Bráð skammtaháð taugaverndandi áhrif pólý(pro-17 estradíóls) í múslíkani af mænuskaða

Ágrip

17 -Estradíól (E2) veitir taugavörn í forklínískum líkönum af mænuskaða þegar það er gefið almennt. Markmið þessarar rannsóknar var að bera E2 staðbundið á slasaða mænu í langan tíma með því að nota poly(pro-E2) filmu lífefni.

Eftir því sem fólk lærir meira um mænuskaða erum við farin að gera okkur grein fyrir hvaða áhrif það hefur á líkamlega og andlega heilsu fólks. Þó að mænuskaðar geti valdið mörgum skaðlegum áhrifum, sem betur fer er hægt að stjórna áhrifum þeirra á minni.

Í fyrsta lagi þurfum við að skýra hvað mænuskaði er. Mænan er taug sem er vernduð í hryggnum sem ber ábyrgð á að senda leiðbeiningar frá heilanum til ýmissa hluta líkamans. Ef mænan er skadd, munu sumir hlutar líkamans missa góða tengingu við heilann, sem leiðir til áhrifa útlimahreyfingar, skynjunar og sjálfstjórnar.

Mænuskaðar geta haft ákveðin áhrif á minni fólks, sérstaklega á fyrstu stigum endurhæfingar sjúklinga með mænuskaða. Mænuskaðar geta valdið því að athygli, vinnsluminni og tilfinningaleg úrvinnsla geta versnað, sem hefur áhrif á minnisgetu einstaklingsins.

Hins vegar munu þessi neikvæðu áhrif minnka smám saman eftir því sem sjúklingar gangast undir endurhæfingarmeðferð. Sjúklingar geta bætt minni sitt með því að taka þátt í minnisleikjum og annarri vitrænni þjálfun. Jafnframt er líkamleg endurhæfing einnig til þess fallin að endurheimta hreyfi- og skynstarfsemi líkamans og bæta þar með tilfinningalega og vitræna starfsemi.

Við ættum að hvetja sjúklinga með mænuskaða til að taka virkan þátt í endurhæfingarmeðferð og halda áfram endurhæfingarþjálfun til að bæta líkamlega og andlega heilsu. Vinsamlegast trúðu því að með hjálp réttrar vitsmuna og meðferðar eftir aðgerð geti sjúklingar sigrast á áhrifum mænuskaða á minni og haldið áfram að lifa virku lífi. Það má sjá að við þurfum að bæta minnið og Cistanche getur bætt minnið umtalsvert því Cistanche getur líka stjórnað jafnvægi taugaboðefna eins og að auka magn asetýlkólíns og vaxtarþætti sem eru mjög mikilvægir fyrir minni og nám. Að auki getur Cistanche einnig bætt blóðflæði og stuðlað að súrefnisgjöf, sem getur tryggt að heilinn fái næga næringu og orku og þar með bætt heilaþrótt og úthald.

Smelltu á vita bætiefni til að bæta minni

Eftir áverka á mænu í fullorðnum karlmúsum voru poly(pro-E2) filmur græddar undir húð og taugavörn metin með ónæmisvefjafræði 7 dögum eftir meiðsli og ígræðslu. Í þessum rannsóknum bættu poly(pro-E2) filmur taugavörn lítillega án þess að hafa áhrif á bólgusvörun þegar borið er saman við slasaða stjórnendur.

Til að auka E2 skammtinn sem losaður var, voru bolus-losandi poly(pro-E2) filmur framleiddar með því að setja óbundið E2 inn í poly(proE2) filmurnar.

Hins vegar, samanborið við slasaða viðmiðunarhópinn, jók bolus-losandi poly(pro-E2) filmur ekki marktækt taugavernd eða takmarkaði bólgu annaðhvort 7 eða 21 dögum eftir meiðsli. Framtíðarvinna mun einbeita sér að þróun pólý(pro-E2) lífefna sem geta nánar tiltekið að losa lækningaskammta af E2.

INNGANGUR

Áverka mænuskaðar (SCI) er lamandi ástand sem hefur áhrif á yfir 18,000 fólk á hverju ári í Bandaríkjunum,1 á meðan alheimstíðni SCI er áætlað á milli 236 og 1009 á milljón.2

Sjúklingar sem eru fyrir áhrifum af SCI verða fyrir alvarlegum taugasjúkdómum, þar með talið skynjunarleysi, skertri starfsemi þarma/blöðru og lömun.3,4 Aðaláhrifin á mænuna leiða til taugafrumnadauða á áverkastaðnum sem er enn versnandi vegna nokkurra aukaáverka sem taka þátt í stjörnufrumum og átfrumur. .

