Etanólútdráttur af Cucurbita Pepo L. fræjum breytir truflun á taugainnkirtla í langvarandi stressuðum rottum og tjáningu bólgumerkja í nýrnahettum og HSP70

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Hailah M. Almohaimeed1, Shereen Hamed2, Hanan S. Seleem3,4, Ashwaq H. Batawi 5, Zuhair M. Mohammedsaleh6, Maha Jameal Balgoon7, Soad S. Ali 8,9, Soad Al Jaouni 9,10 og Nasra Ayuob11*

Bakgrunnur: Grasker(Cucurbita pepo L.) var lýst hafaandoxunarefni,bólgueyðandi, þreytueyðandi og þunglyndislyfjum. Nýrnahetturinn er mikilvægt líffæri sem svarar streitu sem viðheldur jafnvægi við streitu.

Markmið:Þessi rannsókn miðar að því að meta virkni gjafar Cucurbitapepo L. (CP) þykkni til að draga úr hegðunar-, lífefnafræðilegum og byggingarbreytingum á nýrnahettum sem orsakast af útsetningu fyrir langvarandi ófyrirsjáanlegu vægu álagi (CUMS) og til að kanna gangverkið á bak við þessi áhrif.

Efni og aðferðir:Fjörutíu karlkyns albínórottum var skipt í 4 hópa (n=10): samanburðarhópar, CUMS, flúoxetín-meðhöndlaðir og CP-meðhöndlaðir hópar. Hegðunarbreytingar, kortikósterónmagn, bólgueyðandi frumuvakar TNF- og IL-6 og oxunarefni/andoxunarefniprófíllinn var metinn í sermi í lok tilraunarinnar. Nýrnahetturnar voru unnar fyrir vefjameinafræðilegt og ónæmisvefjafræðilegt mat. Genatjáning kaspasa-3 og Ki67 og hitasjokkprótein 70 (HSP70) voru metin í nýrnahettum með RT-PCR.

Niðurstöður:CP útdrátturinn minnkaði marktækt kortikósterónmagn (p < {0}}}.001),="" hreyfingarleysistíma="" (p="">< 0.001)="" og="" bólgu-="" og="" oxunarbreytingar="" tengdar="" þunglyndi="" af="" völdum="" cums="" samanborið="" við="" ómeðhöndlaða="" hópinn.="" cp="" útdrátturinn="" létti="" cums-völdum="" vefjameinafræðilegum="" breytingum="" á="" nýrnahettum="" og="" minnkaði="">apoptosis(p < 0.001) og verulega uppstilltandoxunarefnimagn í sermi.

Niðurstaða:Cucurbita pepo L. bætti á áhrifaríkan hátt hegðunar-, lífefna- og nýrnahettubreytingar af völdum langvarandi streitu, aðallega með þvíandoxunarefniog bólgueyðandi áhrif.

Leitarorð: grasker, streita, þunglyndi, caspase-3, ki67, Hsp70,apoptosis

Cistanche, kínversk jurt, hefur andoxunarvirkni.

KYNNING

Meira en 264 milljónir manna á öllum aldri þjást af þunglyndi um allan heim (WHO, 2020). Frammistaða þunglyndis einstaklingsins er almennt léleg í skólanum, í vinnunni og í fjölskyldunni. Þunglyndi getur leitt til sjálfsvígs; þannig að hún er talin önnur helsta dánarorsök 15- til 29-ára (WHO, 2020). Spendýr geta lifað af streituvaldandi atburði með því að virkja viðeigandi lífeðlisfræðileg viðbrögð við þessum atburðum. Nýrnahetturinn er hluti af undirstúku-heiladinguls-nýrnahettum (HPA) ásnum og samkennd-nýrnahettum ásnum sem viðheldur jafnvægisstöðu við streitu (Ulrich-Lai o.fl., 2006). Greint var frá því að útsetning fyrir hitaálagi leiði til hraðrar tjáningar á HSP70 í nýrnahettuberki (Huang o.fl., 2001). Þessi prótein deila innri mansali, mótefnavakakynningu,apoptosis, og margar aðrar aðgerðir (Khar o.fl., 2001). Því hefur verið lýst að utanaðkomandi hormón eða truflun á innrænum hormónum, á mikilvægum tímabilum þróunar, geta haft varanleg áhrif á lífeðlisfræðilegar og hegðunarferlar sem stjórnast af undirstúku og taugainnkirtla (Gore og Patisaul, 2010). fela í sér alla breidd samþættrar lífeðlisfræði; þess vegna er það meira en hormónaóþægindi (Waye og Trudeau, 2011).

Breytingar á taugainnkirtlastjórnun, umbrotum og mataræði/örverum eru taldar kallar á bólgu og tilhneigingu til að þróa þunglyndi (Huang o.fl., 2019). Því var haldið fram að þunglyndi – ein af taugageðrænum röskunum – og bólga hafi tvíhliða tengsl. Þó þunglyndi ýti undir bólguviðbrögð ýtir bólga undir taugageðræna sjúkdóma þar á meðal þunglyndi (Bauer og Teixeira, 2019).

Flúoxetín, klassískt þunglyndislyf, er meðal þeirra lyfja sem fáanleg eru á markaðnum til meðferðar við þunglyndi. Það er nú talið vera að koma upp taugainnkirtlaröskun. Þessi áhrif flúoxetíns eru aukaverkun, frekar en helsta meðferðarmarkmið spendýra (León-Olea o.fl., 2014). Þess vegna er þörf fyrir öruggari þunglyndislyf án aukaverkana á taugainnkirtlastöðu.

