Hlutverk BATF3 í Tu9 aðgreiningu og T-frumudrifnum L meinafræði MuCOsal (1. hluti)

Til að fá frekari upplýsingar vinsamlegast hafðu sambanddavid.wan@wecistanche.com

T hjálpar 9 (T,9) frumur eru mikilvægar fyrir þróun bólgu- og ofnæmissjúkdóma. TH9 umritunarnetið sameinar merki frá frumuefnum og mótefnavakakynningu en er ófullkomið skilið. Hér greindum við TL1A, sem er meðlimur TNF ofurfjölskyldunnar, sem sterkur örvandi TH9 aðgreiningar músa og manna.Vélrænt, TL1A framkallaði tjáningu umritunarþáttanna BATF og BATF3 og auðveldaði bindingu þeirra við //9 hvata sem leiddi til aukinnar seytingar á I-9, BATF- og BATF3-skorti skert IL{{6} } seyting við Tμ9 og Ty9-TL1A skautunaraðstæður. In vivo, með því að nota T-frumuflutningslíkan, sýndum við fram á að TL1A ýtti undir IL-9-háð, T,9 frumu-framkallaða þarma- og lungnabólgu. Hlutleysandi IL-9 mótefni veiktu TL1A-drifna slímhúðarbólgu. Batf3-7T_9-TL1A frumur ollu minni bólgu ogcýtókín tjáningin vivo samanborið við WT frumur. Niðurstöður okkar sýna að TL1A ýtir undir aðgreiningu og virkni T_9 frumna og skilgreinir hlutverk BATF3 í slímhúðbólgu sem knúin er af T-frumum.

Smelltu hér til að læra meira um Cistanche

KYNNING

Sérhæfðir undirhópar T-hjálparfrumna (T-) gegna mikilvægu hlutverki við að viðhalda vefjajafnvægi og við þróun bólgusjúkdóma á slímhúðflötum. TH9 frumur hafa nýlega verið auðkenndar sem sjálfstæða T-frumu undirmengi sem framleiðir aðallega IL-9 en einnig IL-10 og IL-21.12 Tμ9 frumur hafa verið tengdar við nokkra sjúkdóma, þar á meðal ofnæmislungna bólga, tilrauna sjálfsofnæmiheila- og mergbólga(EAE), ristilbólga, 3- Nýlega hafa TH9 frumur fengið sníkjuormasýkingar og krabbamein. verið tilkynnt um að gegna hlutverki í bólgusjúkdómum í þörmum (IBD).-9Sjúklingar með sáraristilbólgu (UC) hafa aukinn fjölda slímhúðar IL-9 auk T frumna og IL-9 viðtaka (IL) -9R) er uppstillt á þekjuþekju þarma. IL-9 skortur bælir þróun bráðrar og langvinnrarristilbólga af völdum oxazólóns, líkan sem líkir eftir UC. Hjá Crohns sjúkdómi (CD) sjúklingum er há-8-10 IL-9 gildi í sermi í tengslum við alvarlegan sjúkdóm.

Mynd 1 TL1A eykur aðgreiningu TH9 frumna úr músum og mönnum. Naive músa CD4 plús T frumur voru aðgreindar við Ty0-eða T9-skautunaraðstæður með eða án TL1A í 3 daga og ELJSA greiningu á ]L-9, IL{{9} } og IL-13 seyti. b Naive CD4 T frumur úr mönnum (CD4'CD45RACD45ROCD25) voru einangraðar frá PBMC heilbrigðra gjafa og aðgreindar við TH9-skautunaraðstæður með eða án TL1A í 3 daga. ELISA greining á seytingu IL-9 úr mönnum eftir 48 og 72 klst. Box-whisker plot sem sýnir IL-9 styrk í ræktunarfrumvökva fyrir TH9 og TH9-TL1A meðhöndlaðar frumur. Kassarnir tákna miðgildi og 25. og 75. hundraðshluta, og hárhöndin tákna lágmarks- og hámarksgildi dreifingarinnar. N=7-9. Gögn tákna meðaltal± SD af einni sjálfstæðri tilraun af fjórum (óháðar tilraunir. *bls< 0.05,***p=""><0.005 determined="" by="" student's="">

