Samanburður á innihaldsmun átta efnahluta í hráum og vínvinnsluvörum af tvenns konar Cistanche Deserticola byggt á UPLC Ⅱ

2. Aðferðir og niðurstöður

2.1 Litskiljunarskilyrði

UPLC greining var framkvæmd með því að nota aWaters ACQUITY UPLC™ BEH C18 súla (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm kornastærð). Farsímaáfanginn samanstóð afmetanól (A)og0,1% maurasýru vatnslausn (B)með eftirfarandi hallalosun:

0–4 mín: 10% → 26% A

4–18 mín.: 26% → 40% A

18–20 mín.: 40% → 50% A

Rennslishraði:0,3 ml/mín
Inndælingarrúmmál:3 μL
Dálkhitastig:35°C
Uppgötvun bylgjulengd:330 nm

2.2 Undirbúningur lausna

2.2.1 Blandað viðmiðunarlausn

Vigtaðu eftirfarandi staðlaða efnasambönd nákvæmlega:cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, túbúlósíð A, isoverbascoside, 2'-asetýlverbaskósíð, ogtúbúlósíð B. Leysið upp í 50% metanóli til að búa til viðmiðunarblöndu með eftirfarandi styrk (µg·mL⁻¹):

Cistanoside F: 32,7

Echinacoside: 102,4

Cistanoside A: 50,2

Verbascoside: 80,6

Túbúlósíð A: 25,6

Isoverbascoside: 86.3

2'-asetýlverbaskósíð: 77,3

Túbúlósíð B: 60,8

2.2.2 Sýnalausn

Hráar Cistanche sneiðarvoru útbúin með því að mýkja jurtina, skera í sneiðar og þurrka.
Víngufuuð Cistanchevar útbúin með því að leggja hráar sneiðar í bleyti í 30% hrísgrjónavíni, gufa blönduna í 12 klukkustundir, kæla og þurrka aftur.

Um það bil0.2 gaf þurrkuðu dufti (sem farið í gegnum 65 möskva sigti) var vigtað í 50 ml gulbrúna mæliflösku, dregin út með 25 ml af 50% metanóli, hljóðbeitt í 40 mínútur (250 W, 35 kHz) og færð aftur í þyngd. Lausnin var síuð í gegnum a0,22 μm himnaog síuvökvinn var notaður til greiningar.

Athugið: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola hráar sneiðar; RG. Cistanche tubulosa hráar sneiðar; WH. Cistanche deserticola soðið með víni; WG. Cistanche tubulosa soðið með víni; Myndir 4 til 7 eru þær sömu.
Mynd 1 Myndir af Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa lyfjaefni, hráar sneiðar og soðið með víni

frægt cistanche-vín sem selt er í Kína

Kaupa núna

Stuðningsþjónusta Wecistanche-The Hafðu samband til að fá sýnishorn eða heildsöluupplýsingar
Netfang:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Sími:+86 15292862950

2.3 Magngreining á 8 helstu efnasamböndum í hrá- og vínvinnslu Cistanche

2.3.1 Kerfishæfi

Við skilgreiningarskilyrði sem lýst er, fræðilegt plötunúmer fyrirechinacoside exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Litskiljun af blönduðum staðli, hráum eyðimerkur Cistanche og vínverkuðum sýnum eru sýndar á mynd 2.

Peak auðkenning:

Cistanoside F

Echinacoside

Cistanoside A

Verbascoside

Tubuloside A

Isoverbascoside

2'-asetýlverbaskósíð

Tubuloside B

cistanche deserticola

cistanche tubulosa

2.3.2 Línuleiki og greiningarmörk

Staðlaðar kvörðunarferlar voru komnar upp með því að nota raðþynningar af viðmiðunarblöndunni í styrkleika 0,1 til 5,0 ml. Kvörðunarferlar voru búnir til með teikningustyrkur (X)á mótitoppsvæði (Y). Greiningarmörk (LOD, S/N=3) og magngreiningarmörk (LOQ, S/N=10) voru ákvörðuð og staðfestu góða línuleika yfir prófuð svið.