Grasker(Cucurbita pepo L.) eru efnahagslega mikilvægar tegundir sem eru ræktaðar um allan heim. Þau hafa næringar- og heilsufarslegan ávinning þar sem þau eru rík af fenólefnum, flavonoíðum, amínósýrum, kolvetnum og vítamínum (Wang o.fl., 2002). Nokkrar rannsóknir leiddu í ljós að grasker hafa mikla lífvirkni, svo sem sykursýkislyf, krabbameinslyf,andoxunarefni, bólgueyðandi, þreytueyðandi og þunglyndislyfjaáhrif (Wang o.fl., 2012; Zhanget al., 2012; Nawirska-Olszańska o.fl., 2013; Kim Nr o.fl., 2016). Hefðbundin læknisfræði aðallega Ayurvedic kerfi og kínversk læknisfræði hafa notað mismunandi hluta graskersins, þar á meðal hold af ávöxtum og fræjum (Perez Gutierrez, 2016). Verkun þunglyndislyfja Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) og Cucurbita moschata Duch var áður prófuð í in vivo rannsókn þar sem notað var þvingað sundpróf (FST) framkallað dýralíkan af þunglyndi og var borið saman við flúoxetín (Kim Nr o.fl., 2016). Í einni af tiltölulega nýlegum umsögnum var dregið saman að matvæli gegn þunglyndislyfjum, eins og graskersfræ, hafi verið lýst með 47 prósenta einkunn fyrir þunglyndislyf, sem gefur þunglyndislyfjalík áhrif (Lachance og Ramsey, 2018). Nýlega samþykktu Dotto og Chacha að framkvæma fleiri rannsóknir á dýrum og klínískum rannsóknum til að staðfesta batnandi áhrif graskersfræja á þunglyndi (Dotto og Chacha, 2020).

Þessar skýrslur voru hvetjandi til að prófa virknigraskertil að draga úr áhrifum langvarandi streitu á nýrnahetturnar. Þess vegna var þessi rannsókn gerð til að meta áhrif inntöku á Cucurbita pepo L. (CP) útdrættinum á að létta langvarandi ófyrirsjáanlega væga streitu (CUMS)-framkallaða atferlis-, lífefna- og nýrnahettubyggingu og til að kanna gangverkið á bak við þessi áhrif.

desert cistanche þykkni: Andoxun

EFNI OG AÐFERÐIR

Útdráttur og skammtur af grasker

Cucurbita pepo L. (sýnishornsskírteini: AQJ_95) var keypt af staðbundnum markaði í Jeddah, Sádi-Arabíu. Þeir voru auðkenndir í King Abdulaziz University herbarium með því að nota sýnishorn af grasplöntum og flóru KSA (Chaudhary, 2001). Skírteinissýni voru geymd í grasstofunni. CP var auðkennt af höfundum og var staðfest af grasafræðingi frá raunvísindadeild KingAbdulaziz háskólans.

Útdráttur CP var gerður samkvæmt fyrri rannsóknum (Wang o.fl., 2012). Hrá ávextirnir með hýðinu voru skornir með skurðarvél og þurrkaðir með frostþurrkara (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd., Kóreu) og síðan muldir með því að nota rafkvörn. Duftið var látið í gegnum 40-möskvað sigti til að fá afínduft og geymt í loftþéttu íláti. Þurrkuðu duftinu (50 g) var blandað saman við 450 ml af 80 prósent etanóli og látið standa í 1 dag við 37 gráður í hristara (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact ShakingIncubator., Kóreu) og síðan síað. með bómull og síupappír á öðrum degi. Þetta útdráttarferli var endurtekið tvisvar við 37 gráður til að fá etanólútdrátt.

Greining á innihaldsefnum CP

Efnasamsetning PE var greind með því að nota snefilgasskiljun GC-TSQ evo 8000 massarófsmælir (ThermoScientific, Austin, TX, Bandaríkin) með beinni háræðasúlu TG–5MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm filmuþykkt). Hitastig súluofnsins var upphaflega stillt á 50 gráður og síðan hækkaður um 5 gráður/mín í 250 gráður og haldið í 2 mínútur og síðan hækkaður í lokahitastig 300 gráður um 25 gráður/mín og haldið í 2 mínútur. Hitastig inndælingartækisins og MS flutningslínunnar var haldið við 270 og 260 gráður, í sömu röð; helíum var notað sem burðargas við stöðugan flæðihraða 1 ml/mín. Töfin á leysinum var 4 mínútur og þynntum sýnum af 3 µl var sprautað sjálfkrafa með því að nota Autosampler AS1300 ásamt GC í klofningslausum ham í PTV inndælingartæki. EI massaróf var safnað við 70 eVionization spennu á bilinu m/z 50–650 í fullri skönnun. Hitastig jónagjafa var stillt á 250 gráður. Þættirnir voru auðkenndir með samanburði á massarófum þeirra við massarófsgagnagrunn WILEY 09 og NIST 14 sem eru notaðir til að bera kennsl á og rannsaka efnasamsetningu óþekktra íhluta í hvaða útdrætti sem er (Wiley, 2006; Mikaia o.fl., 2014). Greiningin hafði verið gerð ójöfnuð með því að nota Thermo Scientific™ Xcalibur™ 2.2 hugbúnað og öll gildi voru skráð í hlutfallslegu hlutfalli (Abd El-Kareem o.fl., 2016).