TH9 frumur aðgreina sig frá barnalegum CD4 plús T frumum í viðurvist TGF- 1 og IL-4. Nokkrir umritunarþættir aftan við T-frumuviðtakana (TCR), TGF- 1 og IL-4 viðtakana eru nauðsynlegir fyrir sérhæfingu TH9 frumna, þar á meðal IRF4, STAT6, GATA3, PU.1, NF- kB og einfaldur leusín rennilás umritunarþáttur ATF-líkur (BATF.11-15 Hins vegar er umritunaráætlunin og bólgukveikjur sem knýja fram aðgreiningu Tμ9 frumna enn ekki vel skilin og ættarskilgreinandi þáttur tengdur lL{{ 17}} tjáning hefur ekki verið auðkennd.

Fjölskylda BATF umritunarþátta samanstendur afBATF, BATF2, ogBATF3og tilheyrir AP-1 fjölskyldu umritunarþátta sem innihalda JUN og FOS. Umritunarþættir í BATF fjölskyldunni eru samsettir úr DNA-bindandi léni og leucine rennilás mótíf en skortir umvirkjunarsvæði og var upphaflega lýst sem neikvæðum eftirlitsaðilum AP-1 virkni." Hins vegar hafa nýlegar rannsóknir sýnt að BATF fjölskyldumeðlimir hafa samskipti við IRF umritunarþætti, þar á meðal IRF4 og IRF8, og bindast AP-1-IRF samsettum frumefnaröðum til að stjórna markgenum þeirra í T frumum og dendritic frumum. Sýnt hefur verið fram á að BATF er einnig nauðsynlegt fyrir þróun Ty9 frumna sem TH2, TA17 og Try frumur.15,19BATF3 hefur verið lýst til að stjórna þróun CD8a plús og CD103 plús dendritic frumur. "2' Öfugt við BATF hefur óþarfi hlutverk BATF3 í þróun Tu frumna ekki verið sýnt fram á. Auk þess á eftir að skýra utanfrumuáreiti sem geta virkjað BATF3 ferlið í CD4 plús Tu frumum.

Mynd 2 TL1A stjórnar BATF og BATF3 tjáningu meðan á T,9 aðgreiningu stendur. Umritunarsnið á TH9 og TH9-TL1A frumum með RNA raðgreiningu. Hitakort sem sýnir RNA-röðunargögn með því að nota 100 efstu genin með stærsta IQR (millikvartila svið). Dendrografin til vinstri og fyrir ofan hitakortið tákna þyrping gena (raðir) og sýna (dálka). b Naive CD4 plús T frumur voru aðgreindar í mismunandi TH undirmengi og Tregs í 3 daga. Hlutfallsleg BATF mRNA tjáning var greind með PCR,c Naive CD4 plús T frumur voru aðgreindar við TH0- eða TH9-skautunaraðstæður með eða án TL1A fyrir tilgreind tímabil. PCR greining á hlutfallslegri BATF mRNA tjáningu, d Samlitun á BATF og IRF4 (efst). Magngreining á hlutfalli BATFIRF4 frumna(neðst).e Samlitun BATF og IL-9. fg

