Einkenni sautján íhluta í ræktuðum cistanches Herba frá Tarim eyðimörkinni í gegnum HPLC-MS

［Ágrip］Markmið: Að bera kennsl á litskiljunarhluta 60% metanólútdráttar íCistanches deserticola Herbaræktað í Tarim eyðimörkinni af HPLC-MS.

Aðferð: HPLC-MS greining var gerð á Agilent ZOＲBAX Eclipse Plus C18 súlu (6 mm × 250 mm,5 μm)． Hreyfanlegur fasi var asetónítríl-0. 1% maurasýruvatnslausn með hallaskolun með flæðihraða 1 ml·mín-1 og greiningarbylgjulengdin var 254 nm. Súluhitastigið var stillt á 25 gráður og inndælingarrúmmálið var 10 μL. Niðurstaða: Sextán litskiljunartoppar / sautján efnisþættir voru nákvæmlega auðkenndir með því að bera saman varðveislutíma, mólþunga og brotajónir efnasambandanna sem við einangruðum og auðkenndum. Þessir litskiljunarhlutar voru ákvörðuð sem coniferin, demethyl syringin, syringin, echinacoside, cistanoside A, verbascoside (túbúlósíð A), cistanoside B, isoverbascoside, 2'-asetýlcistanoside A, cistanoside C, ísocistanoside C,2'-acetylverbascoside, a cistanoside J.

Niðurstaða: HPLC-MS aðferðin er hentug til að bera kennsl á litskiljunarhluta 60% metanólútdráttar í Cistanches Herba． Þessi rannsókn mun veita vísindalegar sannanir fyrir alhliða greiningu á efnafræðilegum innihaldsefnum þessarar lækningajurtar.

［Lykilorð］ Cistanches deserticolaHerba; Cistanche; HPLC-MS; metanól þykkni

Cistanche deserticola YCMa

Cistanche deserticola, einnig þekktur sem "eyðimerkur ginseng",er frægt tonic kínverskt lyf, sem er dreift í Innri Mongólíu, Ningxia, Gansu og Xinjiang í Kína [1].Það hefur þau áhrif að það styrkir nýra-yang, gagnast blóðkjarna, raka þörmum og saur. Það er almennt notað á heilsugæslustöðvum til að meðhöndla getuleysi karla, ófrjósemi kvenna, kvefverki í mitti og hné, hægðatregða í blóðio.s.frv. [2-3].Cistanche deserticola, sem erinnifalinn í fyrri hluta kínversku lyfjaskrárinnar (2015 útgáfu) er þurrkaður holdugur stilkur af Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa (4). Rannsóknarteymið okkar hefur framkvæmt kerfisbundnar og ítarlegar rannsóknir á Cistanche plöntum í mörg ár.Efnafræðilegir þættir Cistanche plantna eru aðallega fenýletanóíð glýkósíð, auk iridoids og glýkósíða þeirra, lignans og glýkósíða þeirra, bensýlalkóhól glýkósíða o.fl.[5]. Nútíma lyfjafræðilegar rannsóknir sýna að fenýl etanól glýkósíð, helstu þættir ættkvíslarinnar, hafa taugaverndandi, andoxunarefni, lifrarvörn, bakteríudrepandi, veirueyðandi, æxlishemjandi, bólgueyðandi og önnur áhrif [6-11].