Tilraunahönnun

Þessi rannsókn var samþykkt af siðanefnd lífeðlisfræðirannsókna við læknadeild, King Abdulaziz University, Jeddah, KSA (tilvísunarnúmer {{0}}). Í þessari rannsókn voru fjörutíu karlkyns albínórottur sem vógu 150-200 g og á aldrinum 2-3 mánaða fengnar frá King Fahd Medical Research Center (KFMRC). Áður en tilraunin hófst voru rotturnar látnar aðlagast rannsóknarstofuaðstæðum í eina viku. Tíu rottum var úthlutað sem viðmiðunarhópur sem var skilinn eftir óútsettur fyrir CUMS. Hinar þrjátíu rotturnar fóru í CUMS aðferðina í 4 vikur sem innihélt mismunandi tegundir streituvalda á mismunandi tímum dags til að koma í veg fyrir að venjast streitu. CUMS aðferðinni var lýst að fullu í fyrri verkum (Ayuob o.fl., 2016; Ali o.fl., 2017) og var sýnt í töflu 1. Rottunum sem urðu fyrir CUMS var skipt í 3 hópa (n 10). Ómeðhöndlaði hópurinn (CUMS) fékk burðarefnið 0,03 prósent karboxýmetýlsellulósa (CMC-Na) með magaslöngu í 2 vikur. FLU-meðhöndlaða hópurinn fékk FLU (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amman, Jórdaníu), þunglyndislyf notað til lyfjafræðilegrar staðfestingar, leyst upp í CMC-Na 0,03 prósent í 20 mg/kg skammti með magaslöngu (Li o.fl. , 2014). CP-meðhöndlaði hópurinn fékk CP útdráttinn uppleyst í eimuðu vatni í 100 mg/kg skammti með magaslöngu í 2 vikur samkvæmt Wang et al. (2012).

Atferlisbreytingarmat

FST var framkvæmt eftir 4 vikur til að staðfesta áhrif CUMS á rotturnar (Ali o.fl., 2017). Meðan á þessari prófun stóð var hver rotta sett í glerkenndan sívalningsílát (hæð 20 cm, þvermál 14 cm) með 15 cm af vatni við 25 ± 2 gráður. Rottan var tekin upp á myndband í 6 mínútur með því að nota hegðunarhugbúnað (Noldus InformationTechnology, EthoVision XT®), og heildartíminn sem var eytt í hreyfingu á þessum 6 mínútum var mældur af tæknimanni sem var blindur fyrir tilraunahópana. Heildartíminn, í sekúndum, sem rotturnar eyddu án hreyfingar útlima, að undanskildum minniháttar hreyfingum sem nauðsynlegar eru til að halda músinni á floti, "óhreyfanleikatími" á 6 mín.

Lífefnafræðileg tækni

Tuttugu og fjórum tímum eftir að hegðunarprófinu lauk voru blóðsýni tekin úr sinusi rotta eftir að hafa verið svæfð með 4 prósent ísóflúrani (SEDICO PharmaceuticalsCompany, Kaíró, Egyptalandi) í 100 prósent súrefni. Eftir það voru rotturnar aflífaðar með leghálsi. Blóðsýni voru skilin í skilvindu við 3,000 snúninga á mínútu í 15 mínútur við 4 gráður til að fá sermi og var haldið við -18 gráður til lífefnafræðilegs mats.

Magn kortikósteróns (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, Bandaríkin) var metið með ensímtengdum ónæmissogandi prófunarsettum samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda voru TNF- og IL-6 (Quantakin R&D system, USA Kit) metin með því að nota ensímtengd ónæmissogandi prófun. Sjónræn þéttleiki hvers sýnis var ákvarðaður í tvítekningu með ELISA örplötulesara sem stilltur var á 450 nm.

Þíóbarbítúrsýru hvarfgjörn efni (TBARS) prófunarsettið (Biodiagnostic; Egyptaland) var notað til að mæla magn malondialdehýðs (MDA) með litrófsmælingu við 535 nm (Gamal o.fl., 2018). Magn ofuroxíð dismutasa (SOD) var mælt með því að nota SOD prófunarbúnaðinn (Biodiagnostic; Egyptaland) (Packer, 2002). Mat á magni glútaþíonperoxíðasa (GPX) var framkvæmt með því að nota GPX settið (Randox Labs, Crumlin, Bretlandi). Til að mæla virkni katalasa (CAT) var kvörðunarferill búinn til fyrir greiningu og öll sýni, með því að nota prófunarsett (Biodiagnostic; Egyptaland). Aðferðinni hefur verið lýst áður (Gamal o.fl., 2018).

kostir eyðimerkur cistanche þykkni: bólgueyðandi

Magnbundin rauntíma PCR

RNA útdráttur úr vefjasýnunum var gerður með því að nota TriFast™ hvarfefnið (PeqLab, Þýskalandi, vörunúmer: 30-2010), eins og lýst er í samskiptareglum framleiðanda. Styrkur hreinsaðs RNA var metinn með því að nota NanoDrop 2000c litrófsmæli (Thermo Scientific, Bandaríkin). Dregið RNA úr hverju sýni var öfugt umritað með SensiFAST™ cDNA nýmyndunarsettinu fyrir RT-qPCR (Bioline USA Inc., Bandaríkin, vörunúmer: BIO-65053), í samræmi við leiðbeiningar framleiðanda. Tilbúið cDNA var geymt við -80 gráðu þar til það var notað fyrir qRT-PCR.

