Hagræðing og svefnbætandi áhrif Congrong-Zaoren-Wumei drykkjarútdráttar í músum

2 Niðurstöður og greining

2.1 Hagræðing á undirbúningsferlinu fyrir Congrong-Zaoren-Wumei drykkjarútdráttinn

 

Frá mynd 1 náði hin þekkta HPLC aðferð árangursríkan aðskilnað á milli litskiljunartoppa fjögurra viðmiðunarefnasambandanna - sítrónusýru, echinacoside, verbascoside og spinosin - og aðliggjandi toppa. Varðveislutímar voru tR1=9.0 mín, tR2=21.6 mín, tR3=24.3 mín og tR4=25.9 mín, í sömu röð. Línuleg aðhvarf á hámarksflatarmáli á móti styrk greiningarefnis gaf línuleg svið á bilinu 12,12–2016, 0,14–110, 0,18–112,50 og 2,44–18,30 µg·mL–1, með R2 gildi upp á 0,9998, 1, indic. Við þessar aðstæður voru greiningarmörk (LOD) fyrir sítrónusýru, echinacoside, verbascoside og spínósín 3,636, 0,045144, 0,058 og 0,7564 µg·mL–1, og magngreiningarmörk (LOQ) voru 12,14, 0,14, 0,4, 0,4, 0,4 µg·mL–1, í sömu röð. Nákvæmnipróf sýndu RSD 0,10%, 0,07%, 0,06% og 0,33% fyrir greiningarefnin fjögur, sem gefur til kynna góða nákvæmni tækisins. Stöðugleiki yfir 0–12 klst. var góður, þar sem RSD voru 0,78%, 0,16%, 0,20% og 1,46%. Endurtekningarprófanir leiddu til RSDs upp á 0,51%, 0,42%, 0,37% og 0,38% fyrir greiningarefnin, sem sýndu góða endurtekningarnákvæmni. Gadda-batapróf sýndu meðalbata upp á 97,42%, 103,32%, 98,90% og 99,71%, með RSD 0,70%, 0,52%, 1,05% og 0,63%, í sömu röð. Þess vegna er HPLC aðferðin sem sett var á fót til að ákvarða þessa fjóra meginhluta samtímis nákvæm og áreiðanleg, hentug fyrir síðari hagræðingarprófanir á ferlum.

 

 

 

 

Mynd 1 HPLC litskiljun af tilvísuninni og lausnunum við 210 nm bylgjulengd (A) og 330 nm bylgjulengd (B og C)

 

Í aðferðafræðilegu mati á hráum fjölsykrum var LOD 0,098 µg·mL–1. OD-gildi leysislausnar og blanksstýringar við 485 nm sýndu engar augljósar breytingar, sem gefur til kynna góða sértækni. Línuleg afturför OD á móti styrk gaf R2=0.9997, sem gefur til kynna framúrskarandi línuleika. RSD fyrir sex mælingar í röð var 0,47%, sem sýnir góða nákvæmni. RSD fyrir innihald fjölsykru innan 12 klst. var 0,44%, sem gefur til kynna góðan stöðugleika. RSD fyrir sex óháð undirbúin sýni var 2,51%, sem gefur til kynna góða endurtekningarhæfni. Þess vegna er aðferðin hentug til að magngreina óhreinar fjölsykrur meðan á hagræðingu ferla stendur.

 

 

Cistanche Roucongrong ávinningur í fornri bók

Smelltu til að fá frekari upplýsingar

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Fyrir frekari upplýsingar um samvinnu
Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

2.1.2 Niðurstöður einþáttarannsókna

Með því að nota hina viðurkenndu HPLC aðferð ásamt fjölsykruprófinu og taka innihald sítrónusýru, echinakósíðs, verbaskósíðs, spínósíns og fjölsykrna í útdrættinum sem matsvísitölur, voru gerðar einþáttarannsóknir á útdráttshitastigi, fastefni-vökvahlutfalli og útdráttartíma til að styðja við hornrétta hönnun.

Við útdráttarhitastig upp á 60, 80 og 100 gráður jókst innihald sítrónusýru, echinacoside, verbascoside, spínósíns og óhreinsaðra fjölsykrna í útdrættinum með hitastigi.

