And-melanogenese og and-tyrosinase eiginleikar Pistacia atlantica subsp. mutica útdrættir á B16F10 sortuæxlisfrumum úr músum

Tengiliður: ali.ma@wecistanche.com

Samira Eghbali-Feriz1, Akram Taleghani2, Hadi Al-Najjar3, Seyed Ahmad Emami1, Homa Rahimi4, Javad Asili1, Samira Hasanzadeh1 og Zahra Tayarani-Najaran5,*

Ágrip:Pistacia atlantica (P. atlantica) subsp. mutica hefur verið notað í hefðbundnum lækningum og er frægt fyrir lækningaeiginleika sína. Markmið þessarar rannsóknar var að meta áhrif metanóls (MeOH), n-hexans, díklórmetans (CH2Cl2), n-bútanóls (BuOH), etýlasetats (EtOAc), vatnsútdráttar og ilmkjarnaolíur úr P. atlantica subsp. mutica á myndun melaníns og oxunarálagi í B16F10 sortuæxlisfrumulínu. Lífvænleiki B16F10 frumna eftir meðferð með vaxandi styrk mismunandi útdrætti plöntunnar (0,2-200 µg/ml) var mældur með því að nota resazurin. Samsetning ilmkjarnaolíu var auðkennd með gasskiljun-massagreiningu (GC-MS) greiningu og hamlandi áhrifum á nýmyndun melaníns, sveppatýrósínasavirkni, frumu-týrósínasi og oxunarálag voru metin með litamælingum og flúormælingum. Gögnin sýndu útdrætti í styrkleika 0.2-200 µg/mL, sýndu ekki marktækar eiturverkanir á sortuæxlisfrumur en styrkur upp á 200 µg/ml af ilmkjarnaolíu hafði frumudrepandi áhrif. Pistacia atlantica subsp. mutica gæti hamlað sveppnumtýrósínasastarfsemi. Einnig minnkaði magn melaníns í B16F10 frumum. Auk þess er hæfni P. atlantica subsp. mutica útdrættir í að minnka magn hvarfgjarnra súrefnistegunda í sortuæxlisfrumum leiddi í ljós ótrúlegtandoxunarefnistarfsemi. Að auki hafði allur styrkur ilmkjarnaolíu engin marktæk áhrif í þessari rannsókn. Thesortumyndunhamlandi ogandoxunarefniáhrif P. atlantica subsp. mutica á B16F10 frumum gæti bent til hugsanlegrar hvítunarvirkni plöntunnar til notkunar í húðvörur og til að koma í veg fyrir öldrun húðar í snyrtivöruiðnaði.Leitarorð:And-týrósínasa; Melanogenesis; P. atlantica subsp. mutica.

Smelltu til aðcistanche ávinningur fyrir andoxunarefni

KYNNING

Melanín er húðlitarefni sem er myndað í sortukornum og er flutt til keratínfrumna í gegnum lífeðlisfræðilega ferlið sem kallastsortumyndun. Melanín gegnir mikilvægu hlutverki í vörn gegn UV skemmdum og ákvarðar lit húðar, hárs og augna. Offramleiðsla á melaníni má rekja til sortuæxla og óeðlilegrar litarefnis í húð (1-3). Lykilensímið í melanínlífmynduninni er týrósínasi sem hvatar tvö aðskilin efnahvörf, oxun 3,4-díhýdroxýfenýlalaníns (DOPA) í dópakínón og hýdroxýleringu L-týrósíns í DOPA (4).Týrósínasieða pólýfenóloxíðasi er kopar sem inniheldur blandað ensím sem finnast í örverum, dýrum og plöntum (5). Tyrosinase er sá þáttur sem hefur mest áhrif á brúnun ávaxta og grænmetis. Offramleiðsla og uppsöfnun melaníns getur leitt til fjölda húðsjúkdóma, þar með talið melasma, freknur, sólarorku og aldursblettir (6). Þess vegna,týrósínasahemlar hafa vakið mikinn áhuga í matvæla- og snyrtivöruiðnaði. Í mörgum lífverum er oxun nauðsynleg til að framleiða orku til að kynda undir líffræðilegum ferlum.