qRT-PCR viðbrögðin voru framkvæmd með SensiFAST™ SYBR Lo-ROX settinu (Bioline USA Inc., Bandaríkin, vörunúmer: BIO-94002) á Applied Biosystems 7500real -Tíma PCR greiningarkerfi (Life tækni, Bandaríkin). Gensértækir primers fyrir rottur, notaðir í þessari rannsókn, voru hannaðir af Primer3 hugbúnaði (v.0.4.0), og sérhæfni þeirra var skoðuð með NCBI/Primer-BLAST forritinu. Grunnarnir voru síðan keyptir frá Willowfort™ (Bretlandi). Grunnarnir voru GAPDH (5'-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3', 5'-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3'), kaspasi-3 (áfram 5- TGTATGCTTACTCTACCGCACC}CG,{{1 afturábak 20}}GCGCAAAGTGACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGGGCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′).

Ki67 (áfram 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA-3, afturábak 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA 3). PCR blandan var útbúin sem hér segir: 10 µl SensiFASTTM SYBRLo-ROX blanda, 0,8 µl áfram grunnur, 0,8 µl afturábak grunnur, 2 µl template cDNA og 6,4 µl nukleasafrítt vatn. Hvarfblandan var flutt yfir í hitahringrás sem áður var forrituð til að haldast við 95 gráður í 2 mínútur, fylgt eftir af 40 lotum af 95 gráðum í 15 sekúndur og síðan 60 gráður í 30 sekúndur. Neikvætt viðmiðunarviðbragð sem innihélt ekkert sniðmát var keyrt í hverri tilraun.

Bræðsluferilgreining var framkvæmd til að sanna sérhæfni PCR afurða og Ct gildi fyrir hvert hvarf var fengið úr mögnunarreitum. Hlutfallsleg magngreining fyrir hverja genatjáningu í vefjasýnunum var reiknuð út með því að nota samanburðarþröskuld (ΔΔCt) aðferðina með GAPDH sem innra stýrigenið. Fyrir heildarfallabreytinguna var hún reiknuð út og línulögð með 2−ΔΔCt reikniformúlunni.

Vefjafræðilegar aðferðir

Í lok tilraunarinnar og eftir að rotturnar voru svæfðar var kviðurinn opnaður og hægri nýrnahetturinn krufður. Til að fá paraffínblokka var festing nýrnahettunnar í 10 prósent hlutlausum jafnaðri formalíni og frekari aðferðir framkvæmdar. Paraffínhlutarnir með 4-μm þykkt voru útbúnir og litaðir með hematoxýlín og eósíni (H&E). Þar að auki voru aðrir paraffínhlutar litaðir með ónæmisvefjaefnafræðilega litun með því að nota streptavidín-bíótín-peroxidasa tækni. Skyggnurnar voru ræktaðar yfir nótt við 4 gráður og síðan voru þær ræktaðar með einstofna and-Ki67 (Dako Cytomation, Bandaríkjunum, í þynningu 1:1,000) ​​til að sýna fram á frumufjölgun. Að auki var fjölstofna and-kaspasa-3 mótefni (Santa Cruz Biotechnology, Bandaríkjunum, í þynningu 1:1,000) notað til að greinaapoptosis. Fjölklónamótefni gegn hitalostpróteini-70 (HSP70) (Dako, Carpinteria, CA, Bandaríkin, í þynningu 1:1,000) var einnig notað. Samsvarandi bíótínýlerað samtengd aukamótefni frá Dako litunarkerfinu var notað. Glerurnar sem litaðar voru með öðru mótefninu voru eingöngu notaðar sem neikvæðar viðmiðanir.

Kjarnarnir voru mótlitaðir með hematoxýlíni. Browncytoplasmic litun var talin jákvæð viðbrögð. Lituðu hlutarnir voru skoðaðir og myndaðir með því að nota Olympus Microscope BX{{0}} (Olympus) sem tengdur var við stafræna myndavél og tölvu. Hálfmagnsgreining á ónæmissvörun mótefna var gerð með Pro Plus myndgreiningarhugbúnaði. Prósentusvæði ónæmisjákvæðra viðbragða var metið á 30 sviðum við ×400 stækkun. Jákvæðu frumurnar voru taldar á 1,0 mm2 svæði, eins og lýst er af Zhou et al. (2016). Að minnsta kosti fimm reiti úr hverri rennibraut voru skoðuð og meðaltal reiknað fyrir hvert dýr.

Fyrir formfræðilega greiningu voru fjórir hlutar skoðaðir í hverju dýri (stækkun ×100). Þykkt mismunandi svæða nýrnahettunnar var mæld í míkrómetrum. Þykkt nýrnahettuberkins var fengin með því að mæla fjarlægðina milli mergsins og nýrnahettuhylksins í beinni línu, ein mæling er tekin í hverjum fjórðungi nýrnahettunnar.