Með tímanum mynda þessar stjarnfrumur glial ör sem kemur í veg fyrir að axons teygi sig út fyrir brún sársins.5 Það eru engin taugavarnarlyf sem eru samþykkt af FDA til þessa til að meðhöndla SCI.

Rannsóknir sem spanna nokkra áratugi hafa beinst að kerfisbundinni gjöf lífsameinda til að koma í veg fyrir tap í taugafrumum vegna aukaskaða og/eða til að stuðla að endurnýjun á axonal, sem leiðir að lokum til endurheimtar tapaðrar starfsemi. kynhormón, 17 -estradíól(E2).

E2 gjöf er í stórum dráttum gagnleg fyrir miðtaugakerfið með því að draga úr bólgu,7–9 draga úr viðbrögðum glialfrumna,10 takmarka oxunarálag,11–14 og draga úr örvandi taugadauða af völdum glútamats.15 E2 bætir virkan bata í ýmsum nagdýralíkönum af SCI.10, 16,17 Athyglisvert er að fjölskammta almenn gjöf E2 veldur hraðari virkni bata18,19 samanborið við dýr sem fá aðeins einn skammt.17

Þar sem E2 stuðlar að virkni bata á skilvirkari hátt með fjölskammtaáætlunum, var markmið okkar að losa E2 stöðugt staðbundið á meiðslustaðnum (til að koma í veg fyrir áhrif utan markmiðs) til að sniðganga vandamál sem stafa af mörgum skömmtum/altækum inndælingum af E2.

Í því skyni notuðum við fjöl(forlyf) lífefnisstefnu þar sem innfædda lyfið (E2) var fyrst virkjað með hvarfgjörnum allýlhópum og síðan fjölliðað með ljósbyrjaðri þíól-en radical viðbót með sveigjanlegu oligo-(etýlen glýkól) díþíóli, eins og áður hefur verið lýst. .20 Við fengum fjölliðukeðjur með mikla mólþunga, sem samanstanda af E2 forlyf sem endurtekið eining innan fjölliðunnar.

Við vatnsrofsrýrnun losar fjölliðan E2 smám saman út í nærliggjandi miðil. Einu aðrar aukaafurðir frá losuninni eru koltvísýringur og oligo(etýlen glýkól) (oEG) (mynd 1). Poly(pro-E2) keðjur sem eru búnar til í filmu eða örtrefjum geta losað E2 við nanómólstyrk in vitro á tímakvarða frá mánuðum til ára .20

E2 sem losnar úr þessum pólý(pro-E2) vinnupallum er lífvirkt og þessir vinnupallar stuðla að taugatruflun og taugavörn in vitro með því að vernda taugafrumur fyrir oxunarálagi af völdum vetnisperoxíðs. Hér notuðum við pólý(pro-E2) filmurnar í múslíkani af meiðslum SCI, strax eftir meiðsli, og metum taugavarnargetu þeirra in vivo.

Upphafleg pólý(pro-E2) filmuhönnun jók taugavörn bráðlega (7 dögum eftir meiðsli) á meiðslustaðnum án þess að hafa áhrif á bólgusvörun. Þar sem poly(pro-E2) kvikmyndir gefa út nanógrömm af E2 á dag, þróuðum við aðra útgáfustefnu þar sem óbundiðE2 var fellt inn í fjöl(pro-E2) fylkið. Við gerðum þá tilgátu að boluslosun óbundins E2 gæti veitt frekari taugaverndandi ávinning.

Pólý(pro-E2) filmur losuðu E2 á sprungna hátt og síðan var E2 losað úr fjölliðunni við lægri styrk. Ónæmisfræðileg litun metin taugafrumur, stjarnfrumur og átfrumur/míkrófrumur til staðar á skaðastaðnum bráðum (7 dögum eftir meiðsli) og langvarandi (21 dögum eftir meiðsli) eftir SCI í viðurvist þessara bolus-losandi poly(pro-E2) kvikmynda.

