Mechanistic rannsókn á Cistanche-Based Xian Fang Huo Ming drykk í meðferð við langvinnri blöðruhálskirtilsbólgu: samþætt netlyfjafræði og tilraunaprófun sem miðar að PI3K/Akt/NF-κB leiðinni
Oct 27, 2025
2. Aðferðir
2.1 Netlyfjafræði og sameindatengingargreining
2.1.1 Auðkenning virkra innihaldsefna og sjúkdómsmarkmið
Með því að nota TCMSP gagnagrunninn voru virk efnasambönd í Cistanche-undirstaða Xian Fang Huo Ming drykknum (XFHY) skimuð með ADME viðmiðum: aðgengi til inntöku (OB) Stærra en eða jafnt og 30% og lyfjalíkt (DL) Stærra en eða jafnt og 0,18. Hugsanleg markmið þessara efnasambanda voru auðkennd með því að nota SwissTargetPrediction (líkur meiri en eða jafnar og 0,1). "Jurta-sambönd-markmið" net var smíðað með því að nota Cytoscape 3.9.1, og fimm efstu efnasamböndin voru auðkennd út frá miðlægri gráðu. Samtímis var CP/CPPS-tengdum sjúkdómsmarkmiðum safnað frá GeneCards, OMIM og DisGeNET með því að nota lykilorð eins og „langvinn blöðruhálskirtilsbólga“ og „blöðruhálskirtilsbólga“.
Cistanche Extract bætiefni fyrir blöðruhálskirtils- og nýrnaheilbrigði PhGs75% Ech 30% Act 12%
Hafðu samband við okkur keyptu núna
2.1.2 Auðkenning gatnamótamiða
Skurðpunkturinn á milli XFHY efnasambandsmarkmiða og CP/CPPS sjúkdómsmarkmiða var ákvörðuð með Venny 2.1 hugbúnaði til að búa til Venn skýringarmynd, sem auðkenndi helstu hugsanleg meðferðarmarkmið.
2.1.3 PPI netbygging
Gatnamótamörk voru flutt inn í STRING gagnagrunninn (tegund: Homo sapiens; víxlverkunarstig > 0,9). Prótein-prótein víxlverkun (PPI) netið sem varð til var flutt inn í Cytoscape og kjarnamarkmið voru auðkennd með því að nota CytoHubba á grundvelli netkerfis svæðisfræði breytum eins og gráðu, millibili og nálægð.
2.1.4 Uppbygging "Herb–Compound–Target–Pathway" netkerfisins
Með því að nota Cytoscape 3.9.1 var netlíkan smíðað til að sjá tengslin milli XFHY, virkra efnasambanda þess, markmiða og merkjaleiða. Netfæribreytur voru greindar til að ákvarða lykilhnúta.
2.1.5 GO og KEGG auðgunargreining
Gatnamótamarkmiðum var hlaðið upp í DAVID gagnagrunninn fyrir Gene Ontology (GO) og Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) leiða auðgunargreiningu (P < 0,05). Niðurstöður voru sýndar með lífupplýsingatækjum.
2.1.6 Sameindatenging
Fimm efstu efnasamböndin (td quercetin, kaempferol) voru notuð sem bindlar og tíu efstu kjarnamarkmiðin úr PPI netinu sem viðtakar. Próteinbyggingar voru fengnar úr próteingagnabankanum (PDB), forunnar með AutoDockTools 1.5.6 (þar á meðal þurrkun, vetnun og hleðsluviðbót) og breytt í PDBQT snið. Ligandbyggingar á MOL2 sniði voru fengnar frá TCMSP og breyttar á svipaðan hátt. Sameindatenging var framkvæmd með AutoDock og bindandi skyldleika voru sýnd með GraphPad Prism 8.
2.2 Dýratilraunir
2.2.1 Fyrirmyndargerð
Kemísk örvunaraðferð var notuð til að líkja CP/CPPS. Rottur voru svæfðar með 3% pentobarbital natríum (50 mg/kg). Miðlínuskurður var gerður í neðri hluta kviðar og 80 μL af 3% λ-karragenani var sprautað í hvert hliðarblað blöðruhálskirtils (samtals 160 μL). Rottur sem gerðar voru á sýndarverki fengu saltvatnssprautur. Umönnun eftir aðgerð innihélt staðbundna sýklalyfjagjöf. Á 7. degi var árangur af reiknilíkönum staðfestur með gróflegri og vefjafræðilegri skoðun á blöðruhálskirtli (bjúgur, þrengsli, hrörnun þekju og bólguíferð).
2.2.2 Flokkun og meðferð
Sjötíu karlkyns SD rottum var skipt af handahófi í sjö hópa (n=10):
Venjulegt eftirlit
Sýndaraðgerð
Módelstýring
Lág-, meðal- og háskammta XFHY hópar
Tamsulosin hópur
Skammtar voru reiknaðir út frá jafngildisskammti manna (7,29 g/kg/dag). XFHY var gefið með munngjöf við 0,3645 g/ml (lágt) og 1,458 g/ml (hátt). Tamsulosin var gefið með 0,0018 mg/kg. Allar meðferðir stóðu í 28 daga og hófust 8 dögum eftir líkangerð.
2.2.3 Vefjameinafræðilegt mat
Vinstri blöðruhálskirtilsblöð voru fest í 4% paraformaldehýði, felld inn í paraffín, sneidd og lituð með hematoxýlín-eósíni. Vefjafræðilegar breytingar voru metnar í ljóssmásjá.
