Ágrip

MarkmiðTil að rannsaka þvagsýrulækkandi áhrif og öryggismat echinacosides (Ech) sem unnið er úrCistanche tubulosa. AðferðirÍ bráða eiturhrifaprófinu var KM músum gefið Ech í hámarksstyrk tvisvar á dag til inntöku til að athuga bráða eiturhrif. Rottamódel fyrir blóðþvagfall (HUA) var komið á fót með því að nota 1,5 g·kg⁻¹ kalíumoxónat + 0.1 g·kg⁻¹ adenín. HUA líkanrottum var skipt af handahófi í líkanhóp, allópúrínól hóp (30 mg·kg⁻¹) og lág-, meðal- og háskammta Ech hópa (50, 75, 100 mg·kg⁻¹), með eðlilegum samanburðarhópi (n=10 í hverjum hóp). Lyf voru gefin í maga einu sinni á dag í 28 daga í röð. Eftir gjöf var rottum fórnað og sermi var safnað til að greina viðeigandi lífefnafræðilega vísbendingar og xantín oxidasa (XOD) gildi; vefjameinafræðilegar breytingar á nýrum komu fram. Líffæri voru vigtuð til að reikna út líffærastuðla; tjáningarmagn skyldra gena og próteina í nýrnavef greindist.NiðurstöðurEngin augljós eitrunarviðbrögð komu fram í bráða eiturhrifaprófinu. Ech minnkaði marktækt magn þvagsýru í sermi, verulega bætt nýrnastarfsemi og nýrnapípulaga/millivefsskemmdir í HUA líkan rottum og stýrði marktækt umritun og próteintjáningu gena sem tengjast þvagflutningsefni í nýrnavef.NiðurstaðaÞvagsýrulækkandi áhrif Ech í HUA líkan rottum geta tengst því að draga úr in vivo þvagsýruframleiðslu, stjórna nýrnastarfsemi og móta tjáningu þvagflutningsefna, með góðu öryggi.Leitarorð: Cistanche tubulosa; Echinacoside; Ofurþvagfall; Þvagsýra; Genafritun; Prótein tjáning; Verkunarháttur; Öryggismat

 

 

 

Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight er almennt notuð nýrna-tonifying jurt í hefðbundinni kínverskri læknisfræði (TCM). Eins og skráð er íKínversk lyfjaskrá, það endurnýjar nýra yang, endurnýjar kjarna og blóð og er klínískt notað við getuleysi og ófrjósemi, skort á kjarna og blóði og eymsli í mitti og hné. Fenýletanóíð glýkósíð eru algengustu og líffræðilega virku innihaldsefnin íCistanche tubulosa, sem sýnir mikla möguleika til þróunar og beitingar. Rannsóknarteymið okkar fann áður með netlyfjafræði og bráðatilraunum á músum að echinacoside (Ech) fráCistanche tubulosaþykkni getur haft þvagsýrulækkandi áhrif, en sjaldan er greint frá virkni þess og öryggi. Þessi rannsókn tekur meingerð ofþvagsýruhækkunar sem upphafspunktinn til að kanna lyfjafræðilega þvagsýrulækkandi áhrif Ech, með það að markmiði að skýra virkni þess og meta öryggi þess.

1 Efni og aðferðir

1.1 Hljóðfæri, hvarfefni og dýr

7100 Sjálfvirkur lífefnagreiningartæki (Hitachi, Japan); Multiskan GO 1510 Microplate Reader (Thermo, Bandaríkin); BG-Power600i raforkukerfi (Beijing Baijing Biotechnology Co., Ltd.); 7500 Fast Real-Time Fluorescent Quantitative PCR System (Applied Biosystems, USA).

