Lífvirkni Karanda (Carissa Carandas Linn.) Ávaxtaþykkni fyrir nýjar snyrtivörur

Tengiliður:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Ágrip

Markmið þessarar rannsóknar var að ákvarða heildarfenólinnihald (TPC), andoxun, öldrun og bakteríudrepandi virkni Carissa carandas Linn., og miðar að nýju plöntuuppsprettunum sem eru notaðar fyrir snyrtivörur þeirra. Tvö skilyrði (ferskt og þurrkað) og þrjú stig (óþroskuð, þroskuð og fullþroskuð) C. carandas voru dregin út með etanólískri blöndun. Folin-Ciocalteu próf var notað til að ákvarða TPC. 2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl (DPPH) og 2,2'-azínóbis(3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýru) (ABTS) próf voru notuð til að meta andoxunarvirkni. Hindrandi týrósínasavirknin var mæld með því að nota breytta dópakróm prófið. Andöldrun var metin með því að hindra kollagenasa og elastasa og bakteríudrepandi virkni. Niðurstöður sex útdrátta úr C. carandas sýndu að hæsta fenólinnihald og elastasahömlun ferskra ávaxta er fullþroskað stig voru 100.31 ± 2.64 mg GAE/g útdráttur og 14.11 prósent ± 0.95 prósent , í sömu röð. Ferskir ávextir á óþroskaða stigi sýndu að sterkasta hlutfall DPPH IC50 og kollagenasahemjandi virkni var 29,11 ± 0,23 ug/mL og 85,94 prósent ± 2,21 prósent, í sömu röð. Etanólútdrátturinn úr óþroskuðum þurrkuðum ávöxtum sýndi hæstu andoxunarvirknina í ABTS prófinu, með IC50 upp á 0,17 ± 0,01 ug/mL. MBC sýndi þurrkaðir ávextir þroskaðir stigs anti-Cutibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis og Staphylococcus aureus stofnar voru 25,0, 25,0 og 16,25 mg/ml, í sömu röð. Ferskir ávextir á þroskastigi sýndu að sterkasti hömlunartýrósínasinn var 93,88 prósent ± 5,64 prósent. Niðurstaða þessarar rannsóknar bendir til þess að ferskir ávextir af C. carandas ávaxtaþykkni hafi mikla möguleika sem ný snyrtivörur til að vinna gegn öldrun og húðhvíttun. Þurrkaðir ávextir í þroskuðu stigi þykkni hefur áhrifaríkasta innihaldsefnið fyrir lyf gegn unglingabólum.

Lykilorð: Öldrunarlyf, bakteríudrepandi, Carissa carandas, snyrtivörur, karanda

Flavonoids, helstuþáttur í Cistanche, ergegn öldrun.

KYNNING

Náttúrulegar fegurðarvörur hafa náð vaxandi vinsældum frá neytendum, sem samsvarar alþjóðlegum snyrtivörumarkaðispár um 429,8 milljarða dollara árið 2022.[1] Öldrun húðarinnar er fyrir áhrifum af innri og ytri þáttum eins og minnkun á endurnýjunarfrumum, lækkun á hormónamagni, sólarljósi osfrv.[2] Andoxunarefni eru efni sem hjálpa til við að útrýmae sindurefna og minnka magn efnasambanda til að eyðileggja ekki frumurnar.[3] Ávöxtur Karanda (Carissa carandas Linn.) hefur hvítan lit til að vera bleik-rauður þar til hann er dökk-fjólublár of næstum svartur þegar hann er fullþroskaður með súrt bragð, beiskt og astringent. Þar að auki er það gagnlegt til að gróa sár, draga úr hita, hjartasjúkdómum osfrv.[4] Að auki, ávextir af C. carandashafa fundið jurtaefnafræðilega innihaldsefni, þar á meðal C-vítamín,[5] anthocyanin,[6] flavonoids, glýkósíð, alkalóíða, kolvetni, steról, terpenoids, tannín og sapónín.[7] Þess vegna er markmið þessarar rannsóknar hannað til að rannsaka andoxunarefni, andtyrosinasa, öldrun og bakteríudrepandi virkni ýmissa C. carandas ávaxtaþykkna. Niðurstöðurnar geta veitt ávinninginn til að nota sem ný snyrtivöruforrit.