Hins vegar, vetnisperoxíð (H2O2) og aðrar -hvarfandi súrefnistegundir (ROS)- valda frumudauða og vefjaskemmdum í mörgum lífeðlisfræðilegum og meinafræðilegum fyrirbærum, þar með talið ROS aukningu í kjölfar UV geislunar meðan á sortumyndun stendur. Einnig er vel þekkt að útfjólubláa framleiðsla á ROS tekur þátt í meingerð nokkurra húðsjúkdóma, þar á meðal öldrun, hrukkum, ljósnæmi og illkynja sjúkdóma (7). Þannig að finna náttúrulegar uppspretturandoxunarefnimeð and-týrósínasavirkni hjálpar til við að breyta húðskemmdum sem tengjast ofgnóttsortumyndun (4).

Ættkvíslin Pistacia er meðlimur Anacardiaceae fjölskyldunnar sem samanstendur af um 9 tegundum og er að mestu dreifð í Miðjarðarhafssvæðinu, Evrópu og sumum hlutum Asíu (8,9). Pistacia atlantica (P. atlantica)Desf. hefur 3 undirtegundir nefnilega: P. atlanticasubsp. kurdica (Zohary) Rech. f., P. atlanticasubsp. mutica (Fischer & CA Meyer) Rech. f. og P. atlantica subsp. cabulica (Stocks) Rech. f. Hinar þrjár nefndu undirtegundir P. atlantica, P. khinjuk Stocks og P. vera L. eru ræktaðar í Íran (10). Ávextir P. atlanticasubsp. mutica nefnilega Baneh er kringlótt til sporöskjulaga með 0.5-0,7 cm í þvermál. Andoxunar- og krabbameinsvirkni skrokksins á P. atlantica hefur verið tengd háu heildarfenólinnihaldi plöntunnar. P. atlantica hefur jafnan verið notað til að létta óþægindi og verki í efri hluta kviðar, meltingartruflanir og magasár (11-13). Hins vegar eru engar rannsóknir á hamlandi virkni P. atlantica subsp. mutica. Þannig að í þessu verkefni veljum við B16F10 sortuæxlafrumur til að rannsaka andoxunar- og sortuefnavaldandi eiginleika P. atlantica subsp. mutica útdrætti. Markmið þessarar rannsóknar var að kanna hamlandi áhrif metanóls (MeOH), n-hexans, díklórmetans (CH2Cl2), n-bútanóls (BuOH), etýlasetats (EtOAc), vatns (H2O) útdráttar og ilmkjarnaolíur af P. atlanticasubsp. mutica ávöxtur ásortumyndunog til að meta möguleikanaandoxunarefnigetu plöntunnar á B16F10 sortuæxlisfrumum.

EFNI OG AÐFERÐIR

Efni

Sveppirtýrósínasaúr Agaricus bisporus, kojic sýru, resazurin, L-3,4-díhýdroxýfenýlalaníni (L-DOPA), díklóródíhýdró-flúoresceín díasetati (DCFH-DA), egtasínsýra (EGTA), dímetýlsúlfoxíð (DMSO) ), fenýlmetýlsúlfónýlflúoríð, glýserófosfat, -merkaptóetanól, fosfat-bufferað saltvatn (PBS), natríumorthovanadat, tris-bufferað saltvatn tween 20 (TBST) keypt frá Sigma (Bandaríkjunum). Fóstursermi (FBS), penicillín, streptómýsín og trypsín-EDTA voru fengin frá GibcoBRL (Grand Island, Bandaríkjunum). Sortuæxlisfrumulína (B16F10, Cat. No C540) var keypt frá Pasteur Institute of Iran (Teheran, IR Iran). Öll önnur efni og leysiefni voru frá Merck (Þýskalandi).

Undirbúningur útdráttar

P. atlantica subsp. mutica var safnað í maí 2014 frá Bardaskan fjöllunum, Khorasan Razavi héraði, norðaustur af Íran og auðkennt af frú M. Souzani. Skírteinissýnishorn (nr.: 13069) var geymt í herbarium lyfjafræðideildar Mashhad háskólans í læknavísindum, Mashhad, IR Íran. Óþroskaður ávöxtur P. atlantica subsp. mutica (200 g) voru jarðtengd með blandara (Toos chekan Co, IR Iran) og síðan hellt í gegnum MeOH við stofuhita í 24 klst í samræmi við áður tilkynnt siðareglur (14). Eftir útdrátt var leysirinn látinn gufa upp með snúningsuppgufunarbúnaði og síðan frostþurrkaður. Metanólútdrátturinn (94 g) var sundurliðaður frekar með leysi-leysisskiptingu til að gefa fimm mismunandi hluta þar á meðal MeOH, n-hexan, CH2Cl2, BuOH, EtOAc og H2O.