Í hlutföllum fasts og vökva 1:3, 1:5, 1:7, 1:10 og 1:12 (g·mL–1), jókst innihald sítrónusýru, spínósíns og óhreinsaðrar fjölsykrna með hærri hlutföllum; echinacoside og verbascoside náðu hámarki við 1:10 (g·mL–1) og lækkuðu um 1:12 (g·mL–1). Hins vegar jókst heildarinnihald allra merkiþátta með hlutfallinu fast-vökva.

Við útdráttartíma sem voru 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 og 3,0 klst. var innihald einstakra greiniefna mismunandi, en heildarinnihald merkiþátta jókst með tímanum.

Ítarlegar upplýsingar eru veittar í viðbótargögnum. Með hliðsjón af hagkvæmni í iðnaði (forðast of langan útdrátt) voru þættir og stig fyrir hornrétta hönnun stillt eins og í töflu 2 og hornrétta kerfið er sýnt í töflu 3.

Tafla 2. Þættir hornréttrar tilraunahönnunar fyrir útdráttaraðferð Congrong–Zaoren–Wumei drykkjarvöru

Þættir:

A: Hitastig útdráttar (gráða)

B: Hlutfall fasts og vökva (g ml–1)

C: Útdráttartími (h)

Stig	A: Hitastig (gráða)	B: Hlutfall (g ml–1)	C: Tími (h)
1	60	1:7	1.0
2	80	1:10	1.5
3	100	1:12	2.0

2.1.3 Niðurstöður réttarhönnunar

Útdráttur var framkvæmdur á hornrétta fylkinu. Innihald sítrónusýru, echinakósíðs, verbaskósíðs, spínósíns og óunnar fjölsykrna er sýnt í töflu 3. Byggt á sviðsgreiningu (R) var röð þáttaáhrifa á heildarinnihald merkja A > B > C, þ.e. útdráttshitastig > hlutfall fasts-vökva > útdráttartími. Samanburður á k gildi gaf til kynna ákjósanlegasta samsetningu A3B3C3: útdráttshitastig 100 gráður, hlutfall fasts og vökva 1:12 (g·mL–1) og útdráttartími 2 klst. ANOVA (tafla 4) gaf til kynna að útdráttshitastig hefði marktæk áhrif á heildarinnihald merkja, en áhrif hlutfalls fasts-vökva og tíma voru ekki marktæk.

Tafla 3. Rétthyrnt tilraunahönnun og mældur innihaldsefni Congrong–Zaoren–Wumei drykkjar (mg g–1)

Þættir: A (hiti), B (hlutfall fasts og vökva), C (tími)

Réttarhöld nr.	A	B	C	Heildarmerki	Sítrónusýra	Spínósín	Echinacoside	Verbascoside	Hráar fjölsykrur
1	3	3	1	116.71	75.55	4.08	1.62	0.48	34.98
2	1	2	3	70.98	59.01	2.60	0.80	0.36	8.22
3	3	1	3	117.86	73.87	3.53	1.21	0.45	38.80
4	1	3	2	72.55	59.73	2.37	0.94	0.41	9.99
5	2	3	3	83.64	63.20	2.15	1.08	0.44	16.77
6	2	1	2	117.76	74.09	2.58	1.37	0.48	39.24
7	2	2	1	110.74	70.96	2.36	1.07	0.43	35.92
8	2	1	1	69.63	58.37	1.74	0.54	0.34	8.65
9	1	1	3	69.66	58.14	2.48	0.86	0.36	7.83

K tölfræði (summa heildarfjölda á þáttastig)

K1: A = 71.06, B = 85.72, C = 85.49

K2: A = 74.46, B = 86.29, C = 86.65

K3: A = 117.44, B = 90.97, C = 90.83

Svið R: A=46.38, B=5.25, C=4.19

2.1.4 Staðfesting og uppbygging

Fullgilding ferlis við ákjósanleg skilyrði gaf meðaltal heildarinnihalds merkiþátta upp á 119,74 mg·g–1 með RSD 0,57%, sem gefur til kynna stöðugleika og áreiðanleika. Stækkunarprófunin við sömu aðstæður gaf meðaltal heildarmarkainnihalds 120,89 mg·g–1 með RSD 0,95%, í samræmi við niðurstöður forkvarða, sem staðfestir enn frekar styrkleika. Sýni úr þremur uppstækkunarlotum voru notuð fyrir síðari svefntengdar rannsóknir; Meðalinnihald þeirra var: sítrónusýra 77,73 mg·g–1, echinacoside 2,69 mg·g–1, verbascoside 1,03 mg·g–1, spínósín 0,50 mg·g–1 og fjölsykrur 38,93 mg·g–1.