TL1A. f Dæmigerð innanfrumu litun á IL-9 og BATF við 48h.g TíðniBATFfIL-9 plús T frumuraðgreindar undir Ty9 og T9-TL1A skilyrðum. Aðferðir eru sýndar. Hvert tákn táknar einstakan gjafa. N=4. h Hlutfallsleg Batf3 mRNA tjáning í mismunandi músa Th undirhópum og Tregs var greind með qPCR.I Hlutfallsleg Batf3 mRNA tjáning á tilgreindum tímapunktum. j Samlitun fulltrúa BATF3 og IL-9. k Tíðni áBATF3IL-9 plús T frumuraðgreindar undir Ty9 og TH9-TL1A skilyrðum. Aðferðir eru sýndar. Hvert tákn táknar einstaka tilraun. N=3. Naive CD4 plús T frumur úr mönnum voru aðgreindar við T,9-skautunaraðstæður með eða án TL1A. I Fulltrúi innanfrumu litun á IL-9 og BATF3 eftir 48 klst. m Tíðni BATF3L-9 plús T frumna aðgreindar við TH9 og TH9-TL1A aðstæður. Aðferðir eru sýndar. Hvert tákn táknar einstakan gjafa. N=4. Gögnin tákna meðaltal±SD af einni sjálfstæðri tilraun út af tveimur (a) eða að minnsta kosti þremur (bd. i. k) óháðum tilraunum.*n<0.05. n=""><0.01.***n <="" 0.005="" as="" determined="" by="" student's="">

Við höfum nýlega sýnt að TL1A, TNF yfirfjölskyldumeðlimur sem gegnir mikilvægu hlutverki í ónæmismiðluðum sjúkdómum þar á meðal IBD, 25 framkallar seytingu IL-9 í Tu17 frumum. „Ennfremur sýndi nýleg útgáfa að TL1A, í gegnum viðtaka DR3, stuðlar að TA9 aðgreiningu í gegnumIL-2-ogSTATISTI5-háð en PU.1- og STAT6-óháð kerfi í ofnæmislungnabólgu.2' Hins vegar á eftir að vera umritunaráætlanir af völdum TL1A og sjúkdómsvaldandi áhrif TL1A framkalla TH9 frumna í þarmabólgu og IBD. upplýst.

Hér sýnum við fram á að TL1A stuðlar að aðgreiningu TH9 frumna úr mönnum og músum með nýjum merkjaleið. Við skilgreinum BATF3 sem nýjan umritunarstýribúnað fyrir sérhæfingu Tp9 frumna. TL1A leiðir til endurmótunar á litningi á lI9 staðinum og nýliðun brautryðjenda umritunarþáttanna IRF4 og BATF, sem eru mikilvægir þættir fyrir IL-9 umritunarvirkjun, og BATF3 til varðveislusvæða innan 9 hvata. Ennfremur stjórnar TL1A tjáningu BATF og BATF3 á STAT6-háðan hátt. BATF- og Batf3-vantar T-9 og TL1A-framkallað TH9(T-9-TL1A ) frumur eru skertar í IL-9 framleiðslu þeirra.TH9-TL1Afrumur eru mjög bólgueyðandi in vivo þegar þær eru fluttar til ættleiðingar í Ragi-7-mýs eins og sést af alvarlegri slímhúðarbólgu í þörmum og lungum, sem var veikt með meðferð með hlutleysandi IL-9 mótefnum. Samþykkt flutningur á Batf3-/TH9-TL1A frumum yfir í Rag1-7mýs leiðir til verulega minni slímhúðarbólgu og frumumyndun í samanburði við WT TH9-TL1A frumur. Gögnin okkar sýna fram á nýtt hlutverk TL1A og BATF3 við að þróa T,9 frumur með sjúkdómsvaldandi áhrifum og bera kennsl á þessa boðleið sem hugsanlegt meðferðarmarkmið í T_9-knúnum meinafræði, þar á meðal IBD og ofnæmislungnasjúkdómum.