EFNI OG AÐFERÐIR

Plöntuefni

C. carandas ávöxtum var safnað af Dr. Juthaporn Kwansang frá Prachathipat hverfi, Pathum Thani héraði, Taílandi., sem hefur verið auðkennt og auðkennt á plöntutegundum af Bangkok herbarium, plöntuverndarstofu, landbúnaðarráðuneytinu. C. carandas ávextir voru tíndir á hverju þroskastigi; óþroskaður (hvítur litur), þroskaður (bleikur-rauður litur) og fullþroskaður (fjólublá-svartur) ávaxtastig.

Efni

Askorbínsýra, Folin-Ciocalteu hvarfefni (FCR), gallsýra, DPPH, ABTS, sveppir tyrosinasi, L-DOPA, kollagenasa tegund I (frá Clostridium histolyticum), FALGPA, epigallocatechin gallate, elastasi frá svínum brisi tegund I, AAAPVN, Trizma® basa, kalíumpersúlfat, clindamycin, ampicillín, dímetýlsúlfoxíð, NA, NB, TSA og TSB voru keypt frá Sigma Chemical Corp og Merck.

Bakteríustofnar

Bakteríustofnarnir í þessari rannsókn voru notaðir Cutibacterium acnes Scholz og Kilian (Propionibacterium acnes) (ATCC 11827), Staphylococcus epidermidis (Winslow og Winslow) Evans (ATCC 12228), Staphylococcus aureus subsp.aureus (ATCC 25923). Þau voru fengin frá American Type Culture Collection (ATCC).

Útdráttur

Þrjú mismunandi þroskastig, þar á meðal óþroskaður, þroskaður og fullþroskaður ávöxtur, var skipt í tvö skilyrði sem ferskur og þurrkaður ávöxtur. Ávextirnir voru þvegnir, skornir í litla bita og þurrkaðir við 50 gráðu hita. Útdráttarsýni í duftformi (100 g hvert) af ferskum og þurrkuðum karanda ávöxtum (C. carandas) voru dregin út með 95 prósent etanóli (1:10 w/v) í keilulaga flösku auk blöndunar í 1 viku. Eftir að blöndurnar voru síaðar til að fá útdráttinn, síðan gufað upp með snúningsuppgufunarbúnaði og vatnsbaði til að fjarlægja leysið og geymdar við -20 gráður, þess vegna reiknast prósentuávöxtunin.[8]

Cistanche þykknicistanche týnd heimsveldi jurtir

prósent uppskera=Þyngd plöntuþykknisins / Þyngd þurrkaðs plöntusýnis sem notað er × 100

Heildarfenólinnihald

Heildarfenólinnihald (TPC) var auðkennt með Folin– Ciocalteu eftir fyrri aðferð Chatatikun og Chiabchalard[9] Í stuttu máli, 100 μL af C. carandas útdrætti (1 mg/mL) blandað saman við 100 μL af 10 prósent FCR og skilið eftir í 5 mín. Eftir það, bætt við 70 μL af 10 prósent Na2CO3 til að hlutleysa. Og geymdu það síðan á dimmum stað í 90 mín. Frásog blöndunnar var mæld við 750 nm með örplötulesara.

Andoxunarvirkni

Ákvörðun andoxunargetu með DPPH prófi

DPPH prófið á C. carandas útdrætti var aðlagað aðferð frá Lim et al.[10] DPPH lausnin var útbúin í algeru etanóli. Styrkur C. carandas útdráttar var notaður í 15.625–1000 ug/mL raðþynningu sem prófunarsýni. Prófsýninu (100 μL) var blandað saman við DPPH lausn (100 μL) og síðan haldið á dimmum stað í 30 mín. Eftir það var hvarfið mælt með gleypni við 520 nm. Trolox var notað sem staðall. DPPH hreinsunarprósentan var metin með eftirfarandi:

prósenta hömlun=A(stýring) − A(sýni) / A(stýring) ×100 (1)

Að auki var andoxunargeta gefin upp sem IC50 og reiknuð með aðhvarfsgreiningu.

