Andoxunar- og segavarnarlyf áhrif fenýlprópanóíð glýkósíða

fyrir frekari upplýsingar:ali.ma@wecistanche.com

Bartosz Skalski, o.fl

Ágrip

Holoparasitic plöntur af Orobanchaceae, þar á meðal Cistanche, Orobanche og Phelipanche spp, eru þekktar fyrir auðlegð þeirrafenýlprópanóíðglýkósíð(PPG). Mörg PPG efnasambönd hafa reynst hafa breitt svið virkni, svo sem örverueyðandi, bólgueyðandi, andoxunarefni og minnisbætandi. Til að kanna betur lífvirknimöguleika evrópskra kústýra (O. Caryophyllaceae – OC, P. Arenaria – PA, P. ramosa – PR) og tíu einangraðra fenýlprópanóíð innihaldsefna, könnuðum við róteindavirkni þeirra, verndandi áhrif gegn oxun í plasma in vitro kerfi. og áhrif á storkubreytur. Prófuðu útdrættirnir sýndu hreinsunarvirkni upp á 50–70 prósent af krafti Trolox. OC þykkni, ríkur af akteósíði, hafði yfir 20 prósent betri róttæka getu en PR þykkni sem var sá eini sem innihélt PPGs sem vantaði B-hring katekólhluta í asýleiningunni. Þar að auki kom í ljós að aðeins átta prófuðu PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)sýnt andoxunargetu í plasma manna sem meðhöndlað er með H2O2/Fe; hins vegar þrjú prófuð PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)hafði blóðþynningargetu auk andoxunareiginleika. Svo virðist sem uppbygging PPG, sérstaklega tilvist asýl- og katekólhluta, sé aðallega tengd andoxunareiginleikum þeirra. Blóðþynningargeta þessara efnasambanda er einnig tengd efnafræðilegri uppbyggingu þeirra. Valin PPG sýna möguleika á að meðhöndla hjarta- og æðasjúkdóma sem tengjastoxandistreitu.

Leitarorð:Broomrape, fenýlprópanóíð glýkósíð, oxunarálag, blóðvökvi í blóði

CistanchehefurFenýlprópanóíðglýkósíð

Smelltu til að Cistanche vörur

1. Inngangur

Oxandistreituer víða þekkt fyrir neikvæð áhrif á heilsu lífvera, þar á meðal hraðari öldrun og sum krabbamein. Tilkomaoxandistreituer tengt truflun á jafnvægi milli oxunar- og andoxunarhvarfa (þar á meðal ensím (katalasi, glútaþíon peroxidasi) og óensím (glútaþíon) varnar) í frumum líkamans [1]. Offramleiðsla hvarfgjarnra súrefnistegunda (ROS), þar á meðal oxandi stakeindir og tegunda með lokuðum skel, er einn helsti aðferðin á bak við myndun oxunarálags. Hins vegar eru líffræðileg áhrif af völdum ROS háð styrkleika, tíma útsetningar og staðsetningu. Við eðlilegar aðstæður (lágur styrkur) geta súrefnis-/köfnunarefnisrótarefni gegnt hlutverki aukaboðefna, en á hærra stigi geta þær byrjað að bregðast við líffræðilegum byggingum, eins og frumuhimnur [2]. Meðal allra ROS tegunda veldur hýdroxýlrót (HO.) afOxandistreituer þekkt fyrir að gegna mikilvægu hlutverki í ýmsum sjúkdómum, þar á meðal hjarta- og æðasjúkdómum. Truflanir í blóðkerfinu hafa verið tengdir og/eða á undan breytingum á ýmsum breytum blóðmyndunar og lífmerkja í plasma [1,3].

Á hinn bóginn hafa mörg náttúruleg efni, eins og pólýfenól og fjölómettaðar fitusýrur, verið skilgreind sem öflug andoxunarefni sem geta komið í veg fyrir myndun og/eða minnkað hvarfgjarnar súrefnistegundir. Efnasambönd með slíka eiginleika finnast í mörgum matvælum og lyfjablöndum úr jurtaríkinu. Mataræði auðgað með fersku grænmeti og ávöxtum og andoxunarmeðferðir sem byggjast á náttúrulegum andoxunarefnum eru því almennt ráðlögð þar sem þau geta dregið úr magnioxandistreituog koma í veg fyrir ýmsa lífeðlisfræðilega ferla [4,5]. Plöntupólýfenól eru fjölbreyttur hópur afleiddra umbrotsefna, þar á meðal fenólsýrur skipa mikilvægan sess þar sem þau dreifast víða og hafa margvísleg líffræðileg áhrif, svo sem sýklalyf, andoxunarefni og bólgueyðandi.Fenýlprópanóíðglýkósíð(PPGs) eru esterafleiður hýdroxýkanilsýru og þær eru aðal/eini flokkur afleiddra umbrotsefna sem eru til staðar í holoparasitic Orobanchaceae plöntum, þar á meðal Cistanche, Orobanche og Phelipanche spp. Nokkrar tegundir af þessari fjölskyldu eru alvarlegir skaðvaldar ræktunar sem bændur vilja losna við á ökrunum (dæmi um Phelipanche ramosa), fáar eru notaðar í lyfjafræði á meðan flestar skipta menn litlu máli. Herba Cistanche er mikið notað í asískri hefðbundinni læknisfræði við meðferð á nýrnaskorti og sem ónæmis- og minnisbætandi, öldrunar- og þreytueyðandi efni [6]. Plantefnafræðilegar greiningar á ýmsum rannsóknarhópum hafa sýnt þaðfenýlprópanóíðglýkósíð, eins og acteoside, echinacoside og podium side, eru eitt af helstu virku innihaldsefnunum í Herba Cistanche [7]. Nýleg rannsókn á nokkrum kústberjategundum sem fundust í Póllandi af Jedrejek o.fl. [8] hefur sýnt að þetta plöntuefni hefur svipaða eigindlega samsetningu (yfirráð PPGs)(phenýlprópanóíðglýkósíð), þar að auki jafngildir það eða jafnvel meira en Cistanche spp. hvað varðar innihald virkra efna [8]