Tafla 4. Dreifnigreining úr hornréttum tilraunum

Þáttur	Summa ferninga	df	Meðalferningur	F	P
Hitastig útdráttar	4010.50	2	2005.25	116.26	0.01
Hlutfall fasts-vökva	49.79	2	24.90	1.44	0.41
Útdráttartími	47.37	2	23.68	1.37	0.42

Liu o.fl. [16] bjartsýni vatnsútdráttar fenýletanóíð glýkósíða úr Cistanche tubulosa og greindist 1:15 (g·mL–1), 80 gráður og 2 klst sem ákjósanlegur; innihald fenýletanóíð glýkósíðs lækkaði yfir 90 gráður. Í þessari rannsókn náði innihald echinacoside og verbascoside hámarki í hlutfallinu 1:10 (g·mL–1) og lækkaði við 1:12 (g·mL–1), en jókst þó með hitastiginu 60, 80 og 100 gráður. Þetta misræmi gæti tengst notkun Cistanche deserticola (eyðimerkur Cistanche) í drykknum okkar og fylkisáhrifum frá samlífandi Suanzaoren og Wumei sem gætu haft áhrif á upplausn fenýletanóíð glýkósíðs.

Tafla 5. Áhrif Congrong–Zaoren–Wumei drykkjarþykkni á beinan svefn í músum (n=12)

Hópur	Samtals dýr	Svefndýr	Svefntíðni (%)
Autt	12	0	0
Estazolam	12	0	0
Lágskammta útdráttur	12	0	0
Meðalskammta útdráttur	12	0	0
Útdráttur í háum skömmtum	12	0	0

Í stuttu máli, með því að nota HPLC og fenól-brennisteinssýruaðferðina, fínstilltum við útdráttarferlið út frá innihaldi sítrónusýru, echinacoside, verbascoside, spínósíns og fjölsykrum. Einþátta og rétthyrndar tilraunir, fylgt eftir með staðfestingu, komu á fót bestu skilyrðum: 100 gráður, 1:12 (g·mL-1) hlutfall fasts og vökva og 2 klst útdráttartími, sem gefur tilvísun fyrir framtíðar iðnaðarþróun.

Industrialization context: WECISTANCHE (Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd., established 2003) operates a vertically integrated cistanche supply chain with seed-breeding bases (~20,000 acres), cultivation bases (>85.000 hektarar), ferskt geymslurými (~ 15.000 tonn) og GMP-vottað framleiðsluverkstæði (100.000 flokks hreinherbergi) búin háþróaðri ofursíun og nanósíun til hreinsunar og einbeitingar, auk 10.000 flokks örverufræðistofu. Vottun felur í sér China SC, HACCP og lífræn forrit (td NOP). Þessi innviði styður beina þýðingu á bjartsýni vatnsútdráttar og merkjastöðlunarsamskiptareglur yfir í stórfellda, útflutningssamhæfða framleiðslu á hagnýtum drykkjum og útdrætti.

Tafla 6. Áhrif útdráttarins á svefnlyfjaáhrif undirþröskulds natríumpentóbarbitals í músum (x̄ ± s, n=12)

Hópur	Samtals dýr	Svefndýr	Svefntíðni (%)
Autt	12	1	8.33
Estazolam	12	10	83.33**
Lágskammta útdráttur	12	4	33.33
Meðalskammta útdráttur	12	5	41.67
Útdráttur í háum skömmtum	12	6	50.00*

Athugið: Í samanburði við auðan hóp, * P < 0,05; ** P < 0,001.