Einangrun ilmkjarnaolíunnar

Óþroskaður ávöxtur P. atlantica subsp.mutica (150 g) var settur í vatnseimingu með því að nota Clevenger-gerð tæki í 3 klst. Litlausa olían var fengin með 0,8% afrakstur (v/w). Ilmkjarnaolían sem fékkst var þurrkuð yfir vatnsfríu natríumsúlfati og geymd við 4 gráður í myrkri þar til frekari prófun.

Gasskiljun og gasskiljun-massagreining

Gasskiljunin (GC) greiningin var framkvæmd með því að nota Varian CP{{0}} búin FID skynjara, tengdur við samrunna kísilsúlu (CP-Sil 8CB, 50 m × 0,25 mm, filmuþykkt 0,12 µm) við eftirfarandi skilyrði: ofnhitastig 50-250 gráðu með hraðanum 3 gráður/mín; hitastig inndælingartækis 260 gráður, skiptingarhlutfall 1:5, með burðargasi, N2 flæðihraði 2 ml/mín; hitastig skynjara 280 gráður.

Gasskiljunarmassagreiningar (GC-MS) voru framkvæmdar með því að nota Agilent 5975 tæki með HP-5 MS dálki (30 m × 0.25 mm auðkenni, {{ 14}}.25 µm filmuþykkt) tengd við fjórfaldan massaskynjara og tölvu með Wiley 7n.L safni. Ofnshiti 50-250 gráðu með hraðanum 3 gráður/mín., hitastig inndælingartækis 250 gráður, inndælingarrúmmál: 0,1 µL, skipt innspýting með skiptingarhlutfalli 1:50, með flæðihraða burðargassins (helíum) 1 ml/ mín., jónagjafi: 70 eV, jónunarstraumur: 150 µA, og skannasvið: 35-465. Auðkenning á íhlutum ilmkjarnaolíunnar var byggð á gasskiljun sem var unnin með tilvísun í n-alkana röð (C6-C20) á HP-5MS dálki, samanburður á massarófi þeirra og sundrunarmynstri sem greint var frá í bókmenntum og tölvusamsvörun við Wiley 7n.L bókasafnið (15). Magngreining á hlutfallslegu magni einstakra þátta óþroskaðra ávaxta var framkvæmd samkvæmt flatarmálshlutfallsaðferðinni án tillits til kvörðunarstuðs.

Frumuræktun

Sortuæxlisfrumulína, B16F10, haldið við 37 gráður í rakaðri andrúmslofti (90 prósent) sem inniheldur 5 prósent CO2. Frumur voru ræktaðar í RPMI-1640 (Bioidea, Íran) með 10 prósent (v/v) FBS, 100 ae/mL penicillíni og 100 µg/mL streptomycin. Stofnlausn P. atlantica subsp. mutica var útbúið við 50 µg/mL í DMSO og haldið við -40 gráðu. Kojínsýra (2 og 4 mM) var notuð sem jákvæður samanburður í öllum tilraunum. Frumur voru ræktaðar í 96-brunnsplötum í þéttleikanum 105 frumur/ml. Virkni útdráttarins í hverri tilraun var reiknuð út með því að nota eftirfarandi jöfnu: 📄

📁prósenta virkni=Sog sýnisins/Frásog stjórnunar*100

Frumulífvænleikapróf

Resazurin er frumuheilbrigðisvísir sem notar afoxunarkraft lifandi frumna og breytist í resorufín. Resazurin er blátt, óeitrað, flúrljómandi og frumugegndræpt efnasamband sem breytist í rauðan lit og mjög flúrljómandi resorufín í lifandi frumum (16). Um það bil 104 B16F10 sortuæxlisfrumur voru sáð í hvern brunn á 96-örbrunnsplötu og meðhöndluð með ýmsum styrkjum af útdrætti og ilmkjarnaolíu úr P. atlantica subsp. mutica (0.2-200 µg/mL). Eftir 4 klst ræktun var gleypni resazurins og resorufíns mæld við 570 nm og 600 nm með því að nota H4 Hybrid Multi-Mode örplötulesara (BioTek, Winooski, Bandaríkjunum). Hver tilraun var gerð í þríriti. Hámarks hamlandi styrkur (IC50) var reiknaður út með því að nota GraphPad hugbúnað frá styrkleika-áhrifum kúrfunni: log styrkur vs svörun.