Þessi rannsókn miðar að því að meta möguleika á andoxunarefnum og andoxunarefnum, sem og áhrifum á blæðingarstærðir þriggja kústberjaútdrátta (Orobanche caryophyllacea – OC, Phelipanche Arenaria – PA og P. ramosa – PR) sem eru rík af ýmsum fenýlprópanóíðum, eins og auk einstakra PPG kjósenda þeirra. Andróteindageta var mæld með því að nota 2,2'-azínóbis-3-etýlbensþíasólín-6-súlfónsýru/Trolox jafngildi (ABTS/TE) og 2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl (DPPH ) próf. Theoxandistreituí plasmaprófunarkerfinu var framkallað með því að nota hýdroxýlrót (H2O2/Fe), síðan var lípíðperoxun (tíóbarbítúrsýru-viðbragðstegund (TBARS) próf), og magn próteinkarbónýl- og þíólhópa mælt. Meðal ákvörðuðra þátta fyrir blæðingu voru: virkjaður hluta tromboplastíntími (APTT), prótrombíntími (PT) og trombíntími (TT).

CistanchehefurFenýlprópanóíðglýkósíð

2. Efniviður og aðferðir

2.1. Efni

2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýlradikal (DPPH), 2,2'-asínóbís-3-etýlbensþíasólín-6-súlfónsýra (ABTS), kalíumpersúlfat, 6- hýdroxý-2,5,7,8-tetrametýlkróman-2-karboxýlsýra (Trolox), dímetýlsúlfoxíð (DMSO), þíóbarbítúrsýra (TBA), maurasýru (LC-MS gæða) og H2O2 voru keyptir frá Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Bandaríkjunum). Metanól (HPLC halli einkunn) og asetónítríl (LC-MS einkunn) voru keypt frá Merck (Darmstadt, Þýskalandi). Tíu fenýlprópanóíð efnasambönd sem voru prófuð í þessari vinnu, þar á meðal 2'-O-asetýlakteósíð (97 prósent), 2'-O-asetýlpólíumósíð (98 prósent), 3-O-metýlpólíumósíð (96 prósent), akteósíð (99 prósent), vettvangur inni (97 prósent), crenatoside (98 prósent), teniposide (99 prósent), poliumoside (99 prósent), tubuloside A (96 prósent), og wiede mannioside D (96 prósent) voru áður einangruð af okkur frá neðangreindri plöntu efni [8]. Hreinleiki efnasambanda var metinn með UHPLC-PDA-MS greiningu. Ofurhreint vatn var útbúið innanhúss með því að nota Milli-Q vatnshreinsikerfi (Millipore Co.). Önnur hvarfefni voru af greiningargráðu og voru veitt af innlendum viðskiptabirgðum.

2.2. Plöntuefni

Blómstrandi plöntur af þremur kústtegundum, þar á meðal Orobanche Caryophyllaceae Sm., Phelipanche Arenaria Pomel og P. ramosa (L.) Pomel, var auðkennd af prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski University, Kielce, Póllandi) og safnað frá náttúrulegum uppruna í Póllandi. Skírteinissýnishorn (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), xerothermic grasland, parasitize Galium boreale, maí 2014; P. Arenaria – Zwierzyniec (50.3652◗.5N), plássi◦N, 0222◦N, 0222◦N, sníkjudýr Artemisia campestris, júní 2014; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), akur, sníkjudýr Solanum Lycopersicum, september 2014) eru geymd í grasgarði Jan Kochanowski háskólans í Kielce (KTC). Plöntuefnið var frostþurrkað og fínmalað fyrir útdrátt.