NIÐURSTÖÐUR

TL1A eykur aðgreiningu músa og manna Tμ9 frumur in vitro Til að ákvarða áhrif TL1A á TH9 aðgreiningu örvuðum við barnalegar CD4 T frumur við TH9 aðstæður með eða án TL1A. TL1A jók marktækt IL-9 seytingu og I/9 mRNA tjáningu (mynd 1a, viðbótarmynd 1a). TL1A eitt og sér olli ekki seytingu IL-9, sem bendir til þess að TL1A virki samverkandi við TGF- 1 og IL-4 til að stuðla að IL-9 framleiðslu. Seyting og mRNA tjáning T-9-tengdra frumuefna L-10 og IL-13 var einnig aukin með TL1A (mynd 1a, viðbótarmynd 1a, b). Í samræmi við fyrri skýrslur leiddu tímatilraunir á innanfrumu IL-9 litun í ljós tímabundna IL-9 tjáningu með hámarksörvun við T-9 aðstæður á degi 3 og hnignun aftur í grunnlínu á degi 5(viðbótarmynd 1b).28,2TL1A framkallaði marktækt hærra hlutfall IL-9-framleiðandi frumna á meðan tilraunirnar stóðu yfir með breytingu á hreyfihvörf í átt að fyrri og sterkari IL-9 framkalla sem jafnvel fór snemma yfir hámark IL-9 framleiðslu sem framkallað er við TH9 aðstæður (viðbótarmynd 1b). Við sáum einnig aukningu á IL-9 plús IL-10 plús frumum í viðurvist TL1A (viðbótarmynd 1b). Við sáum ekki neina breytingu í átt að öðrum Tu undirhópum (viðbótarmynd 1c). Aukning TH9 aðgreiningar með TL1A var algjörlega háð viðtaka DR3 (viðbótarmynd 1d). Samanlagt benda þessi gögn til þess að TL1A hafi samvirkni við TGF- 1 og IL-4 í TA9 aðgreiningu og IL-9 framleiðslu.

TL1A jók einnig verulega TH9 aðgreiningu í mótefnavaka-sértæku umhverfi með því að nota OVA-sértækar OT-ll frumur (viðbótarmynd 1e, f). TL1A hafði ekki áhrif á frumufjölgun meðan á TH9 aðgreiningu stóð (aukamynd 1g), eins og sýnt hefur verið fram á fyrir minni CD4 plús T frumur. " Þessi gögn benda til þess að TL1A hafi aukið TH9 aðgreining án þess að hafa áhrif á fjölgun. Ennfremur skoðuðum við IL-9 framleiðslu í frumum sem voru aðgreindar við Ty9 og TH9-TL1A aðstæður í 3 daga og endurörvaðar með and-CD3s/ CD28. Við sáum aukna IL-9 framleiðslu í TH9-TL1A frumum samanborið við TH9 frumur eftir aukaörvun sem var aukin enn frekar í nærveru TL1A (viðbótarmynd 1h, i). Þessi gögn benda til þess að TL1A jók einnig IL-9 framleiðslu úr sérhæfðum TH9 frumum. Næst ákváðum við áhrif TL1A á sérhæfingu Tu9 frumna úr mönnum. Naive CD4 plús T frumur voru einangraðar úr PBMC frá heilbrigðum gjöfum og örvaðar við Tu9 ástand í viðurvist af TL1A úr mönnum. Í samræmi við gögn okkar frá TH9-frumum úr músum jók viðbótin á TL1A verulega IL-9 seytingu úr TH9-frumum úr mönnum (mynd 1b).