Ginseng í eyðimörk

Í Kína er Cistanche deserticola dreift í vesturhluta Innri-Mongólíu, norðurhluta Xinjiang og Qaidam-svæðisins í Qinghai, en ekki í Tarim-svæðinu í suðurhluta Xinjiang.. Seint á tíunda áratugnum, til að vernda Tazhong olíusvæðið og stjórna eyðimörkinni, kynntu höfuðstöðvar olíuvallanna mikinn fjölda Haloxylon ammodendrons í kringum Tazhong olíusvæðið og beggja vegna eyðimerkurhraðbrautarinnar og sáðu Haloxylon ammodendron með cistanche, sem hefur verið meira en 10 ár. Vegna hlýs loftslags í Suður-Xinjiang og góðra dreypiáveituskilyrða í olíugrunninum er uppskeran af cistanche deserticola mjög há og uppskeran af ferskum cistanche deserticola á mú nær meira en 500 kg [8]. Margir efnafræðilegir þættir í Cistanche deserticola hafa framleitt mikinn fjölda hverfa vegna mismunandi tengingarstaða skiptihópa. Þetta veldur miklum erfiðleikum við að bera kennsl á litskiljunarhámark þessa lyfjaefnis. Erfitt er að bera kennsl á íhluti litskiljunartoppsins nákvæmlega ef einungis er treyst á LC-MS án einliða efnasambanda sem viðmiðunar. Þess vegna eru fáar ritskýrslur um þetta starf á frumstigi. Höfundur einangraði mörg einliða efnasambönd [9-11] úr Cistanche deserticola sem ræktuð var í Tazhong eyðimörkinni á frumstigi. Með þessum einliða efnasamböndum sem fengust á fyrstu stigum, voru HPLC hluta litskiljunartoppar 60% metanóls útdráttar Cistanche deserticola auðkenndir nákvæmlega. Þetta mun ekki aðeins koma í veg fyrir endurtekna auðkenningu sumra þekktra efnasambanda í efnafræðilegum innihaldsefnum Cistanche deserticola heldur einnig tilvísun til frekari rannsókna á gæðaeftirliti lyfjaefnisins. Í þessari grein voru 17 þættir af 0% metanólútdrætti Cistanche deserticola auðkenndir með HPLC-MS.

Cistanche deserticola sneið

Smelltu hér til að skoða Cistanche vörur

【Biðja um meira】 Netfang: xue122522@foxmail.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1.Efni

Inova-500 kjarnasegulómunartæki (Varian, Bandaríkin); 6320IonTrap LC-MS massagreiningarmælir, EclipseXDB-C18 súla (4,6mm × 250mm,5 μm) (Agilent, Bandaríkjunum); QUINTIX313-1CN gerð 1/10000 rafeindavog (Sedaris Division); KQ-500DV úthljóðshreinsiefni (Jiangsu Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); KMUP - Ⅰ Trace Analytical Ultra Pure Water Generation System (Chengdu Haochun Instrument Equipment Co., Ltd.).

39 viðmiðunarefnin sem notuð voru í þessari tilraun voru öll einangruð úr eyðimerkurræktuðum Cistanche deserticola í Tazhong af höfundi á frumstigi og uppbygging þeirra var ákvörðuð með NMR og öðrum litrófsgreiningaraðferðum. Bygging 39 viðmiðunarsýna var auðkennd sem Cistanche deserticoside J, Cistanche deserticoside K, Cistanche deserticoside L, Cistanche deserticoside M, Cistanche deserticoside N, epimeridinosideA, Isocistancheside C, angiocyanin B, Cistanche heterophyllico, Cistanche deserticosid, Cistanche deserticosid, de C, Cistanche cymosin, 2 '- asetýl Cistanche deserticoside A, 2' - asetýl Cistanche deserticoside A, Cistanche deserticola B, Cistanche deserticola A, Echinoside A, Cistanche deserticola glýkósíð E, Salidroside, 6 '- asetýlsalidrosíð, sýringur, sýringur (2E, 6E) - 3, 7-dímetýl-8-hýdroxýktadíen-1-O- - D-glúkósíð, (+) - syringin, (+) - syringin-4 '- O- - D-glúkópýranósíð, (+) - ísóefliðcomminA, eucomminA, eucomminA, eucomminA, eucomminA, eucomminA, D-glúkósíð, lirfueyðandi-4 '- O- - D-glúkósíð, lirfueyðandi-4-O- - D-glúkósíð- - D glúkópýranósíð, hesperidín A, svæði til hliðar A, 6-deoxýkatapól. Hreinleiki allra ofangreindra viðmiðunarefna er meira en 98,0%. Asetónítríl er litskiljunarfræðilega hreint (DikmaPure, Bandaríkjunum), vatn er ofurhreint vatn og önnur hvarfefni sem notuð eru í prófunarferlinu eru greiningarhrein hvarfefni, framleidd af Beijing Chemical Plant.