ÚRSLIT OG UMRÆÐA

Pólý(pro-E2) filmur gefa frá sér E2 í nanómólstyrk, stuðla að útvexti taugafrumna úr dorsal rót ganglion og vernda taugafrumur fyrir vetnisperoxíði völdum oxunarálagi in vitro.20 Rannsóknin sem kynnt er hér leitast við að ákvarða getu poly(pro-E2) kvikmyndir til að veita taugavörn in vivo með því að nota músamódel af mýkingu SCI.

Miðlungs áverka SCI var framkallað hjá fullorðnum karlmúsum og strax í kjölfar áverka voru pólý(pro-E2) filmur settar beint fyrir ofan áverka (Mynd 2A). Til að tryggja að poly(pro-E2) filmurnar haldist á sínum stað eftir ígræðslu, voru poly(pro-E2) filmur hlaðnar rhodamine B græddar í mænu slasaðra dýra. Sjö dögum eftir ígræðslu var mænu safnað og myndað með ljóssmásjá (Mynd 2B). Hjá öllum dýrum voru ígræddu rhodamine B-hlaðnu pólý(pro-E2) filmurnar áfram á sínum stað sem staðfestir ígræðsluaðferðina.

Til að prófa getu poly(pro-E2) filma til að veita taugavörn og draga úr bólgu, voru poly(pro-E2) filmur (án rhodamine B) græddar í kjölfar mænuáverka og mænu var safnað 7 dögum eftir áverka og ígræðslu. Lengdarhlutar (10 μm þykkir) voru skornir, miðaðir í kringum skaðaskjálftamiðjuna og ónæmismerktir til að sjá fyrir taugafrumum og átfrumur í mænunni (Mynd 3).

Hlutar voru merktir fyrir NeuN til að meta nærveru taugafrumna og megindleg greining á lituninni leiddi í ljós að poly(pro-E2) filmurnar juku NeuN jákvæða svæðið í kringum skaðvaldsmiðjuna verulega samanborið við slasaða viðmiðunarhópinn sem fengu ekki filmuígræðslu (Mynd 3A; p=0.0002). Viðbótarlitun fyrir axóna með því að nota NFH (taugaþráðaþunga keðju) leiddi einnig í ljós bráð taugaverndaráhrif ígræddu poly(pro-E2) filmanna (Mynd 3B; p=0.0017).

Við sáum að þessi breyting á taugavörn var ekki vegna breytinga á frumudauða (caspase 3) á áverkastaðnum (Styrkjandi mynd S1; p=0.9966). Litun fyrir virkjaða átfrumur (CD68) leiddi heldur ekki í ljós nein marktækur munur á fjöl(pro-E2) filmumeðhöndluðu dýrunum og ómeðhöndluðu dýrunum (Mynd 3C; p= 0.7207).

Samanlagt auka pólý(pro-E2) filmur taugavörn örlítið án þess að breyta bólgusvöruninni. Poly(pro-E2) filmur jukust taugaþéttleika bráðlega um tæp 20%, en kvikmyndirnar höfðu engin augljós bólgueyðandi áhrif (byggt á magngreiningu á svæðið sem virkjaðir átfrumur eru frá) (Mynd 3).

Þessi skortur á lækkun á bólgu gæti bent til þess að bólgueyðandi og taugavarnarskammtar af E2 séu aðgreindir og að hvoru tveggja hafi ekki náðst með núverandi filmusamsetningu.20 Við gerðum tilgátu um að aukin E2 losun frá pólý(pro-E2) filmunum gæti dregið úr bólgu. og gera öflugri taugaverndandi svörun.

Til að auka skammtinn af E2 sem losnaði bráðlega, var poly(pro-E2) filmunum breytt þannig að bolus E2 losun myndi eiga sér stað strax eftir ígræðslu. Eftir bolus losun E2 myndi niðurbrot fjölliða fylgja til að losa E2 í sama styrk og áður. Tilraunin sem lýst er hér að ofan var endurtekin með þessum bolus-losandi poly(pro-E2) filmum og taugavörn og bólga voru metin 7 dögum eftir meiðsli (dpi).

Hins vegar, í stað þess að auka ávinninginn, jók bolus-losandi poly(pro-E2) filmurnar ekki marktækt NeuN jákvætt svæði samanborið við slasaða, ómeðhöndlaða viðmiðunarhópinn (Mynd 4A; p=0.6770). Bolus-losandi poly(proE2) filmurnar juku CD68 tjáningu, en aukningin var ekki tölfræðilega frábrugðin (p= 0.1780).