TL1A örvar tjáningu umritunarþáttanna BATF og BATF3 Til að skýra merkjaleiðir framkallaðar af TL1A notuðum við RNA raðgreiningu til að meta umritunarsniðið í TH9 og TH9-TL1A frumum. TL1A breytti ekki verulega TH9 umritunarsniðinu sem gefur til kynna að TL1A hafi ekki skekkt TH9 aðgreiningu á heimsvísu (gögn ekki sýnd). Hins vegar voru 219 gen tjáð á mismunandi hátt í TH9-TL1A frumum (mynd 2a, viðbótartöflur 1 og 2). Vegaauðgunargreining benti á verulegar breytingar á genum sem taka þátt í cýtókín-sýtókínviðtaka og JAK-STAT boðferlum við T,9-TL1A aðstæður (viðbótartöflur 1 og 2, gögn ekki sýnd). BATF3 og nokkur BATF-stýrð gen voru marktækt uppstýrð við T,9-TL1A aðstæður (viðbótartafla 3) sem bendir til þess að umritunarþættirnir BATF3 og BATF gætu tekið þátt í aðgreiningu TH9-TL1A frumna. Lýst hefur verið að BATF sé nauðsynlegt Til að ákvarða þróun Tp17 og TA9 frumna.15,31-34 -hvort TL1A virkjar BATF fjölskyldumeðlimi, metum við fyrst tjáningarstig BATF í mismunandi Tu undirhópum og greindum sterka BATF mRNA tjáningu í TH9 og TH2 frumur (mynd 2b). TL1A jók tjáningu BATF enn frekar við Tu9 aðstæður, sérstaklega á degi 1 þegar TH9 skilyrði ein og sér duga ekki til að framkalla BATF mRNA (mynd 2c). TL1A eitt og sér framkallaði BATF mRNA á svipaðan hátt og Tp9 aðstæður (mynd 2c). Innanfrumulitun fyrir BATF staðfesti að Ty9-TL1A örvun jók verulega hlutfall BATF plús frumna (mynd 2d). Ennfremur jók TL1A eitt og sér hlutfall BATF plús frumna og mikilvægara hlutfall BATF*IRF4 plús frumna samanborið við TH9 aðstæður sem benda til þess að TL1A gæti aukið myndun IRF4-BATF samvinnufléttna (mynd 2d). TH9-TL1A örvun jók einnig hlutfall BATF plús IL-9 plús frumna (mynd 2e).

Að auki höfðu TH9 frumur úr mönnum marktækt hærra hlutfall IL-9-framleiðandi frumna þegar þær voru örvaðar með TL1A (mynd 2f, g). Athyglisvert er að meirihluti IL-9-framleiðandi frumna tjáði BATF samhliða. Samlitun á BATF og IRF4 sýndi að viðbót TL1A jók hlutfall BATF*IRF4 plús frumna við aðgreining á T-9 úr mönnum (gögn ekki sýnd), sem bendir til þess að aukin IL-9 framleiðslu í gegnum BATF merkjaleiðina með TL1A er varðveitt á milli músa og manna TH9 fruma. Öfugt við BATF er hlutverk BATF3 í sérhæfingu TH frumna minna skilgreint. Til að staðfesta RNA-seq gögnin okkar ákváðum við tjáningarstig Batf3 í T-9 frumum og öðrum TH undirmengum og komumst að því að Batf3 mRNA tjáning var hæst í T-9, T,1 og TH2 frumur (mynd 2h). TL1A jók tjáningu Batf3 við T-9 skilyrði (Mynd 2i). Innanfrumulitun fyrir BATF3 staðfesti að T,9-TL1A örvun jók verulega hlutfall BATF3 plús IL-9 plús frumna (Mynd 2j, k). Í T9 frumum úr mönnum jók TL1A tjáningu BATF3 marktækt. plús IL-9 plús frumur(Mynd 2l, m). Svipað og BATF tjáði meirihluti IL-9-frumna BATF3 samhliða.

Mynd,3 TL1A eykur bindingu BATE IRF4, og BATF3 við //9 hvata við Ty9 aðgreiningu, a, b Naive músa CD4 plús T frumur voru aðgreindar við TH0- eða Tμ9-skautunaraðstæður með eða án TL1A í 2 (BATF, IRF4 og AcH3) eða 3 (BATF3) daga. ChP mælingar voru gerðar fyrir BATF, IRF4, BATF3 eða AcH3 bindingu við varðveittar ókóðandi raðir (CNS) 1 (a) og CNS0 (b) af //9. Gögn tákna meðaltal ± SD af einni sjálfstæðri tilraun af tveimur óháðum tilraunum.*bls<><>< 0.005="" as="" determined="" by="" student's="">