Lyfjaefnið sem notað var í þessari tilraun, Cistanche deserticola, var safnað frá eyðimerkursvæðinu Tazhong, Xinjiang, í nóvember 2010. Prófessor Tu Pengfei við lyfjafræðideild Peking háskólans greindi það sem þurrkaður holdugur stilkur Leobaceae plöntunnar Cistanche deserticola. Sýnið var geymt í Modern Research Center of Traditional Chinese Medicine Peking University (sýnisnúmer: CD201011).

Cistanche deserticola sneið

2.Aðferðir og niðurstöður

2.1 Undirbúningur viðmiðunarlausnar

Taktu um það bil 1 mg af hverju af 39 viðmiðunarsýnunum sem fengust úr Cistanche deserticola á frumstigi, vigtaðu þau nákvæmlega, settu þau í 5 ml mæliflösku í sömu röð, leystu þau upp með metanóli og magnaðu þau upp að kvarðanum og fáðu síðan eina samanburðarlausnina.

2.2 Undirbúningur próflausnar

Með því að vísa til kínversku lyfjaskrárinnar, 2015 útgáfu, taktu um 1g af vöruduftinu (í gegnum fjórða sigtið), vigtaðu það nákvæmlega, settu það í 100 ml brúna flösku, bættu nákvæmlega við 50 ml af 60% metanóli, þjappaðu því, hristu það vel, vigtaðu massann, leggðu það í bleyti í 40 minsonic, 30 minsonic meðhöndlun. aftur, bætið við 50% metanóli til að mynda minnkaðan massa, hristið það vel, látið það standa, takið flotið og notið 0,45 μM míkróporous himnusíun, takið samfellda síuvökvann til að fá próflausnina.

2.3 Litskiljunarskilyrði

AgilentEclipse XDB-C18 litskiljunarsúla (4,6mm × 250mm,5 μm), greiningarbylgjulengd 254nm, súluhiti 25 gráður; Notkun asetónítríls (A) - 0.1% maurasýruvatnslausn (B) sem hreyfanlegur fasa, halli skolun (0 - 20mín., 5% - 15% A; 20 - 50mín., 15% - 30% A; 50 - 60mín., 30% - 50mín., 30% - 50mín, 8% - 50mín, 8% 4.6mín. A); Rennsli: 1,0mL · mín-1, inndælingarrúmmál: 10 μL.

2.4 Massarófsskilyrði

Háræðahiti 350 gráður; Háræðaspenna 3500V; Jacket gas (nitur) flæðihraði 12,0L · mín-1; Hjálpargas (nitur) þrýstingur 206,8kPa; Allt skönnunarsvið massagreiningar er m/z 50~1000; Árekstursgas helíum, árekstraorka er sjálfkrafa valin meðan á prófinu stendur; Safnaðu 1 nál fyrir hverja jákvæða og neikvæða jónaham.

2.5 Próf á viðmiðunarefni

39 viðmiðunarlausnirnar sem framleiddar voru undir 2.1 voru prófaðar við 2.3 litskiljunarskilyrði og 2.4 massagreiningarskilyrði og varðveislutími þeirra og hlutfallslegur mólþungi voru skráðir (tafla 1).