Aukin tilhneiging í glial hvarfgirni og microglial bólgu sást einnig í viðurvist bolus-losandi poly(pro-E2) filma vegna aukningar á GFAP (stjarfrumum) og Iba1 (microglia) tjáningu; Hins vegar voru þessar hækkanir ekki tölfræðilega meiri en það sem sást hjá slasaða, ómeðhöndluðu viðmiðunarhópnum (p=0.3233 og p=0.3053, í sömu röð). Samanlagt jók bolus-losandi poly(pro-E2) filmur ekki taugavörn og viðbrögð stjarnfruma og nærvera átfrumna/míkrófruma minnkaði ekki eins og upphaflega var gert ráð fyrir.

Þar sem munur á slösuðum, ómeðhöndluðum dýrum og slösuðum, bolus-losandi poly(proE2) filmumeðhöndluðum dýrum sást ekki á bráðum, 7 dpi tímapunkti, var langvarandi tímapunktur valinn til frekari rannsóknar þar sem poly(pro-E2) kvikmyndirnar getur losað E2 til langs tíma.20 Tilraunin sem lýst er hér að ofan var endurtekin með bolus-losandi poly(pro-E2) filmunum, en dýrin voru metin langvarandi við 21 dpi (mynd 5).

Mæna voru merkt fyrir sömu frumugerðir og áður voru tilgreindar. Eftir greiningu var tilhneiging til aukningar á flatarmálshlutfalli NeuN hjá dýrum sem losuðu bolus-losandi fjöl(pro-E2)filmu ígræddu samanborið við slösuðu, ómeðhöndluðu dýrin (Mynd 5A; p=0.0897) .Að auki sást þróun þar sem bolus-losandi poly(pro-E2) filmur minnkuðu svæðishlutfall CD68 og GFAP tjáningar samanborið við gögn frá ómeðhöndluðum, slösuðum dýraviðmiðum (Mynd 5B, C; p=0.0859 og p=0.2780).

Hins vegar var engin af þróuninni tölfræðilega ólík. Aftur á móti sýndu Iba1 merktir vefjasneiðar úr fjöl(pro-E2) meðhöndluðum dýrum sem losa um bolus aukna tjáningu samanborið við gögn frá ómeðhöndluðum, slösuðum viðmiðunarhópum (p < 0.0001). Fyrri vinna okkar sýnir að poly(pro) -E2) kvikmyndir steyptar á 15 mm × 15 mm hyljara losa um 266 ng af E2 á dag,20 sem þýðir um það bil 2 ng af E2 á dag úr filmunum (1 mm × 1,8 mm) sem notaðar eru hér. Bolus-losandi poly(pro-E2) filmurnar gefa frá sér 40 ug af óbundnu E2 til viðbótar bráðum eftir ígræðslu.

Rannsóknir sem einbeita sér að notkun E2 í SCI líkönum af nagdýrum sýna að lágskammtar estrógen (10 ug/kg) gefið í bláæð dregur úr viðbragðsglímu og veitir taugavörn á sama tíma og dregur úr bólgutilvikum, hindrar frumudauða og eykur æðamyndun. skaðleg áhrif sem fela í sér aukna tíðni djúps bláæðasega og krabbameins22,23 og þróun kvenlegra líkamlegra eiginleika hjá körlum. Þetta er athyglisvert þar sem flestar E2 rannsóknir hafa beinst að því að gefa E2 kerfisbundið annað hvort í bláæð eða í kviðarhol.

Með hliðsjón af öryggisáhyggjum við notkun stóra skammta af E2 kerfisbundið er mikilvægt að hámarka E2 styrk fyrir staðbundna afhendingu á slasaða mænu til að koma í veg fyrir aukaverkanir. Hingað til hefur aðeins ein rannsókn skilað E2 úr lífefni með því að nota nanóagnir til að senda E2 beint (2,5 ug eða 25 ug). Losun frá nanóögnum dró hratt úr bólgu bráð í rottulíkani af heilabroti. of mikið E2 (40 ug) losnar bráðlega á meðan mjög lítið (2 ng) losnar langvarandi.

Þrátt fyrir að það sem við sjáum af þessum gögnum sé hófleg þróun, undirstrikar þessi rannsókn mikilvægi E2 skammta til að stuðla að taugavernd in vivo. Að minnka upphafsskammtinn af E2 og aðlaga niðurbrotshvörf pólý(pro-E2) lífefnisins gæti hjálpað til við að draga úr þessu vandamáli og hugsanlega veita betri taugaverndandi niðurstöður.