BATF og BATF3 eru mikilvægir umritunarþættir í T_9 aðgreiningu af völdum TL1A

Til að skilgreina frekar hlutverk BATF og BATF3, gerðum við chromatin immunoprecipitation (ChIP) próf til að ákvarða bindingu við tvær Il9 varðveittar ókóðunlegar raðir (Il9 CNS1, CNSO).5 TL1A eitt sér olli marktækt meiri bindingu BATF við II9 CNS1 samanborið við TH9 aðstæður. og TH9-TL1A bættu BATF bindingu enn frekar (Mynd 3a). Við I/9 miðtaugakerfið sem er meira andstreymis 0, jók TL1A einnig BATF bindingu við T,9 aðstæður á meðan TL1A eitt og sér hafði engin áhrif (Mynd 3b). TL1A jók IRF4 bindingu við Ty9 aðstæður við CNS1 og CNS 0(Mynd 3a, b). Athyglisvert er að binding asetýleraðs históns 3(AcH3) við CNS1 og CNSO sem áður var lýst til að auðvelda endurgerð litninga á Il9 staðinum við TH9 aðgreiningu var einnig aukin við Ty9-TL1A aðstæður (Mynd 3a,b). BATF3 binding við CNS1 var uppstýrð í TH9 frumum og bindingin var aukin enn frekar við TH9-TL1A aðstæður á meðan BATF3 binst ekki CNS0 (Mynd 3a, gögn ekki sýnd). Þessi gögn benda til þess að TL1A eykur BATF, BATF3 og IFR4 bindingu við //9 verkefnisstjóra við TH9 aðstæður til að framkalla ll9 tjáningu. Til að staðfesta hlutverk BATF og BATF3 í TL1A háðum og Batf3-7-T frumum. IL-9, IL-Ty9 aðgreining, við notuðum Batf7- a 10, og IL-13 framleiðsla var verulega skert í BATF-/-frumum við Tμ9 aðstæður (mynd. 4a-d). Hins vegar, TL1A örvun sigraði að minnsta kosti að hluta til kröfuna um BATF fyrir IL-9 og IL-13 framleiðslu meðan á Ty9 aðgreiningu stóð (Mynd 4a, b, d). Þar sem BATF3 var ekki til staðar minnkaði framköllun IL-9 verulega, sérstaklega við Tμ9-TL1A aðstæður (Mynd 4e,f, viðbótarmynd 2a). Öfugt við BATF var BATF3 ekki krafist fyrir-10 eða IL-13 tjáningu (Mynd 4g, h, viðbótarmynd 2b, c). Til að skilgreina boðleiðir sem leiða til uppstýringar BATF og BATF3 í viðurvist TL1A, notuðum við Stat{ {79}}og p50-/frumur. p50-/TH9 frumur höfðu lækkað hlutfall af BATF plús IRF4t frumum og aukningin á hlutfalli BATF plús IRF4 plús frumna undir TL1A örvun var nánast alveg afnumin (viðbótarmynd 3a, b). Uppstjórnun á BATF og Batf3 mRNA við T.9 aðstæður var p50-óháð, en aukning á BATF og Batf3 tjáningu við TH9-TL1A aðstæður var algjörlega p50-háð (aukamynd 3c) , d). Stat6-/T9 frumur höfðu lækkað hlutfall af BATFIRF4 plús frumum og aukning þeirra undir Tμ9-TL1A örvun var algjörlega afnumin (viðbótarmynd 4a, b). Á sama hátt var uppstjórnun á BATF og Batf3 mRNA algjörlega háð STAT6 við TH9 og TH9-TL1A aðstæður (viðbótarmynd 4c, d). Við sáum engin marktæk áhrif BATF eða BATF3 skorts á tjáningu Batf3 og BATF, í sömu röð, sem bendir til þess að engin bætur séu á milli umritunarþáttanna tveggja (viðbótarmynd 5). Saman benda þessi gögn til þess að BATF og BATF3 gegni mikilvægu og sérstöku hlutverki við T_9 aðgreining í viðurvist TL1A og að aukin BATF og BATF3 tjáning undir TL1A örvun sé háð STAT6 og kanónísku NF-KB ferlinum. Næst gerðum við RNA raðgreiningu á WT og Batf3-/-Tμ9-TL1A frumum. Alls voru 139 gen tjáð á mismunandi hátt í WT á móti Batf3-7Ty9-TL1A frumum (mynd 4i, viðbótartafla 4). Greining á auðgunarferlum genafræðibrauta benti á verulegar breytingar á genum sem taka þátt í stjórnun umritunar, frumufjölgun og boðflutningi innan frumu (viðbótartöflur 5 og 6). Þessar niðurstöður sýna hlutverk BATF3 í aðgreiningu Ty9-TL1A frumna. T-9-TL1A frumur eru mjög sjúkdómsvaldandi in vivo Til að ákvarða sjúkdómsvaldandi möguleika TH9-TL1A frumna in vivo, fluttum við með ættleiðingu CD45.1 plús Tμ9 eða TA9-TL1A. frumur í Rag1-'-mýs. Mýs sem fengu Ty9 frumur mynduðu ekki marktækt þyngdartap (mynd 5a). Hins vegar misstu mýs sem fengu TH9-TL1A frumur þyngd og fengu alvarlegri þarmabólgu, sérstaklega í smágirni (mynd 5a-c). Við sáum einnig alvarlega lungnabólgu, sem einkennist af íferð í berkju- og æðafrumum í bólgufrumum hjá TA9-TL1A-þegum. Litun með Alcian Blue periodic acid-Schiff (AB-PAS) sýndi offjölgun múcinframleiðandi frumna í þekjuvef í öndunarvegi hjá Ty9-TL1A viðtakendum (viðbótarmynd 6a, b). Við sáum meiri frumu í milta og lamina propria einkjarna frumum (LPMC) og hærri prósentu og algera tölu milta, MLN og LPMC CD4 plús frumna í TH9-TL1A viðtakendum (mynd 5d, e) sem bendir til þess að Ty 9-TL1A frumur hafa meiri fjölgunarmöguleika in vivo. Ki67 litun staðfesti að frumur úr MLN, milta og LPMC frá TH9-TL1A viðtakendum fjölga meira jafnvel 6 vikum eftir T-frumuflutning (mynd 5f). Marktækt meiri seyting IL-13 og IL-17 í and-CD3/anti-CD28-endurörvuðum MLN frumum frá TH9-TL1A viðtakendum sást (mynd 5g), og marktækt meiri seytingu IL-9 og IL-13 í and-CD3/anti-CD28-endurörvuðum LPMC frá Ty9-TL1A viðtakendum (mynd 5h). Við sáum hærri heildarfjölda milta og MLN IL-9 plús , IL-13 plús og IL-17 plús frumur og hærri algilda fjölda MLN, milta og LPMC CCR6 plús og CD103 plús T frumur í TH9-TL1A viðtakendum í samræmi við hlutverk þessara frumna á yfirborði slímhúðar (Mynd 5i,j). IL-9 er krafist fyrir in vivo bólgu knúin áfram af T#9-TL1A frumum Til að kanna hvort aukin IL-9 framleiðsla TH9-TL1A frumna hafi stuðlað að bólgu í þörmum og lungum, við meðhöndluðum mýs sem fengu TH9-TL1A frumur með hlutleysandi IL-9 eða samanburðarmótefnum á meðan T-frumuflutningstilraunin stóð yfir. Vefjameinafræðileg greining sýndi marktækt minni þarmabólgu í músum sem fengu and-lL-9-meðhöndlaðar samanborið við samsætuviðmið (mynd 6a, b). Við sáum einnig veiklaða lungnabólgu með minnkuðu íferð í berkju og fækkun á slímframleiðandi frumum í músum sem fengu and-lL{211}} (viðbótarmynd 6c). Heildarfrumufjöldi og heildarfjöldi CD4tCD45.1 plús T-frumna í MLN minnkaði í and-IL-9-meðhöndluðum músum samanborið við samsætuviðmið (mynd 6c). Meðferð gegn IL-9 dró einnig úr framleiðslu IL-13 og IL-17 í MLN og milta, en IFN-y framleiðsla var óbreytt (mynd 6d, gögn ekki sýnd). Saman sýna þessi gögn að T-9-TL1A frumur voru öflugar áhrifafrumur og leiddu til þarma- og lungnabólgu in vivo og að sjúkdómsvaldandi áhrifin voru IL-9-háð.