Tölfræðigreining

Atferlis-, lífefna- og ónæmisvefjaefnafræðileg gögn voru greind með Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) útgáfu 16. Rannsóknarbreyturnar voru fyrir áhrifum af tveimur óháðum þáttum: streituálagi og meðferð. Þess vegna var gerð greining með blönduðu líkani tvíhliða ANOVA byggt á Bonferroni post hoc. Tölfræðileg marktækni var talin á p <>

ávinningur eyðimerkur cistanche: gegn öldrun

NIÐURSTÖÐUR

Niðurstöður hegðunar

Hreyfingartíminn á FST var marktækt hærri (p=0.03) í CUMS hópnum en viðmiðunarhópurinn, en hann var marktækt lægri (p=0.01, p=0.001) í FLU- og CP-meðhöndluðum hópum en í CUMS hópnum (Mynd 1A).

Niðurstöður CP útdráttargreiningar með GC-MS

Helstu efnasamböndin sem finnast í CP innihalda aðallega olíusýru (um 56 prósent), palmitínsýra (um 8,9 prósent), línólsýra 3,5 prósent og línólsýra 2,8 prósent auk margra annarra efnasambanda (tafla 2; mynd 2). Meðal efnasambanda CP sem tilkynnt var um að hefðu bólgueyðandi áhrif eru olíusýra, palmitínsýra, línólensýra, betulín og línólsýra, en þau sem hafaandoxunarefniáhrif eru palmitínsýra,10-oktadekensýra og metýlester.

Lífefnafræðilegt mat

Kortikósterónmagn í sermi

Kortikósterónmagn jókst marktækt (p < {0}}.001) ómeðhöndlaðar rottur sem voru útsettar fyrir CUMS samanborið við samanburðarrotturnar, en þær sem voru meðhöndlaðar með FLU og CP sýndu marktæka lækkun (p < 0,001) á kortikósteróni í sermi stig miðað við það í ómeðhöndluðu rottum sem verða fyrir CUMS (Mynd 1B).

TNF- og IL-6 stig í sermi

Í lok tilraunarinnar sýndi mat á TNF- og IL-6 í sermi að þau voru marktæk hækkuð (p < 0.001) í CUMS hópnum, en þau sýndu marktæka lækkun (p< 0.001)="" in="" flu-="" and="" cp-treated="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figures="" 1c,="">

MDA, SOD, GPX og CAT stig í seruminu

Það var tekið eftir því að magn MDA í sermi var marktækt hærra (p < {0}}.001)="" í="" cums="" hópnum="" en="" í="" samanburðarrottunum,="" á="" meðan="" það="" í="" hópum="" sem="" fengu="" cp="" var="" marktækt="" lægra="" (p="" 0.003)="" en="" hjá="" ómeðhöndluðum="" rottum="" sem="" verða="" fyrir="" cums.="" flu-gjöf="" gat="" ekki="" dregið="" marktækt="" úr="" mda="" stigi="" í="" rottum="" sem="" verða="" fyrir="" cums="" (mynd="">

Aftur á móti voru magn SOD, GPX og CAT í sermi CUMS hópsins marktækt lægri (p < {{0}}.001,="" p="">< 0,001,="" p="0" .002)="" en="" í="" sermi="" viðmiðunarhópsins,="" á="" meðan="" gildi="" þeirra="" sýndu="" marktæka="" aukningu="" (p="0.01," p="0.003," p.="" 0.03)="" í="" hópnum="" sem="" fékk="" cp-meðhöndlun="" samanborið="" við="" þá="" í="" cums-útsettu="" hópnum.="" flu="" gjöf="" gat="" ekki="" aukið="" sod,="" gpx="" og="" cat="" marktækt="" hjá="" rottum="" sem="" urðu="" fyrir="" cums="" (myndir="">

Genatjáning Ki67, Caspase-3 og HSP70

RT-PCR leiddi í ljós óverulega mikla Ki67 genatjáningu (p=0.14) í nýrnahettum CUMS hópsins samanborið við samanburðarhópinn, en hópar sem fengu FLU og CP sýndu marktækt mikla tjáningu (p {{6 }}.02, bls 0.01) samanborið við hópinn sem varð fyrir CUMS (Mynd 3E). Varðandi caspasa-3 var genatjáning hans verulega aukin (p < 0,001) í nýrnahettum CUMS-hópsins samanborið við samanburðarhópinn, en hópar sem fengu FLU og CP sýndu marktæka lækkun (p=0.03, p=0.04) samanborið við hópinn sem var útsettur fyrir CUMS (mynd 3F). Þegar kom að tjáningu HSP70 gena, skráði það marktækt hærra (p < 0,001) gildi í nýrnahettum CUMS hópsins en í samanburðarhópnum, en það af FLU og CP-meðhöndlaðir hópar sýndu óverulega lækkun (p=0.07,p=0.08) samanborið við hópinn sem varð fyrir CUMS (Mynd 3G).

Vefjameinafræðilegt mat

Nýrnahettur stjórnrottna hafa ósnortna byggingu með varðveittum arkitektúr heilaberkisins, þar á meðal zona glomerulosa, zona fasciculata og zona reticularis auk mergsins (Mynd 4). Nýrnakirtlar rotta sem urðu fyrir CUMS sýndu margar frumur í ZG, ZF og ZR með augljósri lofttæmingu og úrkynjaða kjarna og stundum djúplitaða kjarna með miðlungsmikla þykknun í hylkinu og bandvefsfrumum. Margar frumur ZR virtust dökkar með brúnum lípófussín litarefnum. Á hinn bóginn sýndu nýrnahettur CP-meðhöndlaðra rotta færri augljóslega lofttæmdar frumur og djúplitaða kjarna í ZG, og ZF og ZR sýndu fáar dökkar frumur.