2.2.4 ELISA fyrir bólgumerki
Blóð sem safnað var um ósæð í kviðarholi var skilið í skilvindu og styrkur TNF-, IL-1 og COX-2 í sermi var mældur með ELISA settum samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.
2.2.5 qRT-PCR fyrir genatjáningu
Heildar-RNA var dregið úr blöðruhálskirtilsvef og öfugt umritað í cDNA. Rauntíma PCR var framkvæmt með því að nota sérstaka primera fyrir PI3K, Akt og NF-KB p65. GAPDH var notað sem innra eftirlit. Hlutfallsleg tjáning var reiknuð út með 2^-ΔΔCt aðferðinni.
2.2.6 Western blot fyrir próteintjáningu
Prótein var dregið úr frosnum blöðruhálskirtilsvef með því að nota RIPA stuðpúða. Eftir magngreiningu voru prótein aðskilin með SDS-PAGE, flutt yfir á PVDF himnur og rannsakað með frummótefnum gegn PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-kB p65 og p-NF-kB p65. HRP-tengd aukamótefni og ECL uppgötvun voru notuð. Hljómsveitarstyrkur var magngreindur með ImageJ.
2.2.7 Tölfræðigreining
Allar tilraunir voru gerðar í þríriti. Gögnin voru greind með GraphPad Prism 8 og gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik. Einhliða ANOVA fylgt eftir af LSD eða Dunnett's prófi var notað til að bera saman marga hópa. P < 0,05 var talið tölfræðilega marktækt.
3. Úrslit
3.1 Netlyfjafræði og sameindatenging
Gatnamót efnasambands-markmiðs:912 samsett markmið og 2.197 sjúkdómsmark gáfu 374 skotmörk sem sköruðust.
Helstu efnasambönd auðkennd:Quercetin, kaempferol, pelargonidin, naringenin og byakangelicol - allt með þekkt bólgueyðandi og andoxunaráhrif.
PPI greining:Lykilmarkmiðin voru TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1 og NFKB1.
GO og KEGG auðgun:Auðgaðir leiðir voru meðal annars PI3K/Akt, MAPK, RAS og bólgutengd líffræðileg ferli.
Sameindatenging:Mikil bindisækni sást milli kjarnamarkmiða og helstu efnasambanda (bindingsorka Minna en eða jafnt og -5,0 kcal/mól), sem bendir til mikillar lífvirkni.
3.2 Tilraunaprófun
3.2.1 HE litun
Módelhópar rottur sýndu hrörnun kirtilþekju, stromal bjúg og mikla bólguíferð. XFHY-meðhöndlaðir hópar sýndu minni bólgu, sérstaklega í meðal- og háskammta hópum.
3.2.2 Stig bólgumerkja
Í samanburði við líkanahópinn minnkaði XFHY marktækt TNF-, IL-1 og COX-2 gildi í sermi (P < 0,01), sem gefur til kynna bólgueyðandi verkun.
3.2.3 Genatjáning (qPCR)
XFHY minnkaði marktækt mRNA gildi PI3K, Akt og NF-KB p65 á skammtaháðan hátt. Lágskammtaminnkaður Akt og p65 eingöngu; meðal- og stórskammta hópar sýndu víðtækari bælingu.
3.2.4 Próteintjáning (Western Blot)
Fosfórýleringarmagn PI3K, Akt (Ser473, Thr308) og NF-KB p65 var marktækt hækkuð í líkanahópnum og lækkaði í XFHY-meðhöndluðum rottum, sérstaklega við miðlungs og stóra skammta.
4. Umræður
Þessi rannsókn byggir á klínískri reynslu og staðfestir þaðXFHY sem byggir á Cistanchehefur áberandi bólgueyðandi áhrif á CP/CPPS. Lyfjafræði netkerfisins benti á lykilvirk efnasambönd, sérstaklegaquercetin, með sannað bólgueyðandi og andoxunareiginleika. PPI greining lagði áherslu á markmið eins ogTNF, IL6, ogAKT1, sem eru miðlæg í bólgu í blöðruhálskirtilsbólgu.
KEGG greiningin lagði til þátttökuPI3K/Akt/NF-KBboðleið sem er víða viðurkennd í bólgu og ónæmisstjórnun. XFHY getur haft lækningaleg áhrif með því að hindra þessa leið og dregur þannig úr tjáningu bólgueyðandi cýtókína.
Ennfremur virðist tvöföld fosfórun Akt (Ser473 og Thr308) vera mikilvæg fyrir NF-KB virkjun. XFHY hamlaði fosfórýleringu á báðum stöðum, sem bendir til hömlunar á NF-KB merkjum með andstreymis Akt bælingu.
Niðurstaða
XFHY getur dregið úr CP/CPPS með því að loka fyrir PI3K/Akt/NF-KB ferlið, draga úr tjáningu áIL-1 , TNF-, ogCOX-2, og draga úr bólguviðbrögðum í blöðruhálskirtli. Þátttaka leiðarinnar, sérstaklega fosfórun Akt við Ser473 og Thr308, gefur mögulega vélræna skýringu á virkni XFHY. Frekari rannsóknir eru nauðsynlegar til að staðfesta hvort PI3K/Akt/NF-KB sé endanleg leið sem XFHY beitir lækningaverkun sinni í gegnum.
Hagsmunaárekstrar:
Höfundar lýsa engum hagsmunaárekstrum.
Láttu mig vita ef þú vilt amyndrænt ágrip, yfirlitstöflu, eðaPowerPoint kynningbyggt á þessari rannsókn!