Ákvörðun andoxunargetu með ABTS prófi

ABTS virkni náðist eins og áður var skilgreint af Kim o.fl.[11] með nokkrum lagfæringum. Útdrættirnir voru notaðir í 15.625–1,000 ug/mL raðþynningu. Blöndunni var blandað saman við 7 mM ABTS plús og 2,45 mM K2S2O8 (8:12 rúmmálshlutfall), síðan haldið á dimmum stað í 16 klst. Eftir það var blandan þynnt í algeru etanóli og gleypni mæld við 750 nm. Askorbínsýran var notuð sem kvörðunarferill. Að lokum, bættu 180 μL af ABTS plús lausninni í hvern brunn. Eftir það, haldið því á dimmum stað í 30 mínútur og metið gleypni við 750 nm bylgjulengd. ABTS hreinsunarprósentan var áætlað sem hér segir: (1). Ennfremur var beitt útreikningum til að fá IC50.

Týrósínasa hindrunarpróf

Týrósínasa hömlunin var gerð með L-DOPA sem hvarfefni samkvæmt aðferð Di Petrillo o.fl.[12] með nokkrum breytingum. Blandan var innifalin með 50 μL af 2 mg/ml C. carandas þykkni styrkleika, 50 μL af natríumfosfatbuffi (0,2 M, pH 6,6) og 50 μL af tyrosinasa (50 einingar/ml). Í kjölfarið var blandan ræktuð við 37 gráður í 10 mín. Eftir það skaltu bæta við lausn af L-DOPA (2,5 mM) rúmmáli af 50 μL. Að lokum var strax fylgst með hvarfinu við 492 nm. Þar af leiðandi var týrósínasahemjandi prósentan metin með eftirfarandi samsetningu:

prósenta hömlun=(A − B)/A × 100

hvar

= halli stjórnunar við 492 nm
B=halli prófunarsýnis við 492 nm

Cistanche hamlar virkni tyrosinasa.

Aðgerðir gegn öldrun

Kollagenasa hindrandi virkni

Kollagenasa hindrandi virknin var metin með aðferð eftir Liyanaarachchi et al.[13] með breytingu. Kollagenasalausnin (0,8 einingar/ml) var leyst upp í tricine jafnalausn (50 mM, pH 67,5). 0,5 mM FALGPA hvarfefnið var leyst upp í stuðpúða og mæld hreyfigeta gleypni við 340 nm í 1 mín. Heildarhvarfsrúmmálið var innifalið í plöntuþykkni (20 μL), ensímlausn (20 μL) og hvarfefni (200 μL). Engu að síður var ensímvirkni mæld með því að draga úr gleypni á tímabilinu. Andkollagenasahlutfallið var reiknað út með eftirfarandi formúlu

prósent hömlun=Virkni(stýring) −Virkni(tálmur) ×100 (2) Virkni(stýring)

Elastasa hamlandi virkni

Elastasa hindrandi virknin var metin með því að fylgja Chiocchio et al.[14] með breytingu. Elastasalausnin (2 einingar/ml) var leyst upp í Tris-HCl jafnalausn (1 M, pH 8).

1,6 mM AAAPVN var leyst upp í jafnalausn og gleypni mæld stöðugt við 410 nm í 5 mín. Heildarhvarfsrúmmálið innihélt plöntuþykkni (40 μL), ensímlausn (20 μL) og hvarfefni (540 μL). Ensímvirknin var mæld með minni hreyfigetugleypni. Andelastasahlutfallið var reiknað út með eftirfarandi formúlu (2).

Bakteríudrepandi virkni

Prófanir á agar diskadreifingu

Dreifingarprófið á agarskífunni var spilað samkvæmt aðferðinni sem Gomesa o.fl. skilgreindi.[15] Þrír bakteríustofnar, þar á meðal C. acnes og S. epidermidis, voru sáð inn í TSB og S. aureus var sáð inn í NB, og síðan ræktaður í 24 klst við 37 gráður. Eftir það voru ræktuðu bakteríurnar þynntar með TSB og NB og síðan mæld gleypni (0.08–0,10 OD) með litrófsmæli við 625 nm bylgjulengd. Síðan var bakteríusviflausninni dreift á yfirborð TSA og NA plötunnar. Dauðhreinsaður pappírsdiskur (6 mm í þvermál) var gegndreyptur með 20 μL af C. carandas útdrætti (4 mg/mL), DMSO var notað sem neikvæð viðmiðun. Í kjölfarið var bakteríudrepandi virknin ákvörðuð með meðaltali þvermáls á tæru svæði (mm að meðtöldum þvermáli skífunnar).

