eru mikilvægustu breyturnar sem hafa áhrif á framleiðni Taxol með því aðA. favusvoru cystein,pH og ræktunartími eins og kemur fram í Plackett-Burman hönnuninni.
Miðlæg samsett hönnun var tekin upp til frekari hagræðingarrannsókna með því að notaveruleg breytu frá Plackett-Burman hönnuninni. Úrslit úr 20 keyrslum af þremurbreytur með jákvæð áhrif sýndu að framleiðsla Taxol var mjög fjölbreyttmeð ástandinu voru prófuð á bilinu 96,5–302,7 µg/l. Hámarksávöxtun áTaxol eftirA. favus(302,7 µg/l) sást með því að nota cystein (0,50 g/l) við pH 6,0 og ræktaðí 15 daga eins og skráð er í töflu5. Lágmarksframleiðsla Taxol var skráð klkeyrsla númer 15, þar sem cystein (1.0 g/L) við pH 7.0 og ræktað í 7 daga. Tölfræðingreining á línulegu líkanshönnuninni sýnir að F-gildið er 87,08 sem gefur til kynnasignificance of the model, and the values of "Prob>F" minna en 0.050 gefa til kynna þá gerðskilmálar eru mikilvægir (tafla6). Þess vegna eru cystein, pH og ræktunartími mikilvægurfyrirmyndarskilmálar. Greiningin leiddi í ljós að „Pred. R-Squared“ af 0.8972 er í sanngjörnu lagisamkomulagi við "Adj. R-Squared" af 0.9315. "Adeq. Precision" hlutfall upp á 30.800 málmerki-til-suð hlutfallið, þar sem hlutfallið stærra en fjögur er æskilegt, er Adeq.Niðurstöðurnar sem fengust úr CCD tilrauninni voru greindar með ANOVA sem gafeftirfarandi aðhvarfsjöfnu á stigi Taxol framleiðslu: fyrsta stigs líkan jöfnuðurskilmálar um kóðaða þætti — Taxol Conc.{{0}} plús 11,47 plús 1,60A plús 2,43B plús 0,67C. Hið þrívíddasvörunaryfirborðsferlar sem sýna áhrif víxlverkana sem hafa mest marktæktcant breytur, cystein, pH og ræktunartími, voru sýndar á mynd.4.
Tafla 2Lágmark og hámarksvið valinna færibreytnaí P-BD til hagræðingar áTaxól framleiðsla
Tafla 4Plackett-Burman hönnun til að meta þætti sem hafa áhrif á Taxol framleiðslu með því aðA. favus
breytur með jákvæð áhrif sýndu að framleiðsla Taxol var mjög fjölbreyttmeð ástandið sem var prófað á bilinu 96,5–302,7 µg/l. Hámarksávöxtun áTaxol eftirA. favus(302,7 µg/l) sást með því að nota cystein (0,50 g/l) við pH 6,0 og ræktaðí 15 daga eins og skráð er í töflu5. Lágmarksframleiðsla Taxol var skráð klkeyrsla númer 15, þar sem cystein (1.0 g/L) við pH 7.0 og ræktað í 7 daga. Tölfræðingreining á línulegu líkanshönnuninni sýnir að F-gildið er 87,08 sem gefur til kynnasignificance of the model, and the values of "Prob>F" minna en 0.050 gefa til kynna þá gerðskilmálar eru mikilvægir (tafla6). Þess vegna eru cystein, pH og ræktunartími mikilvægurfyrirmyndarskilmálar. Greiningin leiddi í ljós að „Pred. R-Squared“ af 0.8972 er í sanngjörnu lagisamkomulagi við "Adj. R-Squared" af 0.9315. "Adeq. Precision" hlutfall upp á 30.800 málmerki-til-suð hlutfall, þar sem hlutfall stærra en fjögur er æskilegt, Adeq.Niðurstöðurnar sem fengust úr CCD tilrauninni voru greindar með ANOVA sem gafeftirfarandi aðhvarfsjöfnu á stigi Taxol framleiðslu: fyrsta stigs líkanjöfnuskilmálar um kóðaða þætti — Taxol Conc.{{0}} plús 11,47 plús 1,60A plús 2,43B plús 0,67C. Hið þrívíddasvörunaryfirborðsferlar sem sýna áhrif víxlverkana mikilvægustubreytur, cystein, pH og ræktunartími, voru sýndar á mynd.4.