Sveppir tyrosinasa virkni próf

Virkni sveppatýrósínasaí oxun L-DOPA var mæld litrófsmæling eins og áður hefur verið lýst (17), með nokkrum breytingum. Í stuttu máli, 160 µL af 5 mM L-DOPA (í 100 mM natríumfosfatbuffi pH 6,8) og 20 µL af sama jafnalausn með og án P. atlanticasubsp. mutica útdrætti og ilmkjarnaolíur (10-1000 µg/ml) var blandað saman við 20 µL af sveppatýrósínasa (200 einingar/ml) og síðan ræktað við 37 gráður í 30 mínútur. Gleypið var mælt við 475 nm með Synergy H4 Hybrid Multi-Mode örplötulesara (BioTek, Winooski, Bandaríkjunum).

Ákvörðun á melaníninnihaldi í sortuæxlafrumum

Sortuæxlisfrumur, B16F10, voru sáð í þéttleikanum 105 frumur í hverri brunn í 96-brunnsræktunarplötum og ræktaðar í 24 klst. Þeir voru síðan ræktaðir með mismunandi styrk (0.2-200 µg/mL) af P. atlantica subsp. mutica útdrættir og ilmkjarnaolía í 24 klst. Melaníninnihaldið var mælt eins og áður hefur verið lýst (18). Eftir meðferð var frumunum safnað með trypsíni. Þeir þvoðu með PBS. Frumukornin voru leyst upp í 50 µL lausn af natríumhýdroxíði (2 M) í 60 mínútur við 60 gráður. Melaníninnihaldið var mælt með því að mæla gleypni við 405 nm með Synergy H4 Hybrid Multi-Mode örplötulesara (BioTek, Winooski, Bandaríkjunum).

Greining á virkni frumu tyrosínasa

Oxun DOPA í DOPA króm var greind með litrófsmælingu sem vísbending umtýrósínasastarfsemi (18). 106 frumur af B16F10 sortuæxli voru húðaðar í hvern brunn á 96-brunnsplötu yfir nótt. Eftir meðhöndlun á frumu með mismunandi styrk (0.2-200 µg/mL) af P. atlantica subsp. mutica útdrættir og ilmkjarnaolía í 24 klst., Frumurnar voru losaðar með trypsíni; þvegið með PBS og lýsað með 50 µL natríumfosfatbuffi (pH 6,8, 100 mM) sem inniheldur 1 prósent triton X-100 og 0,1 mM fenýlmetýlsúlfónýlflúoríð. Lysötin voru skilin í skilvindu við 10,000 snúninga á mínútu í 20 mínútur við 4 gráður. 100 µL af hverju lysati (hvert um sig innihélt 100 mg prótein) var blandað saman við 30 µL af 5 mM DOPA í 96 brunna plötu og ræktað við 37 gráður í 2 klst., gleypni var mæld við 475 nm með Synergy H4 Hybrid Multi-Mode örplötulesara (BioTek, Winooski, Bandaríkjunum).

Ákvörðun á frumuviðbrögðum súrefnistegunda

Magn hvarfgjarnra súrefnistegunda var mælt eins og áður hefur verið lýst með smávægilegum breytingum (19). Sortuæxlisfrumur, B16F10, (2 × 104) voru sáð í 96-brunnsplötur yfir nótt og síðan meðhöndlaðar með mismunandi styrk (0,2-200 µg/mL) af P. atlantica subsp . mutica útdrættir og ilmkjarnaolía í 24 klst. Síðan ræktaðar frumur með 50 µL H2O2 (24 mM) við 37 gráður í 30 mín. Síðan var 50 µL af DCFH-DA bætt við frumurnar og flúrljómunarstyrkur DCF mældur við 504 nm losun og 524 nm örvun með því að nota Synergy H4 örplötulesara (BioTek, USA).