2.6 Ákvörðun próflausnar

Taktu lyfjaefnið Cistanche deserticola sem safnað er frá eyðimerkursvæðinu Tazhong, Xinjiang, og undirbúið prófunarlausnina samkvæmt aðferðinni sem lýst er í 2.2. Framkvæmdu síðan ákvörðunina í samræmi við skiljunarskilyrðin sem lýst er í 2.3 og massagreiningarskilyrðunum sem lýst er í 2.4, og ákvarðaðu HPLC litskiljunina og massagreininguna í jákvæðum og neikvæðum jónaham (myndir 1-3).

Fig. 1 HPLC litskiljun af 60% metanólútdrætti úr Cistanches Herba

Fig. 2 Jákvæð TIC MS litskiljun af 60% metanólútdrætti úr Cistanches Herba

Fig. 3 Neikvætt TIC MS litskiljun af 60% metanólútdrætti úr Cistanches Herba

2.7 Auðkenning á HPLC litskiljun lyfjaefna

Við sömu aðstæður (2,3 skiljunarskilyrði og 2,4 massagreiningarskilyrði) voru efnisþættirnir auðkenndir með því að bera saman varðveislutíma og hlutfallslegan mólþunga prófunarsýnisins og viðmiðunarsýnisins. Sérstakt auðkenningarferli litskiljunartopps prófunarsýnisins (mynd 1) er sem hér segir.

2.7.1 Auðkenning skiljunartopps 1

Varðveislutími litskiljunartopps 1 er 16,67 mínútur. Í jákvæðu jónahamnum er excimer jónatoppurinn m/z365 gefinn upp sem [M+Na]+, en í neikvæðu jónahamnum er excimer jónatoppurinn m/z387 [M+COOH] - gefinn upp. Hlutfallslegur mólþungi topps 1 er ákvarðaður vera 342. Einnig er gefin upp brotajónin m/z179, sem stafar af tapi á 1 sameind af glúkósa, 163 D, vegna klofnunar glýkósíðtengisins. Samkvæmt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartoppur 1 auðkenndur sem barrtré.

2.7.2 Auðkenning skiljunartopps 2

Varðveislutími litskiljunartopps 2 er 17,36 mín. Undir neikvæða jónahamnum eru excimer jónatopparnir m/z357 [M – H] -, 393 [M+Cl] - gefnir upp og hlutfallslegur mólþungi topps 2 er ákvarðaður vera 358. Á sama tíma er brot jónin m/z195 fengin úr tapi á 1 glúkósameind, dukósíð, bindi 163, glúkósíðsins, bindi 163. brotna. Litskiljunartoppurinn 2 var auðkenndur sem demetýlsýringín í samræmi við varðveislutíma og hlutfallslegan mólmassa viðmiðunarefnisins.

2.7.3 Auðkenning skiljunartopps 3

Varðveislutími litskiljunartopps 3 er 19,04mín, excimer jónatoppurinn m/z395 [M+Na] er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z417 [M+HCOO] - er gefinn í neikvæða jónahamnum, og hlutfallslegur mólþungi toppsins 372 ákvarðaður að toppurinn sé 372. m/z209 er dregið af tapi á 1 sameind af glúkósa, 163 Da, vegna þess að glýkósíðtengi rofnar. Litskiljunartoppurinn 3 var auðkenndur sem syringin í samræmi við varðveislutíma og hlutfallslegan mólmassa viðmiðunarefnisins.

2.7.4 Auðkenning skiljunartopps 4

Varðveislutími litskiljunartopps 4 er 27,66 mín. Excimer jónatoppurinn m/z804 [M+NH4] er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z785 [M–H] - er gefinn í neikvæðum jónahamnum. Hlutfallslegur mólþungi topps 4 er ákvarðaður vera 786. Á sama tíma er brotajónin m/z623 fengin úr esterbindingarbrjótandi tapi á 1 sameind af koffíni, 163 Da. Ásamt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartoppur 4 auðkenndur sem echinacea.