Ákvörðun á lágmarks hamlandi styrk

Lágmarks hamlandi styrkur (MIC) gildi var framkvæmt með því að beita breyttri örþynningaraðferð með Gomesa et al.[15] og Sabooraa o.fl.[16]. Bakteríuhamlandi niðurstöður frá útbreiðslu agardisks voru valdar til að ákvarða MIC. Útdrættirnir voru notaðir í 3,125–100 mg/ml raðþynningu með dauðhreinsuðu TSB og NB og bætt við 1,0 ml í dauðhreinsað tilraunaglas. 1,0 ml af bakteríusviflausnum var bætt í hvert túpa og blandað vel saman. Eftir það, ræktað við 37 gráður í 16 klst, útilokaði C. acnes ræktað við loftfirrt ástand. Að lokum mældi gleypni við 625 nm. Lægsti styrkur sem ekki sýndi neinn vöxt (grugg sást ekki) þessara baktería var tekinn sem MIC.

Ákvörðun á lágmarks bakteríudrepandi styrk

Lágmarksgildi bakteríudrepandi styrks (MBC) var útskýrt sem minnsta þykkni útdráttarins til að drepa örverur. Byggt á MIC prófunarniðurstöðum voru glösin sem sýndu skort á vexti strokin á TSA og NA plötu og ræktuð við 37 gráður í 24 klst en C. acnes ræktuð við loftfirrt ástand. MBC af bakteríudrepandi útdrætti er ávísað í lægsta styrk án sýnilegs vaxtar.

tölfræðigreining

Hver tilraun var gerð þrjár endurtekningar og settar fram sem meðaltal ± staðalfrávik. Marktækur munur á útdrættinum var ákvarðaður með því að nota dreifnigreiningu við P < 0.05;="" ennfremur="" var="" tölfræðileg="" greining="" gerð="" með="" graphpad="" prism="" útgáfu="" 5.01="" (san="" diego,="" kaliforníu,="">

NIÐURSTÖÐUR OG UMRÆÐUR

Útdráttur

Hlutfall afraksturs af sex útdrætti af C. carandas ávöxtum, þar á meðal ferskum ávöxtum á óþroskuðum stigi, ferskum ávöxtum á þroskastigi, ferskum ávöxtum á fullþroskuðum stigi, þurrkuðum ávöxtum á óþroskuðum stigi, þurrkaðir ávextir á þroskastigi og þurrkaðir ávextir á fullþroskastigi stigi var kynnt 5.33, 4.70, 5.28, 32.40, 38.59 og 38.30, í sömu röð. Þurrkaðir ávaxtaseyði sýndu að hæsta hlutfallið var marktækt. Kannski vegna þurrkuðu plöntunnar var hún að fjarlægja umfram vatn og ensímvirkni í frumunni. Þess vegna gefur það ókeypis tengingu og lága seigju sem er gagnlegt í útdráttarferlinu.