Western blotting greining

Sortuæxlisfrumur, B16F10, voru ræktaðar í 75 cm3 flöskum með og án metanólútdráttar (0.5-100 µg/ml) í 24 klst. Frumurnar voru síðan ljósaðar í jafnalausn (50 mM tris-HCl, pH 7,4, 2 mM EGTA, 1 mM fenýlmetýlsúlfónýlflúoríð, 10 mM glýserófosfat, 10 mM -merkaptóetanól, 1 mM natríumorthovanadat, 0,1 prósent deoxýkólínsýru natríumsalt). Jafnt magn af próteinum (50 µg) var hlaðið á 12 prósent natríumdódecýlsúlfat (SDS)-pólýakrýlamíð hlaup rafskaut og flutt yfir á pólývínýliden tvíflúoríð himnur. Himnurnar voru lokaðar í 2 klst í 10 prósent undanrennu í TBST (20 mM tris-HCl pH 7,4, 100 mM NaCl og 0,1 prósent tween 20) jafnalausn við stofuhita. Eftir þvott með TBST stuðpúða var himnan síðan ræktuð yfir nótt með aðal mótefni: 1:300 (kanínu mótefnitýrósínasamótefni (Santa Cruz líftækni, CA)). Eftir að hafa skolað 3 sinnum með TBST jafnalausn, voru himnurnar síðan ræktaðar í 2 klst með and-kanínu IgG (1:2000) sem auka mótefni (frumuboð). Skolun þrisvar sinnum með TBST jafnalausn var endurtekin og próteinböndin fundust með því að nota aukið efnaljómandi (ECL) prime western blotting greiningarkerfi (BioRaD, USA) (20). And- -aktín mótefni var notað sem hleðslustýring.

tölfræðigreining

Hlutfallslegar niðurstöður tilraunanna voru settar fram sem meðaltal ± SD af þremur óháðu mælingunum. Dreifnigreining og IC50 útreikningur voru framkvæmdar með GraphPad Prism 6.0 með einstefnu ANOVA prófi og meðaltölin voru borin saman með Dunnett prófum. P < 0,05="" stendur="" fyrir="" tölfræðilega="" marktækan="" mun="" á="" útdrætti="" meðhöndluðum="" frumum="" og="" samanburðarhópi.="" tvíhliða="" anova="" próf="" og="" bonferroni="" samanburður="" eftirpróf="" var="" notað="" til="" að="" bera="" saman="" áhrif="" mismunandi="" útdrátta="" í="" hverri="">

NIÐURSTÖÐUR

Ilmkjarnaolíusamsetning

Gasskiljun hefur verið notuð til magngreiningar og Gc-Mass til að bera kennsl á efnasamböndin. Niðurstöður bæði GC og GC-MS greiningar eru sýndar í megindlegri og eigindlegri auðkenningartöflu efnasambandanna. Í tilviki P. atlanticasubsp. mutica, 68 innihaldsefni voru auðkennd í ilmkjarnaolíunni og voru 99,8 prósent af heildarolíusamsetningunni (tafla 1). Hópefnasambönd ilmkjarnaolíunnar voru ákvörðuð sem mónóterpen vetniskolefni 86,5 prósent, súrefnisrík mónóterpen 3,7 prósent, seskvíterpen kolvetni 8,7 prósent, súrefnisrík seskvíterpen 0,1 prósent og hin ýmsu 0 .8 prósent. Helstu þættir ilmkjarnaolíunnar voru -E-ocimene 29,7 prósent, myrcene 17,1 prósent, -Z-ocimene 17.0 prósent, -pinene 10,2 prósent og E-caryophyllene 7,1 prósent.

Áhrif útdráttar á lifun frumna

Fylgst var með lífvænleika frumna með resazurini. Sortuæxlisfrumur, B16F10, voru sáð í 96-brunnsplötu. Eftir 24 klst. voru frumur meðhöndlaðar með mismunandi styrk (0.2-200 µg/mL) af P. atlantica subsp. mutica útdrætti, sýndu niðurstöður að útdrættirnir höfðu engin marktæk frumudrepandi áhrif á B16F10 frumur við þann styrk sem notaður var í þessari rannsókn (mynd 1). Doxórúbicín sem jákvæð viðmiðun olli marktækt frumudauða (P <>