Þrátt fyrir að þessi rannsókn hafi eingöngu verið gerð á körlum, er mikilvægt að meta áhrif þessara poly(pro-E2) kvikmynda hjá báðum kynjum til að koma á gildum þýðingarmöguleika fyrir þetta lífefni. Rannsóknir hafa sýnt að í kjölfar SCI getur aukið estrógenmagn hjá konum verið að hluta til ábyrgt fyrir bættum virkni þeirra samanborið við karla.24Þar sem aukin estrógen nærvera er hjá konum verður hvers kyns lífefnaaðferð sem notar estrógen að taka tillit til þessa auknu magns og breyta efninu. losunarhvörf í samræmi við það til að tryggja að skammturinn sem gefinn er sé sá sami hjá körlum og konum.

AÐFERÐIR

Framleiðsla á fjöl(pro-E2) filmum.

Pólý(pro-E2) fjölliðan P1 var framleidd og einkennd eins og lýst er í smáatriðum áður.20 Fjölliðan hefur þyngdarmeðalmólmassa MW ~ 80 kDa og dreifingu ± 3, samkvæmt gel gegndræpi litskiljun (GPC). Pólý(pro-E2) filmur voru framleiddar með því að leysa fjölliðuna upp í klóróformi (5 wt%/w; fjölliða/klóróform), dropasteypa lausnina á 15 mm × 15 mm glerhlífar (100 μL lausn á hvern hylki) og skilja þá eftir. að þorna yfir nótt undir lofttæmi (<100 mTorr) at room temperature (RT). In a subset of experiments, the polymer solution was supplemented with rhodamine B (0.005 wt %/wt; rhodamine B/chloroform) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) to verify the presence of the poly(pro-E2) films in animals post-implantation.
Til að búa til pólý(pro-E2) filmur með óbundnu E2 voru filmur framleiddar með því að bæta óbundnu E2 (Abcam, Cambridge, MA) við fjölliðalausnina (0.0625 wt %/wt; E2/klóróform) fyrir dropcasting lausnina á yfirglasið. Fyrir ígræðslu voru hyljarnar með filmum sótthreinsaðar með útfjólublári (UV) geislun í 30 mínútur og filmurnar voru afhýddar af hyljaranum í dauðhreinsuðum líföryggisskáp. Poly(pro-E2) filmurnar voru síðan skornar í 1 mm× 1,8 mm bita, sem henta til ígræðslu í fullorðna mús eins og lýst er hér að neðan.

Mænuskemmdir og pólý(pro-E2) filmur ígræðsla.

Allar skurðaðgerðir og aðgerðir eftir aðgerð voru samþykktar af Rensselaer PolytechnicInstitute og The Ohio State University Institutional Animal Care and Use Committees (IACUC). Til að framkalla mænuskekkju voru fullorðnar karlkyns C57BL/6 mýs (10- til 12-vikugamlar), keyptar frá Jackson Laboratory (birgðanr. 000664; Bar Harbor, ME), svæfðar með inndælingu í kviðarhol. af ketamíni (80 mg/kg) og xýlazíni (10 mg/kg). Bakið á dýrunum var rakað og útbúið með smitgát með því að nota 70% etanól og betadín.

Eftir að dýrið var komið fyrir á hitapúða sem haldið var við 37 gráður, voru húð- og vöðvalögin opnuð til að afhjúpa hryggjarliðinn og hryggjaskurður var gerður á níunda brjóstholinu (T9) til að afhjúpa mænuna. Miðlungsmikill (75 kdyn) áverki SCI var framkallaður á þessu stigi með því að nota Infinite Horizons höggbúnað (Precision Systems andInstrumentation, Lexington, KY).

Eftir að blæðing hafði náðst var dura opnuð (Mynd 2) og poly(pro-E2) filma eða bolus-losandi poly(pro-E2) filma (1 mm × 1,8 mm) var sett undir dura og fyrir ofan mænu, sem huldi áverkastaðinn. Hjá samanburðardýrum var dura opnuð en poly(pro-E2) filmurnar voru ekki ígræddar. Vöðvalögunum var síðan lokað með dauðhreinsuðum saumum og húðinni var lokað með dauðhreinsuðum málmsárklemmum.