Cistanche tubulosa extract (Ech, self-prepared, chromatographic purity >98%); kalíumoxónat, adenín (Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.); kreatínín (CREA), þvagsýra (UA), þvagefni (UREA), adenósín deamínasi (ADA), alanín transamínasa (ALT), aspartat transamínasa (AST), basísk fosfatasa (ALP) prófunarsett (Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.); XOD virkni greiningarsett (Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.); mótefni URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 (Jiangsu Qinke líftækni); geita gegn kanínu IgG/HRP samtengingu (Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd., Lot: 245440113); DEPC (Amresco, Bandaríkjunum); M5 HiClear DL2000 DNA merki (Beijing Juhemai Biotechnology Co., Ltd.); TRIzol™ hvarfefni (Thermo Fisher Scientific, Bandaríkjunum); 5× All-In-One RT MasterMix, EvaGreen Express 2× qPCR MasterMix-Low ROX (Aibimeng Biotechnology Co., Ltd.).

Fjörutíu SPF-gráðu KM mýs (karlkyns og kvenkyns, 18–22 g) og 90 SPF-gráðu SD karlkyns rottur (150–180 g) voru veittar af tilraunadýramiðstöð Xinjiang Medical University (framleiðsluleyfi nr. SCXK Xin 2023-0001).

1.2 Aðferðir og niðurstöður

1.2.1 Bráð eiturhrifapróf

Dýratilraunir voru samþykktar af siðanefnd Xinjiang Institute of Drug Research (samþykki nr. IACUC-(Zhun)-2024-008, IACUC-(Zhun)-2024-009). Fjörutíu SPF-gráðu KM músum var skipt af handahófi í samanburðarhóp og meðferðarhóp (n=20, karlkyns og kvenkyns) eftir sóttkví og aðlögun. Mýsnar voru á föstu yfir nótt með frjálsan aðgang að vatni fyrir lyfjagjöf. SamkvæmtLeiðbeiningar um eiturverkanapróf í stakskammta hefðbundnum kínverskum lyfjum og náttúruvörum, var hámarksstyrkslausnin (250 mg·mL⁻¹) sem hægt var að fara í gegnum 12 gauge gasgjafanál útbúin. KM músum var gefið til inntöku 40 ml·kg⁻¹ tvisvar á dag með 4 klst. millibili, með uppsafnaðan skammt upp á 20 g·kg⁻¹. Almennar aðstæður, feldslitur, virkni, göngulag, andlegt ástand, saur og þvag var fylgst náið með eitureinkennum, upphafstíma, lengd og bata. Engar aukaverkanir eiturverkana (td takmörkuð virkni, framhjáhald, sljóleiki, dauði) komu fram í meðferðarhópnum. Pelslitur, virkni, ganglag, andlegt ástand, saur og þvag hélst eðlilegt á athugunartímabilinu. Líkamsþyngd og fæðuinntaka sýndu ekki marktækan mun á meðferðar- og samanburðarhópnum. Gróf krufning í lok athugunar leiddi í ljós engin frávik í rúmmáli líffæra, lit eða áferð.

 

Mynd 1 Áhrif Echo líkamsþyngdar (AB) og fæðuinntöku (C,D) í músum

 

1.2.2 Stofnun líkana, flokkun og stjórnun

Sextíu karlkyns SD rottur (150–180 g) voru aðlagaðar og skipt í venjulegan samanburðarhóp (n=10) og líkanahóp (n=50). Líkanahópnum var gefið í maga 100 mg·kg⁻¹ adenín + 1.5 g·kg⁻¹ kalíumoxónat (sviflaust í 0,5% CMC-Na) í 10 ml·kg⁻¹ einu sinni á dag í 14 daga; samanburðarhópurinn fékk 0,5% CMC-Na. Eftir líkanagerð var blóði í svigrúmi safnað til að greina UREA, CREA og serum þvagsýru (SUA). Líkanið var talið vel heppnað þegar UREA, CREA og SUA voru verulega hækkuð. Vel heppnuðum HUA líkanrottum var skipt í líkanhóp, allópúrínól hóp (30 mg·kg⁻¹), og lág-, meðal- og háskammta Ech hópa (50, 75, 100 mg·kg⁻¹) (n=10 í hverjum hópi). Til að viðhalda stöðugu þvagþrýstingsfalli fengu allir hópar nema viðmiðunarhópurinn 100 mg·kg⁻¹ adenín + 500 mg·kg⁻¹ kalíumoxónat (0,5% CMC-Na dreifa) í maga á hverjum morgni og samsvarandi lyf á hverjum degi í 14 daga. Líkönum var síðan hætt en lyfjagjöf hélt áfram í 14 daga í viðbót.