 

2.2 Áhrif útdráttarins á hegðun og svefn músa

2.2.1 Beinn svefn

Eins og sýnt er í töflu 5, eftir 30 daga samfellda gjöf, sýndu mýs í estazólam hópnum og í lág-/miðlungs/háskammta útdráttarhópum ekki augljósan svefn innan 20 mínútna eftir síðasta skammtinn, án marktæks muns miðað við auða hópinn. Þetta gefur til kynna engin bein svefnhvetjandi áhrif eftir 30 daga gjöf útdráttar.

 

2.2.2 Atferlisáhrif

Í opnu vettvangsprófi var metin áhrif róandi lyfja. Áhrifin á heildarvegalengd og miðfærslur eru sýndar á mynd 2. Samanborið við auða hópinn jók estazolam heildarfjarlægð og miðfærslur um 14,48% og 31,07%, í sömu röð, án tölfræðilegrar marktækni. Lágskammta útdrátturinn jók heildarfjarlægð marktækt um 25,10% (P < 0,05) og jók óverulega miðfærslur um 50,93%. Miðlungsskammtur jók marktækt heildarfjarlægð og miðjufærslur um 27,09% og 72,33% (P < 0,05). Stóri skammturinn jók heildarfjarlægðar- og miðjufærslur um 15,60% og 40,78%, í sömu röð, án þess að hafa þýðingu. Í samanburði við estazólam, jukust lágir/miðlungs/háir skammtar heildarfjarlægð um 1,73, 1,87 og 1,07 sinnum og miðfærslur um 1,64, 2,33 og 1,31 sinnum, í sömu röð, engin marktæk. Þessar niðurstöður benda til þess að útdrátturinn hafi dregið úr kvíðalíkri hegðun á víðavangi eftir 30 daga, sem bendir til róandi áhrifa.

2.2.3 Undirþröskuldur af natríumpentóbarbital-völdum svefni

Eins og sýnt er í töflu 6, samanborið við auða hópinn, jók estazolam og allir þrír útdráttarskammtarnir svefnhraða undir undirþröskuldsskammti af natríumpentóbarbital. Estazolam jók fjölda sofandi dýra 9-falt samanborið við tómt (P < 0,001). Lág-, meðal- og háskammta útdráttarhópar fjölguðu sofandi dýrum um 3-, 4- og 5-falt, í sömu röð; aðeins stóri skammturinn náði tölfræðilegri marktekt (P < 0,05). Samanborið við estazolam sýndi enginn útdráttarskammtanna sterkari svefnhvetjandi áhrif. Þannig getur útdrátturinn aukið svefn framkallaðan af natríumpentóbarbital undirþröskuldi að einhverju leyti.

 

2.2.4 Natríumpentóbarbital svefntöf

Samanborið við auða hópinn styttu estazólam og allir þrír útdráttarskammtarnir marktækt svefntöf af völdum pentobarbital (P < 0,001). Estazolam minnkaði leynd um 58,44% (P < 0,001). Lág-, meðal- og háskammta útdráttarhóparnir minnkuðu leynd um 29,59%, 31,42% og 53,83% (allir P < 0,001), í sömu röð. Enginn marktækur munur var á lágum og meðalstórum skömmtum; stóri skammturinn stytti leynd verulega samanborið við bæði lága og meðalskammta um 34,43% og 32,69% (P < 0,01), með svipuð áhrif og estazolam (tafla 7). Þess vegna styttu allir þrír skammtarnir verulega seinkun á svefni af völdum pentobarbital, þar sem stóri skammturinn skilaði bestum árangri.