2.3. Undirbúningur útdráttar úr kústberjum

Plöntuefni í duftformi (O. Caryophyllaceae (OC) – 2 g, P. Arenaria (PA) – 3 g og P. ramosa (PR) – 3 g) var dregið út með 80 prósent MeOH við 40 ◦C og 1500 psi (leysisþrýstingur ) með því að nota ASE 200 hraða leysisútdrátt (Dionex, Sunnyvale, CA, Bandaríkjunum). Útdrættirnir voru látnir gufa upp og frostþurrkaðir (Gamma 2–16 LSC frostþurrkari, Christ, Þýskaland). Útdráttarskilvirkni fyrir OC, PA og PR var 55 prósent, 37 prósent og 43 prósent miðað við þyngd plöntuefnisins, í sömu röð. Vegna mikils kolvetnainnihalds (gögn ekki sýnd) voru hráu útdrættirnir hreinsaðir frekar með fastfasaútdrætti (SPE) á Oasis HLB örsúlu (500 mg; Waters, Milford, MA, Bandaríkjunum). Sykurnar voru fjarlægðar með 1 prósent MeOH, síðan voru áhugaverð efnasambönd skoluð út með 80 prósent MeOH. Eftir að leysirinn hefur verið fjarlægður voru OC, PA og PR útdrættir frostþurrkaðir (Gamma 2–16 LSC frystiþurrkur) og afrakstur SPE hreinsunar var 53 prósent (OC), 67 prósent (PA) og 51 prósent (PR) .

2.4. Plöntuefnafræðilegir eiginleikar kústberjaseyðis

Eigindlegar og megindlegar greiningar á kústútdrætti voru gerðar með því að nota ACQUITY UPLC kerfi (Waters) sem var tengt við ljósdíóða fylkisskynjara (PDA) og fjórpóla tandem-massarófsmæli (TQD-MS/MS). Frostþurrkaðir OC, PA og PR útdrættir voru leystir upp í 50 prósent metanóli í styrknum 0.50 mg/ml og síðan litskiljaðir á BEH C18 súlu (1{ {21}}0 × 2,1 mm, 1,7 µm, vatn). Litskiljunarskilyrði voru sem hér segir: ofnhiti – 25 ◦C, línulegur halli 10→25 prósent af hreyfanlegum fasa B (0,1 prósent maurasýru í asetónítríl) í hreyfanlegum fasa A (0,1 prósent maurasýru í H2O) á 12 mínútum, flæðihraði – 0,4 mL/mín., inndælingarrúmmál – 2 μL, UV-svið – 190–490 nm (3,6 nm upplausn). MS-greiningin var gerð í neikvæðri jónaham með rafúðajónun (ESI), með eftirfarandi stillingum: skannasvið 100–1200 m/z; háræðaspenna 2,8 kV; keiluspenna 35 V; uppspretta hitastig 150 ◦C; upplausnarhitastig 450 ◦C; losunargasflæði 900 L/klst., og keilugasflæði 100 L/klst. Gagnaöflun og úrvinnsla var framkvæmd með Waters MassLynx 4.1 hugbúnaði.

Fenýlprópanóíð glýkósíð (PPG) toppar voru auðkenndir með samanburði á LC-MS gögnum sem fengust við þær sem áður voru einangruð efnasambönd [8]. Magngreining PPGs(phenýlprópanóíðglýkósíð)í kústberjaútdrætti var byggt á UPLC-UV aðferðinni með greiningu við 330 nm og ytri staðalkvörðun með því að nota acteoside (Sigma-Aldrich, Stærra en eða jafnt og 99 prósent, HPLC) sem hópstaðall. Línuleg kvörðunarferill var útbúinn í sex styrkjum á bilinu 1–200 ug/mL og sýndi góða línuleika (R2 Stærri en eða jafnt og 0,999). Megindlegar niðurstöður tákna meðaltal ± SD gildi þriggja inndælinga og voru gefnar upp sem milligrömm akteósíðjafngilda (ígildi) á hvert gramm af útdrætti (mg akteósíðjafngildi/g).

CistanchehefurFenýlprópanóíðglýkósíð

2.5. Antiradical virkni in vitro

2.5.1. ABTS radical scavenging próf

ABTS and-radical prófið var framkvæmt með aðferð sem lýst er af Kontek o.fl. [9], með smávægilegum breytingum sem hér segir: 20 prósent MeOH var notað til að útbúa hvarfefni (7 mM ABTS og 4,9 mM kalíumpersúlfat); lausnirnar af OC, PA og PR útdrætti, í fjórum styrkleikastigum á bilinu 100– 400 ug/mL, og Trolox lausnum, við sex styrkleikastig á bilinu 10– 250 ug/ml, voru unnar með 50 prósentum MeOH. Hlutfall sýnis af ABTS plús vinnulausn var 1:25 (v/v). Gleypið við 734 nm var mælt eftir 30 mínútna ræktun í myrkri með UV-vis litrófsmæli (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, Bandaríkjunum).

Frásogshömlun (prósent) var reiknuð út sem hér segir: [(Abscontrol–Abssample)/abscontrol] ×100.

Trolox-jafngildi (TE) útdrætti kústberja voru reiknuð út með formúlu TE {{0}} sýni/staðall, þar sem m er halli beinlínuferilanna (gleypnihömlun á móti styrk). TE gildi úrtaksins lýsir staðlaðri virkni þess gegn Trolox (TEstandard =1.0). IC50 gildin fyrir OC, PA og PR útdrætti og Trolox náðust í tilraunaskyni, síðan voru þau reiknuð út frá beinlínu ferlum þeirra (gleypnihömlun á móti styrkleika) og eru gefin upp í ug/mL.

Greiningin var gerð í þríriti og niðurstöðurnar eru settar fram sem meðaltal ± staðalfrávik (SD).