Heildarfenólinnihald

Heildarfenólinnihald C. carandas ávaxta, þar á meðal ferskir ávextir á óþroskaða stigi, ferskir ávextir á þroskastigi, ferskir ávextir á fullþroskastigi, þurrkaðir ávextir á óþroskaðri stigi, þurrkaðir ávextir á þroskastigi og þurrkaðir ávextir á fullþroskastigi var sýnt að TPC var breytilegt frá 55,32 ± 1,81 til 100,31 ± 2,64 mg GAE/g af útdrættinum [Mynd 1] með útdrætti af ferskum ávöxtum í fullþroskuðum stigi sýndi hæsta fenólinnihald. Það má álykta að litur ávaxta sé annar þáttur sem hefur áhrif á heildarfenólinnihald ávaxta. Þetta er í samræmi við rannsóknir Athipornchai og Jullapo.[17] Aftur á móti, þegar borið var saman ferskt og þurrkað ástand útdráttar, kom í ljós að útdrætti þurrkaðs á óþroskuðu stigi gaf til kynna aukningu á heildarfenólinnihaldi. Þetta kann að vera vegna þess að hitunarferlið er hægt að breyta nokkrum pólýfenóli í C. carandas útdrætti. Hins vegar eru þessar niðurstöður í samræmi við Tagouelbe, o.fl.[18] sem mælti með því að hitunarhiti auki heildarfenólinnihaldið. Þar af leiðandi er hitastigið einn af þeim þáttum sem hafa áhrif á magn fenóls bæði jákvætt og neikvætt. Ef of hátt hitastig er notað eyðileggjast frumuveggir og bindi fenólefnasambanda sem valda tapi á fenóli. Á hinn bóginn, þurrkun við rétt hitastig, getur það verið aukning á heildar fenólinnihaldi.

Andoxunarvirkni með DPPH og ABTS prófi

DPPH hreinsunarvirkni C. carandas útdráttar er sýnd á mynd 2. Niðurstöðurnar sýndu að IC50 DPPH gildi reyndust vera mismikil á bilinu 29.11 ± 0.23 til 46.49 ± {{16} },34 ug/mL og staðlað Trolox í þessari greiningu var 11,33 ± 2,23 ug/mL og ABTS hreinsivirkni C. carandas útdráttar er sýnd á mynd 3. Þurrkaður óþroskaður ávaxtaþykkni sýndi mesta ABTS sindurefnahreinsann með IC5{ {18}} gildin {{20}}.17 ± 0.01 ug/mL og staðlað askorbínsýra í þessu mati var 0,03 ± 0.{{23} } ug/mL. Niðurstöður DPPH hreinsunarprófsins sýndu ferskt ástand C. carandas útdráttar, sem gaf betri áhrif en þurrkað ástand með því að ferska óþroskaða útdrátturinn var sýndur hæsta hreinsunin (IC50 29.11 ± 0.23 ug/mL), en ferska fullþroskaða seyðið sýndist veikt virkt (IC50 46.49 ± 0.34 ug/mL). Þannig kom fram í niðurstöðunum að óþroskaður þykkni var skilvirkari til að standast sindurefna en þroskaðir og fullþroskaðir ávaxtaþykkni gæti verið vegna þess að óþroskaður þykkni úr C. carandas ávöxtum hefur góða uppsprettu C-vítamíns.[19] C-vítamín er náttúrulegt jurtaefnafræðilegt samsett efni með andoxunareiginleikum með getu til að veita vetnisatóm og búa til sæmilega stöðugar askorbyl sindurefna.[20]

Cistanche erandoxunarefni.

Týrósínasa hindrunarpróf

Hömlun tyrosinasa ensím C. carandas útdráttar var sýnd sterk hömlun á sveppa tyrosinasa með hlutfalli frá 83.00 prósent ± 1.89 prósent til 93.88 prósent ± 5.64 prósent. Virkasta útdráttarmagnið var ferskt þroskað seyðið og 100.00 prósent ± 0.00 prósent af askorbínsýru eru teknar saman á mynd 4. Týrósínasa hindrandi áhrif C. carandas ávaxtaþykkni gaf til kynna möguleika á notkun sem húðhvítandi innihaldsefni í snyrtivörum. Þar sem C. carandas ávaxtaþykkni sýnir meira en 80 prósent af ensímhemlum, kemur árangurinn af ferskum þroskuðum útdrættinum best fram í hamlandi áhrifum svipað og niðurstöður Khunchalee[21] sem 70 prósent etanólið af C. carandas ávaxtaþykkni sýndi mestu týrósínasa hömlunina, 77,65 prósent, gæti verið vegna þess að C. carandas ávaxtaþykkni eru rík af flavonoid,[22] C-vítamíni og anthocyanin[23] sem flavonoid og anthocyanín hafa getu til að hamla tyrosinasa og melanogenes.[{{ 20}}] Þar að auki geta C-vítamín og flavonoids verið andoxunarefni, andelastasi[27] og and-kollagenasa áhrif.[28]