2.7.5 Auðkenning skiljunartopps 5

Varðveislutími litskiljunartopps 5 er 31,48mín, excimerjónatoppurinn m/z818 [M+NH4 er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum, og excimerjónatoppurinn m/z799 [M–H] - er gefinn upp í neikvæðum jónahamnum og hlutfallslegur mólþungi toppsins er ákvarðaður að toppurinn sé 5,00. m/z637 er dregið af esterbindingarbrjótandi tapi á 1 sameind af koffíni, 163Da. Með því að sameina varðveislutíma og hlutfallslegan mólmassa viðmiðunarefnisins, var staðfest að litskiljunartoppur 5 var cistanche glýkósíð A.

Tafla 1 Mólþungi og varðveislutími (tＲ) 39 staðlaðra efnasambanda

2.7.6 Auðkenning skiljunartopps 6

Varðveislutími litskiljunartopps 6 er 34,17 mín. Tveir excimer jónatoppar m/z846642 [M+NH4] + eru gefnir upp í jákvæðu jónahamnum og tveir excimerjónatoppar m/z827623 [M–H] - eru einnig gefnir upp í neikvæða jónahamnum. Getgátur eru um að toppur 6 geti innihaldið tvö efnasambönd með hlutfallslegan mólmassa 828624. Á sama tíma er brotajónin m/z665461 fengin af estertengi sem rofnar tap á 1 sameind af koffíni, 163 Da, og brotajónin m/z622 sem brýtur asetýltengi er afleitt. Þessi tvö efnasambönd voru einangruð og sett saman við varðveislutíma og hlutfallslegan mólmassa viðmiðunarefnisins; litskiljunartoppurinn 6 var blanda af Cimicifugarin og anthocyanin A.

2.7.7 Auðkenning skiljunartopps 7

Varðveislutími litskiljunartopps 7 er 35,34 mín. Excimer jónatoppurinn m/z832 [M+NH4]+, 837 [M+Na]+ er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z813 [M–H] - er gefinn upp í neikvæða jónahamnum, og hlutfallslegur mólþyngd topps 7 er 814. Á sama tíma er m/z-hlutinn afleiddur 3. bindabrjótandi tap á 1 sameind af ferúlsýru, 177Da. Ásamt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartopp 7 auðkenndur sem cistanche glýkósíð B.

2.7.8 Auðkenning skiljunartopps 8

Varðveislutími litskiljunartopps 8 er 36,17 mín., excimer jónatoppurinn m/z647 [M+Na] er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z623 [M–H] - er gefinn upp í neikvæðum jónahamnum og hlutfallslegur mólþungi toppsins er ákvarðaður að vera 6,24. m/z461 er gefið, sem er upprunnið í rofinu á estertengi og tapi á 1 sameind af koffínhópi, 163 Da. Ásamt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartoppur 8 auðkenndur sem heterókóenósíð.

2.7.9 Auðkenning skiljunartopps 9

Varðveislutími litskiljunartopps 9 er 38,20 mínútur. Excimer jónatopparnir m/z860 [M+NH4]+, 865 [M+Na] eru gefnir upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatopparnir m/z841 [M–H] -, 877 [M+Cl] - eru gefnir upp í neikvæða jónahamnum. Hlutfallslegur mólþungi topps 9 er ákvörðuð sem 842. Á sama tíma er brotajónin m/z679636 fengin af esterbindingarbrjótandi tapi á 1 sameind af koffíni, 163 Da, og 1 sameind af asetýl, 43 Da. Varðveislutími og hlutfallslegur mólþungi viðmiðunarefnisins eru í samræmi og auðkenningartoppurinn 9 er 2- 2'-asetýl cistanche glýkósíð A.