2.5.2. DPPH radical scavenging próf

DPPH and-radical prófið var framkvæmt með aðferð sem lýst er af Jedrejek o.fl. [8] og Brand-Williams o.fl. [10], með smávægilegum breytingum sem hér segir: lausnirnar af OC, PA og PR útdrætti, í fjórum styrkleikastigum á bilinu 50−250 ug/mL, og Trolox lausnum, við sex styrkleikastig á bilinu 10− 250 ug/mL, voru útbúin með 50 prósent MeOH. Hlutfall sýna af DPPH var 1:19 (v/v). Gleypið við 517 nm var mælt eftir 30 mínútna ræktun í myrkri með UV-vis litrófsmæli (Evolution 260 Bio).

Frásogshömlun (prósent) var reiknuð út sem hér segir: [(Abscontrol–Abssample)/abscontrol] ×100.

Trolox Equivalent (TE) og IC50 gildi prófsýna voru reiknuð út á sama hátt og í ABTS prófinu (kafli 2.5.1). Greiningin var gerð í þríriti og niðurstöðurnar eru sýndar sem meðaltal ± SD.

2.6. Stofnlausnir prófaðra plöntuefnasambanda og útdrætti fyrir tilraunir með plasma manna

Stofnlausnir af prófuðu efnasamböndunum og plöntuútdrætti voru unnar í 50 prósent DMSO. Lokastyrkur DMSO í prófuðu sýnunum var lægri en 0,05 prósent og áhrif þess voru ákvörðuð í öllum tilraunum.

2.7. Einangrun manna í plasma

Blóð úr mönnum, eða blóðvökvi, var fengið frá sex venjulegum gjöfum (reykingalausum körlum og konum) til blóðbanka (Lodz, Pólland) og læknastöðvar (Lodz, Pólland). Blóði var safnað sem CPD lausn (sítrat/fosfat/dextrósi; 9:1; v/v blóð/CPD) eða CPDA lausn (sítrat/fosfat/dextrósi/adenín; 8,5:1; rúmmál; blóð/CPDA). Gefarnir höfðu ekki tekið nein lyf eða ávanabindandi efni (þar á meðal tóbak, áfengi og andoxunarefni) í að minnsta kosti tvær vikur fyrir gjöf. Greining okkar á blóðsýnunum var framkvæmd samkvæmt leiðbeiningum Helsinki-yfirlýsingarinnar um mannrannsóknir og samþykkt af nefndinni um siðareglur rannsókna í tilraunum á mönnum við háskólann í Lodz. Plasma var útbúið með skilvindu á fersku mannsblóði við 4500x g í 25 mínútur við stofuhita. Próteinstyrkurinn var reiknaður út með því að mæla gleypni prófuðu sýnanna við 280 nm, samkvæmt aðferð Whitaker og Granum [11].

CistanchehefurFenýlprópanóíðglýkósíð

2.8. Merki um oxunarálag í plasma manna

2.8.1. Fituperoxunarmæling

Lípíðperoxun í plasma var magngreind með því að mæla styrk þíóbarbítúrsýru hvarfefna (TBARS). TBARS styrkur var reiknaður út með mólútrýmingarstuðlinum (ε =156,000 M− 1cm− 1). Aðferðinni er lýst nánar annars staðar [12,13].

2.8.2. Mæling á karbónýlhópum

Magn karbónýlhópa var reiknað út með mólútrýmingarstuðlinum (ε=22,000 M− 1 cm− 1) og var gefið upp sem nmól karbónýlhópar/mg af plasmapróteini, samkvæmt Bartosz [13 ] og Levine o.fl. [14].

2.8.3. Ákvörðun þíólhóps

Innihald tíólhópa í plasmapróteinum var mælt með litrófsmælingu með SPECTROstar Nano Microplate Reader (BMG LABTECH, Þýskalandi) með gleypni við 412 nm með 5,5'-dítíól-bis-(2- nítróbensósýru). Aðferðinni er lýst nánar á öðrum stað [15–17].

2.9. Færibreytur blæðingar

2.9.1. Mæling á prótrombíntíma (PT)

PT var ákvörðuð með storkumælingu með því að nota Optic Coagulation Analyzer (líkan K-3002, Kselmed, Grudziadz, Pólland) samkvæmt Malinowska o.fl. [18].

2.9.2. Mæling á trombíntíma (TT)

TT var ákvarðað með storkumælingum með því að nota ljósstorkugreiningartæki (líkan K-3002, Kselmed, Grudziadz, Pólland), samkvæmt aðferð sem lýst er af Malinowska o.fl. [18].

2.9.3. Mæling á virkum hluta tromboplastíntíma (APTT)

APTT var ákvörðuð með storkumælingu með því að nota K-3002 ljósstorkugreiningartæki (Kselmed, Grudziadz, Pólland) samkvæmt Malinowska o.fl. [18].