Formfræðilegar mælingar sýndu að þykkt ZG og ZR sýndi óverulega aukningu eftir útsetningu fyrir CUMS, á meðan þær voru verulega auknar í FLU- (p 0.01,p 0.02) og CP-meðhöndlaðir hópar (p=0.02, p=0.001), í sömu röð. Varðandi þykkt ZF, þá jókst hún marktækt (p 0,02) í hópnum sem fékk CUMS-útsetningu og hún jókst enn frekar, en óveruleg, í FLU- og CP-meðhöndluðum hópum samanborið við ómeðhöndlaða CUMS-hópinn.

Til að ákvarða hvort ofvöxtur frumna væri takmörkuð við tiltekið undirsvæði nýrnahettunnar, var notuð ónæmisvefjaefnafræðileg merking fyrir Ki67 (merki frumunnar sem skiptist). Fjöldi Ki67-jákvæðra fjölgandi frumna jókst marktækt (p < {2}}.001)="" í="" zf="" eftir="" útsetningu="" fyrir="" cums,="" á="" meðan="" meðferð="" með="" flu="" og="" cp="" jókst="" óverulega="" miðað="" við="" ómeðhöndlaða="" cums="" hópinn.="" þrátt="" fyrir="" að="" fjöldi="" frumna="" sem="" fjölgaði="" óverulega="" fjölgaði="" í="" zg="" og="" zr="" og="" fækkaði="" óverulega="" í="" merg="" cums="" hópsins="" samanborið="" við="" samanburðarhópinn,="" jók="" meðferð="" með="" flu="" og="" cp="" marktækt="" fjölda="" fjölgunarfrumna="" í="" zg="" (p="0.001" ,="" p="0.003)," zr="" (p="">< 0.001)="" og="" medulla="" (p="0.004," p="0.003)" samanborið="" við="" ómeðhöndlaða="" cums="" hópinn="" (myndir="" 4,="">

Ónæmisvefjaefnafræðileg litun með kaspasa-3 var gerð til að metaapoptosis(Mynd 6). Það var tekið eftir því að prósentusvæði kaspasa-3 tjáningar jókst marktækt (p < 0.001)="" á="" öllum="" svæðum="" kirtilsins="" eftir="" útsetningu="" fyrir="" cums="" í="" 4="" vikur="" í="" borið="" saman="" við="" samanburðarhópinn.="" hópurinn="" sem="" fékk="" meðferð="" með="" cp="" sýndi="" marktæka="" lækkun="" á="" kaspasa-3tjáningu="" í="" zg="" (p="">< 0,001),="" zf="" (p="">< 0,001),="" zr="">< 0.001,="" p=""
="" 0.005),="" and="" medulla="" (p="0.004," p="0.001)," in="" comparison="" to="" that="" of="" the="" cums="" group="" (figures="">

Flatarmálshlutfall HSP70 tjáningar jókst marktækt (p < 0,001) á öllum svæðum heilaberkisins sem og í merg nýrnahettunnar í CUMS hópnum samanborið við samanburðarhópinn, en það minnkaði óverulega í öll svæði og merg af FLU- og CP-meðhöndluðum hópum samanborið við CUMS hópinn (myndir 5).

Þurrkaðar Cistanche tubulosa sneiðar

UMRÆÐA

Nútímasamfélag er augljóslega fullt af streitu sem getur stafað af daglegum vandamálum, heilbrigðisþjónustu og vinnutengdum vandamálum. Þessir streituvaldar geta valdið svokölluðum streitutengdum röskunum (Clayton og McCance, 2014). Í þessari rannsókn var etanólútdráttur af holdi og hýði af Cucurbita pepo L. notaður til að rannsaka áhrif þess til að draga úr þunglyndishegðun af völdum CUMS og áhrif þess á nýrnahettuna. Þetta var sannað með marktækri aukningu á þéttni kortikósteróns í sermi og staðfest með langvarandi hreyfingarleysi meðan á FST stóð. Þessar niðurstöður voru í samræmi við þær sem áður hefur verið greint frá (Tang o.fl., 2015).

Tilkynnt var að bæði TNF- og IL-6 tækju þátt í meingerð þunglyndis (Taraz o.fl., 2015; Pedraz-Petrozziet al., 2020). Greint var frá því að mýs sem skortir IL-6 eða TNF- viðtaka séu ónæmar fyrir þunglyndishegðun (Viana o.fl., 2010). Þess vegna voru þær metnar í þessari rannsókn og kom í ljós að bæði TNF- og IL{ {9}} jukust marktækt í þörmum hjá rottum sem voru útsettar fyrir CUMS í 4 vikur, sem gefur til kynna að þær hafi verið þunglyndar. Þessi niðurstaða var studd af Numakawa o.fl. (2014) í músum með hegðunarörvæntingu og af Taraz o.fl. (2015) hjá sjúklingum með þunglyndi.

Í þessari rannsókn tengdist gjöf graskersþykkni bata á þunglyndishegðuninni, sem sést af marktækri styttingu hreyfingarleysis tíma FST og staðfest með marktækri minnkun kortikósteróns og bólgusýtókína TNF- og IL-6 í sermi. Þessar niðurstöður voru studdar af Kim Nr o.fl. (2016) sem greindi frá því að SSP í 28 daga lækkaði magn bólgueyðandi frumuefna í þunglyndum rottum. Bólgueyðandi virknigraskermá rekja til virkra efnasambanda graskersins eins og olíu og palmiticasýra og estradíóls.