1.2.3 Ákvörðun á SUA og þvagsýru (UUA) í rottum

Eftir síðustu gjöf voru rottur fastaðar yfir nótt með frjálsan aðgang að vatni. Þvagi var safnað, skilið í skilvindu (3×10³ r·mín⁻¹, 10 mín), þynnt 1:9 með saltvatni og prófað með tilliti til UUA með lífefnagreiningartæki. Blóði var safnað undir svæfingu og sermi var aðskilið (3×10³ r·mín⁻¹, 10 mín) til að greina SUA. Í samanburði við samanburðarhópinn sýndi líkanhópurinn marktækt aukið SUA (P<0.05) and decreased UUA (P<0.01). The allopurinol group and low-, medium-, and high-dose Ech groups had significantly reduced SUA (P<0.05); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly increased UUA (P<0.05 or P<0.01).

 

Mynd 2 Áhrif Ech á SUA(A) og UUA(B) í módelrottum með blóðþvagi

 

1.2.4 Ákvörðun á ADA- og XOD-gildum í sermi hjá rottum

ADA í sermi var mælt með því að nota lífefnagreiningartæki; XOD virkni var greind með ensímtengdri ónæmissogandi prófun (gleypni við 290 nm). Í samanburði við venjulega hópinn hafði líkanhópurinn marktækt hækkað ADA og XOD (P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced ADA (P<0.01); the allopurinol group and high-dose Ech group had significantly reduced XOD (P<0.01).

1.2.5 Ákvörðun þvagefnis, CREA, ALT, AST, ALP í sermi

Í samanburði við venjulega hópinn hafði líkanhópurinn marktækt hækkað UREA og CREA (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group had significantly reduced UREA (P<0.01); all Ech dose groups had significantly reduced UREA and CREA (P<0.05 or P<0.01); medium-/high-dose Ech groups had significantly reduced ALT (P<0.01); low-dose Ech group had significantly increased ALP (P<0.01).

1.2.6 Ákvörðun nýrnalíffærastuðuls hjá rottum

Líffærastuðull=líffæramassi (mg)/líkamsþyngd (g). Í samanburði við venjulega hópinn hafði líkanhópurinn verulega minnkað fastandi líkamsþyngd (P<0.01) and increased kidney and adrenal gland coefficients (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, all Ech dose groups had significantly increased body weight (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced kidney coefficients (P<0.01).

 

Tafla 1 Áhrif Ech á þvagefnis-, CREA-, ALT-, AST- og ALP-gildi í líkanrottum með blóðþurrð í blóði (xˉ±s, n=10)

 

Hópur	Skammtur / mg·kg⁻¹	Þvagefni / mmól·L⁻¹	CREA / μmól·L⁻¹	ALT / U·L⁻¹	AST / U·L⁻¹	ALP / U·L⁻¹
Stjórna	–	8.00 ± 0.71	34.11 ± 3.33	51.22 ± 3.80	109.11 ± 11.62	206.00 ± 42.20
Fyrirmynd	–	23.20 ± 6.05**	100.10 ± 43.59*	62.00 ± 9.64	109.10 ± 7.92	173.10 ± 27.30
Allópúrínól	30	10.70 ± 1.95##	55.20 ± 13.27	52.70 ± 12.79	117.50 ± 21.71	198.40 ± 52.66
Ech	50	11.20 ± 3.33##	44.80 ± 21.01#	55.70 ± 12.59	106.10 ± 13.80	242.11 ± 55.04##
	75	9.90 ± 1.45##	41.20 ± 4.54#	46.50 ± 5.72##	102.10 ± 16.11	183.70 ± 22.31
	100	8.90 ± 1.10##	35.20 ± 2.74#	46.50 ± 5.72##	106.00 ± 15.19	195.20 ± 33.96