2.10. Gagnagreining

Q-Dixon prófið var gert til að eyða óvissum gögnum. Gögnin voru prófuð með tilliti til eðlilegrar dreifingar með Shapiro-Wilk prófinu og dreifnijafnrétti við Levene prófið. Tölfræðilega marktækur munur var auðkenndur með því að nota ANOVA, fylgt eftir með Tukey's margfeldi samanburðarprófi eða Kruskal-Wallis prófi. Samanburður var talinn marktækur við p < 0.05.="" gildin="" eru="" sett="" fram="" sem="" meðaltal="">

3. Niðurstöður og umræður

Tíu áður einangraðir af okkurfenýlprópanóíðglýkósíð[8], þar á meðal 2'-O-asetýlakteósíð, 2'-O-asetýlpólíumósíð, 3-O-metýlpólíumósíð, akteósíð, vettvangur innan, krenatósíð, phelipósíð, podium hlið, tubuloside A og wiedemannioside D, ásamt þremur Bromrape útdrætti (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) og P. ramosa (PR)) voru nú rannsakaðir til að draga úroxandistreituog segavarnareiginleikar í plasmakerfi manna. Efnafræðileg uppbygging fenýlprópanóíðanna sem prófuð eru eru sýnd á mynd 1, og eins og sjá má eru þau öll byggð eftir svipuðu mynstri, með sömu/svipuðum undireiningum: hýdroxýtýrósóli, einsykrum (glúkósa, rhamnósa og/eða xýlósa) og hýdroxýkanilsýru. Flest skoðuð PPG efnasambönd eru skipt út fyrir koffínsýru, en í staðinn má skipta út fyrir annað hvort kúmarsýru eða ferúlsýru.

Burtséð frá einstökum PPG efnasamböndum, þrír kústþykkni - OC, PA og PR, sem eru blöndur af nokkrum PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)og þjónaði áður sem upphafsefni fyrir einangrun efnasambanda, voru einnig með í líffræðilegu rannsókninni. Önnur ástæða fyrir því að velja þrjár mismunandi tegundir var mikill munur á plöntuefnafræðilegu sniði meðal þeirra, eins og sjá má á mynd 2. Nánari samanburður á OC, PA og PR útdrættinum, þar á meðal magngögnin, er sýndur í töflunni. 1. Acteoside var aðalefnisþátturinn í O. Caryophyllaceae útdrættinum (690 mg/g), teniposide og vettvangur inni í P. Arenaria (samanlagt 550 mg/g), en políumósíð og asetýleruð afleiða þess voru mikilvægustu umbrotsefnin í P. ramosa þykkni (samanlagt 640 mg/g). Skoðuðu útdrættirnir voru einnig mismunandi í heildarinnihaldi fenýlprópanóíða, hæsta magnið fannst í OC (810 mg/g), aðeins lægra í PR (795 mg/g) og lægra í PA (685 mg/g). Ennfremur er vert að hafa í huga að tilvist PPGs með öðrum en koffeoylhlutum, eins og kúmaróýli eða ferúlóýli, fannst aðeins í P. ramosa þykkni, þar sem þessi efnasambönd voru um það bil sjötti af heildarfjölda PPG (um 120 mg/ g) (Tafla 1).

Fyrri rannsóknir á andróteindavirknifenýlprópanóíðglýkósíðeftir Heilmann o.fl. [19] og Jedrejek o.fl. [8], þar á meðal um 30 mismunandi PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)eins og acteoside, isoacteoside og crenatoside, hafa leitt í ljós sterk tengsl þess við uppbyggingu asýlhluta (fenólsýru og týrósóls). Almennt leiddi breyting eða skipting á katekólhluta asýleiningar til marktækrar minnkunar á hreinsunarvirkni gegn hvarfgefnum súrefnistegundum (ROS) og DPPH stakeind. Í núverandi rannsókn var róttæka in vitro möguleiki þriggja kústþykkni (OC, PA og PR) kannaður með ABTS og DPPH greiningum og niðurstöður bornar saman bæði innbyrðis sem og við virkni einstakra fenýlprópanóíðþátta sem mældir voru í fyrri rannsókn okkar [8]. Niðurstöðurnar voru gefnar upp sem Trolox-jafngildi (TE) og IC50 gildi (tafla 2). Almennt séð voru allir þrír útdrættirnir góðir til að hreinsa bæði ABTS og DPPH stakeindir en einnig sást munur á sýnunum sem prófuð voru (áætlað TE var á bilinu 0.5–0.7; 1.0 var jafngildi Trolox). Andróteindahreinsandi virkni sýna var í eftirfarandi röð: Trolox > OC > PA > PR. Útdráttur Orobanche Caryophyllaceae (IC50=155–275 µg/mL) hafði yfir 20 prósent meiri virkni en Phelipanche ramosa útdráttur (IC50=200–320 µg/mL).