Lækkun á olíusýru, palmitínsýru og línólsýru var lýst í þunglyndi (Conklin o.fl., 2010; Martin o.fl., 2010). Greint var frá því að olíusýrumiðluð taugavörn tengist bólgueyðandi áhrifum þess sem miðlað er af peroxisomeproliferator-virkjaðri viðtaka gamma (PPAR-) virkjun (Song o.fl., 2019). Til viðbótar við það var greint frá því að palmitínsýra hamli fosfólípasa A(2) og því. talið sem bólgueyðandi efnasamband (Aparna o.fl., 2012). Estradíól var eitt af efnasamböndum graskersins sem fannst í þessari rannsókn. Greint var frá því að estradíól framkallaði bólgueyðandi áhrif og dregur í kjölfarið úr þunglyndishegðun (Xu o.fl., 2015). tjáning á heilaafleiddum taugakerfisþáttum (BDNF) og ERK fosfórun með því að virkja ER- í heilanum (Yang o.fl., 2010).

Í þessari rannsókn jókst styrkur MDA í sermi, en SOD, GPX og CAT lækkuðu hjá þeim sem fengu CUMS. Svipaðar breytingar voru skráðar eftir útsetningu fyrir CUMS í fyrri rannsóknum, og þeir bættu við að þessar lífefnafræðilegu breytingar leiddu til oxunarálags og skerðingar á HPA (Nabavi o.fl., 2015). Liu T. o.fl. (2015) greindu einnig frá því að þróun þunglyndis megi rekja til lágs innihalds andoxunarefna í líkamanum. AndoxunareiginleikargraskerOft var greint frá ávaxtaþykkni (Bahramsoltani o.fl., 2017). Að auki var greint frá því að holdhúð af Cucurbita pepo L. hefði meiri andoxunarvirkni en hinir hlutarnir, til dæmis fræ (Oyeleke o.fl., 2019). Gjöf graskerseyjar, í mörgum fyrri rannsóknum, jók verulega magn SOD og GPX og minnkaði MDA í sermi músa (Guo-Huaet al., 2000; Dang, 2004), og þessi áhrif voru einnig skjalfest í þessari rannsókn. Þess vegna erandoxunarefnivirkni grasker gæti legið að baki þunglyndislyfjaáhrifum sem koma fram í þessari rannsókn. Þetta er í samræmi við athuganir Kim Nr o.fl. (2016). Greint var frá því að náttúrulegar vörur með bólgueyðandi,andoxunarefni, og þreytueyðandi áhrif hafa einnig þunglyndislyfjaáhrif (Jeong o.fl., 2015). Öll þessi fyrri starfsemi var sönnuð ígrasker.

Cistanche hefur áhrif gegn öldrun

Aukið lofttæmingu í umfrymi nýrnahettubarkarfrumna, sem sést í CUMS hópnum í þessari rannsókn, má rekja til aukinnar eftirspurnar eftir lípíðum, sem mynda hornsteininn fyrir nýmyndun kortisóls. Cigankova o.fl. (2005) komust að því að langvarandi ofvirkni í tilraunum leiddi til samruna margra umfrymisfitudropa úr heilafrumum. Þessir fitudropar innihalda kólesteról, sem er helsti undanfari myndun sterahormóna. Hins vegar, Koldysheva og Lushnikova (2008) greindu frá því að streita leiddi til marktækrar minnkunar á fitudropum í frumum nýrnahettuberkins, sérstaklega ZF (Koldysheva og Lushnikova, 2008). Því var lýst að við útsetningu fyrir líkamlegu álagi berist sársaukaáreiti til undirstúku, sem leiðir til CRH seytingar inn í hypophyseal portkerfi, sem eykur ACTH seytingu og örvar viðtaka þess í ZF og ZR til að auka seytingu kortisóls (Patti o.fl., 2018). Áður var greint frá þykknuðu nýrnahettuhylkinu og trabeculae sem sáust í rottum sem urðu fyrir CUMS (El-Desouki o.fl., 2011; Altayeb og Salem, 2017) sem afleiðing af aukinni kollagenmyndun af völdum trefjakímfrumna við útsetningu fyrir hreyfingarstreitu.

Margar frumur í nýrnahettum rotta sem voru útsettar fyrir CUMS sýndu djúplitaða kjarna, sem gefur til kynna að þær hafi gengið í gegnum apoptosis sem var staðfest með caspasa-3 ónæmisvefjaefnalitun. Svipaða athugun var tilkynnt af Altayeb og Salem, (2017), á meðan þeir voru að rannsaka áhrif hreyfingarleysis á nýrnahetturnar hjá rottum. Liu Q. o.fl. (2015) greint frá því að óhófleg oxunarálag, sem sést eftir útsetningu fyrir CUMS í þessari rannsókn, breyti tjáningarstigum "apoptosis-tengd gen" og framkallar frumufrumu og hrörnun í gegnum merkjaleiðir Bcl-2, Bax og caspasa-3. Þessi aðferð var staðfest í þessari rannsókn með RT-PCR sem leiddi í ljós verulega uppstjórnun á caspasa-3 geni. tjáningu. Þegar farið var yfir fræðiritin voru engin bein áhrif af Cucurbita pepo á caspasa-3-miðlaða frumufrumu í mismunandi vefjum. Svo virðist sem minnkun á caspasa-3-jákvæðum apoptótískum frumum sem greindust í nýrnahettum hafi verið rakin tilandoxunarefniáhrif Cucurbita pepo skjalfest í þessari rannsókn. Þetta er stutt af mörgum fyrri rannsóknum sem gerðar voru á öðrum plöntum og jurtum með verulega andoxunarvirkni (Banagozar Mohammadi o.fl., 2019; Ghazizadeh o.fl., 2020).