Mynd.4 Áhrif BATF og BATF3 skorts á TH9 aðgreiningu. ad barnalegar CD4 T frumur úr Batf7or WT músum voru aðgreindar við TH0- eða TH9-skautunaraðstæður með eða án TL1A í 3 daga. Innanfrumu litun á IL-9 og IL-10.b ELISA greining á IL-9 framleiðslu.c ELISA greining á IL-10 framleiðslu.d ELISA greining á IL{{14} } framleiðslu. eh Barnarlegar CD4 plús T frumur frá Batf3-7-eða WT músum voru aðgreindar við T,9-skautunaraðstæður með eða án TL1A í 3 daga. e Innanfrumu litun á IL-9 og IL-10.f ELISA greining á IL-9 framleiðslu. g ELSA greining á IL-10 framleiðslu. h ELISA greining á IL-13 framleiðslu. I Umritunarsnið á WT og Batf3′TH9-TL1A frumum með RNA raðgreiningu. Hitakort sem sýnir RNA-röðunargögn gena sem tjáð eru á mismunandi hátt með p<0.01. the="" dendrograms="" to="" the="" left="" and="" above="" the="" heat="" map="" represent="" the="" clustering="" of="" genes="" (rows)="" and="" samples="" (columns).="" data="" represent="" means±="" sd="" of="" one="" independent="" experiment="" out="" of="" two="" (i)="" or="" three="" (a-h)="" independent=""><0.05,**p <="" 0.01,="" ***p=""><0.005 determined="" by="" student's="">