2.7.10 Auðkenning litningatographic blseak 10

Varðveislutími litskiljunartopps 10 er 39,04 mín. Hámarksjónatoppurinn m/z656 [M+NH4]+, 661 [M+Na] er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z637 [M–H] -, 673 [M+Cl] - er gefinn upp í neikvæða jónahamnum. Hlutfallslegur mólþungi topps 10 er ákvarðaður vera 638. Á sama tíma er brotajónin m/z475 fengin úr estertengi sem rjúfa tap á 1 sameind af koffíni, 163 Da. Varðveislutími og hlutfallslegur mólþungi viðmiðunarefnisins eru í samræmi og auðkenningartoppurinn 10 er Cistanche C.

2.7.11 Greining á litskiljunartopp 11

Varðveislutími litskiljunartopps 11 er 40,82 mín. Excimer jónatoppurinn m/z661 [M+Na]+, 677 [M+K + er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum, og excimerjónatoppurinn m/z637 [M–H] -, 673 [M+Cl] - er gefinn í neikvæða jónahamnum. Hægt er að ákvarða að hlutfallslegur mólþungi topps 11 sé 638. Á sama tíma er brotajónin m/z475 fengin úr esterbindingarrjótandi tapi á 1 sameind af koffíni, 163 Da. Með því að sameina varðveislutíma og hlutfallslegan mólmassa viðmiðunarefnisins var litskiljunartopp 11 auðkenndur sem issocistanche glycoside C.

2.7.12 Auðkenning litskiljunartopps 12

Varðveislutími litskiljunartopps 12 er 41,48 mín. Excimer jóna toppurinn m/z684 [M+NH4]+, 689 [M+Na + er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimer jónatoppurinn m/z665 [M–H] - er gefinn í neikvæðum jónahamnum. Hægt er að ákvarða að hlutfallslegur mólþungi topps 12 sé 666. Á sama tíma er sýnt fram á að brotajónin m/z503460 kemur frá estertengi sem rofnar tap á 1 sameind af koffíni, 163 Da, og 1 sameind af asetýl, 43 Da. Samkvæmt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartoppur 12 auðkenndur sem a2'-asetýlýlkóeliaósíð.

Cistanche deserticola tilraun

2.7.13 Auðkenning skiljunartopps 13

Varðveislutími litskiljunartopps 13 er 44,29mín, excimerjónatoppurinn m/z689 [M+Na] er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z665 [M–H] - er gefinn upp í neikvæðum jónahamnum, og hlutfallslegur mólþungi af toppnum 6 er sýndur á sama tíma 6, 6. m/z503460 kemur frá estertengi sem brýtur tap á 1 sameind af koffíni, 163 Da, og 1 sameind af asetýl, 43 Da. Ásamt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartoppur 13 auðkenndur sem anthocyanin B.

2.7.14 Greining á litskiljunartopp 14

Varðveislutími litskiljunartopps 14 er 46,67 mín. Excimer jónatoppurinn m/z675 [M+Na] er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z651 [M–H] - er gefinn í neikvæðum jónahamnum. Hlutfallslegur mólþungi topps 14 er 652. Á sama tíma er brotajónin m/z475 fengin af esterbindingarrjótandi tapi á 1 sameind af ferúlsýruhópi, 177Da. Ásamt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins var litskiljunartoppur 14 auðkenndur sem epimeridinoside A.

2.7.15 Auðkenning skiljunartopps 15

Varðveislutími litskiljunartopps 15 er 49,90 mín. Excimer jónatoppurinn m/z698 [M+NH4]+, 703 [M+Na + er gefinn upp í jákvæðu jónahamnum og excimerjónatoppurinn m/z679 [M–H] -, 715 [M+Cl] - er gefinn upp í neikvæða jónahamnum. Hlutfallslegur mólþungi topps 15 er 680. Á sama tíma er brotajónin m/z517474 fengin af esterbindingarbrjótandi tapi á 1 sameind af koffíni, 163 Da, og 1 sameind af asetýl, 43 Da. Litskiljunartoppurinn 15 var auðkenndur sem cistanche glýkósíð K miðað við varðveislutíma og hlutfallslegan mólmassa viðmiðunarefnisins.