Athugið:Samanborið við samanburðarhóp: *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

Tafla 2 Áhrif Ech á líffærastuðla í ofurþvagræsilíkani rottum (xˉ±s, n=10)

 

Hópur	Skammtur / mg·kg⁻¹	Fastandi líkamsþyngd / g	Lifrarstuðull	Nýrnastuðull	Nýrnahettustuðull	Miltisstuðull	Thymus stuðull
Stjórna	–	403.6 ± 28.0	26.92 ± 3.15	6.57 ± 0.55	0.14 ± 0.04	1.88 ± 0.26	1.07 ± 0.15
Fyrirmynd	–	352.5 ± 38.5**	26.60 ± 1.78	11.52 ± 1.67**	0.18 ± 0.03*	2.12 ± 0.23	1.03 ± 0.17
Allópúrínól	30	367.5 ± 26.3	25.76 ± 1.14	7.93 ± 0.51##	0.16 ± 0.03	1.93 ± 0.35	1.08 ± 0.27
Ech	50	392.3 ± 28.3#	27.04 ± 2.14	8.06 ± 0.54##	0.16 ± 0.04	2.09 ± 0.24	1.09 ± 0.19
	75	388.4 ± 34.8#	26.78 ± 2.37	7.80 ± 0.78##	0.16 ± 0.02	2.00 ± 0.20	0.99 ± 0.25
	100	386.3 ± 41.4#	25.91 ± 1.46	7.58 ± 0.33##	0.18 ± 0.03	2.09 ± 0.28	1.17 ± 0.31

Athugið:Samanborið við samanburðarhóp: *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

 

 

1.2.7 Vefjameinafræðileg athugun á nýrna rottum (HE-litun)

Nýrnavefur var festur, þurrkaður, innfelldur, sneiddur (4 μm), litaður með HE og innsiglaður. Módelhópurinn sýndi losun nýrnapípla þekjufrumna, íferð dreps og bólgufrumna og brennandi bólguíferð í millivef nýrna. Allopurinol hópurinn sýndi vægar skemmdir; Ech meðferðarhópar sýndu létta útskilnað þekjufrumna, drep og bólguíferð.

 

 

Mynd 4 HElitunarmynd af rotnýrnavef stjórnhóps (A), líkanhóps (B), allópúrínólhóps (C,D), lágs (E) og hárs
(F)skammtahópar af Ech(×400)

 

1.2.8 Próteintjáning URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 í rottum nýrum

Ónæmisvefjaefnafræði var framkvæmd til að greina tjáningu próteina (integrated optical density, IOD). Í samanburði við venjulega hópinn hafði líkanhópurinn marktækt uppstýrt URAT1 og GLUT9 (P<0.01) and downregulated OAT1 and OAT3 (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 and GLUT9 (P<0.05, P<0.01) and upregulated OAT1 (P<0.05, P<0.01); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly upregulated OAT3 (P<0.05, P<0.01).

 

Mynd 5 Áhrif EchonURAT1/IOD-gilda(A),GLUT9/IOD-gilda(B),OAT1/IOD-gilda(C),ogOAT3/IOD-gilda(D) í
nýrnavandamál fyrirmynda af blóðþvagi

 

Mynd 6 Áhrif Ech á nýrna URAT1 tjáningu í ofurþvagræsilíkani rottum

(Stjórnhópur (A), líkanhópur (B), allópúrínólhópur (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech hópar (D–F); IHC ×400)

 

Mynd 7 Áhrif Ech á nýrna GLUT9 tjáningu í ofurþvagræsilíkani rottum

(Stjórnhópur (A), líkanhópur (B), allópúrínólhópur (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech hópar (D–F); IHC ×400)