Hefðbundin kínversk lyf innihalda fjölbreytt lífvirk efni sem verka á mörg markmið og bjóða upp á einstaka kosti fyrir svefnleysismeðferð [17]. Með vaxandi athygli á svefnvandamálum eru lyfja-ætur TCM í auknum mæli rannsökuð fyrir svefnmótun [18]. Til dæmis stytti samsettur drykkur í föstu formi sem samanstendur aðallega af Suanzaoren og Poria verulega pentobarbital-völdum svefntöfum og lengri svefntíma hjá músum, hugsanlega með breytingum á 5-HT, DA og GABA [19]. Hér jók útdrátturinn verulega svefn undir undirþröskuldi pentobarbital og stytti pentobarbital-völdum svefntöf, stuðlaði að því að svefn komi og minnkaði seinkun, en sýndi engin bein svefnhvetjandi áhrif. Mælt innihald frumefna var, í lækkandi röð: sítrónusýra (77,73 mg·g–1), fjölsykrur (38,93 mg·g–1), echinacoside (2,69 mg·g–1), verbascoside (1,03 mg·g–1) og spínósín (0,50 mg·g–1). Sýnt hefur verið fram á að spínósín eykur svefn af völdum pentobarbital; það getur aukið svefn sem ekki er REM og breytt c-Fos tjáningu í svefn-vöku stjórnandi heilasvæðum [20], dregið úr PCPA-völdum svefnleysi, dregið úr svefnleynd og lengt svefn [21]. Verbascoside hefur greint frá kvíðastillandi, svefnlyfjum og vöðvaslakandi virkni [22]. Aftur á móti hafa helstu innihaldsefnin-sítrónusýra, fjölsykrur (frá Cistanche, Suanzaoren og Wumei) og echinacoside færri beinar skýrslur um betri svefn; hins vegar benda nýlegar rannsóknir á TCM fjölsykrum (td Acanthopanax senticosus fjölsykrum) til mögulegs ávinnings af svefni með leiðum eins og SIRT1/PGC-1 [23]. Þess vegna, hlutverk sítrónusýru, fjölsykrra og echinacosides í svefnmótun, gefur tilefni til frekari rannsókna.

 

fær 7. Áhrif útdráttarins á svefnleynd af völdum natríumpentóbarbitals í músum (x̄ ± s, n=12)

Hópur	Samtals dýr	Töf á svefni (mín.)
Autt	12	32.34 ± 4.27
Estazolam	12	13.44 ± 3.20**
Lágskammta útdráttur	12	22.77 ± 5.81**#
Meðalskammta útdráttur	12	22.18 ± 6.05**#
Útdráttur í háum skömmtum	12	14.93 ± 3.35**

Athugasemdir:

Samanborið við auðan hóp: ** P < 0,0001.

Samanborið við háskammta útdráttarhóp: # P < 0,01.

 

3 Niðurstaða

Með því að nota lyfja-ætur TCM Cistanche deserticola, Ziziphi Spinosae Semen og Mume Fructus til að búa til Congrong-Zaoren-Wumei drykk, fínstilltum við undirbúningsferlið útdráttar þess með því að nota innihald fjögurra merkiþátta (echinacoside, verbascoside, spínósín, sítrónusýra) og pólýsýra. Bestu útdráttarskilyrðin voru ákvörðuð sem 100 gráður, fast-vökvahlutfall 1:12 (g·mL-1) og 2 klst., sem gefur fræðilegar leiðbeiningar fyrir iðnaðarframleiðslu. Frekari mat sýndi að 30 daga samfelld gjöf hafði engin bein svefnörvandi áhrif í músum, en það minnkaði marktækt kvíðalíka hegðun í opnu sviðsprófinu (sem bendir til róandi áhrifa), jók svefn undir undirþröskuldsskammti af natríumpentobarbital og stytti verulega seinkun á pentobarbital af völdum svefns. Þessar niðurstöður benda til þess að útdrátturinn sem er útbúinn með bjartsýnisferlinu sýnir hagstæð svefnbætandi áhrif í músum, sem veitir vísindalegan grunn fyrir þróun Cistanche-undirstaða svefnbætandi vörulína.

Application and manufacturing note: Given the optimized aqueous extraction and the need to standardize to marker profiles (citric acid, echinacoside, verbascoside, spinosin, plus polysaccharides), WECISTANCHE's integrated cistanche value chain and GMP infrastructure-100,000-class clean workshops certified for National Health Food GMP, advanced ultrafiltration/nanofiltration concentration systems, a 10,000-class microbiology lab, and certifications such as China SC, HACCP, and organic/NOP-allow reliable scale-up from lab to industrial batches. The company's large agricultural bases (seed-breeding ~20,000 acres; cultivation >85.000 ekrur; fersk cistanche geymsla ~15.000 tonn) styðja við samkvæmni hráefna og alþjóðlega staðlaða QC, sem auðveldar markaðssetningu hagnýtra drykkja og heilsubótarefna sem uppfylla væntingar Bandaríkjanna/ESB.