2.3.3 Nákvæmni

Sex endurteknar inndælingar af blönduðu viðmiðunarlausninni sýnduhlutfallslegt staðalfrávik (RSDs)af toppsvæðum allt frá0,48% til 2,14%, sem gefur til kynna framúrskarandi nákvæmni hljóðfæra.

2.3.4 Stöðugleiki

Sýnishorn af lausnumhrátt Cistanche duft (lotunúmer. 160901)voru greind eftir 0, 2, 4, 8, 12 og 24 klst. RSDs á toppsvæðum fyrir öll 8 efnasamböndin voru á bilinu0,71% til 1,93%, staðfestirstöðugleika lausnar innan 24 klst.

Tafla 1. Dæmi um upplýsingar um Cistanche efni

2.3.5 Endurtekningarhæfni

Sex sjálfstætt útbúnar endurtekningar af sömu Cistanche lotunni sýndu góða endurtekningarhæfni. Meðalinnihald (mg·g⁻¹) og RSD voru sem hér segir:

2.3.6 Endurheimtarpróf

Bati var prófaður með spikingsex endurtekningar af Cistanche dufti (0,1 g)með þekktum styrkleika 8 viðmiðunarefnasambandanna. Meðalendurheimtur voru á bilinu95,56% í 102,71%, með RSD á milli1,44% og 2,97%, sem gefur til kynnaframúrskarandi útdráttar- og magngreiningaráreiðanleiki.

Athugið: A. Blönduð tilvísun; B. Hrá Cistanche deserticola; C. Stewed Cistanche deserticola í víni; 1. Cistancheside F; 2. Echinacoside; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Túbúlósíð A; 6. Isoverbascoside; 7. 2΄-asetýlverbaskósíð; 8. Tubuloside B.

2.3.7 Magngreining virkra efnasambanda í hráum vs. vínvinnslu Cistanche

Hvert sýni var prófað í tvíriti. Markefnasamböndin 8 voru magngreind í10 skammtar af Cistanche deserticola(hrá og vínunnið) og10 lotur af Cistanche tubulosa. Niðurstöður eru teknar saman í töflu 3, sem gefur innsýn í:

Tegundasértækur munur á samsetningu

Breytingar á plöntuefnainnihaldi eftir vínvinnslu

Greinandi fingrafar fyrir Cistanche gæðaeftirlit

Tafla 2. Kvörðunarferlar, fylgnistuðlar (r), línuleg svið, LOD og LOQ fyrir átta efnasambönd

2.4 Samanburðargreining á efnasamsetningu milli Cistanche tegunda

Til að rannsakajurtaefnafræðilegur munurá milliCistanche deserticolaogCistanche tubulosa, styrkur átta lykillfenýletanóíð glýkósíðfrá10 lotur af hrá- og vínsýnumaf hverri tegund voru sýnd með því að notakassareitir (mynd 3). Tölfræðigreining leiddi í ljós að fyrir utan2'-asetýlverbaskósíðogtúbúlósíð B, sýndu flest önnur efnasamböndmarktækur munur (P < 0,05)milli þessara tveggja tegunda í bæði hráu og unnu formi.

Nánar tiltekið:

Íhrár Cistanche, innihaldicistanoside F, echinacoside, isoverbascoside, tubuloside A og verbascosidevarverulega lægriinnC. deserticolamiðað viðC. tubulosa(P < 0,05).

Thevínverkuð sýniendurspeglaði svipaða þróun.

Sérstaklega,cistanoside Afannst klhærra stig íC. deserticolaog varógreinanlegtinnC. tubulosa, sem bendir til þess að það geti þjónað sem ahugsanlegt merki efnasambandfyrir tegundaaðgreiningu.

PLS-DA efnafræðileg greining á Cistanche tegundum

A Greining á minnstu ferningum að hluta (PLS-DA)var framkvæmt með því að nota styrkleikagögn efnasambandanna átta. Afleiðinginstigatöflur (Mynd 4A)sýndi að hrá og unnin sýni úr báðum tegundum gerðu þaðekki flokkast í greinilega aðskilda hópa.