Áhrif útdráttar á sveppa tyrosinasa virkni

Áhrif P. atlantica á hömlun á sveppatýrósínasa í oxun L-DOPA voru metin. Niðurstöðurnar bentu til þess að sveppirtýrósínasavirkni var hindruð af öllum mismunandi útdrætti, en styrkur 1000 µg/mL af n-hexan útdrætti hafði engin marktæk áhrif í þessu prófi. Kojínsýra (2 og 4 mM) var notuð sem jákvæð viðmiðun (P < 0,05)="" (mynd="">

Áhrif útdráttar og ilmkjarnaolíur á myndun melaníns

Til að rannsaka áhrif mismunandi útdrátta og ilmkjarnaolíur af P. atlantica subsp. mutica á myndun melaníns, var melaníninnihald í útdrætti meðhöndluðum B16F10 sortuæxlisfrumum metið. Kojínsýra (2 og 4 mM) var notuð sem jákvæð viðmiðun.

Niðurstöðurnar sýndu að MeOH, CH2Cl2 og EtOAc útdrætti (0.2-200 µg/mL), n-hexan (2-200 µg/mL), og H2O útdráttur (2{{9} }} og 200 µg/mL) höfðu hamlandi áhrif á myndun melaníns (P < 0,05)="" (mynd="" 3).="" hins="" vegar="" hafði="" allur="" styrkur="" ilmkjarnaolíu="" og="" buoh="" þykkni="" engin="" marktæk="" hamlandi="" áhrif="" á="" myndun="" melaníns.="" niðurstöður="" ilmkjarnaolíu="" eru="" ekki="" sýndar="" á="">

Áhrif útdráttar á frumu tyrosinasa virkni

Til að meta hvernig hamlandi áhrif P. atlantica subsp. mutica þykkni ásortumyndunsérstaklega, við metum innanfrumutýrósínasavirkni í B16F10 sortuæxlisfrumum. Niðurstöðurnar gáfu til kynna að MeOH, EtOAc og BuOH útdrætti (0.2-200 µg/mL), n-hexan (0.2 µg/mL) og CH2Cl2 (20 og 200 µg/mL) útdrætti af P. atlantica subsp. mutica gat marktækt hamlað frumu tyrosinasa virkni (P < 0,05)="" (mynd="" 4)="" en="" vatnsþykkni="" hafði="" engin="" hamlandi="" áhrif="" á="" frumu="" tyrosinasa="">

Áhrif útdráttar á frumuviðbrögð súrefnistegunda

Innanfrumu ROS stig sem vísbending umandoxunarefnigetu P. atlantica subsp.mutica var mæld í frumum sem voru meðhöndlaðar með 24 mM H2O2 einu sér eða með mismunandi útdrætti í B16F10 sortuæxlisfrumum. Niðurstöðurnar gáfu til kynna að styrkur allra útdrátta af P. atlanticasubsp. mutica fyrir utan 0.2 µg/mL af CH2Cl2 útdrætti gæti bælt marktækt oxunarálag af völdum H2O2 (P < 0,05)="" (mynd="">

Áhrif útdráttar á frumu tyrosinasa próteinmagn

Innanfrumuáhrif P. atlanticasubsp. mutica á melanogenic tengd prótein eins og tyrosinasa sem vísbending umsortumyndunvar metið með Western blot. Eins og sýnt er á mynd 6,týrósínasapróteinmagn lækkaði marktækt af P. atlantica subsp. mutica þykkni meðferð í styrkleikanum {{0}}.5 og 10 µg/mL (P < 0.05).="" -actin="" var="" notað="" sem="" innra="">

Áhrif ilmkjarnaolíu á mismunandi breytur

Ilmkjarnaolía við 0.2-200 µg/mL sýndi engin marktæk áhrif á allar ofangreindar breytur, nema við styrkleika 200 µg/mL, sem sýndi frumudrepandi áhrif á sortuæxlafrumur. Þess vegna eru niðurstöður ilmkjarnaolíu ekki með í niðurstöðukaflanum þar sem engin hamlandi áhrif komu fram.