Hæstu róttæku hreinsunarvirkni OC útdráttarins sem tilkynnt er um má skýra með hæstu PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)innihald í þessu sýni, sem og inntak akteósíðs, ríkjandi innihaldsefnis þess, sem samkvæmt fyrri rannsóknum [8,19] er einn sterkasti sindurefnahreinsandi meðal umbrotsefna úr þessum hópi (TEDPPH=0 .87; [4]). Hins vegar, með hliðsjón af gagnkvæmu sambandi andróteindavirkni og innihalds fenýlprópanóíða í OC, PA og PR útdrættinum, fannst engin einföld fylgni á milli þessara tveggja þátta (r < 0.5),="" sem="" gefur="" til="" kynna="" marktækt="" inntak="" af="" eigindlegum="" prófíl.="" þetta="" er="" aðallega="" tengt="" p.="" ramosa="" þykkni,="" sem="" þrátt="" fyrir="" mikið="" magn="">(phenýlprópanóíðglýkósíð)({{0}},8 g/g) einkenndist af minnstu líffræðilegu virkni meðal prófaðra sýna (TE ~ 0.5). PR útdrátturinn, eins og getið er hér að ofan, var eina sýnið sem hafði fenýlprópanóíð með kúmarsýru eða ferúlsýru, efni sem skorti B-hring katekólið, sem hefur verið tilkynnt að hafi minnkað andoxunargetu. Fjögur PPG efnasambönd með breyttri koffínsýru, þar á meðal 3-O-metýlpólíumósíð, ramósa A og wiedemanniósíð D, prófuð af okkur áður höfðu TEDPPH um það bil 0,3 [8]. Þannig eru núverandi niðurstöður í samræmi við og staðfesta niðurstöður fyrri róttæku in vitro tilrauna á fenýlprópanóíðum.

Eins og Chen o.fl. [20] sem lýst er, tengist það meiri H-gjafagetu eða stöðugleika róttæksins með ýmsum virkum hópum blöndu efnasambanda. Nokkrir byggingarþættir hafa verið auðkenndir sem auka beina andoxunarvirkni pólýfenóla, sérstaklega þau sem tengjast fjölda og stöðu hýdroxýlhópa. Talið er að virkni til að hreinsa sindurefna aukist með auknum fjölda –OH hópa. Hins vegar hefur staða þessara hópa, í sameind, enn meiri áhrif á þá virkni sem beitt er. Tiltölulega stöðug öflug efnasambönd eru þau sem hafa 3,4-díhýdroxýhluta í byggingu þeirra, sem og þau sem hafa fleiri en tvo hýdroxýlhópa [21]. Efnafræðileg uppbygging andoxunarefnisins gerir kleift að skilja hvernig andoxunarefnahvarfið er. Lopez-Munguía o.fl. [22] byggt á þéttleika hagnýtri kenningu (DFT) útreikningum ákvarðað að PPGs(phenýlprópanóíðglýkósíð)andoxunarefni fer fram í gegnum röð róteindataps stakra rafeindaflutninga (SPLET). Hins vegar, Li o.fl. [23] tilraun til að kanna aðferð fenólísk fenýlprópanóíð andoxunarefna, komst að þeirri niðurstöðu að PPGs (akteósíð, forsýtósíð B og poliumósíð) gætu tekið þátt í mörgum leiðum til að beita andoxunarvirkni, aukið hlutverk sykurleifa.

Rannsóknir hafa sýnt að andoxunarefni sem eru unnin úr plöntum eru áhrifarík stjórnun á blæðingum í hjarta- og æðasjúkdómum [24-26]. Ýmsar plöntur sem notaðar eru í hefðbundinni læknisfræði innihalda umtalsvert magn af PPG [27,28]. Að auki PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)Vitað er að hafa margvíslega líffræðilega virkni, þar á meðal bólgueyðandi, nýrnaeyðandi og lifrareyðandi eiginleika [29-33].

Í nýlegri rannsókn þeirra, Jedrejek o.fl. [8] lýsti einangrun PPGs(phenýlprópanóíðglýkósíð)úr þremur pólskum kústum og metið andoxunarvirkni þeirra með DPPH prófinu. Byggt á því metur þessi rannsókn hvort tíu valda PPGs einangruð úr þessum plöntum gætu dregið úroxandistreituí plasma manna sem meðhöndlað er með sterku líffræðilegu oxunarefni, þ.e. hýdroxýlrótargjafanum H2O2/Fe, og mótar storkueiginleika plasma in vitro. Andoxunareiginleikar tíu einangraðra PPGs voru ákvarðaðir samkvæmt völdum breytum afoxandistreitu: TBARS-stig sem merki um lípíðperoxun, ásamt magni karbónýlhóps og þíólhóps, sem merki um oxandi próteinskemmdir.

Bæði blóðfituperoxun og próteinkarbónýleringargildi í blóðvökva af völdum H2O2/Fe minnkaði verulega í viðurvist átta prófaðra efnasambanda, þ.e. akteósíð, krenatósíð, 2'-O-asetýlakteósíð, phelipósíð, vettvangur inni, túbúlósíð A, poliumósíð og 3- O-metýlpólímúósíð, í öllum prófuðum styrkjum (1, 5 og 50 µg/ml); hins vegar sáust hvorug áhrifin fyrir tvö af prófuðu efnasamböndunum, þ.e. 2'-O-asetýlpólíumósíð og wiedemanniósíð D, eða hvaða útdrætti sem var prófað í hvaða styrk sem er (1, 5 og 50 µg/ml). Að auki reyndist ekkert af prófuðu efnasamböndunum eða prófuðu útdrættinum vernda blóðvökvann gegn H2O2/Fe - völdum tíólhópaoxun í próteinum (myndir 3-5). Hins vegar geta prófuðu útdrættirnir verið uppspretta efnasambanda með ýmsa líffræðilega eiginleika.