Mynd 8 Áhrif Ech á nýrna-OAT3 tjáningu í blóðþvagilíkani rottum

(Stjórnhópur (A), líkanhópur (B), allópúrínólhópur (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech hópar (D–F); IHC ×400)

Mynd 9 Áhrif Ech á nýrna-OAT1 tjáningu í blóðþvagilíkani rottum

(Stjórnhópur (A), líkanhópur (B), allópúrínólhópur (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech hópar (D–F); IHC ×400)

 

 

1.2.9 mRNA Tjáning URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 í rottum nýrum

Heildar-RNA var dregið út og öfugt umritað; qPCR var framkvæmt með því að nota 2⁻ΔΔCt aðferðina. Í samanburði við venjulega hópinn hafði líkanhópurinn marktækt uppstýrt URAT1 og GLUT9 mRNA (P<0.05) and downregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and low-/medium-dose Ech groups had significantly downregulated GLUT9 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly upregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05).

 

Tafla 3 Grunnraðir

 

Primer nafn	Röð (5′ til 3′)	Vörustærð
URAT1-	F: GTTCCCATGGCCTCCAGATTR: CATATGCATGCCACACAGCC	121 bp
GLUT9	F: TCTGCCTTGGCTGAGTATTGAR: ATGTGTCCCCCACATCATTGT	2147 bp
OAT1	F: TGTGAAGCCCTTCCGTTCTCR: TGTGAAGCCCTTCCGTTCTC	218 bp
OAT3	F: TACCTGCATGTGACCTTGCTGR: GAGACACTTCTCAGGCTTCCC	171 bp
-Aktín	F: CCCATCTATGAGGGTTACGCR: TTTAATGTCACGCACGATTTC	150 bp

 

1.2.10 Tölfræðigreining

Gögnin voru greind með SPSS 20.0, gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik (x̄±s). Einhliða ANOVA var notuð fyrir hópsamanburð og LSD eða Tamhane's T2 fyrir post-hoc próf. P<0.05 was considered statistically significant.

Mynd 5 Áhrif EchonURAT1/IOD-gilda(A),GLUT9/IOD-gilda(B),OAT1/IOD-gilda(C),ogOAT3/IOD-gildi(D) í nýrnavandamálmódelum með blóðþvagi

 

2 Umræður

Viðvarandi þvagsýruhækkun veldur nýrnaskaða af völdum þvagsýru og breytir lífvísum um nýrnastarfsemi. Þessi rannsókn kom á fót HUA rottulíkani sem notaði adenín ásamt kalíumoxónati, með UREA, CREA og SUA sem lykilvísa. Niðurstöður sýndu að Ech fráCistanche tubulosabætt nýrnastarfsemi og minnkað SUA í HUA líkan rottum, sem hefur lækningaleg áhrif. Ofurþvagfall stafar af of mikilli þvagsýruframleiðslu og skertri útskilnaði. Lifrar XOD og ADA eru lykilensím í myndun þvagsýru; offramleiðsla er aðalorsök HUA. Um það bil tveir þriðju hlutar daglegs þvagsýru skiljast út um nýrun, sem gerir skert útskilnað í nýrum að aðaláhrifavaldinu. URAT1 og GLUT9 miðla endurupptöku þvagsýru en OAT1 og OAT3 auðvelda útskilnað þvagsýru - allt eru lykilmarkmið fyrir þróun þvagsýrulækkandi lyfja. Ech minnkaði marktækt ADA og XOD í lifur, lækkaði URAT1/GLUT9 nýrna (prótein og mRNA) og hækkaði OAT1/OAT3 (prótein og mRNA), sem gefur til kynna þvagsýrulækkandi áhrif þess með því að draga úr nýmyndun og stjórna flutningsefnum. Í prófunum á bráðum eiturhrifum sást engin dauðsföll eða augljós bráð eituráhrif hjá músum. Ech bætti nýrnastarfsemi og lækkaði ALT í lifur hjá HUA rottum án þess að hafa áhrif á AST eða líffærastuðla, sem staðfestir hagstætt öryggi. Að lokum hefur Ech umtalsverð þvagsýrulækkandi áhrif í HUA rottum af völdum adeníns-kalíumoxónats með því að bæla ADA/XOD-miðlaða þvagsýrumyndun, vernda nýrnastarfsemi og koma á jafnvægi í tjáningu úratflutninga, með áreiðanlegu öryggi fyrir hugsanlega klíníska notkun.