UMRÆÐA

Náttúrulegar snyrtivörur eru víða auglýstar af viðskiptastofnunum vegna öryggis þeirra og fjölþættrar starfsemi. Að finna ný mótefnavaldandi efni meðandoxunarefnivirkni frá náttúrulegum uppruna er eitt af hagsmunum við mótun afurða sem notuð eru við oflitunarsjúkdómum. Í lyfja- og snyrtivörum sem notuð eru sem húðhvítunarefni, hamlar melanínmyndun, hreinsar sindurefna og hindrartýrósínasavirkni sem er mikilvæg til að meðhöndla skylda húðsjúkdóma (21).

Í þessari rannsókn var andoxunarvirkni mismunandi útdrátta af P. atlantica subsp. mutica var metið og áhrif þeirra á tyrosinasavirkni og melanínmyndun voru greind. MeOH og EtOAc útdrættirnir af P. atlantica subsp. mutica sýndi marktæktandoxunarefnivirkni við 2, 20 µg/mL og 20, 200 µg/ml sem má rekja til fjölfenólanna og flavonoids sem finnast víða í plöntunni. Niðurstöðurnar sýndu að allir útdrættirnir, sérstaklega MeOH, EtOAc og H2O útdrættir, gætu hamlað sveppunum verulegatýrósínasastarfsemi. Einnig gátu MeOH, EtOAc og BuOH útdrættirnir dregið úr frumuvirkni tyrosians sem var í samræmi við minnkun á melanínframleiðslu í frumum. Í þessari rannsókn hafði allur styrkur ilmkjarnaolíu engin marktæk hamlandi áhrif gegn frumu tyrosians, melanínmyndun ogandoxunarefnistarfsemi. Vegna meiri virkni MeOH útdráttarins í mismunandi tilraunum í samanburði við önnur útdrætti höfum við valið nefndan útdrátt fyrir Western blot greiningu. Til að draga saman, þá voru mótefnavaldandi áhrif þessa útdráttar staðfest í öllum mælingum í B16F10 frumum, sambærileg við jákvæðu viðmiðunarkójínsýruna (tafla 2).

MeOH, CH2Cl2 og EtOAc útdrættirnir hafa minnkað frumutýrósínasavirkni, melaníninnihald og ROS. Hálfskauta náttúruhlutar geta dregið út plöntuefna sem eru ábyrg fyrir antimelanogenic virkni eins og pólýfenól og flavonoids. n-hexan hlutinn og ilmkjarnaolían voru minna virk sem bendir til þess að plöntuefnaefni með óskautað og rokgjarnt eðli hafi ekki marktæk áhrif ásortumyndunferli (22,23).

Pólýfenól og flavonoids virka sem hemlar á ROS framleiðslu og gætu verið ábyrg fyrir and-melanogenic eiginleika plöntuþykkni (24-27). Helstu efnasamböndin í útdrætti P. atlantica subsp. mutica eru quercetin, luteolin, isoquercetin, rutin, luteolin 7-laktat og fenólsambönd eins og p-kúmarsýra, koffínsýra og gallsýra sem bera ábyrgð áandoxunarefnistarfsemi (28). Tilkynnt hefur verið um að rútín hamli virkni týrósínasa og er öflugt litarefnislyf vegna nærveru hýdroxýlhópa (29). Athyglisvert er að quercetin, luteolin og isoquercetin hafa einnig marga hýdroxýlhópa í uppbyggingu þeirra sem gerir þau hentug fyrir samskipti við tyrosinasa sem leiðir til and-tyrosinasa virkni (21,30). Nýlega hefur verið sýnt fram á að áhrif flavonoids eins og lúteólíns og quercetin eru aðallega miðlað með mótun umritunarþáttarsortumyndun-associated transcription factor (MITF) og/eða sortumyndunarensímtýrósínasa, DCT eða tyrosinasa-tengt prótein 1 (TYRP-1) (31). P-kúmarsýra og koffínsýra hamluðu týrósínasavirkni sveppa og voru 10- og 3-falt öflugri en kojínsýra (32).

Gallsýra sýnir týrósínasa hamlandi virkni og dregur úr dópakínóni aftur í L-DOPA með redox hringrás, svipað og askorbínsýra (33). Á sama hátt, í þessari rannsókn P. atlantica subsp. mutica minnkaði magn tyrosinasa próteins í frumum sem er sterk fylgni við nærveru quercetin, luteolin, isoquercetin, rutin og önnur pólýfenól í plöntunni.