Í fyrsta skipti gefa niðurstöður þessarar rannsóknar til kynna að átta af prófuðu PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)sýna andoxunarmöguleika í plasma manna í nærveru utanaðkomandi hvarfgjarnra súrefnistegunda með því að hindra lípíðperoxun og próteinkarbónýleringu í plasma sem er meðhöndlað með H2O2/Fe. Að auki höfðu 2'-O-asetýlpólíumósíð og wiedemanniósíð D engin slík áhrif. Almennt séð eru niðurstöður okkar í samræmi við fyrri in vitro tilraunir á PPG. Heilmann o.fl. [19] og Jedrejek o.fl. [8] greina frá fylgni á milli efnafræðilegrar uppbyggingar PPG og starfsemi þeirra. Andoxunareiginleikar PPG(phenýlprópanóíðglýkósíð)virðast fyrst og fremst tengjast uppbyggingu asýlhluta þeirra, þ.e. fenólsýru og fenýlprópanóíð einingarinnar, þar með talið nærveru og/eða breytingu á katekólhluta. Til dæmis reyndist wiedemanniosíð D missa andoxunargetu sína gagnvart plasma sem var meðhöndlað með H2O2/Fe eftir að koffóýlhluta þess var skipt út fyrir ferúlóýlhluta.

Breytingar á storknunarferlinu stafa oft afoxandistreitu; þessar breytingar geta stýrt starfsemi hjarta- og æðakerfisins og geta leitt til þróunar hjarta- og æðasjúkdóma [1]. Af tíu plöntuefnasamböndum og þremur plöntuþykkni sem prófuð voru í þessari rannsókn sýndu tubuloside, podium side og 3-O-methylpoliumoside og allir prófaðir útdrættir að lengja þrombíntíma verulega við allan prófaðan styrk, þ.e. 1, 5 og 50 µg/ml (mynd 6B). Hins vegar breytti enginn af þessum útdrætti, né neitt af prófuðu efnasamböndunum, PT eða APTT (mynd 6A og C).

Mynd 6. Áhrif prófaðra efnasambanda (akteósíð, krenatósíð, 2'-O-asetýlakteósíð, phelipósíð, arenariosíð, tubuloside A, poliumoside, 3-O-methylpoliumoside, 2'-O-cetylpolimuoside, wiedemannioside D) og útdrætti (P. arenaria þykkni - PA, P. ramosa þykkni - PR og O. caryophyllacea þykkni - OC) (1–50 µg/mL) á völdum blóðvökvabreytum plasma: PT (A), TTn (B) og APTT (C). Gögn tákna meðaltal ± SEM sex óháðra tilrauna.n* p < 0.05="" (á="" móti="" viðmiðun),="" ns="" –="" p=""> 0.05 (á móti viðmiðun).

Tafla 3 ber saman áhrif PPG (5 µg/mL) á lífmerkioxandistreituí plasma sem er meðhöndlað með H2O2/Fe og áhrif þeirra á storknun. Átta af prófuðu PPG vélunum(phenýlprópanóíðglýkósíð)sýndi aðeins andoxunargetu í meðhöndluðu plasma manna; Hins vegar reyndust þrjú prófuð PPG hafa bæði andoxunareiginleika og segavarnarlyf. Athyglisvert er að niðurstöður DPPH prófsins féllu ekki saman við þær sem fengust í líffræðilegu líkaninu með því að nota plasma manna sem var meðhöndlað með H2O2/Fe: andoxunargeta prófuðu útdráttanna getur verið læst af tilteknum efnasamböndum sem eru til staðar í plasma.

Að lokum varpa núverandi niðurstöður okkar nýju ljósi á andoxunarmöguleika og segavarnareiginleika PPGs.(phenýlprópanóíðglýkósíð). Það virðist sem uppbygging PPGs(phenýlprópanóíðglýkósíð), sérstaklega tilvist asýl- og katekólhluta, er aðallega tengd andoxunar- og segavarnareiginleikum þeirra. Valin PPG getur vel haft möguleika á að meðhöndla hjarta- og æðasjúkdóma sem tengjastoxandistreitu. Hins vegar er þörf á frekari tilraunum til að ákvarða styrk þessara efnasambanda sem þarf fyrir in vivo líkan.

Yfirlýsing um hagsmunaárekstra

Höfundarnir lýsa því yfir að þeir hafi enga þekkta samkeppnislega fjárhagslega hagsmuni eða persónuleg tengsl sem gætu hafa virst hafa áhrif á verkið sem greint er frá í þessari grein.