breytt maltþykkni miðill sem fæst úr RSM með Plackett-Burman hönnun. Eftirmenningarræktun við staðlaðar aðstæður, Taxol var dregið út og magnmælt með TLCog HPLC. Frá þeim niðurstöðum sem fengust (mynd S1) eru engin marktæk áhrif á Taxol proleiðni við -geislun í mismunandi skömmtum.
Nýmyndun AuNPs og samtengingar við A. favus Taxol miðlað af - geislun
Pólývínýlpýrrólídón(PVP)-hettaðar nanóagnir úr gulli (AuNP) voru smíðaðarmeð því að blanda PVP við gull (III) klóríð, miðlað með gammageislun í skömmtum af{{0}}.25–10.0 kGy og þróuð PVP-AuNP voru metin út frá UV–Vis, FT-IR,og XRD greiningar. Sýnd var skissan af myndun Taxol-PVP-AuNPs samsteypunnará mynd.5. Fylgst var með stærð þróaðra PVP-AuNP sem miðlað er af 1.0 kGy gammageislummeð DLS, og það var um 50 nm (mynd.5). Frá HRTEM myndinni, væntanlegtlögun og stærð tilbúnu AuNPs var sýnd með kúlulaga ögnum innannanóskalinn er á bilinu 20 til 30 nm með aðalþvermál að meðaltali 25 nm (mynd.5). Svipaðar niðurstöður komu fram með PVP-AuNP sem miðlað var af gammageislun [49, 50]. Litrófseiginleikar þróaðra AuNPs sem svar við mismunandi skömmtum af gammageislar voru metnir út frá UV–Vis greiningu, með hámarks skráð frásogsrófá λ540nm við 1,5–3.0 kGy. Að auki var fylgst með þróun AuNPsfrá sjónrænni skoðun, með trúverðugum gulleitum til brúnum lit, sem sýnir mynduninaaf AuNPs.
Efnasamtenging Taxol og PVP-AuNPs hefur athugað frá FT-IR litrófinugreiningu, eins og kemur í ljós af lítilsháttar breytingu á styrkleika og flutningshlutfallistarfrænir hópar Taxol-PVP-AuNPs samtenginga samanborið við Taxol sem viðmiðunarhóp.Styrkur toppsins er 3393,3 cm−1úthlutað fyrir hýdroxýl (OH) í Taxol-PVPAuNPs hópnum var fjölgað um það bil 3 sinnum samanborið við innfædda Taxol, sem leiddi í ljósefnateygja á hýdroxýlhópunum (mynd.5). Sem og styrkur tindanna1661.0 sm−1sem vísar til C=O teygjutíðni var mjög aukin um það bil 10brjóta saman við samtengingu við PVP-AuNP, sem tryggir teygjuna á C=O tengingunum. Thestyrkleiki toppsins 2923,5 sem samsvarar alifatískri CH teygju var nokkuð stöðugur. Alítilsháttar breyting á styrkleika toppa sem mælst hefur í 1452.0 cm−1og 1404,0 cm−1hefur veriðsést vegna NH teygjutíðni. Styrkur toppsins 1109,0 cm−1afteygjutíðni karbónýlhóps-súrefnis minnkaði lítillega við samtengingu viðPVP-AuNP.