Mýsnar fengu 2 ml af dauðhreinsuðu saltvatni sprautað undir húð og voru settar aftur í búrin og settar á rennibrautarhitara stillt á 37 gráður yfir nótt. Til að tryggja rétta vökvun og koma í veg fyrir sýkingar var músunum sprautað undir húð með 1–2 ml af dauðhreinsuðu saltvatni og Gentocin (1 mg/kg) daglega fyrstu 5 dagana eftir áverka (dpi). Þvagblöðrur voru handtengdar tvisvar á dag meðan tilraunirnar stóðu yfir. Öll dýrin voru hýst við hefðbundnar aðstæður á 12-klukkutíma ljós-myrkri hringrás með frjálsum aðgangi að mat og vatni.

Vefjauppskera.

Á tilgreindum lokatímapunktum 7 eða 21 dpi var sprautað lethaldósa af ketamíni/xýlazíni (1,5× skurðarskammtur) og þær geymdar í gegnum hjartað með 0.1 Mfosfat-bufferuðu saltvatni (PBS; pH 7,4) fylgt eftir með 4% paraformaldehýði (PFA; pH 7,4). Mænurnar voru fjarlægðar, festar eftir í 2 klst í 4% PFA og síðan færðar yfir í 0.2M fosfatbuffa (PB; pH 7,4) yfir nótt.

Mænurnar voru frystar í 30% súkrósa í 48 klst við 4 gráður og síðan lokaðar í 10 mm hluta með miðju í kringum skaðasvæðið með baksúlurnar upp. Þessir hlutar voru felldir inn í Tissue-Tek kjörhitastigsmiðil (VWR International, Radnor, PA) og hratt frystir á þurrís. Allar mænuþræðir voru skornar í 10 μm á Microm HM505E frystistilli, settar á ColorFrost Plus glærur (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), og síðan geymt við -20 gráður þar til það er notað til ónæmislitunar.

Ónæmisvefjafræði og magngreining.

Glærurnar voru þíðaðar á rennibrautarhitara í 1 klst og síðan skolaðar þrisvar sinnum í 0.1 MPBS. Innræn peroxidasavirkni var slökkt með því að rækta glærurnar í 6% H2O2 þynnt í metanóli í 15 mínútur við RT. Eftir þvott þrisvar í 0.1 M PBS, voru hlutar ræktaðir með 4% BSA og 0.1% Triton X-100 í 0.1 M PBS í 1 h fylgt eftir með ræktun yfir nótt á aðal mótefnum við 4 gráður eða RT (tafla 1).

Skyggnurnar voru ræktaðar með viðeigandi bíótínýleruðum aukamótefnum (1:1000; Vector Laboratories, Burlingame, CA) við RT í 1 klst. Til að sjá bundið mótefnið voru skyggnurnar ræktaðar með Vectastain Elite-ABC (Vector Laboratories) í 1 klst og þróaðar með ImmPACT3,3′-diaminobenzidine (DAB) eða Vector SG hvarfefni (Vector Laboratories) í 10 mínútur.

Þessir hlutar voru þurrkaðir í gegnum 2 × 2 mínútur í röð í 70% og 90% etanóli, 2 × 3 mínútur í 100% etanóli, fylgt eftir með 3 × 3 mínútur í Histoclear og loks sett yfir með Permount (ThermoFisher Scientific). Sex hlutar á hvert dýr, með 100 míkró millibili á milli slasaðrar mænu, voru notaðir við magngreininguna.

Ónæmismerktu hlutarnir voru teknir af mynd með Axioplan 2 myndsmásjá búin AxioCamdigital myndavél og AxioVision útgáfu 4.8.2 hugbúnaði (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Þýskalandi) og 5× hlutlægu.

Fjöldi jákvæðra pixla í hverjum hluta var talinn með því að nota MIPAR myndgreiningarhugbúnað (MIPAR, Worthington, OH) til að reikna út prósentu jákvæða flatarhluta á hvern hluta. Meðaltal prósenta jákvæða flatarmáls sexkaflana á hvert dýr var reiknað út fyrir hvern blett og tilkynnt.

Tölfræðigreining.

Öll gögn eru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik. Tölfræðileg greining var framkvæmd með því að nota GraphPad Prism 9 tölfræðihugbúnaðinn (GraphPad Software, San Diego, CA). Í öllum tilraununum voru notuð 5-6 dýr í hverjum hópi, upprunnin úr að minnsta kosti tveimur mismunandi dýralotum. Til að prófa muninn á samanburðar- og poly(pro-E2) filmuhópunum var t-próf ​​nemenda (myndir 3, 4 og 5) notað. Merking var staðfest við p Minna en eða jafnt og 0.05.