Heimildir

[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Revisiting pharmacology ofoxandistreituog truflun á starfsemi æðaþels í hjarta- og æðasjúkdómum: vísbendingar um meðferð sem byggir á redox, Free Radic. Biol. Med. 157 (2020) 15–37.
[2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker, Biomarkers ofoxandistreituog tengsl þess við þvagskerðandi getu hjá strætóviðhaldsstarfsmönnum, J. Occupat. Med. Toxicol. 6 (2011) 18–23.
[3] P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz,Oxandistreituog hemostasis, Post. Biochem. 56 (2010) 239–247.
[4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, mótun Nrf2 með ólífuolíu og vínpólýfenólum og taugavörn, Andoxunarefni 6 (2017) 73.
[5] S. Amor, P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Polyphenol útdrættir úr rauðvíni og vínvið: hugsanleg áhrif á krabbamein, Sjúkdómar 6 (2018) 1–12.
[6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): ein af bestu lyfjagjöfum hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41–49.
[7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Review: greining á efnafræðilegum innihaldsefnum í Cistanche tegundum, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[8] D. Jedrejek, S. Pawelec, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, Auðkenning og tilvik phenylethanoid og iridoid glýkósíða í sex pólskum broomrapes (Orobanche spp. og Phelipanche spp., Orobanchaceae), 170 (fytókemi) 2020), 112189.
[9] B. Kontek, D. Jedrejek, W. Oleszek, B. Olas, Andoxunar- og andoxunarvirkni in vitro á útdrætti úr humlum sem er ríkur í bitur sýrur og xanthohumol, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1–9.
[10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Notkun sindurefnaaðferðar til að meta andoxunarvirkni, Lebensm. Vísir. Tækni. 28 (1995) 25–30.
[11] JR Whitaker, PE Granum, Algjör aðferð til að ákvarða prótein sem byggir á mismun á gleypni við 235 og 280 nm, Anal. Biochem. 109 (1980) 156–159.
[12] B. Wachowicz, Adenín núkleótíð í blóðflagnafrumum fugla, Cell Biochem. Virka. 2 (1984) 167-170.
[13] G. Bartosz, Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Ákvörðun á karbónýlinnihaldi í oxandi breyttum próteinum, Aðferðir Ensím. 186 (1990) 464–478.
[15] DM Joel, J. Gressel, LJ (ritstj.), Musselman, Parasitic Orobanchaceae: Parasitic Mechanisms and Control Strategies, Springer, Heidelberg, Þýskalandi, 2013, bls. 1–10.
[16] Y. Ando, ​​M. Steiner, Súlfýdýl- og tvísúlfíðhópar blóðflagnahimna: ákvörðun tvísúlfíðhópa, Biochim. Lífeðlisfræði. Acta 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando, ​​M. Steiner, Súlfýdýl og tvísúlfíðhópar blóðflöguhimna: ákvörðun súlfýdrýlhópa, Biochim. Lífeðlisfræði. Acta 311 (1973) 38–44.
[18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, Phenolic brot frá Trifolium pallidum og Trifolium scabrum lofthlutum í plasma manna vernda gegn breytingar af völdum ofhómócysteinemíu, Food Chem. Toxicol. 50 (2012) 4023–4027.
[19] J. Heilmann, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Radical scavenger activity offenýlprópanóíðglýkósíðí FMLP örvuðum fjölbreytikjarna hvítfrumum: sambönd uppbyggingar og virkni, Planta Med. 66 (2000) 746–748.
[20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Free phenolic acids in Shanxi aged vinegar: breytingar á öldrun og samverkandi andoxunarvirkni, Int. J. Food Prop. 19 (2015) 1183–1193.
[21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Sambönd byggingar-andoxunarvirkni flavonoids og fenólsýra, Free Radic. Biol. Med. 20 (1996) 933–956.
[22] A. Lopez-Munguía, 'Y. Hernandez-Romero, 'J. Pedraza-Chaverri, A. MirandaMolina, I. Regla, A. Martínez, E. Castillo, fenýlprópanóíð glýkósíð hliðstæður: ensímmyndun, andoxunarvirkni og fræðileg virkni rannsókn á sindurefnahreinsibúnaði þeirra, PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, Andoxun og frumuvernd akteósíðs og afleiða þess: samanburður og vélræn efnafræði, Molecules 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling, HM Rawel, Chokeberry (Aronia melanocarpa) – umsögn um einkennandi efnisþætti og hugsanleg heilsufarsáhrif, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even, Áhrif mataræði og næringarefna á starfsemi blóðflagna, Semin. Thromb. Hemost. 40 (2008) 214–226.
[26] B. Olas, Fjölvirkni berja í átt að blóðflögum og hlutverk berjafenóla í hjarta- og æðasjúkdómum, Blóðflögur 5 (2016) 1-10.
[27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, US Harput, I. Sahin-Eredemli, Áhrif fenýlprópanóíðs og iridoid glýkósíða á skerðingu af völdum sindurefna á æðaþelsháðri slökun í ósæðarhringjum rotta, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193–197.
[28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Rannsókn á etnískum lækningajurtum Orobanche, Cistanche og Boschniakia, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552.
[29] K. Hayashi, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Yagita, Y. Suzuki, Acteoside, hluti af Stachys sieboldii MIQ, getur verið efnilegt nýrnalyf (3): áhrif asetóníðs á tjáningu á millifrumu viðloðunsameind -1 í tilrauna nýrnahnoðra í rottum og ræktuðum æðaþelsfrumum, Jpn. J. Pharmacol. 70 (1996) 157–168.
[30] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Lifrarverndandi virkni fenýlprópanóíða frá Cistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120–125.
[31] WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside verndar æðaþelsfrumur gegn sindurefnum af völdum sindurefnaoxandistreitu, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748.
[32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Einangrun og lyfjafræðileg virkni phenylpropanoid estera frá Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392.
[33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, The inhibitory effect affenýlprópanóíðglýkósíðog iridoid glúkósíð á framleiðslu sindurefna og 2 integrín tjáningu í hvítfrumum úr mönnum, J. Pharm. Pharmacol. 58 (2006) 129–135.