Aðgerðir gegn öldrun með kollagenasa og elastasa hamlandi prófun

Hlutfall kollagenasahömlunar á C. carandasextracts við 1 mg/ml 71,88 ± 4,42 til 85,94 ± 2,21. Nýja óþroskaða seyðið var með hátt hlutfall kollagenasa hömlunar og staðlað epigallocatechin 3 gallate (EGCG) í þessari greiningu var 71,88 ± 0.00 [Mynd 5]. Elastasa hemjandi virknigreiningin sem gerð var með því að taka EGCG sem staðal sýndi að C. carandas seyði með veiku elastasahömluninni sem er hlutfallið 4,23 ± 0,72 til 10.01 ± 0,92 og staðlað EGCG í þessari greiningu var 95,89 ± 0,22 [Mynd 6]. Kollagen og elastín eru þættir utanfrumu fylkisins. Kollagen hefur þá eiginleika húðarinnar að vera sterkt, togstyrk og vel þyngt af húðinni, en elastín gefur vefjum mýkt. Þess vegna getur það haft ávinning gegn öldrun að hindra ensímin kollagenasa og elastasa sem brjóta niður þessa þætti.[29] Niðurstöður okkar benda til þess að hinir ýmsu C. Carandas etanólútdrættir geti dregið úr niðurbroti kollagens en örlítið hamlað elastasa. Ferskur óþroskaður þykkni er mjög fær um að hamla kollagenasa. Þess vegna benda niðurstöðurnar til þess að óþroskaður útdráttur af C. carandas ávöxtum, sérstaklega óþroskuðum ávöxtum, sé hægt að nota sem virkt innihaldsefni fyrir vörur gegn öldrun vegna þess að áhrifin voru í samræmi við fyrri prófanir á andoxunarvirkni og einnig fullkomlega verndað DNA skemmdir.[30]

Bakteríudrepandi virkni

Unglingabólur eru ein af orsökum sem tengjast húðskemmdum. Unglingabólur geta komið fram af mörgum ástæðum, svo sem hormónaójafnvægi, fituframleiðslu, ofhýdingu eggbúa, bólgu og nærveru helstu bakteríanna C. acnes, S. epidermidis og S. aureus sem valda unglingabólum í húð.[{{{{ 8}}}}] Niðurstöður bakteríudrepandi virkni sex etanólútdrátta til and-C. acnes, S. epidermidis og S. aureus eru sýndar í töflu 1. Þurrkaður óþroskaður útdráttur var með hámarkshömlunarsvæðið 8.00 ± 1.00, 7.67 ± 0. 58, og 12,33 ± 1,15 mm, í sömu röð, MIC þurrkaðs þroskaðs útdráttar sýndi bestu áhrif á milli 6,25 og 12,50 mg/ml og MBC gildi útdrættanna sýndu hamlandi virkni við 6,25 og 25,0 mg/ml. Samantekt, þurrkaðir og fullþroskaðir útdrættir hafa bestu möguleika á að hamla C. unglingabólurvöxt, þurrkaðir þroskaðir útdrættir sýndu gott MBC gegn S. epidermidis og allir útdrættir í þurrkuðu ástandi sýndu mjög hamla S. aureus. Þess vegna bendir rannsóknin á þessum rannsóknum til þess að hægt sé að nota þurrkað þroskað þykkni sem virkt innihaldsefni fyrir lyf gegn unglingabólum vegna virkra jurtaefna sem eru til staðar í C. carandas ávöxtum etanólútdrætti þar á meðal alkalóíða, flavonoids, glýkósíð, terpenóíða, tannín og sapónín.[ 34] Tannín, flavonoids, alkalóíðar og fjölfenól voru ótrúlega andstæðingur propionibacterium eiginleikar.[35-36]

NIÐURSTAÐA

C. carandas útdrættir úr ferskum ávöxtum eru mjög öflugir fyrir öldrun og húðhvítandi eiginleika. Að auki eru þurrkaðir þroskaðir útdrættir með virkasta innihaldsefninu í bólgueyðandi vörum. Þess vegna er hægt að nota C. carandas ávexti sem nýtt snyrtivöruefni.