Heimildir

Zhang MH, Du JW, Zhang T, o.fl. Vélbúnaður Bixie Fenqing Wan í afskiptum af rottum með blóðþurrð í blóði með því að stjórna tjáningu úratflutnings[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3): 1–8.

Niu YF, Zhou YF, Lin H, o.fl. Hömlun á 3,5,2′,4′-tetrahýdroxýchalconi á framleiðslu þvagsýru í músum af völdum hypoxanthine ofuricemic [J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2018, 41(1): 99–105.

Frédéric L. Gigt: uppfærsla[J]. Journal of Bone and Joint Surgery, 2019, 86(1): 103–115.

Takeo N, Kouhei O, Sho S, o.fl. Virk samvinna URAT1 (SLC22A12) og URATv1 (SLC2A9) við endurupptöku úrats um nýru[J]. Nephrology Dialysis Transplantation, 2013, 28(3): 603–611.

Lee SY, Cho SS, Han KM, o.fl. Kóreskt rautt ginseng bætir þvagsýrumagn í sermi með því að minnka URAT1 og hækka OAT1 og OAT3[J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2024, 47(11): 1876–1882.

Falah K, Zhang P, Nigam AK, o.fl. In vivo stjórnun á litlum sameindum náttúruafurða, andoxunarefnum og næringarefnum með OAT1 og OAT3[J]. Næringarefni, 2024, 16(14): 2242.

 

Há-innihaldCistancheFramboðsuppspretta þvagsýrulækkandi jurta

Fyrir stofnanir, iðkendur og einstaklinga með áherslu ánáttúrulyf til að draga úr þvagsýruog meðferð með ofþvagi,hár hreinleikiCistanche tubulosaútdrátturer áreiðanlegt náttúrulegt hráefni með sannreyndri virkni.

Kjarnakostir framboðsins

Hástöðlaðir virkir íhlutir

Echinacoside (Ech): Stærra en eða jafnt og 10%–40%

Akteósíð: Stærra en eða jafnt og 4%–16%

Heildarfjöldi fenýletanóíð glýkósíða: Meira en eða jafnt og 40%–85% (uppfyllir matvæla- og útdráttarkröfur fyrir rannsóknir og þróun og vöruþróun)

 

Cistanche stöð og verksmiðja

Hafðu samband núna

 

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Fyrir frekari upplýsingar um samvinnu
Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

 

Staðfest þvagsýrulækkandi vélbúnaður

Hindrar XOD/ADA til að draga úr nýmyndun þvagsýru

Stýrir URAT1/GLUT9/OAT1/OAT3 til að stuðla að útskilnaði þvagsýru

Verndar nýrnastarfsemi og dregur úr nýrnaskaða tengdum ofþvagi

Öruggt og þolist vel

Bráð eiturhrifapróf: Engar augljósar aukaverkanir við stóra skammta

Engar teljandi skemmdir á lifur, nýrum eða helstu líffærum

Uppfyllir kröfur um mat og fæðubótarefni

Viðurkennd framboðstenging

https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/herbal-cistanche-dietary-supplement-capsules.html

 

Þessi heimild veitir staðlaðaCistanche tubulosaútdrætti, hylki, töflur, vökva til inntöku og sérsniðna vinnsluþjónustu, sem styður jurta-þvagsýrulækkandi vöruþróun, klínískar rannsóknir og fæðubótarefnasamsetningu.