Hins vegar,slembibreytingapróf (Mynd 4B)leiddi í ljós að fyrirmyndin varekki of klæddur, sem sönn gildi umR²Y og Q²voru hærri en á permutuðu módelunum. Hið tiltölulegalág Q² gildileggja tiltakmarkaður fyrirsjáanleiki, líklega vegnabreytileiki innan hópsogskarast samsett sviðá milli hráa og unnu forma.

Frekari PLS-DA líkangerð og VIP greining

Aðskilin PLS-DA líkön voru smíðuð fyrir hrá og vín unnin sýni af báðum tegundum til að kannategundasértækur efnamunur. Eftirfarandi kom fram:

Stigareitir (myndir 5A og 5C)sýndisérstök þyrpingá milliC. deserticolaogC. tubulosabæði í hráu og unnu formi.

Líkanprófun (myndir 5B og 5D)staðfest gott forspárgildi án offitunar.

Variable Importance in Projection (VIP) plots (myndir 6A og 6B)auðkennd lykilefnasambönd sem stuðla að mismunun tegunda:

Fyrirhrásýni: Cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, ogverbascosidevoru fróðlegastar.

Fyrirvínverkuð sýni: Cistanoside Aogtúbúlósíð Bgegnt ráðandi hlutverkum.

2.5 Áhrif vínvinnslu á Cistanche plöntuefnafræði

Vegna verulegs breytileika á innihaldi efnasambanda milli lota,paraður samanburðurvoru gerðar á milli hrá- og vínunnar sýnishorn afsama lotan. Niðurstöðurnar, sýndar með því að notafiðluspil (Mynd 7), leiddi eftirfarandi í ljós:

ÍC. deserticola, stigum af2'-asetýlverbaskósíð, cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, tubuloside A og verbascoside minnkað verulegaeftirvinnslu (P < 0,05), á meðantúbúlósíð B aukist.

ÍC. tubulosa, stigum af2'-asetýlverbaskósíð, echinakósíð og verbaskósíðlíkaminnkaði, á meðanisoverbascoside og tubuloside B aukistmarktækt (P < 0,05).

Þessar niðurstöður benda til þess að vínvinnsla geti leitt tilvatnsrof, ísómerun, eðaefnafræðileg umbreytingaf virkum efnum.

3. Umræður

Samkvæmt2020 útgáfa af kínversku lyfjaskránni, Cistanche deserticolaskal innihalda ekki minna en0.3%af samanlögðu innihaldiechinacoside og verbascoside, enCistanche tubulosaskal innihalda ekki minna en1.5%af þessum tveimur efnasamböndum. Í þessari rannsókn uppfylltu öll hrá og unnin sýni - nema ein lota (180710) - þessum stöðlum.

Þrátt fyrirbreytileiki frá lotu til lotuinnan hverrar tegundar (sum efnasamböndum var allt að 10-faldur frábrugðinn, eins og tubuloside A og isoverbascoside), var stöðugt fram tölfræðilega marktækur munur á innihaldi efnasambanda á milli þessara tveggja tegunda. Þetta staðfestir þaðUppruni tegunda er stór þátturhefur áhrif á jurtaefnasamsetningu.

Að auki,cistanoside Avarbara greinist íC. deserticolaog fjarverandi inniC. tubulosa, sem gerir það að adýrmætt merki fyrir tegundavottun, sérstaklega í lyfjafræðilegum eða gæðaeftirlitsstillingum.

🔬 Áhrif vínvinnslu á efnasamsetningu

Eftir vínvinnslu sýndu báðar tegundir stöðuga þróun:

Lækkuð stigaf:
Cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubuloside A og 2'-acetylverbascoside

Hækkuð stigaf:
Tubuloside B og isoverbascoside

Þessi þróun getur stafað afefna vatnsrof, niðurbrot, eðaskipulagsbreytingumeðan á gufu stendur. Athyglisvert er aðstærð og stefna breytinga var mismunandi eftir lotum, líklega vegna mismunar á:

Upphafsstyrkur efnasambanda

Formgerð jurta (stærð, þykkt)

Næmi fyrir vinnsluaðstæðum

Þetta undirstrikar mikilvægi þessstaðla vinnslubreyturog stjórnandilotusértækt gæðamatmeðan á jurtagerð stendur.