Kristal/líkamleg uppbygging Taxolsins við samtengingu við PVP-AuNPs varleyst úr XRD greiningu (mynd.5). Frá XRD, Taxol-PVP-AuNPs samsortium hafði sömu byggingarstillingu, kristalstefnu og stærð frumbyggjaTaxol, sem tryggir skort á neikvæðum áhrifum á kristalbyggingu innfæddra Taxols. Frániðurstöðurnar, formlaus og kristalbygging Taxol-PVP-AuNPs samanborið viðinnfæddur Taxol hefur verið staðfestur. Frá XRD greiningu, samtengingu á Taxol ogPVP-AuNPs hefur verið leyst eins og kemur í ljós frá sveigjueiginleikum varðandi2ɵ=38.18 gráður, 44.01 gráður, 64.57 gráður, 77.67 gráður og 81.74 gráður sem lýstu athugunum Braggansá (111), (200), (220), (311), og (222), í sömu röð. Allir tindar tengdust hugsjóninnikort sameiginlegu nefndarinnar um duftdreifingarstaðla (JCPDS) AuNPs (JCPDS)kort nr. 04–0784) [51]. Svo, styrkur kristalla tilbúnu AuNPs var sýndur,veitir andlitsmiðjuða kúbika (fcc) kristalla uppbyggingu. Að auki er einfaldlegaformlaust hámark við 19,25 gráður fyrir Taxol sem er innifalið í skipulagi og varanleikaAuNPs. XRD mynstrið staðfesti árangursríka samtengingu Taxol og PVP-AuNPs.Meðalkristallastærð innbyggðu AuNPs var ákvörðuð út frá Scherrer'sjafna [52], og það var 20,2 nm fyrir Taxol-PVP-AuNPs hópinn sem miðlað var af gammageislar eins og getið er um í jöfnunni:
þar sem D er meðalkristallastærð, er full breidd við hálft hámark, λ er röntgengeislinnbylgjulengd, θ er horn Braggs,ogk er fasti.
Krabbameinsvirkni Taxol-PVP-AuNPs samtenginga
Thevirkni Taxol-PVP-AuNPs gegn útbreiðslusamtengingar voru metnar á mótiHEPG-2 og MCF-7 frumulínur, staðlaðar í innfædd Taxol og AuNP, sérstaklega. Frániðurstöðurnar (mynd.6), lífvirkni Taxols jókst verulega við samtengingumeð AuNPs, samanborið við innfæddan Taxol sem stjórn. Eins og kom fram frá IC50gildi, Taxol-PVP-AuNPs hópur sýndi marktæka virkni gegn HEPG-2 (2,2 µg/ml) ogMCF-7 (3,3 µg/ml) samanborið við innfædd Taxol og AuNP sérstaklega. Svo, við samtengingumeð AuNPs jókst virkni Taxol tvöfalt gagnvart frumulínunum sem prófuðu.Varðandi lífvirkni AuNPs, þávirkni gegn fjölgunaf Taxol-PVP-AuNPhópnum fjölgaði um það bil 4 sinnum samanborið við AuNPs sem viðmiðunarefni. Athyglisvert,virkni Taxol-AuNPs samsteypunnar var líklega í samræmi við hið ekta Taxol.
Sýklalyfjavirkni Taxol og tilbúin AuNPs gegn mismunandiÖrverur
The asýklalyfjavirkniaf útdregnuA. favusSamtök Taxol og Taxol-AuNPsvar metið gegn ýmsum fjölónæmum bakteríum og sveppum (tafla7). Við samtengingumeð AuNPs hefur örverueyðandi virkni Taxol verið mjög aukin samanborið viðtil innfæddra Taxol og AuNPs sérstaklega, eins og kemur í ljós af þvermál hömlunarsvæði hinna prófuðu örvera (mynd.6). Eins og sýnt er á mynd.6, Taxol-AuNPS samstarfsaðilitium sýndi mesta virkni á mótiE. þyrpingar(11 µg/ml),C. albicans (12 µg/ ml), ogE. coli(14 µg/ml), samanborið við innfæddaA. favusTaxol og ekta einn. Themeiri virkni Taxol við samtengingu við AuNPs staðfestir aðgengi,leysni og virkni Taxol til að bindast við marktúbúlínpróteinið in vivo.
Biðjið um meira:
Netfang:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plús 86 15292862950