Viðbótarefni

Sjá vefútgáfuna á PubMed Central fyrir viðbótarefni.

VIÐTAKNINGAR

Höfundar þakka Wenmin Lai fyrir aðstoðina við músaaðgerðirnar.

Fjármögnun

Þessi vinna hlaut stuðning frá Craig H. Neilsen Foundation Fellowship (Grant 468116) og Paralyzed Veteransof America Research Foundation Fellowship (Grant 3171) til MKG og frá NIH R01 (Grant NS092754) og New York State Mænuskaða Review Board Institutional Support Grant C3224G Öll dýravinnan var unnin með aðstoð frá Ohio State University Neuroscience Department Surgical Core með stuðningi NINDS Grant P30NS104177.

HEIMILDIR

(1). Landstölfræðimiðstöð um mænuskaða. (2020) Staðreyndir og tölur um mænuskaða í augnablikinu, háskólanum í Alabama í Birmingham, Birmingham, AL.

(2). Cripps RA, Lee BB, Wing P, Weerts E, MacKay J og Brown D (2011) Alþjóðlegt kort fyrir faraldsfræði áverka á mænuskaða: Í átt að lifandi gagnageymslu til meiðslavarna. Mæna. 49, 493–501. [PubMed: 21102572]

(3). Donovan WH (2007) Mænuskaðar - fortíð, nútíð og framtíð. Journal of Spinal CordMedicine 30, 85–100.

(4). Pickelsimer E, Shiroma EJ og Wilson DA (2010) Ríkisrannsókn á heilsutengdum heilsufarsástæðum einstaklinga með mænuskaða. J. Spinal Cord Med. 33 (3), 221–231. [PubMed: 20737795]

(5). Silver J og Miller JH (2004) Endurnýjun handan Glial Scar. Nat. Séra Neurosci. 5 (2), 146–156. [PubMed: 14735117]

(6). Varma AK, Das A, Wallace G, Barry J, Vertegel AA, Ray SK og Banik NL (2013) Spinal Cord Injury: A Review of Current Therapy, Future Treatments, and Basic Science Frontiers.Neurochem. Res. 38, 895–905. [PubMed: 23462880]

(7). Zendedel A, Mönnink F, Hassanzadeh G, Zaminy A, Ansar MM, Habib P, Slowik A, Kipp M og Beyer C (2018) Estrógen dregur úr staðbundinni bólgutjáningu og virkjun eftir mænuskaða. Mol. Neurobiol. 55 (2), 1364–1375. [PubMed: 28127698]

(8). Lee JY, Choi HY, Ju BG og Yune TY (2018) Estrógen dregur úr taugaverkjum af völdum mænuskaða með því að hindra örveru- og stjarnfrumuvirkjun. Biochim. Lífeðlisfræði. Acta, Mol. Grundvöllur Dis. 1864 (7), 2472–2480. [PubMed: 29653184]

(9). Cox A, Varma A, Barry J, Vertegel A og Banik N (2015) Nanóagna estrógen í rottum mænuskaða vekur hröð bólgueyðandi áhrif í plasma, heila- og mænuvökva og vefi.J. Neurotrauma 32 (18), 1413–1421. [PubMed: 25845398]

(10). Sribnick EA, Samantaray S, Das A, Smith J, Matzelle DD, Ray SK og Banik NL (2010)Estrogenmeðferð eftir áverka á langvinnum mænuskaða bætir hreyfivirkni í rottum. J. Neurosci. Res. 88 (8), 1738–1750. [PubMed: 20091771]

(11). Honda K, Shimohama S, Sawada H, Kihara T, Nakamizo T, Shibasaki H og Akaike A (2001) Ógenomic Antiapoptotic Signal Transduction by Estrogen in Cultured Cortical Neurons. J. Neurosci. Res. 64 (5), 466–475. [PubMed: 11391701]

(12). Sribnick EA, Wingrave JM, Matzelle DD, Ray SK og Banik NL (2003) Estrógen sem taugavarnarefni við meðferð á mænuskaða. Ann. NY Acad. Sci. 993.125–133. [PubMed: 12853305]

For more information:1950477648nn@gmail.com