2.7.16 Greining á litskiljunartopp 16

Varðveislutími litskiljunartopps 16 er 55,36 mínútur. Í jákvæðu jónahamnum er excimer jónatoppurinn m/z717 [M+N gefinn upp, en í neikvæðu jónahamnum eru excimer jónatopparnir m/z693 [M–H] -, 729 [M+Cl] - gefnir upp, sem leiðir til hlutfallslegs mólþyngdar upp á 694 fyrir topp 16. Á sama tíma kemur m/7 brotið. frá estertengi sem rofnar tap á 1 sameind af ferúlsýruhópi, 177 Da, og 1 sameind af asetýlhópi, 43 Da. Ásamt varðveislutíma og hlutfallslegum mólþunga viðmiðunarefnisins, var litskiljunartoppur 16 auðkenndur sem cistanche glýkósíð J. Litskiljunartoppar 60% metanóls útdráttar Cistanche deserticola voru auðkenndir með HPLC-MS ásamt hlutfallslegum mólþunga, viðmiðunartíma aðskilda viðmiðunarefnisins og búta. Niðurstöðurnar sýndu að 17 þættir af 16 litskiljunartoppunum voru nákvæmlega auðkenndir (tafla 2).

Tafla 2: Auðkenndir litskiljunartoppar Cistanches Herba og staðlaðar viðmiðunarsambönd

3  . Umræða

3.1 Val á undirbúningsaðferð prófunarhluta

Megintilgangur þessarar rannsóknar er að bera kennsl á HPLC toppa Cistanche deserticola. Þess vegna er val á útdráttarleysi og útdráttaraðferð byggt á getu til að fá fleiri HPLC toppa. Rannsóknarteymið hefur framkvæmt langtímarannsóknir á Cistanche deserticola og unnið mikla vinnu í gæðagreiningum. Í þessari grein voru útdráttarleysir og útdráttaraðferð Cistanche deserticola einnig valin út frá fyrri greiningarvinnu rannsóknarhópsins og kínversku lyfjaskránni (2015 útgáfa). Að lokum var 60% metanól leysir ultrasonic útdráttur í 40 mínútur valinn sem útdráttaraðferð.

3.2 HPLC-MS ástandsval

Val á litskiljunarsúlu í þessari grein er byggt á gæðagreiningu á Cistanche deserticola á frumstigi rannsóknarhópsins og rannsókninni á AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μ m), DionexC18 (4,6 mm × 250 mm), (rm. μ18 mm), (r. 250mm,5 μ m) Litskiljunarsúla, veldu að lokum AgilentZORBAXEclipsePlusC18 litskiljunarsúlu (4,6mm × 250mm,5 μm) Það hefur góð aðskilnaðaráhrif á Cistanche deserticola; Tilvísunarefnin 39 innihalda fenýletanóíð, lignans og fenýlprópanóíð, þannig að greiningarbylgjulengdin er 254nm; Á sama tíma voru áhrif hreyfanlegra fasa eins og metanól-vatns, asetónítrílvatns, metanóls-0,1% fosfórsýruvatns, asetónítríls-0,1% maurasýruvatns á litskiljunaraðskilnað og massagreiningargreiningu könnuð og að lokum var asetónítríl-0,1% maurasýrufasinn valinn sem hreyfanlegur fasi.

3.3 Samantekt

Aðferðin sem kom fram í þessari rannsókn greindi nákvæmlega 17 þætti úr 16 litskiljunartoppum 60% metanólsinsútdrátturafCistanche deserticola.