BATF3 stuðlar að in vivo bólgu knúin áfram af TH9-TL1A frumum Til að ákvarða hvort BATF3 gegnir hlutverki í Tu9-knúnum meinafræði in vivo, fluttum við með ættleiðingu ex vivo aðgreindum WT eða Batf3- /-TA9-TL1A í Rag1-/-mýs. Mýs sem fengu Batf3-'- TA9-TL1A frumur þróa marktækt minni lungnafrumur (Mynd 7a, b, viðbótarmynd 6e) og tilhneiging í átt að minni þarmabólgu (Histoscore: 3,6 á móti 1,2)( mynd 7a). Við sáum minnkað frumuvirkni í lungum og LPMC og lægra hlutfall af MLN og lungum CD4 plús T frumum í Batf37′-TL1A viðtakendum samanborið við WT TH9-TL1A viðtakendur (mynd 7c, viðbótarmynd 6d). Það er marktækt að lægra hlutfall af IL-13 plús og IL-17 plús frumum í milta, MLN og lungum frá Batf3-'-Ty9-TL1A viðtakendum sást (mynd. 7d). Samanlagt benda gögn okkar til þess að BATF3 gegni hlutverki í IL-9 framleiðslu og T#9 þróun in vitro og í Tp9-TL1A-drifinni slímhúðbólgu in vivo.

Mynd 6 IL-9 er krafist fyrir slímhúðbólgu in vivo sem knúin er áfram af Ty9-TL1A frumum. T,9 eða Ty9-TL1A frumum var sprautað inn í Rgg1-7mýs og mýs voru meðhöndluð þrisvar í viku með and-IL-9 mótefna- eða samsætustjórnun, sem er dæmigerð H&E litun af skeifugörn, mælikvarða;200 μm. b Vefjafræðiskor fyrir þörmum.c Heildarfjöldi MLN frumna (vinstri), tíðni CD45.1 plús frumna (miðja) og heildarfrumufjölda CD45.1 plús frumna (hægri).d ELISA greining á IL{{15} }, IL-17 og IL-13 framleiðsla frá MLN eftir ex vivo endurörvun með and-CD3 og and-CD28. Gögn tákna meðaltal ± SD af einni sjálfstæðri tilraun af tveimur óháðum tilraunum. n=4-5/hópur.*bls<><0.01, as="" determined="" by="" student's="" t-test="" (b)="" or="" mann-whitney="" u="" test="" (c,="">