Það eru margar skýrslur um plöntur sem hafa and-melanógenandi og andoxunarvirkni sem dregur úr oxunarálagi, sem getur haft mikla möguleika til að meðhöndla húðsjúkdóma. Til dæmis drógu mismunandi útdrættir úr lofthlutum P. atlantica úr oxunarálagi, sem má rekja til pólýfenóla, flavonoids og anthocyanins sem finnast víða í plöntunni (34). Í annarri rannsókn minnkaði MeOH þykkni P. vera seytingu melaníns sem var kennd við sumaandoxunarefniefnasambönd í þessari plöntu. Þessi rannsókn gaf til kynna að kojic sýra, sem jákvæð viðmiðun, sýndi IC50 gildi upp á 0,05 mg/ml og hærri styrkur P. vera er hægt að nota sem áhrifaríkt lyf við húðsjúkdómameðferð eins og sortuæxli (35 ). Gourine, o.fl. sýndi að lofthlutar P. atlantica hafa öfluga andoxunareiginleika (36). Einnig bentu MeOH og CH2Cl2 hlutar af Nepeta saturejoide til hugsanlegra áhrifa gegn melanínframleiðslu í B16F10 sortuæxlisfrumum og gætu stuðlað að snyrtivörusamsetningum húðvörur (37). Afleiður kojínsýru höfðu hamlandi virkni átýrósínasa. Svo virðist sem tilvist frjálss hýdroxýlhóps og metýluppbótar í þessu efnasambandi hafi staðfest hamlandi virkni. Í þessari rannsókn gaf kojínsýra (jákvæð viðmiðun) til kynna IC50gildi upp á 0.28 mM (38). Fenýlprópanóíð glýkósíða og flavonoids einangruð úr Teucrium polium L. var. gnaphalodes sýndu andoxunarefni og týrósínasa hindrandi virkni. Höfundarnir sýndu að jaranól sýndi hæstu týrósínasa hemjandi virkni (IC50 0.041 mM) og pólíumósíð var besta andoxunarefnið meðal prófaðra efnasambanda. Kojínsýra sýndi IC50 gildi upp á 0,02 mM (39).

Lækkun á próteinmagni aftýrósínasaeftir P. atlantica subsp. mutica ogandoxunarefnieiginleikar og minnkuð ROS hafa staðfest notkun þessa efnis sem lyf gegn sortumyndun. Þessi rannsókn hefur í fyrsta sinn ákvarðað hamlandi áhrif P. atlanticasubsp. mutica ásortumynduní B16F10 sortuæxlisfrumum. Til að koma í veg fyrir uppsöfnun og offramleiðslu melaníns í húðinni, hömlun átýrósínasahefur mikilvægt hlutverk. Þess vegna, með tilliti til tilkynntra andoxunaráhrifa P. atlantica subsp.mutica, eru flavonoid- og fenólsambönd mikilvægir þættir plöntunnar sem bera ábyrgð á and-melanogenese og andtyrosinasavirkni P. atlantica subsp. mutica. Bæði andoxunarefni og and-melanógenandi virkni P. atlantica subsp. mutica gæti boðið upp á viðeigandi efni fyrir húðhvítunarblöndur og gæti verið innifalið í snyrtivörum fyrir húðvörur.

NIÐURSTAÐA

Að lokum sýndi þessi rannsókn í fyrsta skipti að MeOH og EtOAc útdrættir úr P. atlantica subsp. mutica hefur sterkatýrósínasahamlandi virkni sem er í samræmi við melanín minnkun. Ennfremur hefur P. atlanticasubsp. mutica sýndi einnig mikla hreinsunarvirkni ogandoxunarefnieiginleika, sem aðallega mætti ​​rekja til mikils magns flavonoids og heildarfjölfenóla. Niðurstöðurnar bentu til þess að geta P. atlanticasubsp. mutica til að draga úr melanínframleiðslu getur tengst eyðingu á frumu ROS og hamlandi virkni þess á boðleiðina sem stjórnartýrósínasastarfsemi. Þar sem hálfskauta seyðið hafði verulegan and-tyrosinasa og and-sortuvaldandiáhrif, þess vegna ályktum við að efnasamböndin sem bera ábyrgð á þessum áhrifum safnast fyrir í útdrættinum, ekki í ilmkjarnaolíum.