Rannsóknarniðurstöðurnar hafa ekki aðeins ákveðið viðmiðunargildi fyrir frekari gæðagreiningu á lyfinu heldur geta þær einnig komið í veg fyrir endurtekna vinnu við uppbyggingu auðkenningar þekktra efnasambanda lyfsins. Hins vegar, almennt séð, eru tiltölulega fáir auðkenndir litskiljunartoppar og margir litskiljunartoppar hafa ekki verið auðkenndir vegna þess að þeim hefur ekki verið úthlutað til viðmiðunarefnisins. Flestir auðkenndir þættir eru fenýletanóíð glýkósíð, en lignans eru sjaldgæf. Þetta getur verið vegna þess að útdráttaraðferðin sem vísað er til í 2015 útgáfu kínversku lyfjaskrárinnar beinist aðallega að fenýletanóíð glýkósíðum, eða vegna þess að innihald echinacosides og kólíformlíkra efnasambanda í útdrætti þessa lyfjaefnis er of hátt, sem gerir það erfitt að greina önnur efnasambönd með lítið innihald. Nánar þarf að skýra sérstakar ástæður.

[Tilvísanir]

[1] Ritnefnd Flora of China. Gróður Kína [M]. Beijing: Science Press, 1990: 86

[2] Yang Junshan. Desert ginseng -- Cistanche deserticola [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011,46( 12): 881．

[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai, o.fl. Rannsóknir á Cistanche deserticola og iðnaðarþróun þess[J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46 (12): 882-887

[4] Lyfjaskrárnefndin. Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína. Part I [M]Peking: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015: 135

[5] JIANG Y, TU PF. Greining á efnafræðilegum innihaldsefnum í Cistanche tegundum ［J］． J Chromatogr A,2009,1216 ( 11): 1970-1979.

[6] PAN J,YUAN CS,LIN CJ, o.fl. Lyfjafræðileg virkni og aðferðir náttúrulegra fenýlprópanóíð glýkósíða［J］． Pharmazie, 2003,58(11): 767-775.

[7] FU GM, PANG HH, Wong Y. Náttúruleg fenýletanóíð glýkósíð: hugsanlegar leiðir til nýrra meðferða［J］． Curr Med Chem, 2008,15 ( 25): 2592-2613.

[8] Rhode Mei, Long Mei, Du Wenjing, o.fl. Verkunarháttur gegn beinþynningaráhrifum Cistanche deserticola þykkni á M KOOPG músum ［ J］. Kínversk tilraun Journal of Prescriptions, 2016, 22 (10): 138-142

[9] Ma Hui, Yin Ruoxi, Guo Min, o.fl. Áhrif Cistanche deserticola fjölsykru á öldrun af völdum D-galaktósa. Áhrif CREB tjáningar í gömlum músum ［ J］. Chinese Experimental Prescriptions Journal, 2014, 20 (20): 137-141

[10] Tao Yicun, Li Jianying, Xu Yonghua, o.fl. Áhrif fenýletanósíðs af Cistanche deserticola á rottur: Forvarnir og meðferð við lungnabjúg í háum hæð ［ J］. Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2014,20( 15): 134-138．

[11] Zhou Haitao, Cao Jianmin, Lin Qiang. Cistanche deserticola um þreytta sundgetu rotta og andoxunargetu hvatbera í hjartavöðva ［ J］. Kínversk tilraunaformúla Journal of Science, 2012, 18 (6): 229-233

[12] NAN ZD, ZHAO MB, ZENG KW, o.fl. Bólgueyðandi iridoids frá stönglum Cistanche deserticola ræktaðir í Tarim eyðimörkinni ［J］． Chin J Nat Med, 2016,14( 1): 61-65．

[13] NAN ZD, ZENG KW, SHI SP, o.fl. Fenýletanóíð glýkósíð með bólgueyðandi virkni frá stönglum Cistanche deserticola ræktuð í Tarim eyðimörkinni ［J］． Fitoterapia, 2013,89: 167-174.

[14] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong, o.fl. Efnafræði eyðimerkur cistanche ræktuð í Tazhong: Samsetning rannsókn ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2013, 38 (16):2665-2670.

[15] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong, o.fl. Lignans [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2015, 40 (3):463-468．