Þessi rannsókn sýndi að útsetning fyrir CUMS jók Ki67-jákvæðar frumur í nýrnahettuberki sem var marktækt áberandi í ZF, sem gefur til kynna aukinn fjölda frumna sem fjölgaði, og þar af leiðandi jókst þykkt þessa lags verulega. á hinn bóginn minnkaði fjöldi Ki67-jákvæðra fjölgunarfrumna marktækt í medulla sem svar við CUMS. Þessar athuganir voru í samræmi við þær sem Ulrich-Lai o.fl. (2006) greindu frá aukningu á Ki{{ 4}}jákvæðir frumukjarnar eingöngu í ytri ZF eftir útsetningu fyrir langvarandi breytilegri streitu, á meðan themedulla sýndi frumustækkun en ekki ofvöxt. Þar að auki greindu Laborie o.fl., (2003) frá almennri aukningu á mergvirkni eftir útsetningu fyrir langvarandi streitu, sem bendir til þess að langvarandi streita getur leitt til stækkunar á merg. Í þessari rannsókn, gjöf ágraskerútdráttur jók umtalsvert frumufjölgun, augljóst af uppstýringu Ki67 gensins og ónæmistjáningu á næstum öllum svæðum og þema nýrnahettunnar samanborið við CUMS. Þetta útskýrði aukna þykkt kirtilsvæða sem skráð voru í þessari rannsókn. Það getur einnig bætt upp apoptótísk áhrif sem stafa af útsetningu fyrir CUMS. Þessi niðurstaða er studd af Kim Hy o.fl. (2016) greindi frá marktækri uppstýringu á mRNA tjáningu Ki67 og fjölgun miltisfrumna sem voru einangruð úr milta BALB/c músa sem voru meðhöndlaðir með SSP, streymdu, og Cucurbita moschataDuch og aðalhluta þess, -karótíni.

Í þessari rannsókn jók útsetning fyrir CUMS marktækt genatjáningu og ónæmistjáningu HSP70 á öllum svæðum nýrnahettunnar. Í samræmi við það, Zheng o.fl. (2008) sannaði einnig að aukin tjáning HSP70 eftir útsetningu fyrir streituvaldandi aðstæðum mótar bólguviðbrögð með því að hindra virkjun bólguumritunarþáttarins, kjarnaþáttinn-kappa B(NF-kappaB). Að auki getur HSP70 haft bein áhrif á apoptosis og drep (Yenari o.fl., 2005). Nýlega, Liet al. (2019) greindi frá uppstýringu á tjáningu HSP70 í nýrnahettum svína eftir útsetningu fyrir hitaálagi, sem gefur til kynna hlutverk HSP70 í nýrnahettum og leggur áherslu á mikilvægi þess fyrir bólguviðbrögð. Hröð örvun HSP70 sem svar við streitu er talin nauðsynleg fyrir frumuverndarferlinu.

Í rannsókn okkar, meðhöndla CUMS-útsettar rottur meðgraskertengdist óverulegri lækkun á HSP70 tjáningu sem tengdist minni frumudauða og bólgusvörun. Þetta gæti bent til jákvæðra áhrifa af tiltölulega háu magni af HSP70 af völdum bæði FLU og CP þar sem það leiddi til minnkunar á kaspasa-3-miðluðuapoptosisog losun bólgusýtókína. Þrátt fyrir að áhrifum graskera á hitaáfallspróteinfjölskyldu hafi ekki verið lýst áður, þá er olíusýra, sem táknar helstu innihaldsefnigraskernotað í þessari rannsókn, var lýst til að minnka tjáningu HSP60 í T eitilfrumufrumulínu manna (Martins De Lima o.fl., 2004), sem styður niðurstöður okkar. Fyrirhugaður verkunarmáti Cucurbita pepo asans þunglyndislyfjalíks efnis er tekinn saman á mynd 7. Meðal takmarkana þessarar rannsóknar var vanhæfni til að rannsaka ítarlegan verkunarhátt þunglyndislyfjaáhrifa CP og því er frekari rannsókn hvatt til að gera það. .

Að lokum gefur þessi rannsókn vísindalega byggðar vísbendingar um virkni Cucurbita pepo L. þykkni til að draga úr CUMS-völdum hegðunar- og lífefnafræðilegum breytingum sem og vefjameinafræðilegum áhrifum á nýrnahetturnar. Þessi áhrif komu í ljós með því að lækka reglurnar umapoptosisog HSP70 tjáningu og virtist vera miðlað í gegnumandoxunarefniog bólgueyðandi áhrif Cucurbita pepoL. útdráttur. Þrátt fyrir að þessi rannsókn og nokkrar aðrar nýlegar rannsóknir hafi staðfest þunglyndislyfjalík áhrif Cucurbita pepo og kannað verkun þess, er þörf á frekari rannsóknum, þar á meðal klínískum rannsóknum, til að staðfesta þessi áhrif á mönnum.

Cistanche korn